急慢性大鼠梗阻性黄疸模型的建立

目的:探讨急慢性SD大鼠梗阻性黄疸模型的建立,评价其模拟临床梗阻性黄疸的价值,提供一种新型的慢性梗阻性黄疸模型.方法:SD大鼠随机分成3组,每组每时段6只:急性梗阻性黄疸模型组(A组),慢性梗阻性黄疸模型组(B组),对照组(C组).造模后于第1、2、3、4、5周分别抽取大鼠静脉血检查肝功能,显微镜下刻度目镜检测大鼠胆总管直径,光学显微镜观察肝组织的病理改变,其中第4周行胆总管十二指肠吻合再通.结果:A组造模术后4wk内黄疸进行性加重(TB:749.38μmol/L±38.99μmol/Lvs84.86μmol/L±49.09μmol/L,P<0.05),胆总管直径扩张明显(1.50cm±0.30cmvs0.35cm±0.15cm,P<0.05),肝细胞变性、坏死明显,伴有增生.第4周行胆总管与十二指肠端侧吻合后黄疸消退明显(TB:153.93μmol/L±57.36μmol/Lvs749.38μmol/L±38.99μmol/L).B组造模术后黄疸呈现波动性,胆总管直径扩张(0.20cm±0.15cmvs0.30cm±0.10cm,P<0.05),肝细胞以变性为主,并有纤维组织增生.第4周行胆总管与十二指肠端...     

银杏叶提取物与秋水仙碱对大鼠肝纤维化预防作用的比较

目的比较银杏叶提取物(GBE)和秋水仙碱对实验性大鼠肝纤维化的预防作用。方法SD雄性大鼠40只随机分为4组:正常组(n=10)、模型组(n=10)、秋水仙碱预防组(n=10)及GBE预防组(n=10)。模型组、秋水仙碱预防组及GBE预防组给予500 mL/L CCl4腹腔注射,1 mL/kg,每周2次,共8周,秋水仙碱预防组每天同时给予秋水仙碱灌胃,0.2 mg/kg,GBE预防组每天同时给予GBE灌胃,0.3 g/kg。实验结束后,心脏取血分离血清行肝功能生化指标检测,处死动物取肝脏甲醛固定,常规行HE染色,免疫组化检测α-SMA和TGF-β1。结果光镜下组织学检查纤维化分级GBE预防组低于秋水仙碱预防组(P0.05),肝功能生化指标检测GBE预防组优于秋水仙碱预防组[ALT:(168.4±34.6)U/Lvs(210.6±40.8)U/L;AST:(318.8±62.5)U/Lvs(511.2±53.2)U/L;ALB:(31.0±2.1)g/Lvs(28.1±2.0)g/L;P均0.05],免疫组化检测α-SMA及TGF-β1蛋白表达GBE预防组低于秋水仙碱预防组(α-SMA:29.3±1.5vs5.1±2.2;TGF-β1:14.5±0.9vs28.6±0.9)。结论GBE预防大鼠肝纤维化的作用优于秋水仙碱,GBE作为一种新的抗肝纤维化药物有很好的研究和应用前景。     

清肝活血方对乙醇性肝纤维化大鼠肝星形细胞和肝细胞凋亡的影响

目的:观察酒精性肝纤维化大鼠Hsc和肝细胞的凋亡及中药清肝活血方对细胞凋亡的影响.方法:以乙醇为主制备酒精性肝纤维化大鼠模型,将造模大鼠分为清肝活血方低(4.75g/kg)、中(14.25g/kg)和高剂量组(28.5g/kg),每日进行ig药物干预2wk,并设空白对照组、模型对照组及易善复对照组.比色法检测血清ALT,AST,γ-GT;HE和Masson染色观察肝组织炎症和纤维化程度.TUNEL检测肝细胞凋亡,TUNEL-α-SMA双标记检测HSC凋亡.结果:清肝活血方用药组及易善复组能降低大鼠血清ALT(1213±245,1432±253nkat/Lvs2140±428nkat/L,P均<0.05),AST(1671±400,2123±413vs4454±850nkat/L,P均<0.05),γ-GT水平(4539±1847,5509±2430vs8271±3304nkat/L,P均<0.05),减轻纤维化程度(5.5±2.50,6.30±3.16vs9.00±2.27,P<0.05);诱导活化的HSC凋亡(5.25%±2.48%,3.63%±2.04%vs2.30%±1.24%,P<0.05),减少肝细胞凋亡(0.43%±0.11%,0.60%±0.16%vs1.77%±0.49%,P<0.05).结论:清肝活血方能有效减轻大鼠肝纤维化程度,并减少乙醇引起的肝细胞凋亡,诱导活化的HSC凋亡.     

