β-淀粉样蛋白致大鼠行为学改变及对海马核因子-κB和一氧化氮合酶表达的影响

目的研究β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein,Aβ)对大鼠学习记忆功能及海马区内核因子kB(NF-kB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响及其相互关系。探讨NF-kB在阿尔茨海默病(AD)发病中的可能作用。方法采用大鼠侧脑室立体定向注射Aβ25-35的方法建立AD的动物模型,通过Morris水迷宫检测大鼠学习、记忆能力,通过免疫组化的方法观察Aβ25-35对大鼠海马区内NF-kB及iNOS蛋白表达的影响,并分析NF-kB与iNOS表达的关系。结果大鼠经侧脑室立体定向注射10μmol／L Aβ25-35 5μl后,(1)模型组大鼠Morris水迷宫检测逃避潜伏期(3 d分别为42．19±12．29,31．28±20．59,23．91±8．05)较对照组(3 d分别为27．35±14．96,13．17±6．79,13．01±6．38)明显延长(P<0．05或P<0．01);(2)模型组大鼠海马区内NF-kB蛋白表达(29．40±4．01)及iNOS蛋白表达(34．42±5．99)较空白对照组(分别为23．36±2．31和11．56±4．09)均有明显升高(P<0．01),(3)NF-kB与iNOS阳性细胞密度具有显著相关性(r=0．453,P< 0．05)。结论Aβ能够明显降低大鼠短期学习记忆能力,并诱导大鼠海马区内NF-kB和iNOS的蛋白表达增强,同时NF-kB与iNOS的表达呈正相关关系。提示NF-kB和iNOS均参与了由Aβ诱导的炎性反应过程,NF-kB可能是iNOS表达的介导因子之一。     

雌激素对去卵巢大鼠记忆功能、脑海马部位Aβ1-40及PKC表达的影响

目的　探讨雌激素对去卵巢大鼠记忆功能、海马部位 β淀粉样蛋白 1 - 4 0 (Aβ1 - 4 0 )及蛋白激酶 C(PKC)表达的影响。方法　大鼠去卵巢建立动物模型 ,1 7w行水迷宫试验 ,1 8w取脑组织做 Aβ1 - 4 0及 PKC的免疫组化染色。结果　去卵巢大鼠的雌激素 (E2 )水平明显降低 (P<0 .0 1 ) ;去卵巢组的记忆功能下降 ;脑海马部位的 Aβ1 - 4 0表达比假手术组和雌激素替代组增加 (P<0 .0 1 ) ,而 PKC表达则减少 (P<0 .0 1 )。结论　雌激素可能是通过提高 PKC的表达水平 ,使淀粉样前体的代谢生成 Aβ1 - 4 0减少来保护海马部位胆碱能神经元 ,从而改善记忆功能。雌激素可能是影响记忆功能重要因素之一。     

老年性痴呆患者血浆中β淀粉样蛋白Aβ_(1-42)和Aβ_(1-40)水平与对照组的对比研究

目的　研究老年性痴呆 (Alzheimer’sdisease ,AD)患者血浆中 β淀粉样蛋白 (amyloid betapeptide ,Aβ)Aβ1 4 2 、Aβ1 4 0 对临床诊断的意义。方法　分层选择了轻度AD组患者 2 3例 [19≤简易智力状态检查表 (MMSE)≤ 2 6分 ,临床痴呆程度量表 (CDR) =1分 ],中度及中度以上AD组患者 35例 (MMSE <19分 ,CDR≥ 2分及年龄性别相匹配的健康对照 (HC)组 30例。所采集标本需EDTA抗凝管收集新鲜处理 ,低温离心取上清液、加苯磺酸 2h内置低温冰箱保存。应用酶联免疫吸附测定法对所有检测对象同批检测Aβ1 4 2 、β1 4 0 。结果　轻度AD患者Aβ1 4 2 血浆浓度较HC组显著升高 (P <0 .0 0 1) ,中度及中度以上AD患者Aβ1 4 2 血浆浓度随病情的加重而下降 ,与HC组比较差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ,AD各组患者Aβ1 4 0 血浆浓度与HC组比较差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　分层检测AD患者血浆中Aβ1 4 2 的浓度 ,有可能成为辅助诊断轻度AD的生物指标。     

