RNA干扰技术及其应用

RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默。在此过程中,与双链RNA有同源序列的信使RNA被降解,从而抑制了该基因的表达。从发现RNAi现象以来,对RNAi的了解已取得重大进展。包括从最初的,对其干扰模式的预测,到如今,能够精确了解RNAi在多个物种中调节基因表达的作用机制及多面性。RNAi技术也已经在很多领域成为研究基因功能的重要工具。     

基因沉默与RNA干扰

生物体经过漫长的进化和自然选择后逐渐形成了对异常基因活动进行监控和防御的能力,这种天然免疫机制在最近几年的研究中得到了进一步认识。所谓异常基因活动是指病毒基因侵入和复制,转座子和转基因表达。正常基因活动几乎不产生双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),而异常基     

RNA干扰及其在医学中的应用

1995年,Guo等[1]在用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现,反义和正义RNA都阻断了基因的表达,他们对这个结果百思不得其解.直到1998年,Fire等[2]研究发现这种抑制并不是单独正义链的作用,而是正义链中污染了反义链后形成的双链RNA所致.     

载体介导HER-2 RNA干扰治疗乳腺癌研究

目的 探讨载体介导HER-2RNA干扰治疗HER-2阳性乳腺癌的可行性。方法 构建能够产生HER-2 siRNA的质粒载体,利用载体转染HER-2阳性乳腺癌细胞SKBR-3,利用RT-PCR与Western blot检测HER-2 mRNA与蛋白表达情况,同时观察转染后SKBR-3细胞凋亡及生长情况。结果 SKBR-3细胞HER-2受到载体介导的RNA干扰后．HER-2 mRNA及蛋白表达出现明显下调,细胞凋亡增加,肿瘤细胞生长受到抑制。结论 乳腺癌HER-2是理想的RNA干扰治疗靶点,靶向HER-2的RNA干扰可以诱导肿瘤凋亡,抑制肿瘤生长。     

RNA干扰与卵巢癌基因治疗

RNA干扰(RNAi)是由外源性或内源性双链RNA诱发的转录后基因沉默机制,能高效特异性抑制突变基因表达,恢复正常基因功能。卵巢癌的发生是多基因参与并经多阶段演进而形成的疾病,RNAi现象的发现为卵巢癌的基因治疗提供了一种新的思路。通过RNAi技术可抑制卵巢癌致癌基因的表达,阻断细胞凋亡与分裂,增强卵巢癌传统化疗药物的敏感性,抑制肿瘤的浸润与转移,RNAi可能成为卵巢癌基因治疗的新策略。本文就RNAi的分子机制、特性以及RNAi技术在卵巢癌基因治疗领域的应用进行综述。     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的应用价值

RNA干扰（RNAi）是一种在动植物中广泛存在的序列特异性转录后水平的基因沉默过程。它由双链DNA经核酸酶降解成21～23nt的小片段后，特定位点、特定序列的降解与之序列相应的mRNA。利用RNAi技术可作为一种基因敲除工具应用于多种疾病的治疗，尤其在肿瘤的基因治疗中有着广泛的应用前景和价值。     

RNA干扰与胶质瘤的基因治疗

RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术是一种新兴的由外源性或内源性的双链RNA介导的转录后基因沉默技术。RNAi可以使目标基因低表达或完全不表达。随着RNAi技术研究的不断进展，RNAi已成为研究基因功能和探索基因治疗的重要工具。本文就RNAi技术及其在胶质瘤治疗中的研究进展作一介绍。     

RNA干扰技术的研究进展

自1998年2月Fire等[1]首次在Nature上发表了将双链RNA(double stranded RNA, dsRNA)注入一种秀丽线虫(caenorhabditis elegans)体内,dsRNA诱导了靶向基因专一性的基因表达沉默(gene silencing),由此,一门新技术--RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术逐渐发展起来.随后许多研究人员先后运用RNAi技术在线虫、果蝇、植物及动物细胞中进行了大量研究,采用不同长度的dsRNA 可使不同类型细胞的靶向基因表达明显降低.近年来研究表明,在哺乳动物以及人类细胞中转染21～23个核苷酸(nucleotide, nt)的小干扰性RNA(small interfering RNA, SiRNA)可使同源基因表达产生特异性强抑制效应[2].SiRNA和RNAi技术的研究和运用,具有极其重要的理论意义和实践意义,它将对医学生物学的发展产生深远的影响.杂志将这一新发现评为2002年度世界十大科学成就之首.本文就RNAi的作用机制、SiRNA合成以及RNAi技术运用等方面的研究进展综述如下.     

RNA干扰在抗肿瘤中的作用研究进展

癌症是当前危害人类健康的最主要杀手。临床上常用的手术治疗、放射治疗和化学治疗无法完全根除或彻底杀灭肿瘤细胞,常出现肿瘤转移或复发现象。而肿瘤的生物治疗具有安全、有效、毒副作用低等特点,基因治疗是生物治疗的一种,其主要是抑制肿瘤细胞中过度表达的基因。RNA干扰(RNAi)是一种利用双链RNA(dsRNA)特异性沉默某一特定基因转录后翻译的过程。RNAi已成为用于研究基因功能的重要工具,其不仅能敲除某些基因的表达,防御dsRNA病毒,还能作用于整个基因组,观察基因之间的协调合作,可以利用它进行基因治疗。本文主要介绍了RNAi技术的发现、作用机制及其在抗肿瘤方面的应用,并总结了该技术在抗肿瘤过程中存在的问题。     

