脑缺血对阿尔茨海默病大鼠海马内病理特征及炎性反应的影响

目的观察脑缺血后阿尔茨海默病(AD)大鼠海马内的病理特征、炎性细胞及细胞因子表达的变化,探讨脑缺血在AD病程进展中的作用及机制。方法经Morris水迷宫筛选SD大鼠30只.随机分为AD组、AD+脑缺血组、对照组,每组10只。大鼠海马注射凝聚态淀粉β样蛋白_(1-10)成功建立AD模型后.海马注射内皮素-1建立脑缺血条件,观察脑缺血后AD大鼠海马内淀粉β样蛋白(Aβ)的沉积及神经元丢失的变化,采用免疫组织化学、原位杂交和RT-PCR检测脑缺血后AD大鼠海马内星形胶质细胞的数量和白细胞介素1β(IL-1β)、TNF-α表达的变化。结果与对照组比较,AD组和AD+脑缺血组大鼠海马星形胶质细胞数量、IL-1β和TNF-α表达均显著增多(P<0.01)。结论脑缺血促进了AD大鼠海马内Aβ的沉积和神经元的丢失,提示脑缺血可促进AD的病程进展,星形胶质细胞、IL-1β和TNF-α参与了这一过程。     

盐酸多奈哌齐对淀粉样蛋白致痴呆树鼩的治疗作用

目的探讨盐酸多奈哌齐对树鼩侧脑室内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后星形胶质细胞及成熟神经细胞的影响。方法采用GFAP和NeuN免疫组织化学方法检测各组树鼩大脑皮质和海马CA1、CA3、DG区星形胶质细胞和成熟神经元的表达。结果模型组树鼩额叶皮质和海马区GFAP阳性星形胶质细胞数明显高于对照组(P<0.01);治疗组海马(P<0.01)和皮质(P<0.05)GFAP阳性细胞数明显低于模型组。模型组树鼩额叶皮质和海马区NeuN阳性成熟神经元数明显少于对照组(P<0.01);治疗组树鼩海马CA1、CA3区(P<0.05)和额叶皮质(P<0.01)NeuN阳性成熟神经元明显多于模型组。结论盐酸多奈哌齐能抑制Aβ_(1~40)引起的树鼩星形胶质细胞的活化,减轻Aβ对成熟神经元的损伤。     

地塞米松对痴呆大鼠模型脑内炎症损伤的保护作用

目的观察地塞米松对Aβ所致AD大鼠模型脑内炎症的抑制作用,从而为探索AD的炎症损伤机制的可能性提供依据。方法Aβ溶液及生理盐水作海马立体定向注射后,地塞米松腹腔注射治疗模型大鼠并以生理盐水作对照,采用方差对量化指标行统计学处理,采用免疫组织化学染色,显示胶质细胞反应及IL-1β,TNF-α表达情况。结果Aβ组大鼠海马区小胶质细胞和星形胶质细胞数目多,分布密集,染色深。Aβ 地塞米松组大鼠海马区小胶质细胞和星形胶质细胞反应性增生及神经元丧失情况明显减轻。结论凝聚态的Aβ1-40使胶质细胞过度激活,表达IL-1β和TNF-α,并可被地塞米松抑制,证明AD的发病机制中可能存在慢性炎症反应过程的参与。     

姜黄素对Aβ诱导的老年痴呆大鼠海马胶质纤维酸蛋白表达的影响

目的通过观察姜黄素对Aβ1～40诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠空间学习记忆能力及海马区星形胶质细胞胶质纤维酸蛋白(GFAP)表达的影响,探讨姜黄素的作用机制。方法选择健康SD大鼠48只,分为空白对照组、AD对照组、姜黄素给药组,每组16只。Aβ1～40诱导大鼠认知障碍模型,采用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力。采用免疫组织化学方法检测GFAP蛋白表达,RT-PCR检测GFAP mRNA表达。结果姜黄素干预后AD大鼠空间学习记忆能力明显改善(P<0.05);与空白对照组相比,AD对照组大鼠脑组织海马区可见星形胶质细胞GFAP表达明显增多(P<0.05),姜黄素给药组大鼠脑组织海马区GFAP mRNA及免疫阳性细胞表达较AD对照组下降(P<0.05)。结论姜黄素能够改善Aβ1～40诱导的AD模型大鼠空间学习记忆障碍,其机制可能与降低GFAP的表达和抑制星形胶质细胞活性有关。     