茵陈蒿汤对梗阻性黄疸大鼠肝细胞中IRE1α蛋白表达的影响

目的:研究茵陈蒿汤血清对梗阻性黄疸大鼠肝细胞中肌醇酶1α(inositol-requiring enzyme-1-α,IRE1α)蛋白表达的影响.方法:通过结扎SD大鼠胆总管建立梗阻性黄疸模型,分离梗阻性黄疸大鼠原代肝细胞进行体外培养.通过喂食SD大鼠茵陈蒿汤制备相应的含药血清.处理组(B组)以含药血清培养基培养大鼠原代肝细胞,对照组(A组)以不含药的常规培养基培养大鼠原代肝细胞.分别测定细胞中IRE1α蛋白表达情况及培养液中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)含量.结果:通过比较对照组(A组)各时间点与处理组(B组)的蛋白和转氨酶含量,B组在I R E1α蛋白表达(I R E1α表达量:6 h 1.85±0.04 vs 1.58±0.04,24 h 1.95±0.02 vs 1.60±0.03,48 h 2.22±0.13 vs 1.99±0.10,P0.05)及ALT、AST测定值均降低(AST测定值:6 h17.23 U/L±3.01 U/L vs 13.13 U/L±2.41 U/L,24 h 19.33 U/L±3.01 U/L vs 15.67 U/L±2.36U/L,48 h 24.40 U/L±3.93 U/L vs 19.18 U/L±1.65 U/L,P0.05;ALT测定值:6 h 17.23U/L±3.01 U/L vs 13.13 U/L±2.41 U/L,24 h19.33 U/L±3.01 U/L vs 15.67 U/L±2.36 U/L,48 h 24.40 U/L±3.93 U/L vs 19.18 U/L±1.65U/L,P0.05),差异有统计学意义.结论:血清药理学研究方法可以用于茵陈蒿汤的药效评价,经IRE1α介导的内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)可能是茵陈蒿汤对梗阻性黄疸大鼠肝细胞保护作用的一条重要通路.     

梗阻性黄疸大鼠NF-κB的变化及其对免疫应答的影响

目的:探讨梗阻性黄疸(obstructive jaundice,OJ)时NF-KB的变化及其对免疫应答的影响.方法:60只Wistar♂大鼠随机分成3组:假手术组(SHAM组)、梗阻性黄疸组(CBDL组)和梗阻性黄疸+NF-kB抑制剂脯氨酸二硫化氨基甲酸酯(PDTC)组(PDTC组).每组术后7、14 d分批(n=10)检测光镜下肝脏病理组织学,血清总胆红素(TB),谷丙转氨酶(ALT),内毒素(LPS)水平,肝组织促炎因子IL-1β、IL-6,抑炎因子IL-10以及NF-kB蛋白表达.结果:CBDL组7、14 d大鼠均出现肝组织病理损伤,CBDL组较SHAM组血清TB、ALT、LPS增高(7 d:140.14±10.17 vs 7.309±1.04,134.479±10.20 vs 35.79±3.76.189.33±11.05 vs 2.816±0.58;14 d:194.608±12.73 vs 36.142±3.51.217.797±12.37 vs 7.321±1.03.292.816±14.53vs 2.664±0.53,均P＜0.01),肝组织IL-1β,IL-6,IL-10和NF-kB表达增强(均P＜0.01),且14 d较7 d变化更为显著.PDTC组大鼠血清TB、ALT和肝组织IL-1β、IL-6、NF-kB表达在7 d时相点时比CBDL组显著下降(P＜0.01),而到14 d时相点时比较CBDL组无明显变化;LPS和IL-10表达与CBDL组各时相点相比无明显差异.结论:梗阻性黄疸大鼠早期(7 d)通过PDTC抑制NF-kB活化表达,可下调促炎因子的表达,减轻肝损.后期(14 d)作用不明显,其机制可能是通过LPS、IL-10等其他途径所致.     

