circLMNB1对结直肠癌细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及机制探讨

目的 观察circLMNB1表达变化对结直肠癌细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响,并探讨其机制.方法 将培养的结直肠癌细胞系HCT116分为实验组、对照组、空白组,其中空白组正常培养,实验组、对照组分别转染cir?cLMNB1 siRNA、NC siRNA.采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测凋亡细胞水平和细...     

顺铂对人结直肠癌细胞HCT-116中TOB1表达的影响

目的探讨顺铂对人结直肠癌细胞株HCT-116中TOB1的表达水平和细胞内分布的影响。方法采用RT-PCR和Western印迹法实验检测不同剂量顺铂处理后HCT-116细胞中TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化;采用同样的方法检测顺铂处理后不同时间TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化;同时采用免疫荧光实验检测顺铂对TOB1在细胞内分布的影响。结果 HCT-116细胞在不同剂量顺铂处理24 h后,TOB1 mRNA及蛋白的表达水平均明显增加,并存在一定的剂量依赖性;不同处理时间检测发现TOB1 mRNA及蛋白的表达水平在顺铂处理后2 h即明显升高,24 h后仍保持较高的表达水平;免疫荧光实验发现HCT-116细胞中TOB1主要分布在细胞质,而顺铂处理2 h后HCT-116细胞中TOB1即向细胞核内转位。结论顺铂诱导人类结直肠癌细胞株HCT-116中TOB1 mRNA及蛋白的表达增加,同时诱导TOB1向细胞核内转位,提示TOB1作为临床结直肠癌化疗靶基因的可能,对临床用药以及疗效的判断具有一定的指导作用。     

miR-503在结直肠癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨microRNA-503(miR-503)在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测54例结直肠癌组织及4种结直肠癌细胞(SW480、Lovo、LS174T和HT-29)中的miR-503水平,分析结直肠癌组织miR-503表达与常见临床病理参数的关系,采用脂质体转染miR-503模拟物(mimics)至miR-503水平最低的细胞,采用MTT法、流式细胞仪及Transwell法检测过表达miR-503对细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭的影响。结果 54例结直肠癌组织的miR-503相对表达量为(0.257±0.011),低于癌旁组织(P0.05),且miR-503水平与TNM分期、分化情况、肿瘤大小和术前癌胚抗原均有关(P0.05);与人正常结肠细胞系CCD-18Co相比,4种不同恶性程度结直肠癌细胞SW480、Lovo、LS174T和HT-29的miR-503相对表达量依次为(0.342±0.072)、(0.161±0.054)、(0.260±0.041)和(0.415±0.086),差异均有统计学意义(P0.05);与对照组相比,转染miR-503 mimics后的细胞增殖抑制率和凋亡率均升高,G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例均降低,穿膜细胞数减少(P0.05)。结论 miR-503在结直肠癌组织和细胞中低表达,且与结直肠癌的临床病理参数有关,上调miR-503水平可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭并诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

circ_0009910对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的 探讨环状RNA_0009910(circ_0009910)对结直肠癌细胞(SW620)增殖、凋亡的影响及机制.方法 常规培养SW620细胞,将细胞随机分组并进行转染,si-NC组转染si-NC、si-circ_0009910组转染si-circ_0009910、pcDNA组转染pcDNA、pcDNA-circ_0...     

TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组：NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<...     

亚硒酸钠对结直肠癌HT-29细胞AMPK/mTOR通路活化及凋亡的影响

目的研究亚硒酸钠对结直肠癌HT-29细胞中AMPK及其下游靶蛋白mTOR的作用,以及其对HT-29细胞凋亡的影响。方法分别用亚硒酸钠、AMPKα亚基特异激活剂AICAR和AMPK特异siRNAs处理HT-29细胞。采用Western印迹检测HT-29细胞中AMPK和mTOR的磷酸化水平、流式细胞术检测HT-29细胞凋亡率。结果与对照相比,亚硒酸钠可上调HT-29细胞中AMPK的磷酸化水平,下调mTOR的磷酸化水平,并促进HT-29细胞凋亡(P<0.01);亚硒酸钠单独处理HT-29细胞与AMPKα亚基特异激活剂单独处理HT-29细胞作用类似;敲低HT-29细胞中AMPK蛋白表达后,mTOR磷酸化水平升高,同时,亚硒酸钠对HT-29细胞的促凋亡作用降低(P<0.01)。结论亚硒酸钠通过激活AMPK通路进而抑制mTOR通路,从而促进HT-29细胞凋亡。     