依达拉奉对AD模型大鼠行为学和脑部NOS1阳性神经元的影响

目的 观察依达拉奉注射液对老年性痴呆(AD)模型大鼠学习记忆功能和神经元性一氧化氮合酶(NOS1)阳性神经元的影响.方法 用腹腔注射(ip)D-半乳糖和灌胃注射(ig)AlCl3法建立AD模型,Morris水迷宫实验检测学习记忆能力,以免疫组化法观察大鼠脑部的NOS1变化.结果 依达拉奉能显著改善AD模型大鼠的学习记忆障碍(P＜0.05),并明显增强大脑皮质和海马NOS1活性及其神经元密度(P＜0.05),其作用呈现出一定的量效关系.结论 中枢NOS1活性与学习记忆成绩显著相关;依达拉奉注射液对AD模型的学习记忆障碍有明显的改善作用.     

嗅成鞘细胞提取液对阿尔茨海默病脑移植的影响

目的 探讨嗅成鞘细胞提取液对阿尔茨海默病(AD)脑移植的影响.方法 SD大鼠双侧海马注射Aβ1-40,建立AD大鼠模型.实验动物分为四组:正常对照组、空白对照组、人工脑脊液移植组、嗅成鞘细胞OECs提取液移植组,每组10只.两移植组分别加用人工脑脊液、OECs提取液培养胆碱能神经元,并移植到AD模型大鼠.运用行为学测试、NADPH-d组化、刚果红组织学染色结合积分吸光度测定等技术,观察、比较各组AD模型大鼠移植2个月后学习记忆能力、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数以及老年斑的变化.结果 ①行为学测试:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组大鼠达到学会标准所需训练次数(TN)、错误反应次数(EN)、潜伏期(D)、全天总反应时间(TRT)少且短于空白对照组(P＜0.05);OECs提取液移植组更为明显,与人工脑脊液移植组之间有显著差异(P＜0.05).②NADPH-d组化反应:人工脑脊液移植组、OECs提取液移植组NOS阳性神经元数较空白对照组明显增多(P＜0.05),且前两组之间有显著性差异.③刚果红染色:SP积分吸光度测定,三组间均有显著性差异(P＜0.05),OECs提取液移植组SP-IA值最小.结论 OECs提取液能明显提高AD脑移植的效果.     

肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β在淀粉样蛋白致阿尔茨海默病大鼠神经元损伤中的作用

目的探讨炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β在淀粉样蛋白(Aβ)致阿尔茨海默病(AD)大鼠中的作用。方法20只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组,双侧海马注射Aβ制作AS模型,水迷宫实验记录大鼠寻找平台潜伏期;硫堇染色观察海马神经元形态、数量;胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化检测胶质细胞;ELISA方法检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量。结果模型组大鼠寻找平台潜伏期时间较对照组明显延长,模型组大鼠海马神经元数量较对照组明显减少,形态异常;免疫组化显示模型组大鼠海马GFAP阳性细胞数增多,模型组血清中TNF-α、IL-1β较对照组明显升高。结论 Aβ可能激活胶质细胞,后者分泌炎症因子引起神经元损伤,导致学习、记忆能力下降。     

壳聚糖磷酯酰胆碱对AD大鼠海马中诱导型一氧化氮合酶和IκB激酶β表达的影响

目的 研究壳聚糖磷酯酰胆碱对大鼠海马内注射Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IκB激酶β(IKKβ)表达和AD大鼠学习记忆能力的影响.方法 双侧海马注射Aβ25-35建立AD炎性模型,采用Morris水迷宫和免疫组化方法分别观察大鼠的学习记忆能力和炎性因子iNOS、IKKβ表达情况.结果 模型组大鼠的平均逃避潜伏期(AEL)、单位时间内跨越原平台次数和在原平台象限时间与对照组和药物组比减少,差异有统计学意义(P＜0.05).模型组大鼠海马iNOS和IKKβ阳性细胞表达明显高于对照组(P＜0.01),药物组iNOS和IKKβ阳性细胞表达较模型组显著下降(P＜0.05).结论 壳聚糖磷酯酰胆碱对AD大鼠脑海马部位炎症反应有一定的抑制作用,及提高AD大鼠学习记忆能力的作用.     

