江苏省东台市大肠埃希菌O157:H7监测

为了解东台地区1999-2001年和2005-2006年间肠出血性大肠埃希菌(E.coli O157:H7)宿主动物和腹泻患者带菌情况,按照《江苏省大肠杆菌感染性腹泻监测工作实施计划》及《国家大肠杆菌感染性腹泻监测方案》在东台市开展E.coli O157:H7监测工作.     

大肠埃希菌O157:H7的实时荧光PCR检测方法研究

目的建立一种敏感、特异、快速的大肠埃希菌O157:H7的检测方法,应用于突发公共卫生事件及食源性致病菌流行病学调查的检测。方法根据GenBank大肠埃希菌O157:H7rfbE基因序列,设计引物和TaqMan探针,对实时荧光PCR反应条件进行优化,建立实时荧光PCR检测大肠埃希菌O157:H7的反应体系,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果大肠埃希菌O157:H7菌株的检测结果均为阳性,而所有其它菌株检测结果均为阴性;该方法检测的灵敏度可达1×102cfu/ml。模拟污染的猪肉、羊肉、鸡肉、生食蔬菜样品,均可检出1×104cfu/ml的细菌。从细菌核酸提取至完成检测约需3 h。结论建立的实时荧光PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、快速等优点,可用于大肠埃希菌O157:H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

从海产品中检出大肠埃希菌O157:H7

目的：调查南京市饮食行业海鲜类食品受大肠埃希菌O157：H7污染的状况。方法：随机采取南京市各大宾馆的海水产品，进行大肠埃希菌O157：H7的检测，进行常规生化和血清学、毒力基因的PCR检测。结果：从一份文蛤样品中成功分离到了1株大肠埃希菌O157：H7。结论：提示我们该菌的宿主范围比较广，须引起高度重视，加强防范，遏止其流行势头。     

肠出血性大肠埃希菌O157:H7及其质粒O157的研究进展

致病性大肠埃希菌根据毒力性质、病理机制、临床综合征及不同的血清分型被分成肠毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和扩散粘     

2000～2005年海盐县肠出血性O157:H7大肠埃希菌监测

目的：了解海盐县肠出血性O157：H7大肠埃希菌的分布及流行情况。方法：采取肠道门诊病人肛拭样和动物宿主粪便，采用免疫磁珠分离和大肠杆菌O157特异性单克隆抗体胶体金快速诊断技术以及特定培养基分离鉴定技术检测O157：H7大肠埃希菌。结果：从1例腹泻患者的大便中检了了1株O157：H7大肠埃希菌，不产生类志贺毒素；从动物粪便中检出7株O157大肠埃希菌。结论：海盐地区人群中感染率较低，且为非产毒株；猪、鸡是我地区O157：H7大肠埃希菌的主要贮存宿主动物。     

纳米免疫磁颗粒检测大肠埃希菌O157：H7

目的 制备一种表面包被有大肠埃希菌O157:H7多克隆抗体的纳米级葡聚糖免疫磁颗粒.在检测大肠埃希菌O157:H7的同时,对磁颗粒的应用条件进行优化.方法 FeCl3和FeCl2在氨水条件下与葡聚糖反应生成纳米葡聚糖磁颗粒,利用高碘酸钠将其氧化后,在表面包被上大肠埃希菌O157:H7多克隆抗体,制成纳米免疫磁颗粒进行检测.结果 该方法可在15 min内完成对样品的分离,检测限为10 1 CFU/ml甚至更少,当样品中含有10 8 CFU/ml的杂菌时,检测限为10 1～10 2 CFU/ml,杂菌对检测结果影响甚微.结论 利用纳米级葡聚糖免疫磁颗粒分离目的 菌是一种灵敏度高、特异性强、操作简便的有效方法.     

