双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应的影响

目的 观察双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应后核因子(NF)-κB DNA结合活性、细胞胞质核因子抑制蛋白κB(IκB)、细胞胞核NF-κB p65的表达和肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-8等细胞因子表达的影响.方法 经培养的肠上皮Lovo细胞分为5组,分别经LPS( 100 ng/ml)、H2O2( 200 μmol/L)直接刺激3h以及经双歧杆菌分泌型粘附素(30 μg/ml)预孵30 min后再予LPS( 100 ng/ml)、H2O2刺激(200 μmol/L)刺激3h,正常对照组未作任何处理.采用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)方法检测NF-κB DNA结合活性;Western印迹法分别检测细胞胞质IκB和细胞胞核NF-κBp65的表达;RT- PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达情况.结果LPS和H2O2刺激后,细胞表现出较高的NF-κB DNA结合活性[分别为正常对照组的(6.20±0.35)倍和(4.16±0.52)倍]和细胞胞核NF-κB p65的表达[分别为(0.64±0.05)和(0.67±0.06)],而细胞胞质IxB的表达则较弱[分别为(0.28±0.10)和(0.39±0.12)];以双歧杆菌分泌型粘附素预孵后,前二者活性明显降低,而后者的表达明显增强;LPS和H2O2处理后,TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达水平均明显增高[LPS处理组分别为(0.92±0.10)、(0.38±0.03)、(1.44±0.25),H2O2处理组分别为(0.89±0.13)、(0.36±0.06)、(1.42±0.18)],而粘附素预孵后则可显著降低它们的表达水平.NF-κB DNA结合活性与TNF-α、IL-1β、IL-8三种细胞因子的mRNA表达水平均呈显著正相关.结论 双歧杆菌分泌型粘附素对LPS和H2O2诱导的肠上皮细胞NF-κB DNA结合活性有显著抑制作用,NF-κB的活化可能与TNF-α、IL-1β和IL-8等炎性细胞因子的表达调控有关.     

慢性乙型重型肝炎患者外周血树突状细胞核因子-κB及其激活因子的表达及意义

目的 探讨慢性乙型重型肝炎(CSHB)患者外周血单个核细胞衍生的树突状细胞核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-6与疾病严重程度及预后的相关性.方法 采集37例CSHB患者、20例慢性乙型肝炎(CHB)患者和20例健康对照者的外周血,分为CSHB组、CHB组与对照组并分别用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,用免疫磁珠细胞分选法获得纯化的单核细胞,体外培养6 d为未成熟的树突状细胞,用聚肌胞刺激48 h为成熟的树突状细胞(mDC).用实时定量PCR检测mDC NF-κB p50表达;用酶联免疫吸附试验测定培养mDC上清液中TNF α、IL-6的分泌水平.两组间比较采用t检验,3组间比较采用One-Way ANOVA分析法,相关分析采用直线相关分析法.结果 3组研究对象mDC表达NF-κB p50,表达量CSHB组为2.63±0.94、CHB组为2.03±0.39、对照组为1.41±0.40,3组比较,F=19.01,P<0.01,差异有统计学意义.mDC分泌TNF α,CSHB组、CHB组、对照组分别为(15 317.69±4124.90)pg/ml、(9670.29±3654.68)pg/ml、(6547.43±1027.20)pg/ml,3组比较,F=45.77,P<0.01,差异有统计学意义; IL-6分泌量分别为(1423.78±375.14)pg/ml、(862.68±93.68)pg/ml、(567.26±167.04)pg/ml,3组比较,F=67.60,P<0.01,差异有统计学意义.3组研究对象mDCNF-κB p50表达与TNF α、IL-6水平呈正相关(r=0.52,P<0.01;r=0.65,P<0.01).CSHB组mDC表达TNF α、IL-6与凝血酶原活动度呈负相关(r=-0.41,P=0.01;r=-0.40,P=0.01),与ALT、总胆红素、HBV DNA无相关性(r=-0.03,P=0.85,r=0.01,P=0.93,r=0.01,P=0.95;r=-0.09,P=0.58,r=0.16,P=0.34,r=0.09,P=0.59).CSHB 存活组与死亡组mDC表达TNF α、IL-6差异无统计学意义(t=0.42,P=0.67;t=0.76,P=0.45).结论 CSHB患者树突状细胞衍生的NF-κB及其激活产物TNF α、IL-6表达增加,可能与CSHB疾病严重程度相关.     