不同严重程度阿尔茨海默病患者血浆Aβ40和Aβ42水平的比较

目的探讨血浆β淀粉样蛋白(Aβ)浓度对于评价阿尔茨海默病(AD)患者严重程度的应用价值。方法选取2014~2015年南昌市某社区老年痴呆随访队列中全部确诊的AD患者134例,按总体衰退量表GDS评分分为轻、中、重三组,通过双抗体夹心酶联免疫吸附法检测各组血浆中Aβ40和Aβ42蛋白浓度。结果不同严重程度AD患者组间血浆Aβ40浓度差异无统计学意义(F=0.250,P=0.619),Aβ42蛋白浓度差异有统计学意义(F=24.651,P<0.01)。结论血浆Aβ42蛋白浓度的检测有助于AD患者严重程度的评价,低血浆Aβ42蛋白浓度可能与AD的认知功能减退有关。     

脑缺血对AD模型大鼠脑组织Aβ1-40表达的影响

目的 探讨脑缺血与阿尔茨海默病（AD）的相关性。方法 将40只大鼠随机分为假手术组、AD模型组（AD组）、脑缺血组（CI组）、AD脑缺血组（AD＋CI组），每组10只。AD组、AD＋CI组行AD造模，其后CI组、AD＋CI组行脑缺氧造模。分别于实验前、AD造模后14、21d（即脑缺血后1周）行学习记忆功能测试，采用免疫组化法检测大鼠脑组织β-淀粉样肽（Aβ1-40）阳性细胞数。结果 AD＋CI组在21d时学习记忆功能较假手术组、CI组、AD组明显下降；脑内Aβ1-40阳性细胞数明显增加。结论 脑缺血可加重AD病情，其可能机制为增加AB的神经毒性作用。     

雌激素对老年雌鼠阴道NOS及雌激素受体的影响

目的 研究雌激素对老年雌性大鼠阴道组织一氧化氮合酶(NOS)活性及雌激素受体(ER)亚型的影响,探讨雌激素作用于女性性功能的可能机制.方法 SD雌性大鼠分三组:青年组(3月龄)、老年组(20月龄)、苯甲酸雌二醇治疗组,比色法检测阴道组织NOS的活性,免疫组化法检测ER α和β的表达.结果 老年大鼠阴道NOS活性下降,而阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ表达增加,雌激素治疗能逆转这些变化.大鼠血清雌二醇浓度与阴道组织NOS活性呈正相关,两者均与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ呈负相关,而与大鼠阴道上皮细胞ERβ、基质纤维细胞ERα和ERβ无相关性.结论 雌激素可以通过调节阴道NOS维持女性性功能,这一过程与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ密切相关.     

Aβ1-42诱导原代海马神经细胞建立阿尔茨海默病细胞模型

目的 以Aβ1-42诱导原代海马神经细胞建立阿尔茨海默病细胞模型.方法 体外培养原代海马神经细胞,加入不同浓度Aβ1-42诱导并收获细胞,采用MTT法观察细胞活力,流式细胞术观察细胞凋亡及继发性死亡情况.结果 Aβ1-42作用于神经细胞后细胞活力明显下降,细胞存活率呈浓度依赖性降低;流式结果显示细胞凋亡及继发性死亡呈浓度依赖性增加.结论 Aβ1-42诱导后海马神经细胞存活率下降,细胞凋亡,可作为理想的AD细胞模型.     

阿尔茨海默病中β淀粉样蛋白对星形胶质细胞的作用

阿尔茨海默病(AD)是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病,以老年斑(SP),神经元纤维缠结(NFT)和突触丢失为主要病理改变.构成SP的主要成分是β-淀粉样蛋白(Aβ).现在普遍认为AD主要是由大脑特异区域的Aβ神经毒性蓄积所引起[1].星形胶质细胞(Astrocyte,AC)是中枢神经系统的免疫吞噬细胞,是胶质细胞的主要类别,几乎囊括了胶质细胞的所有功能.在神经退行性疾病,如AD和帕金森病患者的大脑中存在大量活化的AC[2].活化后形成的反应性AC既产生和释放神经递质、神经营养因子,也能分泌细胞毒因子、炎症因子、补体蛋白等,参与AD的病理过程[3].<中作者简介一>=王琦(1962-),男,教授,主要从事神经系统退行性疾病病理机制研究.     

