姜黄素对人脑胶质瘤SHG-44细胞抑制及凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素（erueumin）对人脑胶质瘤SHG-44细胞体外抑制及凋亡调控作用。方法20-80μmol／L姜黄素分别处理SHG-44细胞48h后，MTT法测定姜黄素对SHG-44细胞的细胞抑制作用及各种caspase抑制剂对姜黄素作用的影响；通过流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞形态学变化；荧光分光光度法检测easpase-3活性的改变。结果姜黄素明显抑制SHG-44细胞的增殖；诱导SHG-44细胞凋亡；caspase-3活性增强，各种caspase抑制剂可抑制姜黄素诱导的SHG-44细胞凋亡。结论姜黄素可明显抑制并诱导SHG-44细胞凋亡。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对SHG-44细胞的体外实验研究

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对人胶质瘤SHG-44细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法分别以不同浓度(5、10、20、50μmol/L)的MG-132培养SHG-44细胞。MTT法检测不同培养时间细胞增殖活力、流式细胞术检测细胞凋亡及周期、AO/EB及HE染色观察细胞凋亡变化。结果MG-132可显著抑制SHG-44细胞生长,24h时其抑制作用尤为明显,与对照组相比,5、10、20、50μmol/L浓度组细胞增殖OD值均显著低于正常对照组(P<0.01),呈现剂量依赖性抑制作用增强趋势。与正常对照组相比,MG-132处理SHG-44细胞后,于5μmol/LMG-132作用12h后即可检测到明显的凋亡亚二倍体峰,且存在时效及量效关系;同时24h各剂量MG-132处理组G2/M期细胞表达百分率显著高于正常对照组(P<0.01),S期细胞表达百分率显著低于正常对照组(P<0.01)。结论蛋白酶体抑制剂MG-132在体外可显著诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞发生凋亡、G2/M期细胞周期阻滞并抑制细胞增殖。     

紫杉醇对胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和辐射增敏作用

目的观察紫杉醇对胶质瘤SHG-44细胞的抑制及放射增敏作用,并探讨其作用机制。方法不同浓度紫杉醇(0、0.062 5、1.25、2.5、5和10μg/mL)作用于SHG-44细胞,MTT法检测紫杉醇对SHG-44细胞的增殖抑制作用;克隆形成法检测细胞辐射敏感性变化,流式细胞术检测细胞凋亡百分率变化。结果紫杉醇有明显的抑制SHG-44细胞增殖和提高其放射敏感性的作用,紫杉醇可提高3、6 Gy照射24 h后SHG-44细胞的凋亡率。结论紫杉醇对人胶质瘤SHG-44细胞具有杀伤及放射增敏作用。其可能机制是加强射线对肿瘤细胞的诱导凋亡效应,增强其杀伤肿瘤作用。     

榄香烯聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒子对SHG-44脑胶质瘤的抑制作用

目的探究榄香烯聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒子(Gd-PBCA-NP)对SHG-44脑胶质瘤的抑制作用。方法提取大鼠的脑胶质瘤细胞SHG-44,并对其进行体外培养实验,将这些脑胶质瘤细胞SHG-44按照随机的原则分为干预组与对照组,对照组为空白,干预组则严格按照Gd-PBCA-NP浓度进行分组,然后采用MTT比色法,对榄香烯不同浓度体外培养下的脑胶质瘤细胞SHG-44的抑制作用给予有效的检测,然后借助流式细胞仪测定干预组的脑胶质瘤细胞SHG-44中的细胞凋亡情况。结果榄香烯的浓度不同,其对SHG-44脑胶质瘤体的抑制作用也有着一定的区别。10.0 mol/L浓度的Gd-PBCA-NP对SHG-44脑胶质瘤的抑制作用明显优于2.50 mol/L浓度,且干预组的脑胶质瘤细胞SHG-44的存活率明显低于对照组(P0.05);Gd-PBCA-NP浓度越高,其对脑胶质瘤细胞SHG-44的抑制作用就越强。结论 Gd-PBCA-NP对SHG-44脑胶质瘤有着明显的抑制作用,能够在一定程度上抑制脑胶质瘤SHG-44细胞的凋亡与增殖,而且能够增强细胞抗肿瘤活性,具有一定的安全性。     