肠内免疫微生态营养对急性坏死性胰腺炎全身炎症反应影响的研究

目的 探讨肠内免疫微生态营养对ANP猪全身炎症反应的影响.方法 胰管注射5%牛磺胆酸钠1ml/kg体重制备猪ANP模型.造模后24 h,18头猪按随机分组法分为胃肠外营养组(PN)、肠内要素营养组(EN)和肠内免疫微生态营养组(EIN),分别进行相应的营养支持8 d.造模前、造模后24 h、营养支持1 d、2 d、4 d、8 d分别检测外周血内毒素、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10及单核细胞NF-κB活性.8 d时取胰腺行病理学检查.结果 胰腺病理改变符合ANP.造模后24 h,EIN组外周血内毒素、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和单核细胞NF-κB水平分别为(1.85±0.18)EU/L、(461.59±128.25)pg/ml、(185.49±58.81)pg/ml、(354.26±34.63)pg/ml、(110.32±25.18)pg/ml、(51.06 ±2.27)%,均较造模前明显增高(P＜0.01),但与其他两组无显著差异;营养支持8 d后,EIN组血浆上述各项分别为(1.48±0.16)EU/L、(30.11±9.12)pg/ml、(20.17±7.04)pg/ml、(36.42±7.24)pg/ml、(89.46±13.54)pg/ml、(9.06±0.17)%,均较EN组、PN组明显下降(P＜0.05),且IL-10/IL-6比值为2.51±0.42,与制模前的2.28±0.19接近.结论 早期肠内免疫微生态营养能有效减轻内毒素血症,降低NF-κB活性及细胞因子浓度,维持促抗炎反应平衡.     

活化胆碱能抗炎通路对非酒精性脂肪性肝炎炎症反应的抑制作用及其机制

目的 探讨活化胆碱能抗炎通路对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)炎症反应的抑制作用及其机制. 方法 建立高脂高糖饮食诱导的NASH小鼠模型,在正常小鼠和NASH小鼠给予烟碱活化胆碱能抗炎通路,通过肝脏病理切片和细胞因子水平观察肝脏炎症情况;体外培养肝脏巨噬细胞系Raw264.7细胞,给予脂多糖处理后加入不同浓度的烟碱,观察细胞上清液中细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)α的水平,通过Western blot观察烟碱对信号通路NF-κB和IκB的影响.多组间比较采用单因素方差分析. 结果 通过肝脏病理检查和肝功能生物化学指标检测确定造模成功.NASH小鼠给予烟碱激活胆碱能抗炎通路后,肝组织炎症程度下降;血清中TNFα水平,烟碱治疗组[(21.95±0.8)pg/ml]较等渗盐水组[(38.07±1.7) pg/ml]显著下降(P＜0.05).Raw264.7细胞给予脂多糖处理后加入不同浓度的烟碱后检测上清液中TNFα水平,发现加入5 mmol/L以上浓度烟碱后能明显降低脂多糖引起的TNFα增高(P＜0.05).内毒素刺激后RAw264.7细胞内p-NF-κB水平增加,I-κB水平降低,表明NF-κB通路激活,不同剂量的烟碱能明显下调p-NF-κB水平,升高I-κB水平,并表现出剂量依赖. 结论 活化胆碱能抗炎通路对NASH炎症反应有抑制作用,其作用机制可能为通过NF-κB信号通路抑制炎症反应.     

NBD多肽对大鼠急性坏死性胰腺炎的影响

(76±6.7)ng/L、(387±67)ng/L、8.71±0.45、(49.26±2.15)%;多肽预处理后血清TNF-α和IL-6水平、胰腺病理分值、NF-κB p65蛋白阳性表达率分别为(48±4.5)ng/L、(295±48)ng/L、6.76±0.26、(37.46±1.68)%,两组相差均非常显著(P＜0.05).结论 NBD多肽预处理可抑制ANP大鼠胰腺组织NF-κB的过度活化,下调炎症因子TNF-α、IL-6的表达,减轻胰腺损伤.     

