荧光原位杂交技术检测肺腺癌p53基因缺失及其临床意义

[目的]探讨荧光原位杂交(FISH)技术在检测p53基因缺失中的应用,并评估其应用于肺腺癌诊断的可行性及临床应用前景。[方法]采用FISH技术在基因水平上检测30例肺腺癌及20例良性病变的p53基因缺失情况,比较两组间有无统计学差异,同时建立阳性检测的阈值,比较两组间p53基因缺失的阳性率。采用免疫组化检测30例肺腺癌p53蛋白表达情况,并分析肺腺癌p53基因缺失和p53蛋白阳性表达之间有无统计学意义。[结果]30例肺腺癌p53基因缺失率为(38.3%±8.9%),20例良性病变对照组为(13.3%±2.4%),两组间有显著统计学差异(P<0.01)。p53蛋白阳性组与阴性组间的p53基因缺失率无统计学意义(P>0.05)。[结论]p53基因缺失的高表达在肺腺癌的发生中可能起重要作用,用FISH技术检测p53基因缺失率可能对肺腺癌诊断和治疗提供更加准确的依据。     

nm23和p53基因与肺腺癌生物学特性的关系

目的：检测肺腺癌组织中nm23表达和p53基因外显子突变情况,寻找有助于准确预测局部肿瘤进展、分型和预后情况的临床参照指标。方法：应用PCR技术检测31例肺腺癌术后存档蜡块组织中nm23表达及p53基因外显子突变情况,并与肺腺癌的病理及临床指标进行相关性分析。结果：nm23表达及p53基因突变率分别为38．7％（12／31）及48．4％（15／31）。nm23表达和p53基因突变与临床分期相关,P值分别为0．005、0．037。结论：nm23表达和p53基因突变与肺癌临床分期和生存相关,在判断肺腺癌细胞增殖、分化程度、恶性程度及预后转归方面有一定价值,可作为判断肺腺癌预后的参考指标,指导高危患者的进一步治疗。     

77例青年晚期肺腺癌ERCC-1、p53蛋白表达与含顺铂方案化疗疗效关系

[目的]分析青年晚期肺腺癌患者组织中错配切除修复蛋白（ERCC-1）、p53表达与含顺铂方案化疗疗效和生存之间的关系。[方法]收集1997年1月～2005年12月采用含顺铂方案治疗的病理确诊为晚期肺腺癌82例患者的蜡块。采用免疫组化的方法检测ERCC-1、p53的表达，并与含顺铂方案治疗的疗效和生存进行比较。[结果]共有77例可以评价染色，ERCC-1阳性率为33．77％，p53阳性率为53．25％。ERCC—1阳性表达患者顺铂化疗有效率低，并且TTP和PFS较短，p53阳性表达患者生存较差。[结论]ERCC-1阳性表达与青年晚期肺腺癌含顺铂方案化疗耐药相关．p53表达提示青年晚期肺腺癌患者不良预后。     

肺腺癌p53基因突变与临床病理特征关系的研究

目的探讨p53基因在肺腺癌中突变的频率、位置和在肺腺癌发生发展中的作用及与其临床病理特征的关系。方法聚合酶链式反应一单链构象多态性（PCR－SSCP）检测31例肺腺癌的P53基因第5～8外显子突变。结果14例（45％）出现P53基因5～8外显子突变，其中7、8外显子突变占73％。P53基因突变男性显著高于女性（P—0．003），在肿瘤≤3cm的病例p53基因突变率显著低于肿瘤＞3cm的病例（P=0．005）。p53基因突变与吸烟史、年龄、组织学类型、分化程度、淋巴结状况、国际病理TNM分期及瘤栓无显著性差异（P＞0．05）。结论肺腺癌中P53突变率为45％，主要分布在第7、8外显子，P53基因突变参与肺腺癌癌变的始动和腺癌的进展。     

清金得生片对人肺腺癌细胞PCNA及p53蛋白表达水平的调节

目的探讨清金得生片抗肺癌的作用机制。方法运用药物血清和细胞药理学方法,用ELISA法测定清金得生片对培养上清液中p53蛋白含量的影响;免疫组化（SABC）法检测清金得生片对人肺腺癌细胞PCNA、p53蛋白表达水平的影响。结果清金得生片药物血清作用72 h,培养上清液中p53蛋白含量显著地降低,人肺腺癌细胞PCNA及p53蛋白阳性染色率下调,并呈明显的量效关系。结论清金得生片可抑制肺腺癌细胞的增殖活性和p53基因的突变,从而达到抗肺癌作用。     