三氧化二砷诱导人脑SHG-44胶质瘤细胞凋亡

目的观察三氧化二砷(As2O3)对SHG-44胶质瘤细胞增殖抑制的分子机制。方法在加入SHG-44胶质瘤细胞As2O348 h后,采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)方法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR及蛋白免疫印迹(WB)方法,检测BAX及Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平。结果As2O3对SHG-44胶质瘤细胞的抑制作用随着药物浓度的升高而增强;BAX mRNA及蛋白表达水平与对照组比无明显变化(P0.05),BAX mRNA及蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 As2O3通过促进细胞凋亡而抑制SHG-44胶质瘤细胞的增殖。     

氯化镧诱导脑胶质瘤SHG44细胞凋亡作用的机制

目的探讨氯化镧对人脑胶质瘤细胞株SHG44细胞诱导凋亡及其作用机制。方法体外培养人胶质瘤细胞，流式细胞仪、电镜检查细胞周期和超微结构的改变，原位杂交技术及免疫组化染色技术检测bcl-2、bax基因、蛋白表达情况。结果氯化镧能促进入脑胶质瘤SHG44细胞发生凋亡，明显增加G1期DNA含量，减少S期DNA含量。使bax基因、蛋白表达显著增强，bcl-2、bax基因蛋白表达显著减弱（P〈0．05）。结论氯化镧可抑制人脑胶质瘤SHG44细胞的生长，并促进其凋亡。     

蛋白酶体抑制剂Bortezomib对人脑胶质瘤增殖抑制及诱导凋亡作用

目的 探讨Bortezomib对体外SHG-44胶质瘤细胞株形态的影响及诱导凋亡作用.方法 Bortezomib体外处理培养的SHG-44胶质瘤细胞后,采用MTT法检测细胞增殖、HE染色光镜观察、Hochest33342染色荧光显微镜观察以及锇铀铅染色透射电镜观察胶质瘤细胞的形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期.结果 MTT显示Bortezomib抑制SHG-44胶质瘤的增殖与浓度和时间呈相关性;6.0 μmol/L Bortezomib处理SHG-44胶质瘤细胞24 h后,光镜、荧光显微镜、透射电镜下均可见凋亡形态学改变.流式细胞术分析细胞凋亡率为(20.31±2.84)% ( P＜0.01);细胞周期变化显示S期细胞减少到(17.65±6.38)% (P＜0.01),细胞周期被阻滞于G_0/G_1期和G_2/M期,分别为(68.51±5.62) % (P＜0.01)和(14.75±2.48)% (P＜0.01).结论 Bortezomib抑制C6胶质瘤细胞的增殖并诱导其凋亡.     

越桔原花青素对SHG-44脑胶质瘤细胞生长的作用

目的探讨越桔原花青素对体外培养的人胶质瘤细胞株SHG-44生长的影响。方法培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,加入5%基础培养液和越桔原花青素(浓度分别为5、10、20、40μg/L)含药血清培养24、48、72 h,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测药物作用后SHG-44细胞的生长情况。结果不同浓度的越桔原花青素均可以抑制SHG-44胶质瘤细胞的生长。10、20、40μg/L越桔原花青素浓度组在作用24、48、72 h时,细胞的生长均受到了明显的抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而5μg/L浓度越桔原花青素浓度组在作用细胞72 h时,细胞的生长亦明显受到抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论越桔原花青素可以抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞生长,为其开发为抗脑肿瘤新药提供初步理论依据。     