细胞凋亡与结直肠癌发生机制的研究进展

结直肠癌的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，深入了解其发病机制对更好地进行靶向性治疗具有指导作用。为维持正常功能，哺乳动物肠黏膜需要经历一个连续的细胞更替过程，肠黏膜细胞增殖仅局限于隐窝，细胞分化则逐渐上移至绒毛，分化的肠细胞构成了，肠黏膜细胞主体，最终发生程序性细胞死亡。在病理状态下，胃肠道凋亡系统发生功能性紊乱。本文主要对细胞凋亡与结直肠癌的关系．以及相关新的靶向性治疗策略作一综述。     

腹腔镜结直肠癌根治术治疗结直肠癌患者的疗效观察及对胃肠功能的影响研究

目的探讨腹腔镜结直肠癌根治术治疗结直肠癌患者的临床疗效以及对胃肠功能的影响。方法选取62例结直肠癌患者为研究对象,采取数字表法随机分为腹腔镜直肠癌根治术组及开腹结直肠癌根治术组各31例。结果腹腔镜组手术时间与开腹手术时间比较差异无显著性;出血量(84.77±12.06)mL、住院时间(10.20±1.40)d、并发症发生率(22.58%)、肠鸣音恢复时间(2.76±0.05)d、排气时间(2.51±1.03)d、进食时间(53.20±20.04)h等均明显低于开腹组(P<0.05)。结论腹腔镜结直肠癌根治术治疗结直肠癌,术中出血量少、手术时间短、住院时间短、并发症低,且对胃肠功能造成的影响小。     

miR-23a/SATB2信号通路对结直肠癌SW480细胞凋亡和转移的影响

目的 探讨miR-23a/SATB2 信号通路对结直肠癌SW480 细胞凋亡和转移的影响.方法 在结直肠癌SW480细胞中转染miR-23a抑制剂(inhibitor),采用定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测miR-23a mRNA相对表达量,CCK-8 法检测细胞增殖,平板克隆法检测细胞克隆能力,流式细胞术测定...     

芒柄花黄素对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 观察芒柄花黄素对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法 将结直肠癌细胞HCT116随机分为两组,观察组分别以25、50、100μmol/L芒柄花黄素处理,对照组以等量二甲基亚砜处理;用MTT法检测细胞增殖情况(A490),Hoechst荧光染色法计数凋亡细胞,qRT-PCR法检测细胞中的HOC转录反义RNA(HOTAIR),Western blot法检测细胞中的Bax和Bcl-2。结果 与对照组比较,观察组随着芒柄花黄素浓度增加及处理时间延长HCT116细胞A490值降低(P均<0.05);观察组以25、50、100μmol/L芒柄花黄素处理48 h后HCT116细胞凋亡数分别为(3.20±0.84)、(20.20±1.92)、(31.00±2.92)个/HP,均高于对照组的(1.6±1.14)个/HP(P均<0.01);与对照组比较,观察组细胞HOTAIR、Bcl-2表达量降低,而Bax表达量增加,P均<0.05。结论芒柄花黄素可能通过抑制HOTAIR调节Bax和Bcl-2的表达,从而抑制结直肠癌细胞的生长并诱导细胞凋亡。     

