牛磺酸预防肢体缺血再灌注致远隔多器官的损伤

目的:观察肢体缺血再灌注是否可致远隔多器官损伤,以及损伤发生的可能途径和牛磺酸的预防作用。方法:实验于1997-05/1998-03在天津医科大学毒理实验室完成。①选用健康Wistar大鼠18只,鼠龄12周,雌雄不拘。按随机抽签法将大鼠分为3组:假手术组(只切开双下肢股三角区),模型组(夹闭双侧股动脉,阻断循环2h再灌注5h,造成下肢缺血再灌注模型)和牛磺酸组[每天给予200g/L牛磺酸(南京制药厂生产,含量99.7%,生产批号595D35D)3mL/只灌胃,7d后按模型组方法制备下肢缺血再灌注模型]。②各组再灌注5h时取下肢骨骼肌、远隔器官胃、肾、肺、肝及脑组织,采用电镜(×9900)观察超微病理改变;测定外周血白细胞总数及其分类;采用在生化分析仪测定大鼠心肌酶、肝酶活性。③采用亚硝酸盐法测红细胞提取液超氧化物歧化酶活性;采用硫代巴比妥酸法测血清和肝、肺、脑组织丙二醛含量;采用生物化学法测血清谷胱甘肽水平;采用酶联免疫吸附法测定肝、肺、脑组织匀浆肿瘤坏死因子α含量。④计量资料差异比较采用t检验。结果:大鼠18只均进入结果分析。①远隔器官损伤组织形态学观察结果:超微电镜结果显示模型组大鼠下肢骨骼肌、远隔器官肺、肝、肾、胃及脑存在弥漫性损伤,而牛磺酸组各器官损伤明显减轻。②外周血白细胞计数和淋巴细胞所占百分比:模型组明显低于假手术组(P<0.05);外周中性粒细胞所占百分比:模型组明显高于假手术组(P<0.05)。③谷丙转氨酶、碱性磷酸酶和肌酸激酶活性:模型组明显高于假手术组和牛磺酸组(P<0.05),而牛磺酸组与假手术组差异不明显(P>0.05)。④肝、肺组织匀浆肿瘤坏死因子含量:模型组显著高于假手术组(P<0.05);脑组织匀浆肿瘤坏死因子含量:模型组与假手术组相近(P>0.05)。⑤肝、肺组织匀浆丙二醛含量:模型组显著高于假手术组和牛磺酸组(P<0.05);脑组织匀浆丙二醛含量:牛磺酸组明显低于假手术组和模型组(P<0.05)。结论:肢体缺血再灌注可使中性粒细胞激活,释放大量氧自由基、肿瘤坏死因子等炎性介质,使机体处于全身炎症反应状态,引起远隔多器官损伤,牛磺酸具有极强的抗氧化损伤能力,可明显减轻肢体缺血再灌注所引起的远隔多器官损伤。     

L-精氨酸对在体兔肺缺血-再灌注损伤影响的实验研究

【目的】探讨L精氨酸对兔肺缺血-再灌注损伤的影响。【方法】建立在体兔肺缺血-再灌注模型，随机分成三组：A组为假手术组、B组为缺血-再灌注组、C组为缺血-再灌注＋L-精氨酸处理组，每组7只。在再灌注60min行肺组织湿干比W／D值、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量测定和肺组织病理学检查。【结果】再灌注60min后C组肺组织W／D值、MDA含量较B组均明显降低（P〈0．05），而SOD、NO含量较B组明显升高（P〈0．05）；肺组织病理学检查示B、C组兔肺均有部分肺泡结构破坏，不同程度的炎症反应，其中C组炎症积分显著低于B组（P〈0．01）。【结论】L-精氨酸预处理，可减轻随后的缺血再灌注损伤。     

