角膜内皮细胞移植的研究

穿通性角膜移植术是目前临床上治疗各种角膜疾病所致的角膜混浊恢复视力的主要治疗方法，但角膜材料的来源非常有限，另外随着人均寿命的延长，许多高龄供体的角膜不适宜作为移植材料等诸多因素均限制了该手术的广泛开展。近年来不断兴起的角膜内皮细胞移植的研究，可望为角膜病患提供一种新的治疗方法。它是将取向胎儿或其它动物的角膜内皮细胞进行组织细胞培养，再将其接种在除去了自身的内皮细胞层的异体或受试动物自体的角膜基     

聚维酮碘对人角膜内皮细胞的影响

聚维酮碘(povidone-iodine，PI)是针对细菌、病毒、真菌及原生动物等的广谱杀菌剂。5％PI可用于眼科术前准备工作。但文献报道供体角膜保存在0.1％PI中5d，角膜内皮可出现损伤表现；高浓度PI注入兔眼前房可导致角膜内皮损伤；0.01％PI对体外纤维母细胞具有毒性作用，0.1％PI可抑制纤维母细胞生长。因此，我们于2003年开始观察不同浓度PI对体外培养的人角膜内皮细胞的潜在影响，以期为临床提供参考，提高使用PI的安全性。     

家兔角膜内皮细胞的快速培养

目的:短期内体外扩增获得角膜内皮细胞。方法:采用揭膜法与消化法相结合获取原代角膜内皮细胞。并采用本实验室自行研制的角膜内皮细胞培养体系,在24孔培养板中分别以1×106,5×105,1×105,5×104,1×104,5×103细胞/孔浓度传代培养细胞,观察细胞的生长情况。结果:以1×105～5×105个细胞/孔浓度的细胞悬液并添加消化后的Descemet膜原代培养细胞,4d后细胞形成与在体细胞相似的密集单层,可以快速获取纯化的角膜内皮细胞。传代培养时,虽然不同接种浓度在4d的细胞增殖倍数差异不显著,但以1×105～5×105个细胞/孔的浓度传代,3d就可生长成密集单层并可继续传代,现已传至第10代,但传至第4代,细胞形态开始发生改变;而以5×105个细胞/孔以上的浓度传代细胞时,1d的细胞贴壁率下降;以5×104个细胞/孔以下浓度传代,需7d方可长满皿底,并且细胞开始老化,体积变大,不能继续传代培养。或者细胞不能铺满皿底就衰老死亡。结论:本实验的培养体系可在短期内获得实验用角膜内皮细胞。角膜内皮细胞体外培养的增殖能力与其培养浓度和增殖的空间有关,1×105～5×105个细胞/孔的浓度是角膜内皮细胞快速增殖的适宜培养浓度。     

角膜内皮细胞体外培养的研究进展

角膜内皮是角膜的重要组成部分,由单层的角膜内皮细胞(corneal endothelial cell,CEC)组成,在维持角膜正常的透明度方面发挥着重要的作用.CEC在出生后即丧失增殖能力,一旦受损或丢失会导致不可逆性角膜疾病.但是,大量的研究表明CEC可以在体外增殖,这为体外培养人CEC用于角膜疾病的治疗提供了可行性,但至今仍没有建立一套标准的CEC体外培养方法.本文将归纳总结近年来CEC体外培养方法.以利于今后优化CEC体外培养体系.     

以羊膜为载体培养角膜内皮细胞的实验研究

目的 以羊膜为载体培养角膜内皮细胞并形成单层组织，为以后内皮细胞层移植提供方法和材料来源。方法 胰酶消化去除羊膜上皮细胞，保留其底膜作为载体，种植兔角膜内皮细胞，体外培养形成单层内皮层，并进行形态，组织学，超微结构观察。结果 角膜内皮细胞在羊膜上黏附生长并增殖，体外培养6-7d即融合成单层，其形态及生长密度优于单纯培养皿上培养的内皮细胞。复合角膜内皮组织由羊膜基底膜和单层扁平内皮细胞组成，与生理状态下的角膜内皮组织相近。结论 以羊膜为载体培养角膜内皮细胞可形成单层细胞层，有望成为角膜内皮移植良好的材料来源。     

角膜后弹力膜内皮移植术研究进展

角膜后弹力膜内皮移植术由于具有相对较低的移植排斥率以及较好的视力预后等优势,目前已成为部分发达国家治疗角膜内皮失代偿的主流手术方式,但限于手术难度较高,学习曲线较长,中国人前房偏浅,加之国内角膜内皮病变往往合并有其他较复杂的眼部疾病,目前国内尚未普遍开展这一手术。本文就角膜后弹力膜内皮移植术的手术适应证、供体植片制备(...     