雌激素对大鼠海马β淀粉样蛋白的清除作用

目的探讨雌激素对大鼠海马区β淀粉样蛋白(Aβ)的清除作用。方法给去卵巢(OVX)大鼠海马内注射Aβ1～42,连续2次测定海马中Aβ1～42阳性神经元的数量,观察Aβ在海马中的沉积情况。结果 45d时注射Aβ的非OVX大鼠海马区Aβ阳性神经元比OVX大鼠明显减少,而未注射Aβ的OVX大鼠海马区Aβ阳性神经元比注射Aβ的OVX大鼠明显减少,60d时各组大鼠相应比较结果同前;60d时注射Aβ的非OVX大鼠海马区Aβ阳性神经元较45d时明显减少,注射Aβ的OVX大鼠海马区Aβ阳性神经元60d与45d比较无明显变化;未注射Aβ的OVX大鼠海马区的Aβ阳性神经元比正常对照组明显增多。结论雌激素水平下降可使Aβ在大鼠大脑海马区沉积增加,雌激素可清除大鼠海马区过量的Aβ。     

雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病模型大鼠海马iNOS表达和突触超微结构的影响

目的观察应用β淀粉样蛋白(Aβ)后大鼠海马诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的表达和突触超微结构的变化及雷公藤内酯醇对其的影响。方法 21只SD雄性大鼠等分成对照组、模型组、用药组。在大鼠左侧海马定向注射凝聚态Aβ1⁴0作为模型组,注射等量生理盐水设为对照组,大鼠在海马注射凝聚态Aβ140作为模型组,注射等量生理盐水设为对照组,大鼠在海马注射凝聚态Aβ1⁴0后腹腔注射雷公藤内酯醇为用药组。应用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马i NOS的表达;应用透射电镜观察各组大鼠海马突触超微结构的变化。结果免疫组织化学染色显示,模型组大鼠海马i NOS阳性细胞数和平均光密度明显高于对照组(P<0.01),用药组大鼠海马i NOS阳性细胞平均光密度较模型组明显降低(P<0.05)。透射电镜结果显示,模型组大鼠海马神经毡内突触和突触小泡数量较对照组减少,突触后致密物厚度变薄;用药组大鼠海马神经毡内突触和突触小泡数量较模型组增多,突触后致密物增厚。结论雷公藤内酯醇可以抑制Aβ诱导的大鼠海马i NOS的表达,对突触超微结构的损伤有一定的改善作用。     

葛根素对Aβ25-35诱导的PC-12细胞损伤的保护作用

目的研究葛根素对阿尔茨海默病(AD)的保护作用。方法实验分正常组、模型组、葛根素保护组。体外培养大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC-12),以不同浓度诱导PC-12细胞建立AD的细胞模型,观察葛根素对细胞活力、凋亡、异常磷酸化的tau蛋白的影响。结果不同浓度的β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)作用于PC-12细胞后,选用10μmol/L的Aβ25-35作用于PC-12细胞24h建立AD细胞模型,MTT法检测细胞存活率发现葛根素保护组较模型组明显升高,TUNEL法检测凋亡发现阳性细胞葛根素保护组明显少于模型组,P-tau抗体检测异常磷酸化的tau蛋白发现阳性细胞葛根素保护组明显少于模型组,均具有统计学意义。结论葛根素对AD具有保护作用。     

异丙酚和咪唑安定对β淀粉样蛋白1-40促寡聚化和纤维形成的影响

目的研究异丙酚和咪唑安定对β-淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）的促寡聚化和纤维形成的影响。方法对照组Aβ1-40用PBS配制。P组由预先溶解了3μg／ml异丙酚的PBS配制。M组由预先溶解了100ng／ml咪唑安定的PBS配制。在30min、1、2、3、4、5、6、7d时各组进行荧光分析;对照组在30min和7d,其余各组4、7d时进行透射电镜分析。结果与对照组比较,P组在30min时荧光强度明显增强（P〈0．05）;与对照组及P组比较,M组在各时点的荧光强度均明显增强（P〈0．05）。P组老化4d时Aβ1-40以无定形结构存在,老化7d时仅仅有少量纤维状聚集。M组老化4d时可见密集的纤维状聚集物,老化7d时聚集更加明显。结论异丙酚不促进Aβ聚集而咪唑安定对邮有促寡聚化和纤维形成的作用。     