檞皮素抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的实验研究

目的探讨中草药檞皮素抑制人胶质瘤SHG-44细胞的增殖作用。方法运用MTT法检测檞皮素对SHG-44细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术分析檞皮素对SHG-44细胞增殖周期的影响。结果50～200μmol/L浓度的檞皮素均能抑制SHG-44细胞的生长,且呈明显的时间,剂量依赖性关系,细胞周期分析显示檞皮素组G1期细胞比例明显增多,呈量效关系。结论檞皮素抑制SHG-44细胞增殖,可能通过使SHG-44细胞停滞在G1期而诱导其凋亡。     

TNP-470对Wistar大鼠C6胶质瘤细胞抑制作用的体内实验研究

目的探讨TNP-470对Wistar大鼠C6胶质瘤细胞的抑制作用。方法培养C6细胞，建立动物荷瘤模型。荷瘤后将Wistar大鼠随机分为肿瘤对照组（0．9％氯化钠注射液30mg,／kg隔日1次，共6次皮下注射）、TNP-470组（TNP-47030mg,／kg隔日1次，共6次皮下注射）、顺铂组（顺铂5mg／kg每周2次，共4次腹腔内注射）、联合给药组（TNP-47015mg,／kg隔日皮下注射，共6次；同时顺铂2．5mg／kg腹腔内注射，每周2次，共4次），每组15只。观察不同的药物对肿瘤生长的影响。结果与对照组相比，TNP-470治疗组肿瘤重量及最大横径显著降低（P〈0．001）；TNP-470治疗组及联合给药组G0／G1期细胞数显著高于对照组（P〈0．01），而TNP-470治疗组G0／G1期细胞数明显高于联合治疗组（P〈0．01）；TNP-470治疗组、联合给药组及顺铂治疗组G2／M期、S期细胞数显著低于对照组（P〈0．01）。与肿瘤对照组相比，联合给药组和顺铂治疗组及TNP-70组胶质瘤细胞凋亡百分率显著升高（P〈0．01）TNP-470治疗组胶质瘤细胞凋亡百分率显著高于联合治疗组（P〈0．01）。结论TNP-470是一种对胶质瘤有明显疗效的化疗药物，可明显抑制肿瘤生长，使肿瘤重量减轻，同时对大鼠本身体重影响小，行为学症状改变出现较少，疗效明显优于顺铂。     

布鲁生诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的机制

目的 通过体外实验探讨布鲁生诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的作用机制.方法 取人胶质瘤细胞系SHG-44培养18h,按布鲁生作用的不同浓度分组.0.125、0.25、0.5、1.0、1.5 mmol/L,作用的不同时间分组:12、24、48 h,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)计算细胞抑制率;吖啶橙(A0)/溴乙啶(EB)染色及流式细胞术检测细胞凋亡的变化;使用Westem印迹观察细胞BCL-2、BAX和COX-2蛋白表达的变化.结果 (1)利用MTT比色分析法,发现SHG-44细胞分别用含不同浓度布鲁生溶液培养12、24、48 h后,细胞增殖受到明显的抑制,且与浓度和时间呈正相关;(2)流式细胞仪分析结果显示,布鲁生主要使SHG-44细胞集中在晚期凋亡;(3)Western印迹凝胶电泳显示,0.25、0.5、l mmol/L浓度处理组作用24 h后,剂量性地降低SHG44细胞中COX-2、BCL-2蛋白的表达,而升高BAX蛋白的表达.结论 布鲁生能明显抑制人胶质瘤SHG-44细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制了COX-2蛋白表达有关.     

五味子木脂素与顺铂抑制SHG-44神经球细胞的生长

目的研究五味子木脂素和顺铂对人脑胶质瘤SHG-44神经球细胞生长的作用。方法 MTT法分析检测五味子木脂素和顺铂对SHG-44神经球细胞生长的影响;ELISA法检测细胞培养上清中bcl-2及caspase 3蛋白的变化。结果 50、100、200 mg/L五味子木脂素作用24、48、72h,均能明显地抑制SHG-44神经球细胞的生长,作用呈浓度依赖性;10 mg/L顺铂作用后也可明显抑制神经球细胞的生长,作用呈时间依赖性。Elisa结果显示,药物作用后bcl-2蛋白水平明显下调,而caspase 3蛋白水平明显上调。结论五味子木脂素和顺铂都可以通过下调抗凋亡蛋白bcl-2的水平,进而抑制SHG-44神经球细胞的生长。     