体外培养的角膜内皮细胞移植研究新进展

随着组织细胞培养方法的不断完善,大量研究表明,人类及灵长目动物的角膜内皮细胞(corneal endothelial cell,CEC)可以在组织培养的条件下生长并形成单层,其细胞形态与活体人CEC类似,这为采用培养的CEC进行移植以恢复损伤的内皮功能提供了技术支持。本文就有关CEC体外培养、载体选择以及移植方法的最新进展进行综述,对目前仍需解决的问题和前景进行展望。     

角膜内皮细胞治疗研究进展

人角膜内皮细胞(HCECs)是一种有丝分裂后的单层内皮细胞,因此,其在体内和体外的增殖能力十分有限。HCECs在严重受损的情况下会发生内皮失代偿,极易引起失明。目前,唯一有效的治疗方法是使用含健康角膜内皮的供体植片进行角膜移植。因此,世界范围内供体材料的严重短缺推动了对角膜内皮替代来源的研究。随着HCECs的细胞培养研究的不断开展,细胞治疗为角膜内皮失代偿提供了希望。本文对角膜内皮细胞治疗方面的最新研究进展进行综述。     

角膜内皮板层移植术治疗角膜内皮病变的初步报告

探讨角膜内皮板层移植术 (endotheliallamellarkeratoplasty ,ELK)治疗角膜内皮病变的临床效果。方法 :对 6例 ( 6眼 )因角膜内皮病变导致的角膜水肿、混浊患者施行了ELK术。其中 ,白内障术后大泡性角膜病变 2例 ,Fuchs角膜内皮营养不良 1例、外伤性角膜内皮失代偿 3例。用 6 0～ 7 5mm环钻切取前 1/ 2厚度供眼板层角膜片 ,保留后 1/ 2厚度 ,包括后基质、后弹力层和内皮细胞层的后板层角膜片。用比供体角膜片小 0 2 5～ 0 5mm的环钻钻切患眼角膜 ,深度达 1/2厚度 ,用角膜板层刀剖切下前板层备用 ,再钻切后板层角膜。将异体后基质角膜植片和自体前基质角膜植片重叠用 10 / 0尼龙线连续缝合。术毕结膜下注射庆大霉素和地塞米松 ,术后局部滴环孢霉素。随访 6～ 15个月。结果 :植片平均上皮化时间 6 5天 ,无新生血管侵入异体后基质植片 ,5例植片透明 ,1例排斥反应。裸眼视力 0 0 8～ 0 3 ,1例因白内障需进行手术 ,2例分别因原有的青光眼和老年性黄斑变性而视力不能矫正 ,1例层间积液 (粘弹剂 )经冲洗而消失。结论 :ELK具有植片上皮化时间短、水肿消失快、手术反应轻、排异反应率低等特点 ,对治疗内皮失代偿的病变是一种较理想的替代手术。     

体外培养自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉1例

目的：观察体外培养自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉的临床效果。方法：翼状胬肉11例12眼采取显微镜下手术切除局部病灶联合体外培养自体角膜缘干细胞移植术，术后随访6～15(平均10)mo。结果：术后角膜上皮愈合良好，无排斥反应或其它并发症发生。随访期间1眼复发，复发率为8％。结论：体外培养自体角膜缘干细胞移植术为受损的角膜缘提供新的健康干细胞，可有效地防止翼状胬肉复发，简单、安全、有效。     

角膜内皮细胞培养的研究进展

角膜内皮功能失代偿引起的失明可通过角膜移植来治疗.人们通过体外培养角膜内皮细胞并使其增殖,进行角膜内皮细胞移植和角膜组织工程学研究.目前常用的分离角膜内皮细胞的方法是从供体上撕除后弹力层和角膜内皮层,利用酶消化作用使角膜内皮细胞分离.常用的培养基为基础培养基加各种生长因子.这些生长因子在一定程度上促进细胞增殖,但培养的角膜内皮细胞长期传代后仍难以维持正常的细胞形态和功能.基因转染技术建立了永生化角膜内皮细胞系,有关细胞周期、信号通路和离子通道的研究成果也促进了角膜内皮细胞体外培养的研究进展.本文综述了角膜内皮细胞体外培养各个环节的最近进展.     

