β-榄香烯对胃癌MGC803细胞凋亡的影响及机制探讨

目的观察β-榄香烯对胃癌MGC803细胞凋亡的影响,并探讨其机制c用不同浓度β-榄香烯作用于MGC803 24～48 h,MTT法检测细胞活力,流式细胞术测算细胞凋亡率,Western blot法检测MGC803中的磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）及总ERK。结果随着药物浓度增加,细胞存活率逐渐降低（P均〈0.05）,细胞凋亡率明显增高（P均〈0.05）;随着药物浓度增加、作用时间延长,MGC803中p-ERK表达量显著下降（P均〈0.05）。结论β-榄香烯可诱导胃癌MGC803凋亡,其机制可能与抑制细胞ERK通路活性有关。     

ERK通路对胃癌细胞顺铂敏感性的调节作用

目的:研究在人胃癌细胞中,细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路对人胃癌细胞顺铂敏感性的影响.方法:采用MTT法测定顺铂对两种胃癌细胞MGC-803、BGC-823的增殖抑制影响,测定PD98059作用BGC-823细胞后顺铂对细胞的增殖抑制影响.Western blot方法检测MGC-803、BGC-823细胞中谷胱甘肽-S-转移酶π(glutathione S-transferases π,GGST-π)蛋白的表达;及PD98059作用BGC-823细胞24 h后BGC-823细胞中p-ERK、GsT-π蛋白的表达.结果:顺铂作用两种胃癌细胞7 2 h后.MGC-803,BGC-823细胞的IC50值分别为0.71和1.21 mg/L,且MGC-803细胞的增殖率明显低于BGC-823细胞的增殖率(P<0.05).MGC-803细胞顺铂的敏感性高于BGC-823细胞.MGC-803细胞不表达GST-π蛋白,BGC-823细胞强表达GST-兀蛋白.20 μmol/LPD98059作用BGC-823细胞24 h后,p-ERK蛋白表达明显下调,GST-π蛋白表达亦明显下调.20 μmol/L PD98059作用BGC-823细胞24 h后,加入顺铂培养48 h,BGC-823+PD98059组增殖率明显低于对照组,BGC-823细胞对顺铂的敏感性明显增强.结论:下调胃癌细胞GST-π蛋白的表达可增强其对顺铂的敏感性;抑制胃癌细胞中ERK通路的活化,可以降低其细胞内GST-π蛋白表达;ERK通路通过调节人胃癌细胞GST-π基因表达影响其对顺铂的敏感性.     

β-榄香烯对不同分化程度胃癌细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯治疗胃癌的作用机制.方法:应用四唑蓝(MTT)比色法、端粒重复扩增(TRAP)-微孔板杂交法、光镜检查和DNA末端原位标记染色法(TUNEL)研究β-榄香烯对胃癌细胞株SGC-7901(中分化)、MKN-45(低分化)和MKN-28(高分化)的细胞毒作用及其对端粒酶活性、细胞形态学变化和细胞凋亡的影响.结果:β-榄香烯对不同分化程度的胃癌细胞均具有较强的细胞毒作用;其抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关.β-榄香烯抑制端粒酶活性及诱导凋亡的效果与作用时间、浓度及细胞分化程度相关.结论:β-榄香烯对胃癌细胞具有很强的细胞毒作用,这一作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关.     

β-榄香烯对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2家族的影响

[目的]研究β-榄香烯对肝星状细胞(HSC)凋亡及凋亡相关蛋白的影响。[方法]传代培养的大鼠HSC系HSC-T6与不同剂量β-榄香烯(终浓度为10、5、2.5 mg/L)共同培养48 h后,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测β-榄香烯对HSC凋亡的影响,免疫组化检测凋亡相关蛋白BcL-2/Bax。[结果]β-榄香烯可使HSC凋亡率明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,促凋亡分子Bax表达增强(P<0.01)。[结论]β-榄香烯可通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡。     

转化生长因子β1基因和细胞外信号调节激酶在胃癌中的表达和意义

目的：研究胃癌组织中TGF-β1、ERK-1及ERK-2的表达特点和意义。方法：选取67例胃癌标本，常规石蜡包埋行TGF-β1、ERK-1及ERK-2免疫组织化学染色。结果：TGF-β1、ERK-1、ERK-2在胃腺癌、粘液癌和印戒细胞癌中过表达率无明显差异；Ⅲ∕Ⅳ期、低分化、癌细胞浸润至深肌层或浆膜层和淋巴结转移的组织TGF-β1、ERK-1、ERK-2过表达率明显高于Ⅰ∕Ⅱ期、高分化、癌细胞未浸润至深肌层和淋巴结未转移组织，差异均有显著性意义。TGF-β1、ERK-1、ERK-2在胃癌中的表达密切相关。结论：TGF-β1、ERK-1和ERK-2三者的表达与胃癌发生发展的生物学行为和预后可能有关，可作为重要的生物学标记物。     