砷暴露与大鼠肝脏损伤及激活素A,转化生长因子-β1的相关性

目的:探讨水砷暴露与大鼠肝脏损伤的关系,了解激活素A(ACTA),转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝脏损伤中的作用.方法:大鼠110只随机分成对照组、模型组(浓度100 mg/L的亚砷酸钠溶液)、自然恢复组.对照组和模型组分别予第1、2、3、4月末各处死10只,自然恢复组第1月给予砷溶液,月末随机取出10只改为自来水,其余仍给予砷溶液.第2月末处死上月分出的10只,并在此取出10只改为自来水,1 mo后处死,依次类推,第4月末将最后10只停用砷溶液的大鼠处死.股动脉取血进行血清肝功能和肝组织病理学检查以观察其肝脏损伤的动态变化,取大鼠肝组织采用实时荧光定量PCR法检测ACTA、TGF-β1的基因表达水平.结果:砷暴露1 mo后脱离自然恢复1 mo可见炎细胞浸润明显减轻.ALT、AST模型组中增高,第3、4月造模,ALT升高差异有统计学意义( P<0.05);造模1、2、3 mo后分别自然恢复1 mo,ALT降低有统计学意义(49.33±13.51 U/L vs 62.68±23.57 U/L,62.75±14.40U/L vs 64.36±18.24 U/L,65.74±11.85 U/Lvs 69.36±15.7 U/L,均P<0.05).ACTA mRNA第3、4月造模与对照组比较有统计学意义(64.83±28.29 vs 28.33±18.70,98.67±26.80vs 28.33±18.70,均P<0.05),TGF-β1 mRNA1、2、3、4 mo造模与对照组比较均有统计学意义(46.27±18.39 vs 33.64±20.17,67.06±20.79 vs 33.64±20.17,88.33±23.42 vs 33.64±20.17,110.57±24.23 vs 33.64±20.17,均P<0.05);造模1、2、3 mo后分别自然恢复1mo,TGF-β1 mRNA降低有统计学意义(35.36±16.48 vs 46.27±18.39,52.04±21.37 vs67.06±20.79,70.69±35.27 vs 88.33±23.42,均P<0.05).结论:砷暴露所引起的肝脏损伤随暴露时间的延长而加重,越早脱离暴露其损伤的肝细胞修复越快;促炎症因子ACTA、TGF-β1与砷暴露肝损伤的发生相关.     

丹酚酸B对肝纤维化大鼠TGF-β1、MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的:观察丹酚酸B盐(salvianolic acid B,SA-B)对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子-β1 (TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响,并探讨SA-B抗肝纤维化的可能机制.方法:♂SD大鼠30只随机分为正常对照组、模型组和丹酚酸B治疗组,以5 mL/L的二甲基亚硝胺(DMN)建立肝纤维化模型,治疗组在造模4 wk后给予SA-B治疗4 wk.应用HE,Masson染色观察肝组织病理纤维化分级,全自动生化分析仪检测ALT、AST和Alb,放免法检测HA和LN,S-P免疫组织化学方法检测TGF-β1、MMP-2和TIMP-2蛋白质的表达.结果:与模型组相比,SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构,治疗组血清ALT、AST、HA和LN水平明显减低(87.0±28.7 U/L vs 190.4±27.4 U/L.85.6±25.3 U/L vs 178.2±15.9 U/L,179.7±32.8 mg/L vs 433.3±86.1 mg/L,135.6±21.1 mg/L vs 224.7±29.2 mg/L,均P<0.01),经SA-B干预后TGF-β1和TIMP-2表达明显下降,与模型组相比有显著性差异(18.53±2.54 vs 12.78±2.65,21.88±3.83 vs 14.69±4.51,均P<0.01),而MMP-2表达水平无明显变化.结论:SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构,可能通过抑制TGF-β1和TIMP-2表达而促进肝纤维化的逆转.     

大鼠肝硬化形成过程中肝组织TGF-β1,Smad3,Smad7水平动态的变化

目的:观察实验性大鼠肝硬化形成过程中,肝组织TGF-β1,Smad3,Smad7水平的动态变化,研究三者在肝硬化发生过程中的作用及机制.方法:以SD大鼠为实验对象,于实验开始时处死6只大鼠作为wk 0正常对照组,剩余大鼠,600 mL/L四氯化碳3 mL/kg,sc,2次/ wk,复制肝硬化动物模型.于wk 3,6,9,12各处死一批大鼠,用RT-PCR检测动物肝组织中TGF-β1,TGF-βRⅡ的mRNA表达水平,Western blot检测肝组织中Smad3,Smad7蛋白水平,免疫组织化学方法检测动物肝组织中TGF-β1的表达和定位.结果:正常肝组织中有少量TGF-β1,TGF-βRⅡ的mRNA表达.随着肝纤维化及肝硬化的形成,模型组wk 0,3,6,9,12,TGF-β1,TGF-βRⅡ和Smad3表达量分别逐渐递增(TGF-β1:0.19±0.12,0.29±1.02,0.89±0.23,0.98±0.77,1.7±1.00;TGF-βRⅡ:0.30±0.22,0.49±0.16,1.02±0.33,1.51±0.72,2.14±1.02;Smad3:0.44±0.24,0.84±0.69,1.10±0.16,1.40±0.12,1.75±1.05),Smad7表达量呈逐渐减少(1.35±0.12,1.09±0.78,1.14±0.31,1.11±0.91,0.74±1.21).正常肝组织TGF-β1可见少量表达,主要在中央静脉周围肝细胞中.随着肝纤维化及肝硬化的形成,TGF-β1表达增强(P<0.01).结论:随着肝硬化的形成,肝脏中TGF-β1,TGF-βRⅡ和Smad3表达增加,Smad7表达下降.     