TRAIL真核表达质粒诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)真核表达质粒对U251胶质瘤细胞凋亡的诱导作用。方法构建人TRAIL基因114-281胞外段肽链相应基因序列(504bp)的真核表达质粒;构建荷U251胶质瘤裸鼠模型,随机分组给药后,观察肿瘤生长情况,应用透射电镜技术,分析TRAIL真核表达质粒抗肿瘤作用。结果质粒组和质粒 化疗组肿瘤生长受到抑制。超微结构提示为凋亡改变。结论TRAIL真核表达质粒可以诱导U251胶质瘤细胞凋亡,与化疗药物联合应用后作用更明显。     

氯化甲基汞抗裸鼠皮下U251胶质瘤细胞的体内实验研究

目的 在建立裸鼠皮下U251胶质瘤模型基础上,通过体内实验及相关形态学研究,分析氯化甲基汞(MMC)的抗脑胶质瘤作用.方法 制备裸鼠皮下U251胶质瘤模型,随机分为对照组和实验组,实验组裸鼠注射U251脑胶质瘤细胞1 w后,每天灌胃给予10 mg/kg体重MMC,连续5 d,对照组给予相同体积的生理盐水.全部裸鼠于肿瘤接种后14 d处死.结果 大体病理显示实验组肿瘤体积明显小于对照组,病理组织学观察发现实验组U251胶质瘤细胞生长密度较对照组低,并可见细胞体积变小、核固缩等凋亡的形态学改变.透射电镜显示实验组肿瘤细胞发生核固缩、染色质周边化、核断裂、胞浆空泡变性等改变,实验组瘤体汞含量明显高于对照组.结论 MMC对裸鼠U251胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能是通过诱导胶质瘤细胞凋亡实现的,相关分子机制有待进一步深入研究.     

替莫唑胺耐药细胞系SHG-44/TR生物学特征及其耐药机制

目的探讨对替莫唑胺耐药的人胶质瘤细胞系SHG-44/TR的生物学特征及耐药机制。方法通过体外分阶段剂量递增诱导法使人脑胶质瘤细胞系SHG-44对替莫唑胺产生耐药性,建立耐药细胞系SHG-44/TR。采用细胞集落形成试验和噻唑蓝比色法检测SHG-44/TR增殖情况、耐药性及耐药指数;采用Western-blotting法检测耐药蛋白O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)及人类错配修复蛋白2(h MSH2)表达变化;流式细胞仪检测SHG-44/TR细胞周期变化。结果历时8个月成功建立了对替莫唑胺耐药的人胶质瘤细胞SHG-44/TR。与SHG-44比较,SHG-44/TR对替莫唑胺的耐受程度差异有统计学意义(P<0.05);SHG-44/TR没有细胞周期阻滞现象;SHG-44/TR较亲本细胞MGMT蛋白表达无变化,h MSH2表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论耐替莫唑胺胶质瘤细胞系SHG-44/TR h MSH2表达降低,其耐药机制可能为DNA错配修复缺失。     

整合素拮抗剂IS201对GL15胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的观察整合素拮抗剂IS201对体外培养的GL15脑胶质瘤细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法将体外培养的GL15脑胶质瘤细胞接种于多孔培养板中,分别加入不同浓度的整合素αvβ3拮抗剂IS201进行干预,采用MTT法、免疫细胞化学法评价IS201对体外培养的GL15脑胶质瘤细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术观察IS201对胶质瘤细胞凋亡的促进作用。结果 IS201对GL15胶质瘤细胞生长有明显的抑制作用,并能促进凋亡,且有量效关系。结论整合素拮抗剂IS201对胶质瘤细胞有明显抑制作用,应用整合素拮抗剂治疗脑胶质瘤前景广阔。     