肺腺癌组织中RNA结合基序蛋白38和p53基因的表达及其临床意义

目的:分析肺腺癌组织中RNA结合基序蛋白38基因(RNA-binding motif protein 38,RBM38及抑癌基因p53 mRNA和蛋白的表达情况,探讨其在肺腺癌发生发展中的意义.方法:取2012年10月至2015年6月新疆医科大学附属肿瘤医院收治的50例肺腺癌患者的肿瘤组织标本作为实验组,相对应的癌旁组织标本作为对照组.用RT-PCR法检测两组中RBM38及p53mRNA相对表达量,用Western blotting法检测两组中RBM38及p53蛋白的相对表达量.结果:实验组RBM38 mRNA及蛋白相对表达量(0.357±0.170、0.294±0.149)均高于对照组(0.271±0.128、0.206±0.099),实验组p53 mRNA及蛋白(0.457±0.208、0.671±0.200)相对表达量均高于对照组(0.308±0.167、0.332±0.071),差异均有统计学意义(均P＜0.01).RBM38表达与肺腺癌患者TNM分期、浸润深度有关(P＜0.05),p53表达与患者TNM分期有关(P＜0.05).实验组RBM38与p53蛋白表达呈负相关(r=-0.626,P＜0.01).结论:肺腺癌组织RBM38、p53 mRNA及蛋白表达均高于癌旁组织,两者均与患者TNM分期等病理参数关系密切.随着RBM38蛋白表达的增加p53蛋白随之减少,RBM38可能通过抑制p53的翻译从而促进肺癌的发生发展,RBM38可能成为肺腺癌分子靶向治疗的靶点.     

肺鳞癌和肺腺癌中抑癌基因缺失的比较研究

目的 比较中国人肺鳞癌和肺腺癌中抑癌基因丢失的情况,分析抑癌基因在肺癌发生中的不同作用。方法 选取位于13个抑癌基因侧翼（与基因紧密连锁）或位于基因内含子区的22个微卫星位点,对28例肺鳞癌和13例肺腺癌标本进行杂合缺失分析。结果 FHIT、p53、INFNA、VHL和p16基因在肺鳞癌和肺腺癌中均有高频率的杂合缺失,而PRLTS、PTEN和p57基因的杂合缺失率在肺鳞癌和肺腺癌中有明显差异。结论 在肺鳞癌和肺腺癌发病过程中可能有不同的抑癌基因失活,其中PRLTS可能对肺腺癌的发生有重要作用。     

腺病毒介导的野生型p53基因对肺腺癌细胞株生长的抑制作用

为研究野生型p53基因对肺腺癌细胞株GLC-82细胞生长的作用,确立腺病毒介导的野生型p53基因在肿瘤治疗中的意义,应用分子克隆技术首先构建了野生型p53复制缺陷型腺病毒重组体,应用生化染色方法确定了重组体的转染效率,以免疫组化法及PCR技术分别确定了腺病毒载体介导的p53基因转染GLC-82细胞后p53蛋白和p53 cDNA的表达情况;最后应用细胞生物学方法检测了p53对GLC-82细胞扩增及细胞周期的影响.结果表明所构建的重组体可以高效、快速转染GLC82细胞,抑制GLC-82细胞扩增,使细胞合成期和分裂后期的量减少,出现细胞凋亡现象:提示野生型p53基因导入可作为治疗肺腺癌的途径之一     

p53突变蛋白在非小细胞肺癌中的表达及与iNOS的关系

目的测定肺癌组织中p53抑癌基因突变蛋白的表达,诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及分布.了解肺癌组织中 p53抑癌基因突变蛋白与iNOS的关系.方法按自身配对原则收集人肺癌癌灶组织,癌灶周围组织及远癌组织各40份,分 别进行免疫组化法测定p53抑癌基因突变蛋白的表达,原位杂交法测定iNOSmRNA的表达及分布.结果1、肺癌组织中 p53抑癌基因突变蛋白的表达阳性.与肺癌的临床分期、组织分型、淋巴结转移未见相关,(均为P＞0.05).2、iNOSmRNA 在肺腺癌中的表达高于鳞癌,(均为P＜0.05).3、肺腺癌组织中iNOS在p53抑癌基因突变蛋白表达阳性组高于p53阴性 组,(P＜0.01).结论肺腺癌中p53抑癌基因突变蛋白阳性组iNOS表达高于p53阴性组的表达,提示NO/iNOS途径可诱 使p53抑癌基因突变.     