前列腺素E1对梗阻性黄疸大鼠肝脏缺血再灌注损伤时白介素-1β表达的影响

目的:探讨前列腺素(PG)E1对梗阻性黄疸肝脏缺血再灌注损伤的保护作用以及对IL-1β表达的影响.方法:将♂Wistar大鼠随机分为PGE1处理组(PG组,n=18)和生理盐水对照组(NS组,n=18).参照Yoshidome法结扎并切断胆总管建立梗阻性黄疸模型,1 wk后Pringle法阻断肝门15 min,再灌注后建立胆道再通.于缺血前15 min至再灌注60 min,PG组经门静脉持续泵入PGE1 0.5 μg/(kg·min),NS组给予等量生理盐水.于再灌注1、6和24 h 3个时点取材,检测血清ALT,AST,总胆红素(total bilirubin,TBIL),直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)水平,测定肝组织GSH,MDA含量.ELISA法测定肝组织IL-1β表达,并观察肝脏病理组织学改变.结果:再灌注各时点PG组血清ALT水平(1 h:1939±1427 nkat/L vs 5596±2975 nkat/L;6 h:3409±1708 nkat/L vs 9279±4404 nkat/L;24 h:1434±274 nkat/L vs 2264±630 nkat/L)和AST(1 h:21746±12083 nkat/L vs 37552±12382 nkat/L;6 h:55039±35471 nkat/L vs 98811±11126 nkat/L;24 h:9394±1662nkat/L vs 27664±15856 nkat/L)、肝组织MDA含量(1 h:0.89±0.18 μmol/g vs 1.21±0.24 μmol/g;6 h:1.08±0.23 μmol/g vs 1.45±0.13 μmol/g;24 h:1.03±0.08 μmol/g vs 1.45±0.26 μmol/g)以及肝组织IL-1β表达水平(1 h:304.1±67.9 ng/L vs 362.8±137.1 ng/L;6 h:376.8±74.6 ng/L vs 618.8±217.8 ng/L;24 h:273.0±69.0 ng/L vs 373.0±71.7 ng/L)均显著低于NS组(P＜0.05),而肝组织GSH含量显著高于NS组(1 h:945.1±121.2 mg/g vs 720.0±80.1 mg/g;6 h:753.5±118.6 mg/g vs 553.6±140.0 mg/g;24 h:768.0±135.9 mg/g vs 596.3±36.4 mg/g,P＜0.05),但两者胆红素水平无明显差异(P＞0.05).PG组肝脏病理组织学损伤程度也较NS组明显减轻.结论:PGE1下调肝组织IL-1β表达,对梗阻性黄疸肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用.     

清肝活血方对酒精性肝损伤大鼠内质网应激反应性凋亡基因表达的影响

目的:探讨清肝活血方及拆方对酒精性肝损伤大鼠内质网应激反应性凋亡GRP78/Bip、GRP94、caspase-12基因和蛋白表达的影响.方法:建立大鼠慢性酒精性肝损伤复合模型, 第11周将造模大鼠按体质量和状态均衡分为模型组、清肝活血方组9.5 g/(kg·d)、清肝方组3 g/(kg·d)、活血方组6.5 g/(kg·d)和空白对照组, 每组10只. 各组每日上午仍灌胃给予乙醇混合液, 下午给予药液或生理盐水,连续给药2 wk, 末次给药1 h后称质量, 腹主动脉采血, 处死, 分离肝脏. DNA ladder法和流式细胞术对肝细胞凋亡进行定性和定量检测, RT-PCR和Western blot法检测大鼠肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达.结果:与正常组比较, 造模12 wk大鼠血清ALT和AST水平明显升高(138.3±43.3 U/Lvs 33.9±9.8 U/L, 257.4±162.3 U/L vs 119.6±28.6 U/L, P<0.01); 肝细胞发生早期凋亡改变, 总凋亡率和早期凋亡率分别达到29%和26%( P<0.01); 肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达明显增强( P<0.05或0.01). 经2 wk治疗后, 清肝活血方及拆方均能明显降低酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST水平; 抑制肝细胞凋亡, 总凋亡率和早期凋亡率分别降至8%和6%; 清肝活血方及清肝方显著降低肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达, 与模型组比较有统计学差异( P<0.05或0.01), 而活血方组与模型组则无明显差异.结论:清肝活血方及拆方对酒精性肝损伤大鼠肝细胞凋亡均表现出较强的抑制作用, 其机制可能与下调内质网应激反应性凋亡相关基因caspase-12、GRP78/Bip和GRP94表达有关.     