小分子干扰RNA(siRNA)沉默CD147基因对脑胶质瘤细胞系SHG-44生长及凋亡的影响研究

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默CD147基因对脑胶质瘤细胞系SHG-44生长及凋亡的影响。方法根据CD147 cDNA序列设计具有短发夹结构的两条DNA序列,与载体pSilencer4.1-CMV neo构建重组表达载体,鉴定后转染至SHG-44细胞,western blotting检测抑制效果,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况。结构成功构建了针对CD147基因表达的干扰质粒,有效抑制了SHG-44细胞增殖,促进了SHG-44细胞凋亡。结论 CD147靶向RNA干扰重组表达载体为肝癌的基因治疗提供了可能。     

DAPT对人胶质瘤细胞系SHG-44增殖的抑制作用及机制

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对人脑胶质瘤细胞系SHG-44细胞体外增殖的抑制作用及机制.方法 应用不同浓度的DAPT作用SHG-44细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及CD133+的肿瘤干细胞(TSC)数量的变化;应用RT-PCR及Western印迹法检测Notch通路关键分子(Notch-1,Delta-1,Hes-1)基因及蛋白水平的表达.结果 DAPT作用SHG-44细胞后,明显抑制了细胞增殖(P＜0.05),且抑制作用呈剂量依赖性.细胞周期结果显示S期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加;CD133+的TSC数量明显减少.随着DAPT浓度的增加,Notch-1,Delta-1,Hes-1 mRNA及蛋白表达水平逐渐下降.结论 DAPT可以下调Notch通路中Notch-1、Delta-1、Hes-1的表达,减少TSC数量,抑制SHG-44细胞增殖.     

脑胶质瘤中IGF-Ⅰ的表达及与细胞增殖和凋亡的关系

胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF—Ⅰ)具有刺激细胞生长分化以及DNA合成和转录的能力,在细胞凋亡的调控中也起着重要的作用。现已发现许多肿瘤如肺癌、乳腺癌、肝癌、大肠癌等癌组织中可异常表达IGF—Ⅰ,而其在人脑胶质瘤中表达的研究甚少。本研究利用S—P免疫组织化学方法检测在人脑胶质瘤中IGF—Ⅰ、核增殖指标(Ki-67)和抑制凋亡蛋白(bcl-2)的表达,分析IGF—Ⅰ与脑胶质瘤病理分级、肿瘤细胞恶性增殖程度和细胞凋亡的关系,为利用IGF—Ⅰ基因治疗脑胶质瘤提供实验依据。     

声动力化学疗法对大鼠脑胶质瘤凋亡及相关基因表达的影响

目的 以大鼠颅内C6胶质瘤为实验模型,观察SDT组、单纯照射组、血卟啉单甲醚(HMME)组、对照组脑胶质瘤组织学变化、原位凋亡检测、Cyt-C和Caspase-3蛋白表达水平.结果 SDT组随着时间的延长,肿瘤组织坏死逐渐增加,24 h达到高峰;单纯照射组可见肿瘤组织坏死较SDT组明显少;对照组及HMME组标本各时间段胶质瘤细胞均未见坏死组织.原位凋亡检查见HMME组和对照组凋亡细胞极少,各时间点凋亡率无明显差别.处理后24 h,单纯照射组凋亡率明显高于HMME组和对照组(P＜0.01);处理后3、7 d,凋亡率与HMME组和对照组无明显差别.SDT组处理后24 h,凋亡率明显高于其他3组(P＜0.01).处理后3、7 d,凋亡率与其他3组无明显差别.HMME组和对照组各时间点Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率无明显差别.单纯照射组Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率高于HMME组和对照组(P＜0.01);处理3、7 d后Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率与HMME组和对照组无明显差别.SDT组处理后24 h,Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率明显高于其他3组(P＜0.01).处理后3、7 d,Cyt-C和Caspase-3蛋白表达表达率与其他3组无明显差别.结论 SDT对大鼠脑胶质瘤有明显的抑制效应,早期可能通过损伤线粒体后,释放Cyto-C,激活Caspase-3而直接启动胶质瘤细胞本身凋亡程序.