PNU上调大鼠皮质星形胶质细胞内源性Cryab抑制Aβ聚集

目的探讨PNU激活星形胶质细胞α7胆碱能受体(α7 n AChRs)上调内源性B-晶状体蛋白(Cryab)并抑制β淀粉样蛋白(Aβ)集聚的现象及其机制。方法分离24 h内新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并鉴定;体外制备Aβ_(1~42)寡聚体;将细胞分为对照组、PNU组、PNU+α7 n AChRs阻断剂(MLA)组、Aβ_(1~42)组、PNU+Aβ_(1~42)组、PI3K信号通路阻断剂LY294002+PNU+Aβ_(1~42)组。用蛋白印迹法检测细胞内Cryab、P-Akt(ser473)、Aβ寡聚体的表达水平。结果 (1)PNU可以显著上调星形胶质细胞内源性Cryab蛋白(P0.05);应用MLA阻断α7 n AChRs后,PNU上调内源性Cryab蛋白的作用被显著抑制(P0.05);使用LY294002阻断PI3K信号通路后,PNU上调内源性Cryab蛋白的作用被显著抑制(P0.01);(2)PNU能够显著上调磷酸化Akt蛋白水平(P0.05);应用MLA阻断α7 n AChRs后,PNU上调磷酸化Akt蛋白的作用被显著抑制(P0.01);使用LY294002阻断PI3K信号通路后,PNU上调磷酸化Akt蛋白的作用被显著抑制(P0.01);(3)在细胞裂解液及培养基中,PNU显著增强星形胶质细胞对Aβ聚集的抑制作用(P0.01);使用LY294002阻断PI3K信号通路后,PNU增强星形胶质细胞抑制Aβ聚集的功能显著减弱(P0.01)。结论PNU通过激活星形胶质细胞α7 n AChRs上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚;PI3K/Akt信号通路可能参与PNU激活星形胶质细胞α7 n AChRs上调内源性Cryab蛋白抑制Aβ集聚的过程。     

大黄酚对β-淀粉样蛋白25～35致小鼠学习记忆障碍的改善作用

μl可引起小鼠学习记忆障碍,同时使脑组织NO含量增加和NOS、iNOS活性升高(P<0.01);而大黄酚(0.1,1.0,10.0 mg/kg,ip,17 d)可不同程度改善Aβ25～35造成的学习记忆障碍,并降低脑组织NO含量及NOS、iNOS活性(P<0.01).结论 侧脑室注射Aβ25～35可引起小鼠学习记忆障碍,而大黄酚可能通过抑制iNOS/NO参与的在体条件下对Aβ25～35神经毒性的介导,改善Aβ25～35致小鼠学习记忆障碍.     

绞股蓝皂甙对Aβ诱导AD细胞模型的影响

目的探讨绞股蓝皂甙对Aβ诱导AD细胞模型的影响。方法原代培养胎鼠基底前脑胆碱能神经元,实验细胞分为6组:空白对照组、BDNF组、SLs组、β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)组、Aβ1-40+BDNF组和Aβ1-40+SLs组。应用MTT比色试验检测SLs对细胞活性的影响,免疫细胞化学染色检测胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达;采用Aβ1-40诱导AD细胞模型,运用免疫细胞化学染色和流式细胞仪分别检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达和凋亡。结果空白对照组、BMDF组、SLs组、Aβ1-40组、Aβ1-40+BNDF组、Aβ1-40+SLS组实验细胞MTT检测细胞积分吸光度(IA)值分别为0.61±0.04、0.91±0.07、0.92±0.07、0.36±0.02、0.56±0.04、0.55±0.04,ChAT免疫阳性细胞数分别为43.00±2.73、64.00±4.57、61.00±4.62、21.00±1.92、41.00±2.69、40.00±2.54,iNOS免疫阳性细胞数分别为41.00±2.92、40.00±2.89、40.00±2.96、67.00±5.26、46.00±2.78、45.00±2.97,细胞凋亡数分别为30.00±2.31、29.00±2.12、28.00±2.49、57.00±3.83、33.00±1.75、34.00±3.46。Aβ1-40+SLs组细胞活性与ChAT阳性细胞数均高于Aβ1-40组(P<0.05),Aβ1-40+SLs组iNOS阳性细胞数与细胞凋亡数均低于Aβ1-40组(P<0.05)。结论 SLs可促进体外培养的胆碱能神经元及其突起生长,可提高神经元的活性和ChAT表达,并可有效抑制Aβ1-40诱导的神经元iNOS表达和细胞凋亡。绞股蓝皂甙对Aβ诱导的AD细胞模型具有保护作用。     