脑室内移植嗅成鞘细胞改善大鼠阿尔茨海默病的症状

目的探讨嗅成鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）脑室内注射对大鼠阿尔茨海默病的影响。方法sD大鼠双侧海马注射ABl．40,建立AD大鼠模型。实验动物分为四组：正常对照组、AD模型组、OECs移植组、MCSF注射组,每组10只。体外原代培养嗅成鞘细胞并将其移植至AD大鼠侧脑室。运用行为学测试、组织化学、原位杂交结合图像分析以及电镜等技术,观察、比较各组大鼠学习记忆能力、海马CA1区线粒体细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase,COX）活性、细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基（COⅡ）mRNA表达、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）阳性神经元数,以及CA1区神经元线粒体超微结构等指标的变化。结果与正常对照组比较,AD模型组大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及CO II mRNA表达、NOS阳性神经元数明显降低或减少俨〈0．05）,线粒体数肇减少,结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂;嗅成鞘细胞移植明显上调上述指标俨〈0．05）,并对神经元线粒体超微结构有明显的保护作用。结论嗅成鞘细胞移植通过改善AD大鼠学习记忆能力、提高海马COX活性和CO1ImRNA、NOS阳性神经元表达以及保护神经元线粒体等作用,对大鼠阿尔茨海默病具有明显的治疗作用。     

神经生长因子和蝮蛇抗栓酶对脑梗死大鼠海马神经元一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)和蝮蛇抗栓酶对多发性脑梗死大鼠海马神经元一氧化氮合酶(n NOS)阳性神经元的影响。方法采用微小栓子颈内动脉注入法以建立多发性脑梗死大鼠动物模型。将大鼠随机分为正常组、模型组及治疗组。比较各组大鼠体重变化、各时间点神经功能评分变化、神经元尼氏染色及大鼠海马CA1区的n NOS阳性表达水平。结果第7天,治疗组大鼠海马CA1区n NOS阳性神经元数量比模型组有所增加(P0.01);与正常组无显著差异(P0.05)。治疗组第7天与第1天比较n NOS阳性神经元数量有所减少(P0.01)。结论 NGF和蝮蛇抗栓酶可以修复受损海马组织并改善大鼠的神经行为学,对多发性脑梗死具有很好疗效。     

Aβ_(25～35)对大鼠海马神经元及小胶质细胞的影响

目的探讨双侧海马注射Aβ25³5不同时间点对大鼠海马神经元及MG的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组(注射Aβ后2、7、15、21 d 4个时间点),双侧海马注射Aβ建立大鼠AD模型。水迷宫法观察大鼠学习记忆能力;硫堇染色观察海马CA1区神经元和胶质细胞;Aβ、CD11b免疫组化染色分别观察Aβ沉积和活化MG。结果与对照组相比,模型组大鼠在第335不同时间点对大鼠海马神经元及MG的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组(注射Aβ后2、7、15、21 d 4个时间点),双侧海马注射Aβ建立大鼠AD模型。水迷宫法观察大鼠学习记忆能力;硫堇染色观察海马CA1区神经元和胶质细胞;Aβ、CD11b免疫组化染色分别观察Aβ沉积和活化MG。结果与对照组相比,模型组大鼠在第3⁵天逃避潜伏期均显著延长,学习记忆能力下降(P<0.05);4个时间点模型组大鼠海马都有神经元缺失,胶质细胞增生,2 d、7 d、15 d组大鼠神经元损伤呈加重趋势,但21 d组神经元损伤较15 d组有减轻趋势(P<0.05);4个时间点模型组大鼠都有Aβ沉积和活化的MG,Aβ沉积量及MG活化自第7天后呈下降趋势(P<0.05)。结论 Aβ可以引起神经元损伤,降低大鼠的学习记忆能力;Aβ可以激活MG,引起MG形态和数量改变,MG可吞噬、清除Aβ;Aβ沉积量和MG活化数量变化呈正相关。     

雌激素对小鼠大脑中动脉缺血后海马星形胶质细胞变化的研究

目的探讨雌激素对小鼠大脑中动脉缺血后海马星形胶质细胞动态变化的影响。方法雄性昆明小鼠108只随机分为雌激素组(术前7d按体质量0.1ml/10g每日定时腹腔注射17β雌二醇)54只和对照组(腹腔注射生理盐水)54只,2组均行永久性右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)术,分别于MCAO术后3、6、12、24、48和72h取材,TTC染色法观察2组小鼠脑缺血部位及范围;苏木精-伊红染色观察海马神经元的变化;免疫组织化学法观察海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达变化。结果雌激素组术后各时间点脑梗死体积明显低于对照组(P0.05,P0.01),以缺血12h最为明显[(31.50±3.36)%vs (54.50±5.68)%,P=0.019]。2组海马神经元损伤程度随缺血时间的延长而加重,且相同时间点,雌激素组缺血侧海马神经元损伤程度均较对照组轻。2组双侧海马各区GFAP阳性细胞表达均随缺血时间延长而增多(P0.05);除CA3区缺血6h时,雌激素组缺血侧GFAP阳性细胞表达均较对照组增多(P0.05),突触增粗延长,树突棘分布较密集。结论雌激素对小鼠局灶性脑缺血具有神经保护作用,可刺激星形胶质细胞突触的发生,减轻缺血后神经元损伤,从而减小脑梗死体积。     