IL-33通过调节NF-κB信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移

目的 探讨IL-33通过对NF-κB信号通路及炎症因子的调控,对肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响。方法 RT-PCR检测IL-33在不同肝癌细胞系中的表达,Western Blot检测IL-33对HepG2细胞NF-κB信号通路激活相关蛋白(NF-κB、p-NF-κB、IKB、p-IKB)的调控,ELISA检测IL-33对HepG2细胞中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18等炎症因子释放的调控,EdU增殖实验检测IL-33对HepG2细胞增殖的影响,CCK8实验检测IL-33对HepG2细胞24 h和48 h活力的影响,Transwell小室实验和划痕实验检测IL-33对HepG2细胞迁移的影响。结果 IL-33 mRNA表达分别为LO2(1.01±0.01)、MHCC97H(1.08±0.05)、LM3(1.76±0.21)、HepG2(3.88±0.35)、SMCC7721(2.24±0.43)和Hep3B(2.13±0.30),差异有统计学意义(F=19.621,P=0.001)。IL-33处理24 h组中IL-1α(3185.25±194.67)、IL-1β(2103...     

八面蒙脱石联合莫沙必利灌胃对急性坏死性胰腺炎大鼠回肠NF-κB活化的影响

目的 探讨八面蒙脱石对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠回肠黏膜NF-κB活化的影响.方法 120只雄性SD大鼠按完全随机法分为假手术组、ANP组、莫沙必利组、八面蒙脱石组和莫沙比利+八面蒙脱石(联合)组,每组24只大鼠.采用胰胆管内逆行注射牛磺胆酸钠诱导大鼠ANP模型;假手术组开腹注射生理盐水后关腹.各治疗组于造模前30 min分别给予相应药物灌胃1次.术后3、6、12 h分批处死动物.取胰腺组织行病理检查;取血测定TNF-a、IL-1水平;取回肠观察超微结构的改变;免疫组化法检测回肠黏膜NF-κB的表达;Western blotting法检测回肠组织IκBa水平.结果 与假手术组比较,ANP组胰腺损伤明显,血TNF-a、IL-1水平明显升高[(36.79±1.14)pg/ml对(9.00±0.01)pg/ml,(25.17±1.93)ng/ml对(3.45±0.11)ng/ml,P值均＜0.05],回肠绒毛高度显著下降[(0.25±0.22)×10~(-6)m对(1.50±0.33)×10~(-6)m,P＜0.05],柱状细胞指数显著降低[(2.40±1.65)×10~6个/m对(13.5±4.28)×10~6个/m,P＜0.05],NF-κB表达增加(6.92±1.54对1.28±0.29,P＜0.05),IκBa蛋白水平下降(3.30±1.99对24.32±1.93).莫沙必利组和八面蒙脱石组的各项指标与ANP组均无显著差异.联合组的血TNF-a、IL-1水平[(30.57±0.39)pg/ml和(13.45±1.26)ng/ml]、回肠绒毛高度和柱状细胞指数[(1.05±0.28)×10~(-6)m和(10.10±2.50)×10~6个/m]、NF-κB活化(4.32±1.57)和IκBa蛋白水平(15.99±1.26)均与ANP组有统计学差异(P值均＜0.05).结论 八面蒙脱石联合莫沙必利灌胃能减少ANP大鼠回肠黏膜NF-κB的大量激活,减轻胰腺和回肠黏膜的损伤程度.     