潘生丁对兔肝脏热缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

【目的】探讨潘生丁对兔肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用及其相关机制。【方法】采用Pringle＇s肝脏缺血再灌注模型，48只新西兰长耳大白兔随机分成3组：假手术组（A组）；肝脏缺血再灌注组（B组）和潘生丁预处理组（C组）。测定各组缺血30min（T1）、再灌注120min（T2）血小板聚集率（PAGT）、肝功能（ALT、AST）、肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化产物丙二醛（MAD）含量、肝指数（湿重／干重％）、比较肝组织形态学改变。【结果】①T1、T2相，B、C组与A组比较肝组织损害重：ALT、AST均升高（P〈0．05）；肝组织匀浆SOD含量降低；MDA含量升高（P〈0．05）；肝脏水肿程度上升（P〈0．05）；肝组织出现不同程度的病理学改变。T2相，C组与A组比较血小板聚集率没有显著性差异（P〈0.05）。②在T1、T2相，C组与B组比较肝组织损害轻：ALT、AST均较低（P〈0.05）；肝组织匀浆SOD含量高，MDA含量减少（P〈0．05）；肝脏水肿程度较轻（P〈0．05）；肝组织出现较轻的病理学改变；血小板聚集率较低（P〈0．05）。【结论】潘生丁通过改善肝脏微循环状况，改善缺血肝脏组织的能量代谢，提高肝组织抗氧化能力，减少肝脏细胞的变性坏死程度而对肝脏热缺血再灌注起保护作用。     

星状神经节阻滞对家兔脑缺血再灌注时氧自由基损伤的保护作用

目的：研究星状神经节阻滞（SGB）对脑缺血再灌注家兔脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）以及含水率的影响．以探讨其对氧自由基损伤的作用机制。方法：选择SGB模型有效的家兔32只，随机分为4组（n=8）：假手术组（Sham组）、空白对照组（I／R组）、生理盐水对照组（NS组）和SGB组。SGB组再灌注开始时从兔颈部导管注人0．25％丁哌卡因0．5ml／h至再灌注12h时。NS组则注入NS0．5ml／h。I／R组不用任何药。各组于再灌注12h时断头取脑制成10％脑组织匀浆，检测SOD活性、MDA含量。结果：与Sham组比较，I／R组、NS组SOD活性均明显降低（P〈0．01），MDA含量明显增加（P〈0．01），脑组织含水率增加（P〈0.05），而I／R组与NS组比较差异无显著性意义；与I／R组、NS组比较，SGB组SOD活性显著升高而MDA含量明显降低（p〈0．01），脑组织含水率下降（P〈0．05）。结论：SGB可明显减轻脑水肿，提高脑组织内源性SOD生物活性，降低MDA含量，具有明显的抗氧自由基损伤作用，并因此而起到抗脑缺血再灌注损伤的作用。     

葛根素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的抗氧化作用及对部分生化指标的影响

目的探讨葛根素对大鼠缺血再灌注损伤肝脏的抗氧化作用及对部分生化指标的影响。方法建立大鼠全肝缺血再灌注模型，60只大鼠随机分为三组，每组20只，分别为假手术对照组（A组）、肝缺血／再灌注组（B组）和肝缺血／再灌注加葛根素治疗组（C组），分剐在肝缺血前、缺血45min、再灌注45min共3个时相点，检测血浆超氧化物歧化酶（SOD）活性、黄嘌呤氧化酶（XO）活性、丙二醛（MDA）浓度以及血清谷丙转氨酶（ALT）活性。结果肝缺血／再灌注组，血浆XO，MDA及ALT显著高于假手术对照组、SOD明显低于假手术对照组（P〈0．05或Y〈0．01）；而葛根素治疗组与缺血／再灌注组比较，上述指标均有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）。结论葛根素可通过降低氧自由基水平（增强SOD活性、减弱XO活性）拮抗脂质过氧化反应（降低MDA浓度），从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