西咪替丁对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:观察西咪替丁对人胃癌SGC-7901细胞增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:培养人胃癌SGC-7901细胞,以不同浓度的西咪替丁处理后用MTT法检测SGC-7901细胞的增殖情况;流式细胞术检测癌细胞周期和凋亡;Hoechst33258染色后荧光显微镜观察药物作用后癌细胞的形态变化;透射电镜观察用药后细胞超微结构的改变;Western印记法检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果:以不同浓度的西咪替丁分别处理人胃癌SGC-7901细胞24h和48 h,结果发现,在0.5,1,2.5,5,10 mmol/L时对SGC-7901细胞的增殖具有显著的抑制作用,与对照组相比差异显著(24 h:0.705±0.018,0.560±0.038,0.408±0.029,0.276±0.042,0.205±0.031 vs 0.803±0.012,P<0.05;48 h:0.902±0.024,0.671±0.015,0.420±0.030,0.180±0.037,0.0117±0.021 vs 1.079±0.040,P<0.05),并呈时间和剂量依懒性,而在0.25 mmol/L以下浓度对SGC-7901细胞未见明显细胞毒作用;0.5-10 mmol/L西咪替丁作用后,可观察到典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪检测可见凋亡峰,G0/G1期细胞明显增多(60.83±2.27,67.21±1.18,75.15±4.01,81.88±3.10,86.99±1.43 vs 50.28±1.97,P<0.05);西咪替丁还可下调SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达.结论:西咪替丁可改变细胞周期分布,并能通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白表达,诱导SGC-7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

miR-1908对人内脏前体脂肪细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响

目的研究miR-1908对人内脏前体脂肪细胞（HPA-v）增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。 方法体外培养HPA-v脂肪细胞,并根据实验分为抑制剂组（转染经化学修饰的miR-1908-5p抑制剂）、空载体组（转染空载体）、对照组（未进行任何处理），CCK8（Cell Counting Kit-8）法用于检测细胞的增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期、Tunnel法检测细胞凋亡情况。 结果CCK8结果显示miR-1908抑制剂组的吸光度（OD）值（0.61±0.07）明显低于对照组（1.01±0.05）（P<0.05），抑制miR-1908具有抑制HPA-v脂肪细胞增殖的作用；Tunel结果表示miR1908抑制剂组凋亡率（0.27±0.03）%明显大于对照组（0.13±0.05）%（P<0.05）；流式细胞测定的结果为G0/G1期细胞增加（与对照组相比，P<0.05），表明抑制miR-1908表达可能通过诱导HPA-v脂肪细胞G0/G1期阻滞抑制HPA-v脂肪细胞增殖。 结论下调miR-1908表达能明显抑制人内脏前体脂肪细胞增殖，诱导细胞凋亡及改变细胞周期分布。     

丙戊酸钠对肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、细胞周期及对p21WAF1/CIP1mRNA表达的影响.方法:实验分为空白对照组、PBS组、VPA0.2mmol/L组、VPA1.0mmol/L组和VPA5.0mmol/L组.不同浓度VPA干预人肝癌SMMC-7721细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期;干预72h后,用Real-timePCR法检测VPA干预72h后p21WAF1/CIP1mRNA的表达情况.结果:与空白对照组及PBS组比较,不同浓度的VPA作用24h,48h及72h时组肝癌SMMC-7721细胞增殖均出现了不同程度抑制(请将具体数据列出来P<0.05),随着VPA药物浓度升高,细胞增殖抑制作用逐渐增强,随作用时间延长,抑制程度逐渐增强(P<0.05).随药物浓度升高,G1期细胞比例逐渐增多,S期细胞比例逐渐减少,细胞发生G0/G1期阻滞.VPA干预肝癌SMMC-7721细胞72h后,VPA组p21WAF/CIP1mRNA表达较空白对照组及PBS组表达明显升高(请将具体数据列出来P<0.01).结论:VPA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性,并诱导出现G0/G1细胞周期阻滞,同时上调p21WAF1/CIP1mRNA的表达.     