电刺激小脑顶核对AD大鼠海马神经元c—Rel和Bcl—xl表达的影响

目的 研究电刺激小脑顶核(FNS)对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力及脑内海马神经元c-Rel和Bcl-xl表达的影响.方法 40只SD大鼠随机分成4组:Aβ1-40微量注射组(AD组)、假手术组(SC组)、Aβ1-40微量注射+电刺激小脑顶核组(FNS组)和Aβ1-40微量注射+电刺激齿状核组(DNS组),采用Morris水迷宫检测电刺激小脑顶核对AD大鼠认知功能的影响;通过HE染色、电镜观察电刺激小脑顶核对AD大鼠的海马神经元形态的影响;采用免疫组化法观察电刺激小脑顶核对AD大鼠海马神经元c-Rel和Bcl-xl的表达的影响.结果 与SC组比较,AD组、FNS组和DNS组每天隐匿平台逃避潜伏期明显延长(P＜0.05)、海马CA1区的Bcl-xl和c-Rel阳性细胞OD值差异显著(均P＜0.05); FNS组与AD组比较,大鼠每天逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05),FNS组海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞OD值为(0.46±0.04、0.65±0.09),较AD组阳性细胞OD值明显增高(P＜0.05),但齿状核刺激(DNS)组与AD组比较大鼠每天逃避潜伏期和海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞OD值无显著差异(P＞0.05).结论 电刺激小脑顶核能通过增强C-Rel及Bcl-xl的表达,抑制海马神经元的凋亡,改善AD大鼠学习记忆能力.     

金匮肾气丸对阿尔茨海默病大鼠模型海马神经元β-淀粉样蛋白和神经元核抗原表达的作用

目的探讨金匮肾气丸对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元β-淀粉样蛋白(Beta-amyloid)和神经元核抗原(Neu N)表达的影响。方法清洁级健康SD大鼠24只,分成三组:对照组,AD模型组,中药组。采用在单侧海马注射Aβ25-35建立AD大鼠模型,SABC免疫组化方法检测各组大鼠海马神经元中Beta-amyloid和Neu N的表达。结果 1AD模型组与对照组比较,大鼠海马Beta-amyloid阳性细胞数增多(P0.01),Neu N阳性细胞数减少(P0.01);2中药组与AD模型组比较,大鼠海马Beta-amyloid阳性细胞减少(P0.01),Neu N阳性细胞数增加(P0.01)。结论金匮肾气丸能抑制Beta-amyloid阳性细胞表达,促进Neu N阳性细胞的表达,从而起到防治AD的作用。     

新型复合式老年痴呆动物模型的建立

目的建立一种新的复舍式老年性痴呆（AD）大鼠模型，用于AD及其治疗药物的研究。方法选用雄性正常老年Wistar大鼠，左侧侧脑室一次性注射5μL聚集态的Aβ5—35，制备AD动物模型。通过水迷宫试验、脑组织AB免疫组化染色和银染色，比较AD模型大鼠和正常老年大鼠的差异。结果模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长（P〈0．01）；免疫组化结果示模型组海马、额叶和颞叶Aβ阳性细胞数增加，平均灰度值显著降低（P〈0．01），且染出了脑淀粉样血管病变（CAA）、老年斑（SP）和小胶质细胞；模型组Bielschowsky染色可见星形胶质细胞。但并未见到典型的NFTs。结论老年大鼠加左侧侧脑室一次性注射聚集态的Aβ5—35所致的AD模型在一定程度上模拟了AD的发病特点。可以作为AD及其治疗药物研究的一种新模型。     