NOS在脑缺血再灌注大鼠肺肝肾组织中的作用

目的：检测脑缺血再灌注大鼠肺、肝、肾组织中一氧化氮合酶（NOS）的活性及作用。方法：按改良的Pulsinelli方法建立大鼠脑缺血再灌注模型，分别测定假手术组（S组）、缺血再灌注组（I组）2、6、12、24及48h时肺、肝、肾组织中NOS活性。结果：与S组比较，1组总NOS活性在2、12及24h时均升高，以12h时最显著（P〈0．01），其中2h时以结构型NOS（cNOS）上升为主（P〈0．05）。12h时以诱导型NOS（iNOS）上升为主（P〈0．01）；在24h时iNOs仍高（P〈0．05），48h时基本接近S组水平。结论：不同类型NOS在脑缺血再灌注不同阶段肺、肝、肾组织中活性不同，早期（〈6h），cNOS活性升高，对器官损害具有保护作用；后期（1224h），iNOS活性显著上升，介导了迟发性组织损伤。     

绞股蓝总皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨绞股蓝总皂苷（Gypenosides,GP）对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,实验分为假手术组、模型组、血塞通阳性药组（20mg·kg^-1）、绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组（100、30和10mg·kg^-1）,观察绞股蓝总皂苷对脑缺血再灌注大鼠神经功能评分、脑组织匀浆中SOD、MDA、NO含量等生化指标及梗死面积变化的影响,同时观察HE病理改变,用免疫组化方法观察绞股蓝总皂苷对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果与模型组比较绞股蓝总皂苷可改善大鼠神经功能评分（P〈0．05）,提高大鼠脑组织中s0D活性（P〈0．05）,降低其MDA含量（P〈O．05）,缩小脑梗死面积（P〈0．05）。免疫组化结果显示绞股蓝总皂苷可明显提高Bcl-2呈阳性的细胞数（P〈0．05）,降低Bax阳性的细胞数（P〈0．05）。结论绞股蓝总皂苷能够改善大鼠脑缺血再灌注损伤,可通过保护脑组织抗氧化酶的活性,抑制脂质过氧化反应,减轻自由基对脑组织的损害,对缺血再灌注脑组织具有治疗作用。     

异丙酚预处理对全脑缺血再灌注大鼠脑损伤和神经行为学的影响

目的：观察异丙酚预处理对全脑缺血再灌注大鼠脑组织SlooB及神经元特异性烯醇化酶含量的影响，分析异丙酚的脑保护作用。 方法：实验于2005—03／05在解放军广州军区武汉总医院动物实验中心完成，36只雄性SD大鼠，随机分为假手术组、脑缺血模型组和异丙酚预处理组，每组12只，异丙酚预处理组动物在缺血前腹腔注射异丙酚100mg／kg，采用线栓法制作全脑缺血模型，假手术组同样麻醉手术但不行颈总动脉夹闭术，脑缺血模型组麻醉后采用线栓法制作全脑缺血模型，3组动物于脑缺血再灌注后24h评估并记录动物的神经行为学评分，取大鼠脑组织行S100B和神经元特异性烯醇化酶测定。 结果：36只大鼠顺利完成全部实验的有34只。脑缺血再灌注组和异丙酚预处理组各有1只动物在脑缺血再灌注后出现偏瘫无法进行余下实验，这可能与动物的个体差异不能耐受实验有关，随机取30例作为结果分析样本（每组10只）。①假手术组和异丙酚预处理组旷场评分、斜坡实验、悬挂时间评分均较脑缺血模型组高[（29．75&;#177;4．17），（24．25&;#177;7．51），（10．13&;#177;3．22）格；（8．13&;#177;2．36），（8．50&;#177;3．48），（16．25&;#177;3．79）s；（51.00&;#177;5．93），（32．75&;#177;6．13），（13．13&;#177;4．25）s；P〈0．05～0．011；异丙酚预处理组悬挂时间评分较假手术组低（p〈0．05），旷场评分和斜坡实验评分也低于假手术组，但差异无显著性意义（p〉0．05）。②假手术组和异丙酚预处理组脑组织中S100B和神经元特异性烯醇化酶含量均明显低于脑缺血模型组[（0．351&;#177;0．07），（0．831&;#177;0．47），（1．47&;#177;0．88）μg/L；（4．35&;#177;1．24），（10．40&;#177;5．66），（19．68&;#177;9．73）μg／L；P〈0．05-0．01]。假手术组和异丙酚预处理组比较差异有显著性意义（P〈0．05）。 结论：缺血前2h异丙酚预处理可以改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经行为学评分，降低脑缺血损伤大鼠脑组织SlooB及神经元特异性烯醇化酶的含量，减轻神经损害，有明显的脑保护作用。     