β-榄香烯对胃癌及胃癌耐药细胞杀伤作用的实验研究

目的 研究β-榄香烯联合或不联合化学治疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌细胞株SGC-7901和相应耐药细胞株SGC-7901/5-FU的杀伤作用及机制.方法 用不同剂量β-榄香烯(20、40或80μg/ml)联合或不联合5-FU (100 μg/ml)作用于SGC-7901和SGC-7901/5-FU细胞,采用四甲基偶氮唑盐实验、透射电镜观察、流式细胞仪和DNA原位末端标记(TUNEL)法检测药物对细胞的杀伤作用及其诱导细胞凋亡的情况.通过建立SGC-7901和SGC-7901/5-FU细胞裸鼠移植瘤模型观察β-榄香烯对这两种细胞的体内杀伤作用.结果 β-榄香烯在体内、外均具有抑制SCA3-7901和SGC-7901/5-FU细胞生长的作用(P值均<0.05),一定剂量范围内具量效关系(P=0.02).透射电镜、流式细胞仪和TUNEL实验均显示β-榄香烯抑制两种胃癌细胞生长的作用与其诱导细胞凋亡有关.结论 β-榄香烯在体内外对SGC-7901和SGC-7901/5-FU细胞均具杀伤作用,该作用可能与其诱导细胞凋亡有关.     

鱼藤酮诱导多巴胺能细胞α-突触核蛋白聚集和ERK1/2通路活化的研究

目的探讨鱼藤酮对多巴胺能细胞α-突触核蛋白聚集和细胞外信号调节激酶-1／2（ERK1／2）通路活化的影响。方法用鱼藤酮处理神经元样分化的PCI2细胞,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,免疫荧光法检测α-突触核蛋白聚集,免疫细胞化学法检测ERK1／2通路活化情况。结果鱼藤酮处理后细胞活力呈时间依赖性下降;磷酸化ERK1／2水平逐渐升高（P均〈0．01）;处理16h后细胞内出现α-突触核蛋白聚集体,24h后进一步增多。结论鱼藤酮可诱导α-突触核蛋白聚集和ERK1／2通路活化,参与多巴胺能神经元损伤。     

ERK通路抑制剂对白蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞细胞外基质合成的影响

目的探讨血清白蛋白在肾小管间质纤维化（TIF）发生、发展中的作用。方法将体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞随机分为四组：A组不加刺激物;B组加入5mg／ml人血清白蛋白;C组加入10punol／L的PD98059;D组用10p,mol／LPD98059预处理HK-2细胞45min后再加入5mg／m1人血清白蛋白。RT—PCR法检测各组HK-2细胞在0、12、24、48h基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）和Ⅳ型胶原（col-Ⅳ）mRNA相对表达量。结果B组MMP-9mRNA表达先升高后下降,TIMP-1mRNA、col—ⅣmRNA表达均呈时间依赖性升高,TIMP-1／MMP-9值先下降后升高,D组MMP-9、TIMP-1和col-ⅣmRNA表达均明显低于B组,P均〈0．01;TIMP-1／MMP-9值的失衡得到部分纠正（P〈0．05或〈0．01）。结论人血清白蛋白可能通过ERK通路作用于HK-2细胞,促进ECM合成和抑制ECM降解、诱导ECM积聚而促进TIF发生、发展。     

β-榄香烯脂质体体内外对消化系肿瘤的抑制作用

目的:评价β-榄香烯脂质体注射荆实验性治疗消化系肿瘤的作用.方法:用细胞培养方法测定β-榄香烯脂质体及其乳剂对5株人消化系癌细胞株和1株人胚肺成纤维细胞的半数抑制浓度(IC50);建立肝癌H22昆明鼠实体瘤和腹水模型,尾静脉注射高(80 mg/kg)、中(40 mg/kg)、低(20 mg/kg)剂量β-榄香烯脂质体,测定其在动物体内的抑瘤率和生命延长率,注射葡萄糖和40 mg/kg β-榄香烯乳剂注射液作为阴性和阳性对照.结果:β-榄香烯脂质体及乳剂对5株人消化系癌细胞株的IC50分别为34.1±4.5 mg/L-51.4±4.2 mg/L和41.5±4.7 mg/L-82.3±8.8 mg/L,前者约为后者的1/2.在实体瘤鼠,高、中、低剂量β-榄香烯脂质体和乳剂的抑瘤率分别为47.4%-50.8%、38.2%-45.0%、23.2%-28.2%和21.8%-43.0%,平均瘤质量明显低于葡萄糖组(t>4.09,P<0.05).在腹水瘤鼠,脂质体和乳剂较葡萄糖组生存期延长51.3%-153.0%(t>.92,P<0.05),中、高剂量脂质体组较乳剂组明显延长(t>4.64,P<0.05).β-榄香烯脂质体的刺激症状、尾静脉炎明显低于乳剂组.结论:β-榄香烯脂质体较乳剂有明显抗肿瘤作用和较低的副作用.     

