家系感染乙型肝炎病毒基因变异与HLA-Ⅱ类等位基因的关系

目的研究家系内慢性乙型肝炎病毒基因变异特征及与HLA-II类分子基因多态性的关系。方法采用PCR扩增和产物测序检测HBV前C区1896位及BCP区1762/1764位变异,分析家系内慢性HBV感染者121例（实验组）病毒变异特征及与非家系慢性乙肝患者83例（对照组）病毒变异频率差异;用PCR/SSP对家系内慢性HBV感染者的HLA-DQA1和DQB1等位基因多态性进行测定;分析HLA-II类分子基因多态性与家系内慢性乙型肝炎病毒基因变异的关系。结果实验组前C区1896位变异、BCP区1762/1764位双变异及联合变异率均高于对照组;HLA-DQA1＊0501和DQB1＊0301等位基因频率和家系慢性HBV感染者前C区1896位、BCP区1762/1764位及联合变异有关;母亲为第一代的感染家系中,子女的前C区1896位及BCP区1762/1764位变异与母亲是否有该位点变异差异无显著性。结论家系感染HBV患者中,HBV前C区1896位、BCP区1762/1764位双突变及联合变异频率明显高于无家系感染的慢性乙型肝炎患者;家系内感染HBV前C区1896位、BCP区1762和1764位变异并非都是由上一代遗传或传播而来,而主要是与个体的免疫状况有关。     

慢性乙型肝炎病毒感染者病毒前C区和基本核心启动子区变异检测及意义

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）前C区和基本核心启动子（BCP）区变异与基因型及疾病进展间的关系。方法 收集HBV携带者（ASC）、慢性乙型肝炎（CHB）、肝炎肝硬化（LC）、肝细胞肝癌（HCC）患者血清148份，用半巢式聚合酶链反应扩增HBV前C／C基因部分片段，产物纯化后直接测序，检测前C区A1896及BCP区T1762／A1764变异。用S基因聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）方法确定HBV基因型。结果 有128份血清能够成功分型和测序，其中B基因型60份，C基因型68份。在B基因型感染者中前C区A1896变异检出率（48．33％）明显高于C基因型感染者（29．41％，X^2=4．83，P〈0．05）；而BCP区T1762／A1764变异检出率却明显低于C基因型感染者，差异亦有统计学意义（30．00％：73．54%，X^2=24．25。P〈0．05）。前C区A1896变异在CHB、LC、HCC中的阳性检出率分别为46．88％（15/32）、39．39％（13／33）、51．52％（17／33）。与ASC的13．33％（4／30）相比，P分别〈0．05，差异有统计学意义。BCP区T1762／A1764变异检出率在HCC、LC组分别为87．88％（29／33）和72．73％（24／33）．明显高于CHB组的37．50％（12／32）及ASC组10.00％（3／30）（P〈0．05）。结论 前C区A1896变异常见于B基因型感染者，而BCP区T1762/A1764变异C基因型感染者多见。除ASC外．前C区A1896变异与疾病进展关系不大．而BCP区T1762/A1764变异与乙型肝炎进展及顶后相关。     

HBV前-C区和BCP区变异与肝细胞癌的相关性分析

目的探讨HBV前-C区G1896A和BCP区A1762T/G1764A变异与肝细胞癌(HCC)的关系及其可能的机制。方法选择于青岛市传染病医院住院的HBV DNA104拷贝/ml的慢性HBV感染者82例,其中慢性乙型肝炎(CHB)29例,乙型肝炎肝硬化(LC)27例,HBV相关肝细胞癌(HCC)26例,采用实时荧光PCR法检测其HBV前-C区1896位变异和BCP区1762/1764位变异,并采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 HCC组和LC组前-C区G1896A和BCP区A1762T/G1764A变异率、血清TNF-α水平均显著高于CHB组,但HCC组和LC组间无显著差异。前-C区G1896A和BCP区A1762T/G1764A变异者血清TNF-α水平均显著高于非变异组。结论 HBV前-C区G1896A和BCP区A1762T/G1764A变异与HCC形成有关,机制是否与HBV变异和TNF-α水平间的因果关系相关,有待进一步研究。     