咯利普兰对类风湿关节炎合并间质性肺疾病患者外周血单个核细胞核因子-κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素-8表达的影响

目的 探讨选择性磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂对类风湿关节炎(RA)合并间质性肺疾病(ILD)患者外周血单个核细胞(PBMC)体外产生促炎性细胞因子的影响及机制,为选择性PDE4抑制剂治疗RA合并ILD提供理论依据.方法 采集15例健康志愿者(健康对照组)和20例初治活动期RA合并ILD患者(RA合并ILD组)的PBMC.RA合并ILD组PBMC分为空白对照组、茶碱组、咯利普兰组和地塞米松组,免疫细胞化学法检测PBMC核因子-κB (NF-κB) p65阳性细胞百分率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测PBMC培养上清中肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-8(IL-8)水平.结果 (1)健康对照组、RA合并ILD组中咯利普兰组、地塞米松组PBMC培养上清中TNFα、IL-8水平和NF-κB p65阳性细胞百分率低于空白对照组(P＜0.01),咯利普兰组、地塞米松组低于茶碱组(P＜0.01);地塞米松组IL-8水平低于咯利普兰组(P＜0.05).(2)相关性分析:RA合并ILD组PBMC培养上清中NF-κB p65阳性细胞百分率与TNFα、IL-8水平呈正相关(r值分别为0.902、0.735,P＜0.01).咯利普兰组NF-κBp65阳性细胞百分率与TNFα、IL-8水平呈正相关(r=0.874,P＜0.01;r =0.561,P ＜0.05).结论 RA合并ILD患者PBMC NF-κB活化并产生促炎性细胞因子,参与了RA合并ILD的发病过程;选择性PDE4抑制剂可能通过抑制NF-κB活性抑制PBMC产生促炎性细胞因子,从而抑制RA合并ILD的炎症反应.     

Toll样受体-2、核因子-κB在Aβ诱导的阿尔茨海默病中的作用

目的探讨Toll样受体2(TLR-2)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β与β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法将雄性Wistar大鼠50只,随机分为A、B、C、D、E组,每组10只;A组大鼠双侧海马CA1区注射5μl生理盐水,B~E组双侧海马注射5μl Aβ(分别含Aβ25~350.5、1、5、10μg);ELISA检测TNF-α、IL-1β含量;免疫组化(IHC)检测海马CA1区TLR-2表达;实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测TLR-2、NF-κB基因的mRNA表达。结果 IHC检测TLR-2主要聚集在Aβ斑块周围,D组(0.036 6±0.007 3)、E组(0.044 8±0.010 8)TLR-2阳性表达明显高于A组(0.018 7±0.005 8)、B组(0.010 0±0.003 4)、C组(0.015 1±0.006 0)(P0.01);ELISA检测大鼠血清TNF-α含量D组(568.65±44.66)pg/ml、E组(685.06±29.92)pg/ml明显高于A组(426.87±55.91)pg/ml、B组(432.99±28.09)pg/ml、C组(488.14±39.04)pg/ml(P0.01),IL-1β含量D(104.60±9.32)pg/ml、E组(143.38±17.09)pg/ml明显高于A(49.13±8.46)pg/ml、B(60.89±14.71)pg/ml、C(79.81±9.94)pg/ml三组(P0.01);qRT-PCR检测大鼠海马组织内TLR-2 mRNA表达D组(2.185 9±0.381 4)、E组(2.977 7±0.390 7)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.178 5±0.106 6)、C组(1.463 3±0.127 3)(P0.01);NF-κB mRNA表达D组(1.747 0±0.125 6)、E组(2.271 9±0.533 2)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.274 3±0.165 1)、C组(1.429 1±0.077 7)(P0.01)。结论随着Aβ剂量不断增加,TLR-2促进小胶质细胞吞噬和清除Aβ的能力不足使Aβ积聚体并激活NF-κB,促进更多的TNF-α、IL-1β释放,最终导致大鼠脑内神经元损伤。     

变异IκBα抑制肝癌细胞株SMMC-7721中NF-κB活性及细胞生长

目的 了解变异IκBα(mIκBα)转染到肝癌细胞株SMMC-7721细胞中是否抑制NF-κB向核内转位活性及细胞的生长。 方法 电泳迁移率分析检测32p标记的寡核苷酸探针与NF-κB结合情况,westernblot检测核内NF-κB表达情况,细胞生长曲线分析和细胞增殖实验分析肝癌细胞生长情况。 结果 转染mIκBα质粒肝癌细胞在0、24、48、96 h未见核内蛋白与κ B探针结合转染,而转染对照PcDNA3质粒肝癌细胞始终可见核内蛋白与κB探针强结合;Western blot结果也显示0、24、48、96 h未见核内NF-κB表达,而对照PcDNA3质粒核内NF-κB高水平表达。细胞增殖实验分析发现转染mIκBα质粒肝癌细胞生长受到抑制,而转染对照PcDNA3质粒肝癌细胞生长未受影响,第2天开始转染mIκBα质粒肝癌细胞与其它两种细胞比较差异有非常显著性,增殖效率值分别是5 092.63±541.41、7 851.87±72.76、8 240.88±603.26,t值分别是14.29、10.99,P<0.01。 结论 转染mIκBα质粒肝癌细胞可以持续表达mIκBα,抑制NF-κB向核内转位,从而抑制肿瘤细胞的生长。     