熊果酸对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和α-SMA表达的

织TGF-β1基因与蛋白及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响, 并探讨其抗肝纤维化作用机制.方法: SD大鼠96只随机分为正常对照组(N组)、模型组(M组)、UA低剂量组(U1组)、UA中剂量组(U2组)、UA高剂量组(U3组)及秋水仙碱组(C组), 每组16只. 除N组外, 均用二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine, DMN)诱导肝纤维化4 wk, 分别给予安慰剂、不同剂量的UA、秋水仙碱腹腔注射, 治疗4 wk处死大鼠,取肝组织行病理HE染色及VG染色判断炎症和肝纤维化程度; 分别采用免疫组织化学和Western blot检测TGF-β1蛋白和α-SMA蛋白的表达; 采用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达.结果: U2和U3组肝细胞坏死和纤维组织增生明显减轻; M组TGF-β1蛋白、TGF-β1 mRNA及α-SMA蛋白较N组的表达明显增加(8.76±1.47 vs 1.48±0.24; 0.60±0.11 vs 0.05±0.02;0.51±0.10 vs 0.09±0.02, 均P<0.01). U1组和C组TGF-β1蛋白的表达较M组降低( P<0.05),U2和U3组TGF-β1蛋白的表达较M组明显降低(5.32±1.63, 3.98±0.67 vs 8.76±1.47,均P<0.01), 且低于C组的表达(7.14±1.29,P<0.05或0.01). U2和U3组的TGF-β1 mRNA的表达也明显低于M组(0.36±0.07, 0.25±0.06 vs 0.60±0.11, 均P<0.01)和C组(0.47±0.10, P<0.05或0.01). U1-U3组较M组α-SMA蛋白的表达明显降低(0.36±0.08, 0.23±0.02,0.15±0.03 vs 0.51±0.10, 均P<0.01); U2和U3组α-SMA蛋白的表达也显著低于C组(0.43±0.05, 均P<0.01).结论: UA能明显改善肝纤维化大鼠的肝脏组织结构, 减轻肝纤维化; 其抗肝纤维化的机制可能与降低TGF-β1表达, 抑制HSC的激活有关.     

Th17、Treg及其平衡与大鼠肝移植术后免疫耐受的研究

目的探讨肝移植术后肝组织T淋巴细胞Th17/Treg表达变化和肝移植免疫耐受之间的关系.方法以采用改良Kamada二袖套法建立LEWIS→BN原位肝移植大鼠急性排斥反应模型:LEWIS大鼠为供体,BN大鼠为受体,行原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT).对照组为:BN→BN原位肝移植大鼠耐受模型:BN大鼠为供体,BN大鼠为受体,行OLT.术后观察大鼠一般情况,并于第1、3、5及7天分别处死大鼠取肝组织,HE染色观察肝组织结构.检测血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)、白介素(interleukin,IL)-17、IL-23、IL-10和转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)的表达水平.结果与对照组比较,LEWIS→BN组各时间点肝功能指标ALT、AS T明显上调(P0.05).对照组第7天ALT:819.29 IU/L±79.33 IU/L;OLT组第7天ALT:1305.62 IU/L±94.82 IU/L;对照组第7天AST:337.82 IU/L±32.17 IU/L;OLT组第7天AST:867.75 IU/L±73.97 IU/L;大鼠第7天外周血Th17相关因子IL-17(对照组:28.67 pg/m L±2.55 pg/m L,OLT组:92.36 pg/m L±9.00 pg/m L)、IL-23(对照组:26.82 pg/m L±8.17 pg/m L,OLT组:62.98 pg/m L±12.96 pg/m L)明显上升,而Treg相关因子IL-10(对照组:76.92 pg/m L±12.87 pg/m L,OLT组:47.92 pg/m L±7.00 pg/m L)、TGF-β1(对照组:129.47 pg/m L±18.37 pg/m L,OLT组:82.48 pg/m L±11.83 pg/m L)明显下降,Th17/Treg表达失去平衡.同时,TGF-β下游Smad2/3蛋白具有跟TGF-β1相同变化趋势,LEWIS→BN急性排斥组与BN→BN免疫耐受组相比,差异具有统计意义(P0.05).结论IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β1、Smad2/3参与了同种异体大鼠肝移植急性排斥反应,引起Treg向Th17的免疫偏移,可作为治疗大鼠肝移植免疫耐受的靶向指标.     