慢性乙型肝炎前C区G1896A基因变异对HBV复制及疾病严重程度的影响

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)前C区G1896A变异对乙型肝炎病毒复制及疾病严重程度的影响。方法选取43例慢性乙型肝炎及49例乙型肝炎肝硬化患者为研究对象。采用PCR技术检测HBV前C区G1896A位点变异及乙型肝炎基因分型。同时检测HBeAg、HBV DNA定量、肝功能血清生化指标。结果(1)发生HBV前C区G1896A变异患者的年龄大于野生株感染者(P0.01),发生肝硬化的可能性更大(P0.01)。(2)随着变异株感染率的增加,HBeAg阴性率较野生株组增加(P0.01),基因C型较野生株组增加(P0.05),HBV DNA水平降低差异意义(P0.05)。结论 HBV前C区G1896A变异与HBeAg的状态,HBV DNA的复制及疾病严重程度相关。     

三种基因亚型乙型肝炎病毒感染者的临床资料与病毒学指标差异分析

目的 调查HBV Ba、C1和C2三种基因亚型在临床致病性方面的差异,同时检测并分析三种基因亚型毒株在前C和C基因启动子区发生变异的模式.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法对来自广东地区151例慢性HBV感染者血清进行HBV基因亚型分析,同时测定所有标本前C及C基因启动子区的序列.结果 151份样本中Ba亚型占53.0%(80/151),C1亚型占33.8%(51/151),C2亚型占13.2%(20/151).三种亚型的患者在年龄和性别构成比无差异的情况下,其HBeAg阳性率以及多项肝功能指标差异均无统计学意义,但在前C及C基因启动子区的变异模式上存在明显差异:Ba亚型易发生A1896终止密码变异,T1762/A1764变异的发生概率较低;C1亚型易发生T1762/A1764变异,A1896变异发生概率较低;C2亚型发生T1762/A1764和A1896变异的概率介于Ba和C1亚型之间.结论 三种HBV基因亚型毒株可能采取不同的变异模式形成HBeAg阴性HBV感染.     

新疆维吾尔族慢性乙型肝炎病毒感染者病毒基因型及亚型分布特点

目的 了解新疆维吾尔自治区(简称新疆)维吾尔族慢性HBV感染者基因型、基因亚型分布情况及其与预后的关系.方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法,分析109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者感染病毒的基因型及基因亚型.多标本均数比较采用单向方差分析.结果 109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者,其中慢性乙型肝炎88例,乙型肝炎肝硬化17例,肝癌4例.13基因型HBV感染者9例,占8.3%,C基因型感染者50例,占45.9%,C/D基因型重组体32例,占29.4%,D基因型感染者18例,占16.5%,C基因型、C/D基因型重组体为主要基因型.经过聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析及测序检测,鉴定9份B基因型HBV,均为Ba亚型.50例C基因型HBV感染者病毒基因亚型分布情况:Cl亚型27例,占54%,C2亚型23例,Cl亚型比C2亚型感染者多.在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝癌患者中,HBV Ba基因亚型感染者分别为8例(9.1%)、1例(5.8%)和0例;C2基因亚型感染者分别为17例(19.3%)、8例(47.5%)和2例(50%);C/D基因型感染者分别为29例(33.0%)、2例(11.9%)和1例(25%),随着病情加重,Ba基因亚型和C/D基因型感染者所占比例呈下降趋势,C2基因亚型感染者所占比例增加.结论 新疆地区维吾尔族慢性HBV感染者以Cl基因亚型为主,新疆维吾尔族慢性HBV感染者存在C/D基因型重组体.C2基因亚型HBV感染预示病情严重,预后差.     