CD137信号通过核因子κB影响小鼠主动脉平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达

目的 探讨CD137信号是否通过核因子-κB(NF-κB)调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)表达.方法 采用组织块贴壁法对正常C57BL/6J小鼠的VSMC进行原代培养.以每孔2×105个VSMC接种于6孔板中培养,待其贴壁后,饥饿24 h,用含10％ FBS+肿瘤坏死因子(TNF-α,终浓度10 ng/ml)的DMEM培养基分别培养细胞0、4、8、12、24、36、48 h后,收获细胞用于CD137 mRNA和蛋白的检测,选取CD137表达最多的时间点进行下一步实验.细胞实验分为3组,即对照组[含10％ FBS、TNF-α(终浓度10 ng/ml)、DMEM培养基共同干预]、刺激组[对照组干预基础上加CD137 mAb激动剂(终浓度10 μg/ml)]和抑制组[对照组干预基础上加PDTC(终浓度30 μmol/L),然后加CD137 mAb激动剂(终浓度10 μg/ml)].加入不同干预因素后继续培养,分别于90 min时收集核内外磷酸化(p)-NF-κB p65、核因子κB抑制蛋白(IKB-α),24 h收集细胞总RNA和NFATc1蛋白备检.逆转录定量聚合酶链反应检测CD137和NFATc1 mRNA表达水平.流式细胞术检测CD137膜蛋白表达水平.蛋白印迹法检测IκB-α、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平.结果 (1)TNF-α诱导VSMC表达CD137的结果:TNF-α刺激VSMC 4、8、12、24、36、48 h后,细胞CD137 mRNA表达均上调.RT-PCR结果示,以24 h组CD137 mRNA升高最为显著,以未刺激(即0h)组的细胞为对照进行比较,差异有统计学意义(40.00±2.83比1,P＜0.05).流式细胞术检测亦显示24 h组CD137膜蛋白升高最为显著.(2)各组VSMC中p-NF-κB p65蛋白表达水平的检测结果:刺激组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平高于对照组(8.34±0.28比1,P＜0.05),而IkB-α蛋白表达水平低于对照组(1比2.70±0.28,P＜0.05).抑制组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平低于刺激组(1.15 ±0.14比8.34±0.28,P＜0.05),而IkB-α蛋白表达水平则高于刺激组(1.78±0.74比1,P＜0.05).刺激组VMSC细胞核内p-NF-KB p65蛋白表达水平高于对照组(2.64±0.42比1,P＜0.05),而抑制组表达水平则低于刺激组(2.09±0.12比2.64±0.42,P＜0.05).(3)各组VSMC中NFATc1 mRNA和蛋白表达水平的检测结果:干预24 h后,刺激组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平高于对照组(2.07±0.09比1,P＜0.05),NFATc1蛋白表达水平亦高于对照组(1.75±0.07比1,P＜0.05).而抑制组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平低于刺激组(1.15±0.07比2.07±0.09,P＜0.05),蛋白表达水平亦低于刺激组(0.90±0.11比1.75±0.07,P＜0.05).结论 CD137信号通过NF-κB p65影响小鼠VSMC中NFATc1的表达.     

