猪带绦虫六钩蚴TSO45W基因工程疫苗研究进展

囊虫病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病。研制有保护性作用的疫苗将是控制和消灭该病的有效方法,猪带绦虫保护性抗原的研究是猪囊虫病免疫的基础。45W蛋白是猪带绦虫六钩蚴时期的重要抗原,但天然45W抗原来源有限,限制了其应用,而基因工程重组抗原的应用可解决质量控制和抗原来源的问题。本文就近年来国内外对猪带绦虫六钩蚴TSO45W基因工程疫苗的研究进展作一综述。     

猪带绦虫六钩蚴TSO18基因的克隆和表达

囊虫和绦虫在中国大部分地区是一个重要的公共卫生问题,对人的健康危害很大。猪的囊尾蚴感染率也较高。每年造成的经济损失达20亿元。猪囊虫病的免疫预防是一个难度很大的课题。主要原因是抗原成分复杂且不能大量生产。随着分子生物学技术在寄生虫研究领域的应用。通过寻找免疫相关基因,在体外克隆并表达该基因,用表达产物作为抗原进行免疫和诊断无疑是一个新的研究方向和热点。     

猪带绦虫六钩蚴超微结构的观察

目的 观察猪带绦虫六钩蚴的超微结构。 方法 猪带绦虫病患者驱虫,收集成熟虫卵。次氯酸钠法破卵壳后,等渗细胞分离液（Percoll）收集六钩蚴,人工肠液激活。热琼脂离心法制备电镜样品,透射电镜观察。 结果 猪带绦虫成熟六钩蚴呈卵圆形,（14～17）μm ×（10～13）μm,表面有不规则的突起或皱褶。六钩蚴小钩从外至内由颗粒带、纤维层和芯髓组成。成熟六钩蚴具成肌细胞、小钩生发细胞和皮层细胞等几种细胞类型。 结论 猪带绦虫六钩蚴的超微结构和缩小膜壳绦虫（Hymenolepis diminuta）六钩蚴的超微结构相似,但小钩的结构不同;猪带绦虫六钩蚴有形成上皮的双核细胞。     

抗猪带绦虫六钩蚴独特型抗体疫苗对猪体免疫保护作用的研究

目的本研究在证实猪带绦虫六钩蚴抗原具有很高的免疫保护性的基础上，探讨六钩蚴抗独特型抗体作为六钩蚴抗原替代物对猪体的保护作用，为研制猪体囊虫疫苗提供理论基础。方法用六钩蚴粗制抗原免疫家兔，制备兔抗六钩蚴抗体(Ab1)，再用Ab1免疫昆明小白鼠，制备抗独特型抗体(Ab2)，免疫猪体，以3节猪带绦虫孕卵节片攻击感染，90d后剖杀，观察感染情况。结果5头试验猪只有1头在膈肌发现1个囊虫，而2头阳性对照猪均被感染，各检查部位囊虫数平均为4．5个／100g和3．2个／100g。结论抗猪带绦虫六钩蚴独特性抗体Ab2对猪体有较强的免疫保护作用。     

猪带绦虫六钩蚴抗原对猪体免疫保护作用的初步研究

本文报告猪带绦虫六钩蚴抗原对猪体的免疫保护作用，结果发现，免疫接种的实验动物没有感染，得到了完全保护，提示六钩蚴抗原对猪体有高度的保护作用；２头未免疫的对照组，１头雌猪感染较重，虫体负荷数为６６８，另１头雄猪没有感染，提示宿主的性别或不同的个体对猪带绦虫的易感性可能有判别。     

抗猪带绦虫六钩蚴独特型抗体疫苗对猪体免疫保护作用的研究

目的　本研究在证实猪带绦虫六钩蚴抗原具有很高的免疫保护性的基础上 ,探讨六钩蚴抗独特型抗体作为六钩蚴抗原替代物对猪体的保护作用 ,为研制猪体囊虫疫苗提供理论基础。　方法　用六钩蚴粗制抗原免疫家兔 ,制备兔抗六钩蚴抗体 (Ab1) ,再用Ab1免疫昆明小白鼠 ,制备抗独特型抗体 (Ab2 ) ,免疫猪体 ,以 3节猪带绦虫孕卵节片攻击感染 ,90d后剖杀 ,观察感染情况。　结果　 5头试验猪只有 1头在膈肌发现 1个囊虫 ,而 2头阳性对照猪均被感染 ,各检查部位囊虫数平均为 4.5个 /10 0g和 3 .2个 /10 0 g。　 结论　抗猪带绦虫六钩蚴独特性抗体Ab2对猪体有较强的免疫保护作用。     

猪带绦虫六钩蚴抗原对猪体免疫保护作用的初步研究

本文报告猪带绦虫六钩蚴抗原对猪体的免疫保护作用，结果发现，免疫接种的实验动物没有感染，得到了完全保护，提示六钩蚴抗原对猪体有高度的保护作用；２头未免疫的对照组，１头雌猪感染较重，虫体负荷数为６６８，另１头雄猪没有感染，提示宿主的性别或不同的个体对猪带绦虫的易感性可能有差别。     