β-榄香烯对大鼠胃粘膜癌变过程bcl-2基因mRNA表达及端粒酶活性的影响

目的：探讨β－榄香烯对大鼠胃粘膜癌变发生、发展过程中bcl-2基因mRNA表达及端粒酶活性的影响。方法：采用甲基硝基亚硝基胍（MNNG）、10％、NaCl混合液加40％乙醇灌胃建立大鼠胃粘膜癌变模型，设立正常组、模型组及榄香烯组，榄香烯组在造模过程中采用β－榄香烯干预。30周后，分别采用原位杂交及端粒微孔板杂交法检测大鼠胃粘膜bcl-2基因mRNA表达及端粒酶活性。结果： 榄香烯组癌变发生率低于模型组。在大鼠胃粘膜癌变的发展过程中,bcl-2 基因mRNA表达与端粒酶活性呈递增趋势，且两者具有高度相关性。结论：下调bcl-2基因表达抑制端粒酶性，是β－榄香烯重要抗癌机制之一。     

β-榄香烯脂质体体内外对消化系肿瘤的抑制作用

目的: 评价beta-榄香烯脂质体注射剂实验性治疗消化系肿瘤的作用. 方法: 用细胞培养方法测定beta-榄香烯脂质体及其乳剂对5株人消化系癌细胞株和1株人胚肺成纤维细胞的半数抑制浓度(IC50); 建立肝癌H22昆明鼠实体瘤和腹水模型, 尾静脉注射高(80 mg/kg)、中(40 mg/kg)、低(20 mg/kg)剂量beta-榄香烯脂质体, 测定其在动物体内的抑瘤率和生命延长率, 注射葡萄糖和40 mg/kg beta-榄香烯乳剂注射液作为阴性和阳性对照. 结果: beta-榄香烯脂质体及乳剂对5株人消化系癌细胞株的IC50分别为34.1±4.5 mg/L-51.4±4.2 mg/L和41.5±4.7 mg/L-82.3±8.8 mg/L, 前者约为后者的1/2. 在实体瘤鼠, 高、中、低剂量beta-榄香烯脂质体和乳剂的抑瘤率分别为47.4%-50.8%、38.2%-45.0%、23.2%-28.2%和21.8%-43.0%, 平均瘤质量明显低于葡萄糖组(t>4.09, P<0.05). 在腹水瘤鼠, 脂质体和乳剂较葡萄糖组生存期延长51.3%-153.0%(t>7.92, P<0.05), 中、高剂量脂质体组较乳剂组明显延长(t>4.64, P<0.05). beta-榄香烯脂质体的刺激症状、尾静脉炎明显低于乳剂组. 结论: beta-榄香烯脂质体较乳剂有明显抗肿瘤作用和较低的副作用.     

β-榄香烯对肝星状细胞周期及凋亡的影响

肝纤维化是肝脏细胞外基质（EcM）异常生成和积累的结果，肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）为肝纤维化形成的关键细胞。HSC在诸多因素（如细胞因子、生长因子、肝细胞、Kupffer细胞、内皮细胞等）的调控下，HSC持续激活导致胶原生成细胞增多，并最终引起ECM的大量沉积，同时在肝纤维化的逆转过程中，HSC的减少主要通过凋亡机制。因此HSC的激活增殖是各种原因引起肝纤维化形成的中心环节，阻抑激活的HSC增殖和诱导其凋亡是治疗慢性肝损伤和肝纤维化的重要策略。莪术为临床抗肝纤维化治疗的常用中药，不少研究显示该药具有抗肝纤维化、抑制ECM生成的作用。榄香烯为其有效成分，具有抗血栓形成、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用。榄香烯是否为莪术抗肝纤维化的有效成分尚少见报道，本实验采用传代的HSC系HSC-T6初步探讨β-榄香烯对HSC凋亡、增殖的影响。     