血脂康胶囊对LPS诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响

目的探讨血脂康胶囊对脂多糖(LPS)诱导大鼠肝脏Kupffer细胞NF-κB表达的影响。方法将分离的Kupffer细胞按1×105个/ml接种于24孔板内培养48 h后,对照组:常规培养;LPS组:给予终浓度为100 ng/ml的LPS培养8 h;血脂康胶囊组:血脂康胶囊用生理盐水溶解,90 mg·kg-1·d-1,其余处理同LPS组。ELISA法检测上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平。Western blotting检测胞浆IκBα、p-IκBα及胞核NF-κB p65蛋白表达水平。结果 LPS组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6表达高于对照组(P0.05)。血脂康胶囊组细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6低于LPS组(P0.05),但高于对照组(P0.05)。对照组胞浆蛋白IκBα表达显著高于LPS组和血脂康胶囊组(P0.05),但LPS组明显低于血脂康胶囊组(P0.05)。LPS组胞核NF-κB p65和p-IκBα表达高于对照组和血脂康胶囊组(P0.05),但血脂康胶囊组表达低于LPS组(P0.05)。结论血脂康胶囊对LPS诱导的Kupffer细胞炎症因子分泌有一定的抑制作用。     

抵抗素对脂肪变性肝细胞核因子κ B和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的 探讨抵抗素(resistin)对脂肪变性肝细胞脂质代谢及核因子κB (NF-κ B)、肿瘤坏死因子(TNF)α表达的影响. 方法 选用软脂酸诱导L02细胞脂肪变性模拟非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)体外模型.分C组(正常对照组),P组(模型组:软脂酸20μg/ml)及分别加入重组人抵抗素50μg/L的CR组和PR组.各组给予相应处理72 h后,观察细胞的脂肪变并测定细胞培养上清液中甘油三酯(TG)、ALT、AST及γ谷氨酰转移酶(GGT)的浓度;采用半定量RT-PCR及Western blot法检测细胞胰岛素受体底物2(IRS-2)、NF-κB、TNFα的基因及蛋白表达水平.根据资料不同应用方差分析或t检验进行统计学分析,P＜ 0.05为差异具有统计学意义. 结果 P组、CR组及PR组细胞培养上清液中TG、ALT、AST、GGT的浓度明显高于C组.分别与C组比较,P组、CR组及PR组NF-κ B mRNA相对表达量0.54±0.04、0.60±0.04及1.00±0.06,与C组的0.10±0.01比较,t值分别为17.64,22.03,26.06;TNFαmRNA相对表达量0.58±0.04、0.61±0.06及1.05±0.09,与C组的0.33±0.06比较,t值分别为5.67,5.38,11.64,相对表达量明显升高,而IRS-2 mRNA (t值分别为8.19,9.23,20.93)明显降低,且P值均＜0.05,差异有统计学意义.P组与CR组间比较,t值分别为1.75,0.58,2.14,P值均＞0.05,差异无统计学意义.蛋白质表达变化趋势与mRNA变化趋势相一致.结论 抵抗素可能通过NF-κ B依赖途径对肝细胞脂肪变性胰岛素抵抗发挥促炎作用,从而促进NAFLD的发生与发展.     

血管紧张素Ⅱ对培养血管内皮细胞核因子-κB激活及厄贝沙坦干预研究

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)核因子-κB(NF-κB)激活与其对肿瘤坏死因子-α(TNFα)、白介素-6(IL-6)表达的影响及血管紧张素1型受体(AT1R)拮抗剂厄贝沙坦(irbesartan，Irb)干预后的变化，以探讨AngⅡ／NF-κB在动脉粥样硬化(AS)致病机制中的作用和Irb可能的抗AS效应。方法体外培养HLIVEC，测定AngⅡ刺激下NF-κB亚单位p65的核易位阳性率、TNFα、IL-6的时间与浓度反应曲线；然后将分盘于24孔板的细胞随机分为5组(n=6)：正常培养对照组、AngⅡ刺激组，AngⅡ和3种不同浓度的Irb共孵育组；采用细胞ELISA、免疫细胞化学分析分别测定TNFα、IL-6的含量和NF-κBp65的核易位阳性率。结果AngⅡ(1nmol／L-5μmol／L)刺激HUVEC表达TNFα、IL-6呈时间与浓度依赖性，其表达高峰分别为12～24h、6～12h，NF-κBp65核易位阳性率亦呈时间浓度依赖性，高峰在1～4h。厄贝沙坦(0．01μmol／L、0．1μmol／L、1μmol／L)均能显降低TNFα和IL-6表达与NF-κBp65核易位阳性率。结论AngⅡ以浓度和时间依赖方式刺激HUVEC NF-κB激活与TNFα、IL-6表达，厄贝沙坦抑制HUVEC NF-κB激活与TNFκ、IL-6表达，提示AngⅡ／NF-κB信号途径在促进AS发病机制中起重要作用，拮抗AT1R或抑制NF-κB有可能减轻或抑制AS进展。     

紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子的调控作用

目的探讨支架涂层复合物紫杉醇水蛭素对脂多糖(LPS)诱导人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子表达的影响。方法选用4~6代的HCASMC,将细胞分为空白对照组(正常HCASMC,未做任何处理)、LPS模型组(LPS干预)、紫杉醇水蛭素高浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.2 mg/ml水蛭素+LPS干预)、紫杉醇水蛭素低浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.0125 mg/ml水蛭素+LPS干预)。每组设置3个复孔。ELISA法检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的表达水平,用Q-PCR法对各组细胞NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA进行检测,用Western Blotting检测NF-κ B p65蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,LPS模型组NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1β的m RNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P均0.05);HCASMC经高、低浓度紫杉醇水蛭素复合物预处理,LPS刺激后,上述指标低于LPS模型组,差异有统计学意义(P均0.05)。LPS模型组NF-κ B p65蛋白表达水平明显高于空白对照组,而紫杉醇水蛭素预处理组NF-κ B p65蛋白表达水平较LPS模型组明显降低,其中高浓度处理组降低更为显著。与空白对照组比较,LPS模型组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平升高,差异有统计学意义(P均0.05)。与LPS模型组比较,紫杉醇水蛭素低浓度与高浓度组TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显降低,差异有统计学意义(P均0.05)。其中高浓度紫杉醇水蛭素干预后IL-1β表达下降较低浓度更为显著,差异有统计学意义(P0.05)。结论紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中NF-κ B p65的激活具有明显的抑制作用,有效下调核转录因子NF-κ B p65的转录活性,显著抑制下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达。     

棕榈酸对EA.hy926细胞炎症反应相关基因表达的影响及机制

目的观察棕榈酸(PA)对内皮细胞株EA.hy926细胞炎症反应的影响,检测相关基因表达的变化并探讨其可能的信号途径。方法体外培养内皮细胞株EA.hy926,分为白蛋白对照组和PA处理组。改良MTT法检测PA孵育对EA.hy926细胞活性的影响,实时荧光定量PCR法检测白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA水平,ELISA法检测IL-6、IL-8和TNF-α浓度,Western blot检测磷酸化核因子κB(NF-κB)p65、NF-κB p65、核因子κB抑制蛋白(IκBα)水平。结果与白蛋白对照组相比,20、50、100μmol/L PA处理组的IL-1、IL-6、IL-8 mRNA水平显著升高(P0.05),50、100μmol/L PA处理组的TNF-α、MCP-1 mRNA水平显著升高(P0.05),20、50、100μmol/L PA处理组细胞培养上清液中IL-6和IL-8的浓度显著升高(P0.05),IκB蛋白水平显著降低(P0.05),NF-κB p65磷酸化水平显著升高(P0.05)。结论 PA能够导致EA.hy926细胞炎症反应,其机制可能与激活NF-κB信号途径有关。     

他克莫司对转化生长因子-β诱导的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用及对核因子-κB活性的影响