急性肝衰竭TNF-α、Caspase-3及TGF-β1 mRNA的表达及罗格列酮的干预

目的: 观察D-氨基半乳糖(D-Ga lN)联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝衰竭TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA的表达,并探讨罗格列酮的干预作用.方法: ♂昆明小鼠随机分为3组: 正常组、对照组、干预组.对照组和干预组以D-Ga lN/LPS腹腔注射构建小鼠急性肝衰竭模型,正常组则相应予以生理盐水腹腔注射;干预组于造模前2 h予以罗格列酮灌胃,正常组和对照组则相应予以生理盐水灌胃.比较各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,肝组织病变程度及肝组织TNF-α、Caspase-3,TGF-β1 mRNA的表达水平.结果: D-GalN联合LPS腹腔注射成功构建了小鼠急性肝衰竭模型,对照组肝组织中TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA的表达较正常组明显增高( P＜0.001);干预组小鼠血清ALT,AST水平明显低于对照组(403.6±76.1 U/L vs 3664.8±646.1 U/L,464.6±63.0 U/L vs 3514.0±468.9 U/L,均P＜0.001),肝组织中TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA表达水平明显低于对照组(0.270±0.042 vs 0.459±0.072,0.388±0.033 vs 0.553±0.033,0.261±0.031 vs 0.403±0.042,均P＜0.001);与对照组比较,干预组肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞以变性为主,未见明显坏死.结论: 罗格列酮可能通过下调T N F - α、Caspase-3、TGF-β1的表达对D-GalN/LPS小鼠急性肝衰竭起保护作用.     

梗阻性黄疸对大鼠周围神经结构的影响

将30只Wistar大鼠随机分为对照组、假手术组、梗阻性黄疸（OJ）组,每组10只。OJ组大鼠于近肝门处游离并结扎胆总管,假手术组仅做游离但不结扎胆总管。对照组、假手术组大鼠术后体质量上升,OJ组体质量显著降低,与术前相比P均〈0.05。OJ组大鼠术后血清直接胆红素、胆汁酸、内毒素水平显著高于正常对照组和假手术组,P均〈0.01。OJ组神经损伤较重。认为梗阻性黄疸大鼠存在周围神经变性,与内毒素移位和高胆红素血症有关。     

IL-10基因修饰骨髓源性肝干细胞移植对肝纤维化大鼠细胞外基质积聚的影响

目的: 评价IL-10基因修饰骨髓源性肝干细胞(BDLSCs)移植对肝纤维化大鼠细胞外基质(ECM)积聚的影响.方法: 利用免疫磁珠细胞分选(magnetic beadcell sorting, MACS)方法分选大鼠β2m-/Thy-1++BDLSCs. 将腺病毒介导的IL-10基因转导至BDLSCs, 采用ELISA法检测IL-10蛋白分泌水平. 将大鼠随机分为4组: 正常组、模型组、BDLSCs组及BDLSCs/IL-10组. 采用PCR法检测Y染色体性别决定基因Sry; 采用VG染色法观测肝组织胶原沉积面积; Western blot法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscleactin, α-SMA)表达; 采用碱水解法检测肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline, Hyp)浓度; ELISA法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)等细胞外基质含量.结果: MASC法能成功分选纯化BDLSCs.IL-10修饰BDLSCs持续高浓度分泌IL-10蛋白至胞外, 移植后能顺利种植于肝内, 减轻胶原沉积, 减少α-SMA表达从而抑制肝星状细胞活化, 与BDLSCs组比较, BDLSCs/IL-10组大鼠肝组织Hyp水平显著降低(255.0±50.5 μg/gvs 373.0±26.7 μg/g, P<0.01), 血清HA, LN及PCⅢ水平也有所降低, 差异具有统计学意义(40.5±7.7 μg/L vs 79.4±10.3 μg/L, 61.5±16.4 μg/L vs 77.7±12.6 μg/L, 14.3±0.8 μg/Lvs 14.9±1.5 μg/L, P<0.01或0.05).结论: IL-10基因修饰BDLSCs移植能有效减少肝纤维化大鼠ECM的积聚, 为治疗肝纤维化提供了新思路.     