褪黑素对阿尔茨海默病模型大鼠NOS、Ca2+和神经元凋亡的影响

目的研究褪黑索（melatonin，MT）对阿茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的NOS、Ca^2＋及神经元凋亡的影响。方法Wistar大鼠48只随机分为AD组、AD-MT大剂量干预组、AD-MT小剂量干预组和假AD组。应用β-淀粉样蛋白（AB）注入大鼠海马CAI区，建立大鼠AD模型。AD-MT干预组以MT灌胃，每日一次直至试验结束。应用电迷宫检测大鼠学习记忆情况，用比色法，硝酸还原法和Tunel法检测海马钙离子（Ca^2＋），一氧化氮合酶（NOS）含量以及海马神经元凋亡情况。结果MT可以明显改善AD大鼠的学习记忆能力，同时可不同程度的抑制因AB在脑内的沉积所导致海马的Ca^2＋超载，NOS的异常增高以及海马神经元的凋亡。结论MT对AD有显著的脑保护作用。     

碘过量对成年大鼠海马胶质原纤维酸性蛋白的影响

目的研究碘过量对Wistar成年大鼠海马星形胶质细胞的影响。方法断乳一个月Wistar大鼠，雌雄各半，随机分为4组：适碘组（NI），10倍碘组（10HI），50倍碘组（50HI）和100倍碘组（100HI）。给予不同浓度碘酸钾水喂养6个月后，处死，取大脑，应用免疫组织化学技术观察海马CA，区星形胶质细胞，并对胶质原纤维酸性蛋白GFAP反应阳性细胞进行形态计量学分析。结果各碘过量组海马GFAP阳性细胞的Vv，NA和细胞质的平均灰度值与NI组比较均无明显差异（P〉0．05）。结论碘过量不会造成Wistar成年大鼠海马神经元的明显损伤，其星形胶质细胞Vv，NA和细胞质的平均灰度值无明显改变。     

迷迭香酸对新生大鼠海马星形胶质细胞增殖的影响及其机制探讨

目的 观察迷迭香酸（RA）对新生大鼠海马星形胶质细胞增殖的影响,并探讨其机制.方法 取原代培养的新生大鼠海马星形胶质细胞,处理组加入1、5、10、20、40 μg/mL的RA处理,对照组加相同体积的DMEM.免疫组化细胞染色法计数BrdU阳性细胞数（细胞增殖）,WST-1法检测波长450 nm时的OD值（细胞活力）,ELISA法检测细胞培养液上清的脑源性神经营养因子（BDNF）.结果 作用72 h,20、40 μg/mL的RA处理组BrdU阳性细胞数高于对照组及其他浓度RA处理组（P均≤0.05）,20 μg/mL的RA处理组波长450 nm下的OD值、BDNF均高于对照组及其他浓度RA处理组（P均≤0.05）;其余各组两两比较,P均＞0.05.结论 一定剂量的RA可促进新生大鼠海马星形胶质细胞增殖,该作用与其提高细胞活力、促进BDNF释放有关.     

雌激素对去卵巢大鼠不同脑区APPβ位点裂解酶表达的影响

目的观察内外源雌激素对卵巢切除大鼠大脑皮层、海马CA1区APPβ位点裂解酶（BACE）表达的影响。方法21只雌性Wistar大鼠随机分为假手术对照组、卵巢切除组（OVX组）、卵巢切除后补充外源性雌激素组（E2组）。放免法测量大鼠血中雌激素含量。免疫荧光标记细胞化学法计数皮层区、海马CA1区BACE蛋白表达阳性细胞。结果与对照组和E2组比较，OVX组大鼠皮层区、海马CA1区BACE阳性细胞数显著增加（P均〈0．01），血液雌激素含量显著降低（P均〈0．01）。E2组与对照组比较，两组之间各观察部位BACE表达阳性细胞数和血液雌激素含量无显著差异（P均〉0．05）。结论体内外雌激素含量的变化可影响大鼠皮质和海马区域BACE表达。     

促红细胞生成素对慢性脑缺血大鼠认知障碍及海马星形胶质细胞的影响

目的 观察促红细胞生成素干预后慢性脑缺血大鼠的空间学习记忆功能及海马星形胶质细胞的变化.方法 结扎大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型,治疗组术后给予EP01 000 U/kg腹腔内注射5d.术后第8周时3组大鼠Morris水迷宫测试后断头取脑做免疫组化检测观察CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果 缺血组水迷宫表现同假手术组和EPO治疗组相比有显著差异(P＜0.01).EPO干预能改善慢性脑缺血大鼠的空间学习记忆能力(P＜0.01).缺血组海马CA1区GFAP表达较假手术组相比明显增多,而EPO组海马CA1区GFAP表达同缺血组相比明显降低(P＜0.01).海马CA1区GFAP阳性细胞数与学习记忆能力呈负相关.结论 EPO能显著改善慢性脑缺血大鼠认知障碍,机制可能与减少海马星形胶质细胞增生有关.