目的:探讨他克莫司(FK506)对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用,及其与核因子-κB(NF-κB)活性变化的关系.方法:以人类肾脏近曲小管上皮细胞株(Human kidney cell,HKC)为研究对象,分为以下4组:①阴性对照组;②TGF-β(8 ng/ml)组:③FK506(0.1、1、10、50 ng/ml)组:④TGF-β(8 ng/ml) FK506(0.1、1、10、50 ng/ml)组.应用形态学、间接免疫荧光法,免疫组化技术和酶联免疫吸附法观察FK506对TGF-β诱导的HKC细胞转分化的作用、细胞培养上清液纤连蛋白、Ⅰ型胶原的变化及FK506对HKC细胞NF-κB活性的影响.结果:FK506(1,10,50 ng/ml) TGF-β组比TGF-β组诱导的HKC细胞E-钙粘蛋白和细胞角蛋白表达有所增强,波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达比TGF-β组减弱(P＜0.05),同时HKC细胞NF-κB的活性比TGF-β组减弱(P＜0.05),培养上清液纤连蛋白及Ⅰ型胶原的浓度比TGF-β组降低(P＜0.05);FK506(1、10、50 ng/ml)使基础状态下HKC细胞NF-κB的活性明显下降(P＜0.05)和上清液中纤连蛋白及Ⅰ型胶原的水平明显降低(P＜0.05).结论:①FK506剂量依赖性地抑制TGF-β诱导的肾小管上皮细胞转分化和纤连蛋白及Ⅰ型胶原的形成及基础状态下和TGF-β诱导的HKC细胞NF-κB的表达.②FK506抑制TGF-β诱导的HKC细胞转分化很可能与NF-κB的表达下调有关,需要进一步研究.     

LOX-1/NF-κB信号途径对ox-LDL刺激的人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响及氟伐他汀的干预作用

目的：探讨血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）/核因子（NF）-κB信号途径对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）炎症因子表达的影响及氟伐他汀的干预作用。方法：设立不同浓度的ox-LDL刺激组,LOX-1中和抗体干预组,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氢基甲酸盐（PDTC）干预组,氟伐他汀干预组及空白对照组;检测细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α,白细胞介素（IL）-6的浓度。结果：25mg/L、50mg/L、100mg/L浓度的ox-LDL刺激组24h后上清液TNF-α浓度分别为：（32.34±2.46）pg/ml、（96.43±8.36）pg/ml、（62.79±4.64）pg/ml,IL-6浓度分别为：（264.71±15.06）pg/ml、（630.70±17.77）pg/ml、（378.62±16.33）pg/ml,均较空白对照组TNF-а（22.99±3.55）pg/ml、IL-6（80.37±8.29）pg/ml水平显著升高（P〈0.05~0.01）;NF-кB抑制剂PDTC和LOX-1中和抗体干预后上清液TNF-α浓度较50mg/L ox-LDL刺激组显著下降（P〈0.01）。不同浓度氟伐他汀（0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L）干预HUVECs 24h后上清液TNF-α浓度分别为（73.84±6.50）pg/ml、（42.59±6.45）pg/ml、（23.55±4.27）pg/ml;IL-6浓度分别为（549.0±20.23）pg/ml、（434.56±22.4）pg/ml、（302.42±21.30）pg/ml,较50mg/L ox-LDL刺激组显著下降（P〈0.05~0.01）。结论：氧化低密度脂蛋白可刺激人脐静脉内皮细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达,在25~50mg/L剂量范围内呈显著的剂量-效应关系。氟伐他汀可浓度依赖性抑制人脐静脉内皮细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达。     

大鼠急性坏死性胰腺炎NF-κB的变化及乌司他丁的调控作用

目的:探讨乌司他丁对急性坏死性胰腺炎大鼠核因子-κ B(NF-κB)的表达及有关细胞因子的影响．方法:将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(SO 组)、急性坏死性胰腺炎组(ANP组)和急性坏死性胰腺炎乌司他丁治疗组(UTI组),比较各组大鼠NF-κB、IL-6、 TNF-α、血清淀粉酶的水平．结果:ANP组淀粉酶活性195 907．51±38 618．39 nkat／L, TNF-α值41.37±7．54 ng／L,IL-6值32．32±8．62 ng/L,肺、胰腺组织NF-κB表达增加,与SO组比较P均<0．01,乌司他丁治疗后,淀粉酶活性69 804．30±19 432．55 nkat／L,TNF-α值 18．66±6．45 ng／L,IL-6值23．41±7．65 ng／L,肺、胰腺组织NF- κB表达降低,与SO组和ANP组比较P均<0．01．结论:急性坏死性胰腺炎时NF-κB活化,上调IL-6、TNF-α, 加重胰腺及肺的损伤,乌司他丁抑制NF-κB表达而减轻胰腺及肺的损伤,改善急性坏死性胰腺炎的预后．