慢性乙型肝炎患者HBV前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异与乙型肝炎自然史、血清HBsAg定量及疾病程度的相关性

目的研究HBV前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异与HBV自然史、血清HBsAg水平间的相关性及对疾病严重程度的影响。方法分别各选取40例HBV野生株、前C区G1896A或核心启动子1762/1764变异以及两者联合变异的慢性乙型肝炎感染者为研究对象。采用PCR反向点杂交技术检测HBV前C区G1896A位点、核心启动子1762/1764变异及HBV基因分型。同时检测HBsAg定量、HBeAg、HBV DNA定量、肝脏生化指标等。结果(1)HBV前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异患者的年龄、ALT高于野生株感染者(P0.001),Alb低于野生株感染者(P0.001)。(2)HBV自然史免疫耐受期以野生株感染为主(P0.001),免疫清除期、低(非)复制期野生株及PC G1896A或/和BCP1762/1764变异株差异无统计学意义(P0.05),再活动期以PC G1896A或/和BCP1762/1764变异株为主(P0.001)。(3)PC G1896A或/和BCP1762/1764变异株的HBsAg水平(lgIu/mL)、HBeAg阳性率较野生株组降低(P0.001),基因C型、HBV DNA水平(≥6 lg拷贝/mL)较野生株组差异无统计学意义(P0.05)。(4)HBV PC G1896A或/和BCP1762/1764变异中肝硬化患者多于野生株(P0.05)。结论慢性HBV感染者前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异与乙型肝炎自然史、HBsAg水平、HBeAg的状态及疾病严重程度相关。     

慢性HBV感染者HBV前C区/基本核心启动子区基因突变与临床应用

目的:探讨2010年10月至2013年6月来我院门诊及住院慢性HBV感染者中HBV前C(Pre C)区/基本核心启动子(BCP)区基因突变与其病程进展的相关性。方法:165例慢性HBV感染者血清生化指标检测,血清HBV DNA含量和HBe Ag定性检测,HBV Pre C区/BCP区突变率比较,分析Pre C区l896、BCP区1762/1764变异在HBV携带者(As C)、慢性乙型肝炎(CHB)和慢性乙型肝炎肝硬化(CHB-LC)患者中的分布。结果:血清生化指标在慢性HBV感染者病程发展中呈现相关性。与As C组比较:CHB组、CHB-LC组患者血清ALT、AST、AFP、TBA水平升高,差异有显著性意义(p0.01),呈显著正相关,而TP、Alb、A/G水平降低,差异有显著性意义(p0.05),呈负相关。HBe Ag(+)、HBe Ag(-)的标本中,BCP的突变率高于前C区突变率,差异有非常显著性意义。BCP区1762/1764双突变的突变率高于Pre C1896突变率。As C、CHB、CHB-LC 3组患者Pre C A1896、BCP区1762/1764变异率依次升高,与As C组比较,CHB组差异有显著性意义(P0.05);CHB-LC组差异有非常显著性意义(P0.01)。结论:对165例慢性HBV感染者观察,HBe Ag(+)/HBe Ag(-)患者及其病程不同发展阶段,Pre C/BCP出现相关联的突变率。特别需要注意的是HBe Ag(-)的慢性HBV感染者BCP区的突变率高于Pre C区的突变率,需要慎防HBV复制的危害性。HBV Pre C区/BCP区突变率可以预测到慢性HBV感染者病情的发展程度,对临床此类患者的研究具有重要意义。     

慢性HBV感染前C区变异与病毒复制水平关系

探讨HBV前C基因变异与病毒复制水平的关系在慢性HBV感染者中的意义。应用错配聚合酶链反应（PCR）－限制性片段长度多态性（RFLP）分析与荧光定量聚合酶链反应检测HBVDNA相结合,对30例HBsAg（＋）、抗－HBe( )及抗－HBc( )慢性HBV感染者,其中无症状携带者（AsC)9例、慢性乙型肝炎（CHB）12例及慢性重症肝炎（CHF）9例进行前C区基因变异与HBVDNA水平关系进行分析。AsC组3例（33．33％）,CHB组9例（75％）及CHF组8例（88．89％）有A83(nt1896)变异。荧光定量PCR结果表明HBVDNA含量在CHF组中最高。HBV前C变异与HBV不同感染状态中都可见,其病毒复制水平与肝病活动相关。     