转化生长因子β 1对缺血再灌注损伤肺组织肿瘤坏死因子α及白细胞介素1 β含量的调节

背景：肺缺血再灌注时，大量聚集在肺内的白细胞被激活，释放多种细胞因子如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β等，进而介导再灌注损伤。新近研究发现，转化生长因子β1对犬移植肺组织缺血再灌注损伤有保护作用。目的：观察转化生长因子β1干预后，肺缺血再灌注损伤肺组织肿瘤坏死因子。和白细胞介素1β的含量变化。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-08／10在解放军第二军医大学附属长海医院胸心外科实验室完成。材料：清洁级SD大鼠30只，随机分为假手术组、缺血再灌注组、转化生长因子β1组，10只／组。转化生长因子β1为PeprotechINC．公司产品。方法：缺血再灌注组与转化生长因子β1组大鼠通过结扎肺门阻断肺循环1h、再灌注2h建立原位肺缺血再灌注损伤模型，假手术组大鼠仅以10^8丝线绕过肺门后不结扎。肺循环阻断前15min，各组颈静脉注射肝素抗凝，转化生长因子β1组同时注射10ug／kg转化生长因子β1。主要观察指标：再灌注2h后摘取左肺组织，光镜下观察肺组织形态变化，测定湿干重比及肺泡损伤指数，ELISA法检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量。结果：30只大鼠均进入结果分析。假手术组肺组织无明显病理改变；缺血再灌注组可见明显的组织水肿及中性粒细胞浸润；转化生长因子β1组轻微组织水肿，少量中性粒细胞浸润。与假手术组比较，缺血再灌注组湿干重比及肺泡损伤指数均显著升高（P〈0．01）；与缺血再灌注组比较，转化生长因子β1组上述两项指标均明显降低（P〈0．05）。与假手术组比较，缺血再灌注组肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β含量均显著升高（P〈0．01）；与缺血再灌注组比较，转化生长因子β1组上述两项指标均明显降低（P〈0．05，P〈0．01）。结论：转化生长因子β1能够明显改善肺缺血再灌注损伤，该作用与其有效抑制肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β的表达密切相关。     