大肠埃希菌O157:H7分离鉴定过程中赫尔曼埃希菌的鉴别

目的：鉴别大肠埃希菌O157：H7和赫尔曼埃希菌。方法：观察菌株在山梨醇麦康凯，营养琼脂及Chromagar O157培养基上菌落形态。生化试验检测菌株的生化特性，血清凝集试验检测菌株的O157和H7抗原，聚合酶链反应法检测O157和H7特异性基因。结果：在营养琼脂培养基上，5株赫尔曼埃希菌均产黄色色素，2株O157：H7菌不产色素；在Chromagar O157培养基上，2株O157：H7菌株呈紫红色，2株赫尔曼埃希菌株呈蓝色，其余3株赫尔曼埃希菌株呈黄绿色。O157：H7菌株KCN试验均为阴性，而赫尔曼埃希菌阳性。O157和H7抗血清坡片凝集试验，7析均为强凝集。O157：H7菌株与O157单克隆抗血清玻片凝集试验均为强凝集，而赫尔曼埃希菌均不凝集。O157：H7菌株O157和H7特异性基因均为阳性，赫尔曼埃希菌均为阴性。结论：赫尔曼埃希菌与O157多克隆抗血清有交叉反应，但单克隆抗血清能区分O157：H7和赫尔曼埃希菌。KCN试验和特异性基因检测亦能鉴别这两种菌。在营养琼脂和Chromagar O157培养基上的菌落形成也有助于两菌的区分。     

食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的PCR检测

目的建立快速准确检测食品中肠出血性大肠埃希菌O157：H7的方法。方法采用多重聚合酶链式反应技术（MPCR）特异性扩增肠出血性大肠埃希菌O157：H7的STX、rfbE、fliC基因。结果分别在228，378，709bp处扩增出3个目的基因片段，且只有肠出血性大肠埃希菌O157：H7获得扩增，其他菌种扩增均呈阴性。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便，为食品中肠出血性大肠埃希菌O157：H7的快速检测提供了新的手段。     

从生羊肉中检出一株大肠埃希氏菌O157:H7

目的了解和掌握安阳市市售生鲜肉类食品受EHECO157:H7污染的状况。方法从安阳市市售生鲜类食品中随机采样,选择增菌培养后,用免疫磁珠富集分离病原菌,应用VITEK-32全自动微生物分析系统和血清学方法鉴定,并用PCR方法进行STX1、STX2、eaeA、hlyA、rfbO157和flicH7基因检测。结果从一份生羊肉中分离到一株大肠埃希氏菌O157:H7,该菌株有rfbO157、flicH7、STX2、eaeA和hlyA基因,不含有STX1。结论此次从生羊肉中分离出带有毒性基因的O157:H7。该菌在我市食品中的存在有引起食源性疾病的潜在危险性,须引起重视,加强防范。     

2009年贵港市出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻监测结果分析

目的 动态观察O157大肠埃希菌的分布特征,掌握贵港市O157大肠埃希菌的来源,为制定本市肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻的防治策略与措施提供依据.方法 通过采集腹泻病人粪便、动物粪便、苍蝇、肉类等标本,采用国标 GB/T4789.36-2008大肠埃希菌O157:H7/NM法检测O157:H7.结果 采集各类标本953份检测O157:H7,检出菌株29份,阳性率为3.04%.结论 该市在动物粪便、苍蝇、肉类中均检出了O157:H7菌,说明目前该市虽未发现人感染O157大肠埃希菌的病例,但发生人间散发流行乃至暴发的条件仍存在,需重视此病的防控.     

大肠埃希菌O157:H7嵌合荧光RAM检测分析

目的建立大肠埃希菌O157：H7的嵌合荧光法（SYBR Green I）实时网状分枝扩增（RAM）检测技术.方法将产志贺样毒素大肠埃希菌O157：H7靶基因递比稀释确定SYBR Green I实时RAM的灵敏度,并进一步检测临床分离的菌株.结果SYBR Green I实时网状分枝扩增技术最低能检测10个产志贺样毒素大肠埃希菌O157：H7,检测信号出现的时间与靶基因的浓度成正比,临床分离3株产志贺样毒素大肠埃希菌O157为阳性,而非致病性大肠埃希菌为阴性.结论SYBR Green I实时RAM是一种快速、灵敏、准确、实时、环保的检测大肠埃希菌O157：H7的新核酸扩增技术.     

我市首次分离到O157:H7大肠杆菌分离株的生化特征、毒力因子与耐药性的探讨

目的：了解金华市外环境中O157：H7大肠杆菌分离株中生化特征、毒力因子的携带与耐药情况。方法：直接分离接种于O157显色培养基。结果：从51份样品中分离出2株O157：H7大肠杆菌,对这2株O157：H7大肠杆菌分离株进行PCR毒力因子的测定,携带eaeA、stx2毒力因子。结论：药敏试验结果显示,这两株O157：H7大肠杆菌分离株对利福平类、四环素耐药。     