黄芩甙对肝癌细胞BEL-7402抗黏附作用中细胞凋亡和细胞周期的改变

目的:研究黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系黏附、细胞凋亡及细胞周期的影响,探讨三者之间的关系.方法:应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞,不同浓度黄芩甙处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其黏附力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞integrinβ_1、E-cd表达的改变及细胞凋亡率.结果:5,10,20mg/L黄芩甙处理组细胞黏附力与对照组相比均有显著降低(52.38±3.83,35.63±2.32,26.58±1.13 vs 84.32±6.74.p<0.05).对照组表现出纤维母细胞样形态,伸出形态各异的伪足.而黄芩甙组细胞形态较圆,伪足数目相对较少,电镜下显示细胞微绒毛明显减少,甚至消失.5,10,20mg/L黄芩甙组细胞integrinβ_1表达较对照组降低(354.07±18.17,319.44±15.21,291.49±12.88 vs 407.54±20.58:P<0.05),E-cd的表达则增加(335.5±20.18,376.4±22.36,393.8±25.68 vs 251.72±12.34,P<0.05).黄芩甙作用后,随黄芩甙浓度增加肝癌细胞G_0/G_1,期比例逐步增高,S期细胞减少,同时细胞凋亡率增加.结论:黄芩甙对肝癌BEL-7402细胞发挥抗黏附作用,其机制可能与抑制黏附分子E-cd的表达,促进integrinβ_1表达有关.在抗黏附的同时细胞周期发生改变,细胞凋亡增多.     

Berberine induces cell cycle arrest and apoptosis in human gastric carcinoma SNU-5 cell line

AIM:To investigate the relationship between theinhibited growth (cytotoxic activity) of berberine andapoptotic pathway with its molecular mechanism ofaction.METHODS:The in vitro cytotoxic techniques werecomplemented by cell cycle analysis and determinationof sub-G_1 for apoptosis in human gastric carcinomaSNU-5 cells.Percentage of viable cells,cell cycle,andsub-G_1 group (apoptosis) were examined and determinedby the flow cytometric methods.The associated proteinsfor cell cycle arrest and apoptosis were examined byWestern blotting.RESULTS:For SNU-5 cell line,the IC (50) was found tobe 48 μmol/L of berberine.In SNU-5 cells treated with25-200 μmol/L berberine,G_2/M cell cycle arrest wasobserved which was associated with a marked incrementof the expression of p53,Wee1 and CDk1 proteins anddecreased cyclin B.A concentration-dependent decreaseof cells in G_0/G_1 phase and an increase in G_2/M phasewere detected.In addition,apoptosis detected as sub-Gocell population in cell cycle measurement was proved in25-200 μmol/L berberine-treated cells by monitoring theapoptotic pathway.Apoptosis was identified by sub-G_0cell population,and upregulation of Bax,downregulation of Bcl-2,release of Ca(2 ),decreased the mitochondrialmembrane potential and then led to the release ofmitochondrial cytochrome C into the cytoplasm andcaused the activation of caspase-3,and finally led to theoccurrence of apoptosis.CONCLUSION:Berberine induces p53 expression andleads to the decrease of the mitochondrial membranepotential,Cytochrome C release and activation ofcaspase-3 for the induction of apoptosis.     

抗增殖蛋白过表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响*

目的 探讨抗增殖蛋白（PHB）过表达对人肝癌细胞系HepG₂细胞增殖和凋亡的影响。方法 在已构建的PHB真核表达质粒pEGFP-N1-PHB瞬时转染HepG₂细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测HepG₂细胞增殖;使用流式细胞仪检测HepG₂细胞周期和凋亡。结果 转染pEGFP-N1-PHB细胞增殖明显低于pEGFP-N1空载转染细胞或未转染细胞（P<0.05）;在转染后48 h,转染组G2/M期细胞比例为（27.84±0.47）%,显著高于空载转染组的（17.21±0.64）%或未转染组的（22.67±0.33）%（P<0.001）;转染组细胞凋亡率为（31.72±0.35）%,显著高于空载转染组的（18.66±0.56）%或未转染组的（13.47±0.94）%（P<0.001）。结论 PHB过表达可抑制人肝癌HepG₂细胞增殖,诱导细胞进入G2/M期后被阻滞,并诱导细胞凋亡。     