大鼠海马内注射β淀粉样蛋白对脑内小胶质细胞活化和神经元凋亡的影响

目的观察脑内β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积早期对脑内胶质活化和细胞凋亡的影响。方法通过立体定位技术将Aβ_(1-42)注射至大鼠双侧海马,对照组注射反序列Aβ_(42-1)或PBS。分别于注射后3、7、14 d,用免疫组织化学和免疫荧光法检测CD11b、MHCⅡ及活化caspase-3的表达。结果海马内注射Aβ_(1-42)后3 d,大鼠脑内CD11b和MHCⅡ阳性小胶质细胞数量[分别为(345.22±75.86)和(200.22±42.88)],较PBS组[分别为(98.61±20.79)和(35.43±12.46)]和Aβ_(42-1)组[分别为(103.44±22.13)和(43.41±15.63)]明显升高(P<0.01),7 d达到高峰[分别为(486.22±81.51)和(223.62±66.99)],表现为明显的激活状态。注射后3 d,大脑皮质、海马的活化caspase-3阳性细胞数量(132.42±31.80)比PBS组(4.41±3.13)和Aβ_(42-1)组(4.85±3.70)明显升高(P<0.01),7 d后更明显(165.24±33.95),以海马更为显著。结论海马内注射A?可以诱导小胶质活化和神经细胞凋亡,有可能作为研究阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病早期的动物模型。     

Aβ25-35海马注射对大鼠神经细胞中NF-κB活性的影响

阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是以智能衰退和行为紊乱为特征的神经系统退行性疾病,是引起痴呆的主要疾病之一。β-淀粉样蛋白(β-amy-loid,Aβ)是AD主要病理特征老年斑(senileplaque,SP)的核心成分,目前认为Aβ神经毒性作用是各种原因引起AD的共同通路,是AD形成和发展     

雷公藤内酯醇对β-淀粉样蛋白诱导的大鼠小胶质细胞IL-1β和PGE2表达的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇对β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40诱导的大鼠小胶质细胞白细胞介素-1β(IL-1β)及前列腺素E2( PGE2)表达的影响.方法 本实验用Aβ1-40(20μg/ml)诱导体外培养的原代小胶质细胞,建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,并给予不同剂量雷公藤内酯醇(终浓度分别为5、25μg/ml)在不同时程(2h、12 h、24 h)进行干预,提取细胞培养上清,采用放射免疫学方法检测IL-1β和PGE2的含量.结果加药后12h,模型组IL-13和PGE2的含量比对照组明显升高(P ＜0.01);5 μg/ml组和25 μg/ml组IL-1β的含量比模型组明显减少(P＜0.01),5μg/ml组PGE2的含量比模型组明显减少(P＜0.01).结论雷公藤内酯醇对Aβ1-40诱导的小胶质细胞IL-1β和PGE2的表达上调有抑制作用.     

TAT-XIAP融合蛋白对Aβ(25～35)诱导的阿尔茨海默病大鼠行为学的影响

目的 研究TAT-XIAP融合蛋白对阿尔茨海默病(AD)大鼠空间学习记忆能力的影响.方法 将SD大鼠随机分成三组,对照组海马区注射生理盐水,模型组海马区注射Aβ (25 ～35),给药组尾静脉注射TAT-MAP融合蛋白10 mg/kg.采用Morris水迷宫法检测AD大鼠的空间学习记忆能力.结果 与模型组比较,给药组AD大鼠的Morris水迷宫实验逃避潜伏期缩短(P＜0.05);游泳轨迹路线多在平台所在象限附近,呈趋向型.结论 TAT-XIAP融合蛋白能够改善AD大鼠空间学习记忆能力.