一氧化氮对猪带绦虫六钩蚴细胞毒作用的研究

目的　研究一氧化氮 (NO)对猪带绦虫六钩蚴杀伤作用。方法　以LPS诱导离体的小鼠腹腔巨噬细胞 ,使其产生NO ;加入猪带绦虫六钩蚴 ,测定 4 8h内六钩蚴的死亡率 ;分别用诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)的抑制剂地塞米松 (Dexam ethasone ,DXS)和左旋硝基精氨酸 (Nω -nitro -L -arginine ,L -NNA)抑制NO产生 ,与未加抑制剂组比较六钩蚴死亡率的变化。结果　LPS可有效诱导巨噬细胞产生NO ,2 0× 10 5巨噬细胞产生的NO浓度为 119 6 4 0 0 +5 115 4 μmol/L ,相应的杀虫率为 79 83%。加入抑制剂DXS和L -NNA后 ,巨噬细胞的NO产量均明显降低 ,其杀虫率也明显降低。结论　活化巨噬细胞产生的NO对猪带绦虫六钩蚴有杀伤作用。     

猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位预测及鉴定

目的预测并鉴定猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。方法利用生物信息学在线工具分析TSO45-4B抗原FnⅢ结构域序列并预测其线性B细胞表位;采用SWISS-MODEL软件预测TSO45-4B的蛋白空间结构,并合成两条预测表位肽。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪囊尾蚴病人血清与两条预测表位肽的免疫反应性。结果获得2个TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞预测表位,其中1条预测表位合成肽可为猪囊尾蚴病患者血清识别。结论成功预测并鉴定了猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。     

链状带绦虫六钩蚴形态与猪体感染初期分布的研究

本文通过链状带绦虫虫卵体外孵育和猪体感染,对六钩蚴形态和感染猪体初期的分布进行了观察。体外孵育的六钩蚴有４种不同的运动形式,可能与卵成熟情况有关;定向运动的六钩蚴有感染能力;扫描电镜下不能运动的六钩蚴外有一层单位膜包囊;六个小钩为六钩蚴的运动器官,感染宿主后１０～１５ｄ开始退化消失。     

猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达

目的 在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法 将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转化入长双歧杆菌, IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果 酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(M_r)约为55 kD,与预期结果相一致。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论 猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。     

猪带绦虫重组抗原研究进展

猪囊尾蚴病(Cysticercosis cellulosae)俗称囊虫病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(Taenia solium, Ts)中绦期幼虫猪囊尾蚴(cysticercus cellulosae)引起的一种严重的人兽共患寄生虫病。该病呈全球性分布,主要流行于中非、南非、拉丁美洲、东亚和南亚等地区。我国主要流行于黑龙江、吉林、河南、河北、山东、广西、云南、四川和贵州等31个省市自治区。采用分子生物学技术对Ts生活史不同阶段的抗原基因进行克隆、表达及生物学功能研究是当前研究的热点。本文就Ts六钩蚴、囊尾蚴、成虫阶段重要重组抗原的研究进展作一介绍。     

猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌疫苗的稳定性分析

目的 研究猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)疫苗的人工传代稳定性。方法 将重组质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18电转入L.lactis,经PCR鉴定阳性菌株pMG36e-TSOL18/L.lactis、pMG36e-SP-TSOL18/L.lactis,在无红霉素抗性和含红霉素抗性条件下,连续人工传代20次,通过测定质粒遗传稳定率和双酶切鉴定,分析质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中的稳定性情况。结果 质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中连续传代20代后,在无红霉素抗性条件下,质粒稳定率均为100%,在含红霉素抗性条件下,质粒稳定率均为99%。将各代次的质粒采用限制性内切酶SacI/HindIII进行双酶切鉴定,琼脂糖凝胶电泳显示大小正确,连续传至20代时,与原代质粒相符。结论 提示质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中连续传代20代时,均有较好的遗传稳定性,为猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌疫苗的进一步研究奠定了基础。     

猪带绦虫TSOL18疫苗的研制现状

猪囊尾蚴病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,主要流行于中非、南非、拉丁美洲、东亚和南亚等地区.采用疫苗防治该病是当前研究的热点.该文对TSOL18的编码基因、DNA疫苗和蛋白疫苗等方面的研究现状进行了综述.     

Antibody responses to the host‐protective Taenia solium oncosphere protein TSOL18 in pigs are directed against conformational epitopes

TSOL18 is a recombinant protein that has been shown in repeated experimental trials to be capable of protecting pigs against challenge infection with the cestode parasite Taenia solium. Antibodies raised by the vaccine are capable of killing the parasite in an in vitro culture and it is believed that antibody and complement‐mediated killing of invading parasites is the major protective immune mechanism induced by vaccination with TSOL18. Investigations were undertaken to characterize whether the principal antibody specificities raised by TSOL18 in pigs were against linear or conformational determinants. TSOL18 was expressed in two truncated forms representing either the amino terminal portion or the carboxy terminal portion, with the two truncations overlapping in sequence by 25 amino acids. The original protein (designated TSOL18N^?) and the two truncations (TSOL18N^?‐1 and TSOL18N^?‐2) were used in inhibition ELISA. TSOL18N^? was shown to be capable of completely inhibiting the binding of pig anti‐TSOL18N^? antibodies to TSOL18N^? in ELISA. However, neither TSOL18N^?‐1 nor TSOL18N^?‐2, either alone or when combined together, was capable of inhibiting any detectable amount of reactivity of pig anti‐TSOL18N^? antibodies with TSOL18N^?. It is concluded that the dominant antibody specificities, and probably the host‐protective specificities, of TSOL18 are conformational epitopes.     