iNOS及ERK1/2信号转导通路在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 观察诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）及细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号转导通路在17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖中的作用。方法: 采用MTT比色法和Western blot技术,检测E2预处理前后胎牛血清（fetal calf serum,FCS）对VSMCs中DNA合成、iNOS表达及磷酸化的ERK1/2蛋白表达的影响。结果: E2作用24 h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。Western blot的结果显示,FCS孵育VSMCs后,iNOS蛋白的表达下降,磷酸化的ERK1/2蛋白表达增加。E2预处理后,可增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化ERK1/2蛋白表达。若提前应用iNOS阻断剂L-精氨酸甲酯（L-NAME）孵育VSMCs,可部分逆转E2诱导的磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降的效应。结论: E2可抑制FCS诱导的VSMCs增殖,其作用可能与增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化的ERK1/2表达有关。     

幽门螺杆菌对肠化生胃黏膜GST-π和p53表达的影响

目的探讨幽门螺杆菌(HP)对肠化生胃黏膜GST-π和p53表达的影响。方法采用免疫组化染色检测30例正常胃黏膜、182例肠化生胃黏膜和32例胃癌组织GST-π和p53蛋白表达状况;采用HE染色和ELISA方法判断HP感染。结果 HP阳性肠化生组GST-π表达阳性率显著高于正常胃黏膜和胃癌组(P<0.01),显著低于HP阴性肠化生组(P<0.01)。HP阳性肠化生组p53蛋白表达阳性率显著高于正常胃黏膜和HP阴性者,显著低于胃癌组(P<0.01)。HP阳性肠化生经HP根除治疗后,其GST-π表达阳性率高于根除治疗前(P<0.05),p53蛋白表达阳性率低于根除治疗前(P<0.01)。结论 HP感染可能通过降低GST-π表达、削弱GST-π的保护性作用和增强突变型p53基因的表达增强而在胃癌的发生发展过程中发挥作用。早期进行HP根除治疗,对于降低胃癌发生具有现实意义。     

TGF-β1和ERK2在肺癌组织中的表达及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞外信号调节激酶2(ERK2)在肺癌发生、发展中的作用。方法选取77份肺癌组织标本和20份肺良性病变组织标本。标本常规石蜡包埋行免疫组织化学染色,检测TGF-β1和ERK2蛋白表达。分析TGF-β1、ERK2蛋白表达与肺癌主要病理特征的关系。对TGF-β1与ERK2蛋白表达关系行Spearman等级相关分析。结果肺癌组织中TGF-β1、ERK2蛋白表达阳性率均明显高于肺良性组织,P均<0.05。TGF-β1、ERK2蛋白表达在低分化肺癌、淋巴结转移组织中的表达均明显高于高分化、中分化和无淋巴结转移组织。TGF-β1与ERK2表达呈明显正相关,P<0.000 1(r=0.646)。结论 TGF-β1、ERK2蛋白在肺癌组织中呈高表达,TGF-β1/ERK转导通路可能在肺癌的发生、发展及淋巴转移过程中起重要作用,检测二者水平有助于肺癌的病情判断。     

PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞来源的Exosome促进同源肿瘤细胞增殖中的作用

目的:研究胃癌细胞来源的Exosome对同源肿瘤细胞增殖的影响,初步探讨PI3K/Akt和MAPK/ERK信号转导通路在此过程中的作用.方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度离心的方法从胃癌MGC803细胞的上清液中分离出胃癌细胞来源的Exosome.应用透射电子显微镜观察Exosome的形态,MTT检测细胞活力,Weste...     

五灵胶囊对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β／Smad及Ras／ERK信号通路蛋白的影响

目的探讨五灵胶囊对肝纤维化大鼠肝组织TGF-βSmad及Ras／ERK信号通路蛋白的影响,阐述五灵胶囊治疗肝纤维化的作用机制。方法SD大鼠以高脂低蛋白饲料饲养,饮用10％乙醇,并腹腔注射4．1mol／LCCl4制备肝纤维化模型,给予五灵胶囊进行治疗1个月。Westernblot检测肝组织中α-SMA、Ras、ERK、p-ERK、Smad2／3、p-Smad2／3、Smad7、TJ3RI、T13R1I;RT-PCR法检测肝组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1mRNA;酶法测定血清ALT、AST;ELISA测定血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ含量;肝组织masson和HE染色进行肝细胞变性程度与胶原纤维增生程度评分。结果五灵胶囊可显著降低血清AST、ALT水平,下调肝组织中Rasp21、α-SMA、p-ERK、T13RI蛋白与TGF-β1、COL-I、COL-Ⅲ mRNA表达（P〈0．01或0．05）,增加p-Smad2／3蛋白表达（P〈0．01）,使肝细胞变性程度与胶原纤维增生程度显著降低。结论五灵胶囊治疗肝纤维化的作用机制是显著降低肝纤维化大鼠组织肝细胞变性和胶原纤维增生的程度、抑制TGF-β／Smad及Ras／ERK信号通路TJ3RI、Rasp21、p-ERK蛋白表达及TGF-β1过量分泌。     