细胞自噬在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤模型中的保护作用及机制

目的利用D-氨基半乳糖(D-Gal N)/脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤模型研究细胞自噬在急性肝损伤中的作用及机制。方法以C57BL/6小鼠为研究对象,腹腔注射D-Gal N/LPS建立小鼠急性肝损伤模型。动物实验分组:对照组、DGal N/LPS组、雷帕霉素+D-Gal N/LPS组、三甲基腺嘌呤(3-MA)+D-Gal N/LPS组、Atg7 siRNA+D-Gal N/LPS组。观察不同分组中小鼠的生存情况,观察肝组织病理变化评价肝损伤情况,全自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平,实时荧光定量PCR检测肝组织中TNFα和IL-6基因表达,荧光显微镜观察肝组织中肝细胞凋亡情况。多样本组间比较采用One-way ANOVA分析,进一步两两比较,方差齐时采用LSD-t检验,方差不齐时采用Games-Howell法。结果与D-Gal N/LPS组相比,应用自噬激活剂雷帕霉素干预后,小鼠生存率明显升高(80%vs 40%),肝脏出血、炎症和坏死明显减轻,肝细胞凋亡明显减少,血清ALT、AST水平明显降低[ALT:(427.4±195.5)U/L vs(977.7±247.3)U/L,P=0.002;AST:(378.2±169.7)U/L vs(1100.0±438.0)U/L,P=0.004],肝组织中炎症因子TNFα和IL-6 mRNA表达水平明显降低[TNFαmRNA:0.288±0.010 vs 1.136±0.267,P=0.003;IL-6mRNA:0.272±0.061 vs 0.869±0.317,P=0.010];应用自噬抑制剂3-MA和Atg7 siRNA干预后,小鼠生存率明显降低(0、10%vs 40%),肝脏出血、炎症和坏死明显加重,肝细胞凋亡明显增多,血清ALT、AST水平明显升高[ALT:(1836.0±560.5)、(1654.0±627.6)U/L vs(977.7±247.3)U/L,P值分别为0.006、0.034;AST:(1948.0±645.5)、(1804.0±492.6)U/L vs(1100.0±438.0)U/L,P值分别为0.029、0.033],肝组织中TNFα表达水平明显升高[2.026±0.342、1.994±0.286 vs 1.136±0.267,P值分别为0.006、0.005]。结论在D-Gal N/LPS诱导的小鼠急性肝损伤中,细胞自噬发挥着重要的保护性作用,其调控机制可能与自噬抑制炎症因子和肝细胞凋亡有关。     

梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前术后肝脏中转化生长因子β1表达

目的探讨转化生长因子(TGF)-β1在梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前后肝脏中的表达。方法监测梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前及术后不同时间组及假手术组TGF-β1的表达强度。结果 TGF-β1在梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前表达强度较高,术后3、6、9 d表达强度逐渐下降,与假手术组有明显差异(P<0.05)。结论 1TGF-β1在梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前术后肝脏中的表达存在显著差异,术后不同时段差异不同,术后随时间推移TGF-β1表达减弱。2胆道外引流术可改善梗阻性黄疸大鼠肝损伤,越早引流肝损伤恢复越快。     

血清糖链抗原19-9对梗阻性黄疸患者发生急性胆管炎的预测价值

目的探讨梗阻性黄疸患者发生急性胆管炎的预测因子。方法回顾性分析海口市第四人民医院2010年10月-2015年10月收治的358例胆总管结石合并梗阻性黄疸患者的临床资料。根据患者是否发生急性胆管炎,分为急性胆管炎组(n=223)和梗阻性黄疸组(n=135)。比较两组患者的年龄、性别和合并症,评估血清肿瘤标志物及肝功能指标的异常与急性胆管炎发生的关系。计量资料组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验。选取有统计学意义的指标构建受试者工作特征曲线(ROC),评价其对急性胆管炎诊断的敏感度和特异度。结果急性胆管炎组血清糖链抗原(CA)19-9、CA12-5水平明显高于梗阻性黄疸组[(82.33±23.01)k U/L vs(36.75±12.58)k U/L,(30.21±9.59)k U/L vs(18.62±5.27)k U/L],差异均有统计学意义(t值分别为11.028、8.597,P值均0.001)。ROC曲线分析显示,血清CA19-9、CA12-5曲线下面积分别为0.891、0.705,对应诊断准确度最高的临界值分别为61.01 k U/L、22.56 k U/L,敏感度分别为82.1%、77.6%,特异度分别为79.8%、69.5%。结论血清CA19-9升高对胆总管结石合并梗阻性黄疸发生急性胆管炎有较大的预测价值。     