出血性大肠杆菌O157∶H7的脉冲场凝胶电泳分型方法研究

目的应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对肠出血性大肠杆菌O157:H7进行基因分型,了解不同来源分离株的相关性。方法选择在广西食品污染物检测地区食品样本中分离到的7株出血性大肠杆菌O157:H7,采用琼脂糖包埋胶块法制备基因组DNA,以XbaⅠ限制性内切酶进行酶切,选定脉冲电泳参数进行脉冲场凝胶电泳,照相记录结果;Nei的公式计算相似性和遗传距离,并用PHYLIP程序非加权成对算术平均法聚类分析。结果PFGE可生成14~18条清晰条带的分离株DNA指纹图谱,由聚类分析树状图可将7株分离株分为6个基因群。结论广西不同地区食品分离O157:H7血清型菌株存在多个分子亚型,提示不是一个克隆株,研究发现脉冲场凝胶电泳分型技术重复性高,在分子流行病学研究中有较大的应用前景。     

熔解曲线分析方法甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的:采用熔解曲线分析技术,建立一种快速、简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7方法。方法:选取肠出血性大肠杆菌O157:H7编码脂多糖基因(rfbE)和编码鞭毛抗原基因(fliC)作为检测靶基因,建立荧光PCR反应体系。结果:通过多种标准菌株试验,结果显示所建立的熔解曲线分析法可特异性地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7;纯培养的灵敏度达到2.8×101cfu/ml;检测108例临床样本,其中18例肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性,3例为肠出血性大肠杆菌O157:非H7阳性,与常规培养方法的符合率达到100%。结论:本方法可简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7,结果可靠,通过进一步增加反应体系中引物的数量可同时对肠出血性大肠杆菌其他血清型进行鉴定。     

河北省食品中大肠杆菌O157：H7分布及毒力研究

目的:掌握河北省食品中大肠杆菌O157:H7分布状况及菌株的毒力研究。方法:运用免疫磁珠富集进行分离培养,并用PCR进行毒力基因分析。结果:共采集食品530份,检出O157:H7大肠杆菌5株,总检出率为0.9%。其中,以生牛、羊肉检出率较高,分别为6.7%和4.4%。5株O157:H7菌株中,4株带有SLT2、eae和H ly 3种毒力基因,1株带有SLT1、SLT2、eae和H ly 4种毒力基因。结论:掌握食品中O157:H7分布及生物学特性对预防食源性疾病暴发有重要意义。     

大肠埃希菌O157:H7蜚蠊实验带菌消长的研究

目的采用EHEC O157H7-EDL933株,体外染菌感染德国小蠊(Blattela germanica),观察其体内外感染和带菌消长情况.方法点滴法体外定量染菌,剂量为1 μl(菌悬液浓度为 8.0×105～ 1.9×107(CFU/ml),并采用昆虫单虫单管方法饲养观察.结果蜚蠊经体外染菌,获得体内外带菌,体外带菌时间中位数为( 144.0± 22.17)h(95%CI 100.55～ 187.45 h);体内中位数为( 144± 25.77)h(95%CI 93.48～ 194.52 h);体内外带菌消长差异,无统计学意义( χ2＝ 1.46,P＝ 0.226 3).德国小蠊最长带菌时间至少216 h(9 d).结论蜚蠊不仅是EHEC-O157H7的贮存宿主和疾病传播的媒介,更重要的是潜在的人类感染的传染源.     

大肠杆菌O157∶H7双重荧光PCR方法的建立与应用

摘要:目的　建立快速检测食品中大肠杆菌O157︰H7的双重荧光PCR 方法。方法　针对大肠杆菌O157︰H7菌体抗原O和鞭毛抗原H的特异性基因rfbE（O157）和fliC（H7）筛选设计引物和探针,优化反应条件,建立可特异性检测大肠杆菌O157︰H7的双重荧光PCR方法,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行评价,对模拟样品和实际样品进行初步验证。结果　利用建立的方法对2株大肠杆菌O157︰H7及12株非大肠杆菌O157︰H7进行检测,O157︰H7菌株检测结果均为rfbE和fliC阳性,非O157︰H7菌株检测结果均为阴性,rfbE和fliC基因的特异性均为100%;2基因的检测灵敏度可达1.16×102 CFU/ml;批内、批间变异系数均小于3.5％;模拟样品立即检测,2个基因的最低检出限（2.7×102 CFU/ml）和细菌纯培养时接近;实际样品检测结果与我国检验检疫行业标准（SN/T 0973-2010）的检测结果一致。结论　建立的荧光定量PCR 方法特异性及重复性好,灵敏度高,可快速准确鉴定大肠杆菌O157︰H7菌株。