深板层角膜内皮移植术

深板层角膜内皮移植术(DLEK)是一项新近开展起来的眼科手术，由板层角膜移植手术发展而来，主要用于治疗因角膜内皮功能不良引起的角膜失代偿患。本主要就DLEK手术适应证、手术方法、及其与传统的穿透性角膜移植手术相比存在的优缺点作一较为详细的综述。     

人角膜内皮细胞的体外培养及其鉴定的研究进展

角膜内皮细胞对维持角膜的透明性和厚度起着关键性的作用。人体内角膜内皮细胞有限的增殖能力及角膜供体的短缺,使组织工程人角膜内皮的体外重建受到了关注。目前,人角膜内皮细胞的培养方法已基本成熟。但是体外培养的人角膜内皮细胞的功能评价及鉴定标准却尚未建立。本文就人角膜内皮细胞的体外培养及其鉴定的研究进展进行综述。     

角膜内皮移植术不同时期并发症的成因及处理

随着角膜内皮移植术在国内外的广泛开展和应用,角膜内皮移植术作为目前治疗角膜内皮失代偿的较理想术式,其优点不言而喻,但也存在植片制备、术中及术后发生并发症的可能。本文以2种常见的角膜内皮治疗术式——角膜后弹力层剥除内皮移植术和角膜后弹力层内皮移植术为例,从植片制备并发症(如植片穿孔、植片撕裂)、术中并发症(如植片展开困难...     

角膜内皮细胞培养方法的改进

介绍三种角膜内皮细胞的原代培养方法，这三种方法的特点是简便、易行、不需特殊的试剂和设备。应用这些方法，均获得良好的单层角膜内皮原代培养细胞。     

穿透性角膜移植术后角膜内皮细胞之命运

地２组猴行５。５→５．０ｍｍ穿透性角膜移植术，异种组４只，同种组４只，术前用冷冻创伤＾３Ｈ－ＴｄＲ标记法标记受生角膜内皮细胞，术后１４周摘除眼球，用放射自显影法显示银颗粒的分布。     

以异种后弹力膜基质为载体培养角膜内皮细胞的研究

目的　探讨以异种后弹力膜 (DM) /基质为载体培养角膜内皮细胞的可行性 ,为培养内皮细胞的临床移植提供新的方法和供体材料。方法　取厚 10 0 μm的猪角膜后层 ,冻存解冻后置中性蛋白酶 3 7℃孵育 5min ,去除内皮细胞 ,保留DM及薄层基质 ,置纯甘油中脱水保存 6个月 ;使用前复水 ,紫外线二面灭菌 ,制备成载体 ;接种兔角膜内皮细胞于载体的DM面并体外培养 ,行细胞形态、密度、组织学、超微结构的观察。结果　兔内皮细胞在猪DM/基质载体上贴附生长 ,形成紧密连接的单层 ,形态近似六角形分布 ;细胞密度达 ( 3 62 0± 110 2 3 )个 /mm2 ,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。结论　角膜内皮细胞能够在异种DM/基质载体上良好生长 ,该载体有可能成为培养内皮细胞应用于临床移植的供体材料     

人表皮生长因子对体外培养兔角膜内皮细胞影响的实验研究

目的：明确人表皮生长因子（ｈｕｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ,ｈＥＧＦ）对角膜内皮细胞的影响。方法：采用体外培养的兔角膜内皮细胞,观察接种后不同时点ｈＥＧＦ对其生长状态的影响;兔角膜片内皮损伤模型,离体培养后行Ｈ－Ｅ染色和Ｈ＾３－ＴｄＲ掺入放射自显影,观察ｈＥＧＦ对其修复的影响。结果：兔角膜内皮细胞体外培养ｈＥＧＦ组细胞数高于对照组,并使细胞形态产生纺锤形改变;角膜内皮细胞     

肝素钠对人角膜内皮细胞的影响

实验与临床研究表明：肝素可抑制限内成纤维细胞的生成，减少晶体囊外摘除术后眼内组织表面纤维蛋白的沉积和后囊细胞的生长，而抑制后发障的形成。但肝素是否会损害角膜内皮细胞，迄今未见报告。本研究用含有肝素销的平衡液作为白内障人工晶体植入术中的皮质冲吸液，以观察肝素钠对角膜内皮细胞有无影响。1对象与方法将67例（67只眼）老年性白内障患者随机分为肝素组和对照组。肝素组33例，其中男16例、女17例；对照组34例，其中男16例、女18例，平均年龄67a。在手术显微镜下，按现代白内障囊外摘除及后房型人工晶体植入的常规方法进行，并…