联合应用TGF-β、TGF-βR siRNA对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路相关基因表达的抑制

目的: 探讨TGF-β1、TGF-β1R siRNA联合应用对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路的干预作用.方法: 清洁级健康大鼠36只分为2组: 正常对照组(n=6, 注射生理盐水)与实验组(n =30).实验组动物在实验第1天和第5天腹腔注射CCl4花生油溶液6 mL/kg, 造成急性肝损伤并启动TGF-β/Sma d信号传导通路.实验分为TGF-β1 shRNA干预组(T);TGF-β1siRNA+TβRⅠshRNA干预组(T+R1);TGF-β1shRNA+TβRⅡ siRNA干预组(T+R2);TGF-β1siRNA+TβRⅠshRNA+TβRⅡ shRNA干预组(T+R1+R2)和模型对照组(M).观察各实验组血清ALT、AST、HA;肝组织学RT-PCR和免疫组织化学检测肝组织中α-SMA、COL-1、COL-3、TGF-β1、Smad3、PCNA和TGF-αmRNA及蛋白的表达.结果: 经shRNA质粒DNA干预的4个治疗组与模型组比较, 均能显著降低血清ALT, AST及HA的水平(ALT: 592.80±98.4 IU/L, 440.80±91.9 IU/L, 461.61±120.0 IU/L, 284.00±49.0IU/L vs 949.5±196.1 IU/L;AST: 686.80±112.3IU/L, 591.00±99.87 IU/L, 607.50±84.8 IU/L,398.30±61.9 IU/L vs 985.67±274.8 IU/L;HA:5682.80±824.14 μg/L, 2871.26±394.68 μg/L,3004.29±354.25 μg/L, 1982.12±402.71 μg/Lvs 8444.65±812.15 μg/L, P<0.05)的测定值;4个治疗组两两比较, T+R1+R2组疗效明显高于其他3组(P<0.01).与模型组比较.shRNA质粒DNA干预能明显抑制TGF-β1, Smad3, α-SMA,COL-1及COL-3的mRNA与蛋白的表达(均P<0.05).其抑制效果以T+R1+R2组最明显.对蛋白水平表达的作用也有相似趋势.结论: 针对TGF-βRⅠ及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)的siRNA联合治疗对小鼠肝损伤中TGF-β/Smad信号传导通路相关的基因表达的抑制具有协同作用.     

肾素血管紧张素系统在非酒精性脂肪性肝病发病机制中的实验研究

目的 探讨肝组织肾素血管紧张素系统在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病机制中的作用.方法 取Wistar大鼠24只均分为模型组和对照组.对照组予正常饮食,模型组予高脂饮食,8周后处死大鼠,测定血清肝功能、血脂、血糖和胰岛素,分别以HE染色和苦味酸-天狼星红染色进行肝组织病理学观察,ELISA法测定肝组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,免疫组织化学法测定肝组织转化生长因子(TGF)-β1表达水平.结果 模型组大鼠高脂喂养8周后,体质量、肝指数、肝功能、血脂、血胰岛素显著高于对照组[体质量:(463.50±22.72)g比(405.12±10.32)g;肝指数:(3.75±0.21)比(2.66±0.15);ALT:(79.8±8.6)U/L比(58.8±11.6)U/L; AST:(200.01±51.72) U/L比(150.30±37.27)U/L;胆固醇:(3.67±0.48)mmol/L比(1.50±0.23)mmol/L;三酰甘油:(2.06±0.40) mmol/L比(0.71±0.34) mmo1/L;胰岛素:(17.37±2.89)pmol/L比(11.08±2.12) pmol/L],差异均有统计学意义(均P＜0.01).模型组大鼠病理组织学均出现明显的肝脂肪变性,且部分出现小叶内和汇管区炎性反应,部分肝组织出现明显的纤维化改变.模型组大鼠肝组织AngⅡ[(32.80±2.81) pg/ml]较对照组[(22.83±1.75)pg/ml]高(t=9.559,P＜0.01).免疫组织化学检测显示模型组TGFβ1表达量明显高于对照组(Z=--2.540,P=0.011).Spearman相关性分析显示,大鼠肝组织内AngⅡ浓度增加程度与肝脂肪变积分(r=0.644,P=0.002)和TGF-β1表达量(r=0.470,P=0.037)均呈正相关.结论 AngⅡ和TGF-β1在NAFLD模型大鼠的肝组织内浓度明显增加,肾素血管紧张素系统可能参与了NAFLD的发生和发展.