活血化瘀汤对抗大鼠脑缺血再灌注损伤的量效和时效作用

背景：已知脑缺血后再恢复血流可使脑损伤加重，也有一些研究结果证实中药的活血化瘀成分能对抗脑缺血再灌注损伤。目的：观察活血化瘀4个最基本中药（红花、桃仁、川芎、赤芍）作为施加因素对脑缺血再灌注大鼠血清、脑组织匀浆的免疫球蛋白、C反应蛋白及补体等免疫指标变化的影响，并验证其量效和时效关系。设计：随机对照实验，单盲法评估。单位：广州市红十字会医院暨南大学附属第四医院神经内科。材料：实验于2001-01／2002-12在广州市红十字会医院创伤研究所实验室完成。实验动物选择成年雌性SD大鼠138只，体质量280-300g，由广州中医药大学实验动物中心提供。红花、川芎、桃仁、赤芍为单味中药饮片浓缩颗粒，按1：1：1：2比例制成含2．5g／mL生药汤剂（活血化瘀药）。干预：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型（经2h大脑中动脉阻断后再灌注24h）。138只大鼠随机分6组，每组23只。假手术组：结扎各血管，不阻塞大脑中动脉。灌药1组：术前30min灌胃给予2g，／kg活血化瘀药。灌药2组：术前30min灌胃给予2．5g，／kg活血化瘀药。灌药3组：术前连续7d灌胃给予2g／kg活血化瘀药。灌药4组：术前连续7d灌胃给予2．5g/kg活血化瘀药。对照组给予等容积生理盐水。①全部大鼠清醒后于缺血2h再灌注24h进行神经功能缺损评分（5分制，0～1分为神经功能轻度缺损，2-4分为神经功能重度缺损）。②再灌注24h后从各组大鼠中随机选取10只，采用速率散射比浊法检测脑匀浆、血清C反应蛋白，补体C3，C4水平及血清IgG含量。③再灌注24h后从各组大鼠中随机选取10只，麻醉后迅速断头取脑，然后在110℃烘箱中烘干至恒重，计算脑组织含水量。④光学显微镜下观察各组大鼠脑组织细胞形态。⑤再灌注24h后从各组大鼠中随机选取3只，透射电镜观察各组大鼠脑组织超微结构。主要观察指标：①各组大鼠脑组织神经功能缺损评分结果。②各组大鼠脑匀浆、血清C反应蛋白及补体C3和C4水平及血清IgG含量。③各组大鼠脑组织含水量及脑组织细胞形态。④各组大鼠脑组织超微结构变化。结果：138只大鼠全部进入结果分析。①灌药各组大鼠缺血再灌注24h后重度神经功能缺损所占比例明显低于对照组（P〈0．01），灌药4组低于灌药2组（13％，48％，X^2=6．571，P〈0．05）。②脑组织含水量：假手术组和灌药各组大鼠脑组织含水量低于对照组（P〈0．05）。灌药3组低于灌药1组（P〈0．01）。③血清C反应蛋白含量：假手术组和灌药各组低于对照组（P〈0．01）。（多血清补体C3含量：假手术组和灌药各组低于对照组（P〈0．01）。⑤血清补体C4含量：假手术组和灌药各组低于对照组（P〈0．01）。灌药3组低于灌药1组（P〈0．01），灌药4组低于灌药2组和灌药3组（P〈0．05）。⑥血清IgG含量：假手术组和灌药各组低于对照组（P〈0．01）。灌药4组低于灌药2组（P〈0．05）。⑦脑匀浆C反应蛋白含量：假手术组和灌药各组低于对照组（t=5．626-17．929，P〈0．01），灌药3组低于灌药1组（P〈0．01），灌药4组低于灌药2组（P〈0．05）。⑧脑匀浆补体C3水平：假手术组和灌药各组低于对照组（P〈0．05-0.01）。灌药3组低于灌药1组（P〈0．01）。灌药4组低于灌药2组（P〈0．01）。⑨脑匀浆补体C4含量：假手术组和灌药各组低于对照组（P〈0.05-0.01）。灌药3组低于灌药1组（P〈0．01）。灌药4组低于灌药2组和灌药3组（P〈0．01）。⑩脑组织充血水肿情况：对照组炎症反应明显，灌药组脑水肿、病理损害较对照组轻，（11）假手术组超微结构正常；对照组皮质坏死边缘区的细胞、毛细血管、髓鞘水肿明显，神经元细胞器减少，灌药3，4组细胞膜界限清楚，结构完整，线粒体丰富，大小均匀，有髓纤维形态正常，灌药1，2组介于两者之间。结论：①给予活血化瘀药使大鼠神经功能缺损评分降低，用药时间长的大鼠神经功能缺损评分低，提示用药时间长能更好地改善大鼠神经功能缺损程度。②给予活血化瘀中药可使大鼠脑匀浆和血清中补体C3和C4水平明显降低，血清IgG含量降低，说明该药可通过启动补体系统而减轻对脑组织的损伤，C反应蛋白也明显降低，更进一步提示该药可抑制炎症反应。③用药时间越长脑损伤越轻，且用药剂量2．5g／L效果较好。