RNA干扰在肿瘤基因治疗方面的研究进展

RNA干扰作为一项特异性基因沉默的有效工具正以前所未有的速度发展,仅用10年的时间就从低等生物领域进军到哺乳动物领域,以后可能会用于人类各种疾病的预防,成为人类最有前景的生物治疗手段。RNA干扰通过在转录水平调控基因的表达来实现对肿瘤的治疗。现就RNA干扰基本原理以及在肿瘤基因治疗的应用进展方面作一综述。     

RNA干扰技术的应用

RNA干扰是自然界生物中广泛存在的一种保守的自我保护现象。随着对RNAi发生机制的深入研究,RNAi正作为一种成熟的技术被研究工作者广泛应用于功能基因组的研究,如基因功能的检测、基因治疗、肿瘤多药耐药研究、药物开发等。     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,也称为基因沉寂疗法(Gene Silencing),是利用双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发对宿主细胞特异性RNA转录的抑制,从而抑制特异目的基因表达的方法.也即双链RNA在细胞内RNA酶Ⅲ的作用下,被裂解成21～23个核苷酸(nucleotide,nt)的小干扰性RNA(small interference RNA,siRNA),进而启动细胞内RNAi反应,特异性地阻断靶基因表达的过程.     

基于RNA干扰的非病毒递送载体研究进展

干扰RNA和微小RNA均由约20个碱基对组成,具有调控基因表达的功能,已广泛应用于肿瘤、心血管、组织再生等疾病的诊断、治疗中。利用可逆性的RNA干扰技术调控体内基因的表达以实现对疾病的治疗已受到越来越多的研究者的关注。但干扰RNA和微小RNA本身存在如带负电荷、易降解、细胞摄取低、核酸酶降解及内涵体释放困难等问题,因此,一种高效低毒的基因递送系统对于提高基于RNA干扰的治疗效果具有重要的作用。随着对纳米递送系统的开发,出现各种各样的基因递送系统,本文主要对非病毒递送系统在递送干扰RNA和微小RNA上作用进行综述,分析递送系统的设计思路、方法和作用机制,为未来设计递送RNA干扰核酸的非病毒载体提供一定的指导。     

RNA干扰技术及其在大肠癌研究中的应用

RNA干扰是指生物体内利用双链RNA（dsRNA）诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,导致转录后基因沉默的现象。近年来RNAi技术在医学研究中的广泛应用取得了显著的基因沉默效果,并以其高效、特异等显著优势成为研究基因功能的新手段。大肠癌的恶性度高,发展迅速,治疗困难,病死率高,其发生发展涉及原癌基因的激活、抑癌基因的失活及突变,以及凋亡相关基因的异常表达等过程,多数伴有大量基因的过度表达。本文就RNAi的作用机制、特点及其在大肠癌研究中的应用作一综述。     

RNA干扰中小干扰RNA的设计原则

RNA干扰(RNAi)是由内源性或外源性双链RNA介导的一种高度保守的序列特异性基因表达调控机制,主要通过小干扰RNA(siRNA)和微小RNA发挥作用。由于其具有高效、高特异性、作用稳定等特点,已被广泛地应用于基础实验和疾病治疗的研究中。在进行siRNA介导的RNAi实验时,如何设计高效、特异性抑制靶mRNA的siRNA是实验成败的关键。     

人组织因子RNA干扰真核表达载体的构建

目的:利用RNA干扰(RNAi技术,以人组织因子(TF)基因为靶基因,构建特异性的RNA干扰真核细胞表达载体.方法:根据GenBank提供的人TF基因的核苷酸序列,设计具有小发夹结构的2条DNA序列,经退火后成为互补双链,然后将其克隆至干扰载体pSUPER质粒中,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定,最后进行DNA测序.结果:构建成功的针对人TF基因的RNA干扰真核表达载体,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计序列完全一致.结论:成功构建了针对人TF基因的真核载体,使其可能成为肿瘤基因治疗的一种新方法.     

RNA干扰技术在肝癌研究中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种广泛存在的,由外源或内源性的双链RNA(double strands RNA,dsRNA)诱发的同源mRNA特异性沉默,进而抑制其相应基因表达的过程.小片段干扰RNA(small interference RNA,siRNA)技术在沉默癌基因、抑制抗凋亡癌基因、减少过度表达的生长因子和受体、抗血管生成、抑制肝癌细胞化疗耐药、降低肝癌细胞的侵袭转移能力等方面均取得了可喜的研究成果,部分研究已从体外试验过渡到体内试验,为肝癌的临床治疗奠定了基础.但在这一技术广泛应用于临床前,仍存在一些问题,需要进一步的研究.     

RNA干扰在消化道肿瘤基因治疗中的应用

消化道肿瘤的恶性度高,发展迅速,治疗困难,病死率高.因而消化道肿瘤的防治始终是医学界面临的重大课题.该类肿瘤的发生,发展涉及原癌基因的激活、抑癌基因的失活及突变,以及凋亡相关基因的异常表达过程,其共同特点是大量基因的过度表达.RNAi是近几年发展起来的一种特异性抑制基因表达的新方法,通过导入一段与内源基因同源的双链RNA序列,使内源mRRNA降解,达到抑制基因表达的目的 .RNAi操作的简单性和对靶基因表达抑制的高效性使其成为研究基因功能的有力手段,并能选择性地抑制人类疾病相关基因的表达,为肿瘤等疾病的基因治疗带来新的希望.本文就近年来RNA干扰技术在消化道肿瘤基因治疗研究中的应用作一综述.