青蒿琥酯对糖尿病大鼠MEK/ERK通路及心肌纤维化的影响

目的:探索青蒿琥酯对糖尿病大鼠丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路及心肌纤维化的影响。方法:制作糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、青蒿琥酯低剂量(25 mg/kg)组、青蒿琥酯中剂量(50 mg/kg)组、青蒿琥酯高剂量(100 mg/kg)组、二甲双胍(70 mg/kg)组,每组12只,另取12只SD大鼠设为对照组。分组处理后,测定大鼠血糖、总胆固醇(TC)及三酰甘油(TG)水平;Masson染色检测大鼠心肌组织纤维化情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹法检测心肌组织MEK/ERK通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠心肌呈现明显纤维化变性,大鼠血糖、TC、TG、CK-MB、cTnI、TNF-α、IL-6水平及心肌组织MEK/ERK通路蛋白p-MEK/MEK、p-ERK/ERK明显升高(P<0.05)。与模型组比较,青蒿琥酯低剂量组、青蒿琥酯中剂量组、青蒿琥酯高剂量组及二甲双胍组大鼠心肌组织纤维化程度...     

β-榄香烯对实验性肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ表达的影响

目的观察β-榄香烯对四氯化碳肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ表达的影响.方法采用CCl4皮下注射诱导Wistar ♂大鼠肝纤维化模型,用β-榄香烯0.1 mL/100 g剂量每天腹腔注射8 wk后,用苏木精-伊红染色(HE)和胶原纤维(Masson)染色观察大鼠肝脏病理变化,酶动力法检测肝功能,SP免疫组化法检测肝组织中α-肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)表达的变化,样本碱水解法检测肝组织中羟脯氨酸(HYP)的含量.结果8 wk后,正常组、模型组、对照组及治疗组肝组织胶原纤维面积百分比分别为1.22%±0.24%,7.47%±0.81%,5.57%±0.78%,4.33%±0.48%,治疗组与模型组、对照组相比均有显著差异(P＜0.01),并且治疗组肝组织纤维化程度分级较模型组逐渐好转,胶原纤维所占面积显著缩小;在肝组织中测得的Col-Ⅰ阳性面积比分别为3.022%±0.553%,9.998%±1.431%,7.554%±0.914%,4.587%±1.008%,治疗组与模型组、对照组相比均有显著差异(P＜0.01).α-SMA和TGF-β1在治疗组和模型组肝组织中的表达也有显著差异(3.172%±0.542% vs 5.605%±1.315%,P＜0.01;2.868%±0.554% vs 5.653%±0.9%,P＜0.01).结论β-榄香烯对四氯化碳肝纤维化大鼠具有拮抗作用,主要是通过抑制肝星状细胞激活,降低TGF-β1,α-SMA在肝组织中的表达,减少细胞外基质在肝脏中的沉积,从而延缓肝纤维化的进程.     

外源性硫化氢对早期糖尿病肾脏疾病大鼠丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路的影响

目的 研究外源性硫化氢(H₂S)通过丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对早期糖尿病肾脏疾病(DN)大鼠的保护作用。方法 随机选取SPF级健康雄性SD大鼠24只腹腔一次性注射1%链尿佐菌素(STZ)60 mg/kg制作DN模型,余下10只(正常对照组)腹腔一次性注射等量的柠檬酸缓冲液。3周后DN造模成功,再将24只DN大鼠随机分为DN组和DN+硫氢化钠(NaHS)组,每组各12只。DN+NaHS组予腹腔注射NaHS溶液56μmol·kg^-1·d^-1,正常对照组和DN组予等量生理盐水腹腔注射,3组大鼠均连续注射12周。检测各组血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)及24小时尿蛋白(24h Upro)水平,观察其肾脏组织病理变化。采用Katafuchi评分评估大鼠肾脏病变(包括肾小球、肾小管及肾血管)。采用免疫组化法检测ERK1/2、MEK1和MEK2蛋白阳性区域面积百分比。结果 DN组大鼠SCr、BUN及24h Upro水平、肾脏组织Katafuchi评分、MEK1、MEK2及ER...