拉米夫定治疗无良好应答患者乙型肝炎病毒P区突变与基因型的关系

目的 观察拉米夫定治疗后无良好应答的慢性乙型肝炎患者HBV P区变异情况与基因型的关系.方法 对631例拉米夫定治疗后无良好应答的慢性乙型肝炎患者进行研究.通过荧光定量PCR或核酸测序确定HBV基因型,直接测序观察P区突变,实时荧光定量PCR方法检测患者病毒载量,比较不同基因型患者的HBV DNA水平及HBV P区变异情况.计量资料采用成组设计资料t检验,计数资料采用x~2检验或Fisher精确检验.结果 631例慢性乙型肝炎患者中,B基因型HBV感染者272例,C基因型感染者359例,C基因型感染者患者年龄为(39.1±11.4)岁,明显大于B基因型感染患者的(33.7±9.7)岁(t=-6.55,P<0.01).C基因患者病毒载量为(5.96±1.22)log_(10)拷贝/ml,高于B基因型患者的(5.58±1.21)log_(10)拷贝/ml,t=-2.01,P<0.05.A181V/T变异在C基因型的发生率高于B基因型(0.4%比5.3%,χ~2=12.23,P<0.01),M204I/V,L180M、T184A/G/I/S、S202G/I和V173L变异发生率在B、C基因型之间差异无统计学意义(P值均>0.05).M204I在B基因型的发生率为20.6%,高于C基因型的13.9%(χ~2=4.91,P<0.05);M204V和M201Ⅳ变异在B、C基因型中的发生率差异无统计学意义(χ~2值分别为1.70和2.21,P值均>0.05).拉米夫定耐药发生率在B、C基因型间差异无统计学意义(χ~2=0.00,P>0.05).结论 拉米夫定常见耐药位点在B、C基因型之间无明显差异,但是C基因HBV感染患者病毒载量高于B基因型HBV感染患者;M204I变异在B基因型中出现频率高于C基因型,拉米夫定加用或改用阿德福韦酯后可能会使A181V/T变异在C基因型出现的概率高于B基因型;年龄、免疫因素和非常见位点的变异或许是影响拉米夫定疗效的重要因素.     

土拨鼠肝炎病毒和乙型肝炎病毒的核心蛋白存在共同线性B淋巴细胞表位

目的寻找并证实土拨鼠肝炎病毒核心抗原（WHcAg）和HBcAg存在共同的B淋巴细胞表位。方法用变性重组WHcAg和HBcAg免疫Balb/c小鼠以制备单克隆抗体；用单克隆抗体对WHcAg和HBcAg进行ELISA、Western blot及免疫组织化学对比分析,同时用该抗体对WHcAg和HBcAg进行表位分析,并在氨基酸水平进行比对。结果经过ELISA、Western blot、免疫组织化学对比分析,制备的单克隆抗体中有2株与HBcAg和WHcAg有交叉反应,而且灵敏度和特异性相似；针对的抗原表位分别位于HBcAg和WHcAg的1～8位氨基酸和125～140位氨基酸。结论WHcAg和HBcAg存在2个共同的线性B淋巴细胞表位,分别位于1～8位和125～140位氨基酸。     

Nucleosome core particles suppress the thermal untwisting of core DNA and adjacent linker DNA.

Covalently closed circular DNA is known to undergo a temperature-dependent change in helical twist. We have reconstituted nucleosome core particles onto closed circular DNA and measured the thermal untwisting of the DNA as a function of nucleosome density. The results demonstrate that the DNA associated with the nucleosome core particle does not alter its twist when the temperature is varied between 4 degrees C and 37 degrees C, and that the length of DNA prevented from thermal untwisting includes the linker as well as the core DNA.