猪带绦虫TSOL18基因的表达、纯化和兔抗血清的制备

目的 构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TSOL18,表达纯化TSOL18重组蛋白,制备兔抗重组蛋白血清。方法 全基因合成猪带绦虫TSOL18抗原编码基因,定向克隆到pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSOL18;转化大肠埃希菌ArcticExpress(DE3), IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达情况;亲和层析纯化获得重组蛋白,免疫兔制备抗血清;ELISA测定抗血清的效价,Western blot鉴定抗血清的特异性。结果 全基因扩增出393 bp的TSOL18抗原编码基因,酶切和测序鉴定证实TSOL18基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达重组蛋白相对分子质量(Mr)约为41 kDa,经亲和层析后可获得纯度为75%的重组蛋白;ELISA测定抗血清的效价为1∶256 000,Western blot证实该抗血清能与重组蛋白发生特异性反应。结论 猪带绦虫TSOL18基因能在大肠埃希菌中高效表达,成功制备了高纯度的TSOL18重组蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清,为猪带绦虫的疫苗研制奠定了基础。     

猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建及其表达

目的 构建猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,研究TSOL18基因在BCG中的表达情况。方法 通过酶切的方法 从重组质粒pGEX-TSOL18获取猪带绦虫TSOL18基因,将其定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV261中,构建猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18,进行酶切、PCR和测序鉴定;再将其电穿孔转化入BCG,构建猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,进行PCR鉴定;SDS-PAGE和Western blot分析TSOL18基因在BCG中的表达情况。结果 通过酶切成功获得了393 bp的TSOL18基因片段;酶切、PCR和测序鉴定证明成功构建了猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18;PCR鉴定证实猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18成功转入BCG中,提示猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建成功;SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约为14.7 kD处有明显的TSOL18目的蛋白条带,Western blot证实表达的TSOL18目的蛋白能被兔抗血清和囊虫病猪血清所识别。结论 成功构建了猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,TSOL18基因能够在BCG中成功表达,表达的TSOL18重组蛋白具有特异的抗原性,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。     

猪带绦虫抗原基因TS76的克隆及原核表达

目的　测定和分析自猪囊尾蚴表达型cDNA文库中筛选出的cDNA克隆 (TS76 )的序列 ,并进行该片段的原核表达研究。方法　采用PCR扩增重组 (噬菌体 (TS76中的TS76cDNA片段 ,亚克隆至 pUC18,得到的重组子用于测序 ,并对测定结果进行分析及同源性比较 ;将TS76片段亚克隆到原核表达载体pGEX - 1(T中 ,免疫印迹方法筛选得到能正确表达TS76片段的重组子 pGTS76 ;制备pGTS76原核表达产物 ,进行浓度梯度SDS -PAGE和Westernblotting分析。 结果　TS76克隆含 5 16对核苷酸 ,编码含 83个氨基酸残基的多肽 ,与EMBL数据库中的猪囊虫免疫原性蛋白质mRNA有 383bp的同源区域。重组质粒在大肠杆菌中表达的融合蛋白分子量为 34KD ,能与抗猪囊尾蚴兔血清产生很强的免疫反应。结论　分离到一个编码具较强免疫原性猪囊尾蚴抗原的基因。     

Gorham-Stout综合征五例临床分析并文献复习

目的 探讨Gorham-Stout综合征(GSS)患者的临床、骨影像及组织病理特点及其诊断、治疗和预后.方法 回顾性分析1980年1月至2008年1月北京协和医院收治的5例GSS患者的临床资料并进行文献复习.结果 (1)5例患者中男2例,女3例;年龄15～37岁,平均30.2岁.(2)5例患者均有不同部位、不同程度的骨破坏,3 例合并大最胸腔积液,均为血性渗出液;其中2 例为乳糜性胸腔积液.所有患者均无恶性肿瘤的依据.4 例接受骨组织活检,其中2例接受局部穿刺及切开活检,有典型的骨病理表现.(3)采用二膦酸盐、钙剂+活性维生素D3、病变部位的放疗、胸导管结扎等治疗方法.(4)转归:5例患者中,仅有骨病变的2例病情平稳,合并胸腔积液的3例患者中,1例骨病变相对稳定,但需间断放胸腔积液,2例失访.结论 GSS是一以渐进性溶骨性改变为主要表现的罕见病,临床表现取决于受累部位.目前没有确切的治疗方法;合并胸腔积液时预后差.