二甲双胍对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖与凋亡的影响

目的观察二甲双胍对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖、凋亡的影响,探讨其相关分子机制。方法应用1、2．5、5、10、20、40、60mmol／L二甲双胍处理人胰腺癌CFPAC-1细胞24、48、72h,以未处理的细胞作为对照组。采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测磷酸化AMPK（p-AMPK）、FAS、cyclinD1、Bcl-xl、Bax、caspase-3、survivin蛋白的表达。结果二甲双胍呈浓度及时间依赖性抑制CFPAC-1细胞的增殖。40mmol／L二甲双胍处理细胞48h后,G0／G1细胞比例显著增多[（65．93±0.27）％比（42．89±1．02）％],G2／M期、s期细胞比例显著减少[（22．01±2．95）％比（38．28±4．93）％,（13．58±0．43）％比（20．12±3．38）％],差异均有统计学意义（P值均〈0．05）;细胞凋亡率从对照组的（3．01±0．49）％增加到（32．97±3．19）％（P〈0．05）;p-AMPK、Bax、caspase-3表达增强,FAS、cyclinD1、Bcl-xl、survivin表达减弱。结论二甲双胍可以显著抑制CFPAC-1细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能通过激活AMPK信号通路,下调FAS、cyclinD1、survivin表达及Bcl-xl／Bax比值,上调caspase-3表达所致。     

阿司匹林对胃癌细胞株7901增殖和凋亡的影响

目的 体外观察阿司匹林（ASA）对胃癌细胞株SGC-7901细胞平殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞仪（FCM）、电镜和^3h-TdR核素标记等技术,研究ASA和SGC-7901细胞增殖的抑制和可能的机制。结果 MTT显示体外ASA对SGC-7901有细胞毒作用,与浓度和作用时间有相关性,^3H-TdR实验表明,ASA对细胞DNA合成有抑制制作。FCM显示,DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,凋亡率在7.8%-34.4%。使S期、G2/M期细胞比例升高,G1期比例下降,呈一定剂量效应关系。电镜下见典型的细胞凋亡形态学特征：细胞核染色质致密浓缩,凋亡小体形成等。结论 体外ASA对SGC-7901细胞增殖有抑制作用,可能与诱导细胞凋亡和阻止细胞周期的进展有关。     

辛二酰苯胺异羟肟酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,给予不同浓度（2.5、5.0和7.5μmol/L）SAHA处理12~72h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;加入SAHA（5.0和7.5μmol/L）处理SMMC-7721细胞24h或48h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;采用RT-PCR法检测p53、bcl-2及bax基因mRNA水平;采用分光光度法检测Caspase-3蛋白表达。结果经5.0μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,细胞增殖率较对照下降了25.8%和28.8%,经7.5μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,下降了30.6%和48.6%;经5.0μmol/L或7.5μmol/L SAHA处理细胞24 h后,S期细胞从对照水平（24.33±0.17）%分别显著上升至（32.08±0.160）%和（33.96±0.20）%,（P=0.00）,早期凋亡率均由（0.19±0.04）%显著上升至（1.67±0.59）%和（8.92±0.94）%,（P=0.03）,而在48h后,S期细胞由（24.33±1.18）%分别显著上升至（32.25±0.53）%和（34.61±0.08）%,早期凋亡率由（0.19±0.04）%分别显著上升至（14.49±2.26）%和（26.23±0.55）%,（P=0.00）;SAHA能够上调p53、bax基因mRNA水平,下调bcl-2基因mRNA水平;经5.0μmol/L和7.5μmol/L SAHA处理细胞24h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平（0.41±0.07）分别上升至（0.81±0.02）,（P=0.01）和（1.09±0.21）,（P=0.00）,而在处理48 h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平分别上升至（1.43±0.23）和（2.01±0.01）,（P均=0.00）。结论 SAHA通过影响p53、bcl-2及bax凋亡相关基因水平及Caspase-3蛋白的活性,对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用。