转染 p53基因对肺腺癌细胞株裸鼠 移植瘤生长的影响

目的：探讨转染野生型 p53（ wt-p53）和突变型 p53（ mt-p53）基因对人肺腺癌细胞株 GLC-82裸鼠移植瘤生长的影响。方法：采用脂质体介导法,分别将 wt-p53和 mt-p53基因导入人肺腺癌细胞株 GLC-82,在裸鼠体内、体外实验中检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性。结果：转染 mt-p53 基因的细胞株 G418筛选的细胞集落数、 3H-TDR掺入实验、软琼脂平皿细胞集落数,以及裸鼠瘤组织重量和体积均高于对照组（ P<0.01）,而转染 wt p53基因的细胞株均显著低于对照组（ P< 0.01）,表明导入 wt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度明显低于对照组细胞株和导入 mt p53基因的细胞株,即导入 mt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度最快,而导入 wt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢。结论： wt p53基因能有效抑制人肺腺癌细胞生长; mt p53基因则可以明显地促进瘤细胞生长。     

氧化铁磁性纳米颗粒介导wt p53基因对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨氧化铁磁性纳米颗粒介导野生型p53基因（wild type p53,wtp53）对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP增殖抑制和凋亡诱导的作用。 方法:氧化铁磁性纳米颗粒介导wtp53转染肺腺癌细胞A549/DDP作为实验组，以纳米颗粒介导空载体pcDNA3转染作为阴性对照     

Ad-p53与Ad-p16联合对人肺腺癌GLC-82细胞作用的体外实验研究 *

探讨腺病毒介导的p53与p16基因的联合对人肺腺病GLC-82疗效提高的可能性。方法：将分别携有p53基因、p16基因重组腺病毒(Ad-p53与Ad-p16)联合使用,通过细胞生长和存活实验、克隆形成实验、流式细胞分析、TUNEL检测、RT-PCR分析、免疫组织化学实验,观察其对人肺腺癌GLC-82细胞的作用。结果：在总感染强度相同的前提下,Ad-p53与Ad-p16联合导入GLC-82细胞,对细胞生长存活及克隆形成能力的抑制、以及所造成的凋亡效果比施用单种基因的效果强,表明p53基因与p16基因在体外疗效上互为协同。结论： Ad-p53与Ad-p16联合,可以提高对人肺腺癌GLC-82细胞的疗效。     

氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53基因对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨氧化铁磁性纳米颗粒介导野生型p53基因（wild type p53,wt-p53）对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP增殖抑制和凋亡诱导的作用。方法：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染肺腺癌细胞A549/DDP作为实验组,以纳米颗粒介导空载体pcDNA3转染作为阴性对照组,脂质体介导wt-p53转染作阳性对照组。MTT法和绘制生长曲线观察基因转染对A549/DDP细胞增殖抑制作用,荧光显微镜、流式细胞术观察其对A549/DDP细胞诱导凋亡作用,RT-PCR检测其对A549/DDP细胞Bax mRNA表达的影响。结果：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP增殖有持续的抑制作用,而以脂质体介导wt-p53对增殖抑制作用持续时间短暂;纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP诱导凋亡作用明显强于以脂质体载体;同时介导wt-p53上调Bax mRNA表达水平的作用也明显强于以脂质体载体。结论：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染对人肺腺癌细胞A549/DDP有持续的增殖抑制和诱导凋亡的作用。     

血管紧张素Ⅱ1型受体在肺鳞癌、腺癌中的表达及与Survivin、p53相关性研究

目的:探讨在肺鳞癌、腺癌组织中血管紧张素Ⅱ1型受体(AngiotensinⅡtype-1 receptor,AT1R)的表达及临床意义,并探讨AT1R表达及与Survivin、p53之间的相关性。方法:采用免疫组织化学方法(SP法)检测72例肺鳞癌、腺癌组织和12例癌旁正常组织中AT1R、Survivin、p53的表达。结果:AT1R在肺鳞癌、腺癌组织中的阳性表达率为48.6%,在正常组织中未检出阳性结果。AT1R阳性表达率与淋巴结转移及TNM分期呈正相关(P<0.05),与组织学类型、病理分级及是否吸烟无相关性(P>0.05)。AT1R阳性表达患者p53蛋白、Survivin阳性表达率分别为71.4%和74.3%,AT1R不表达患者p53蛋白及Survivin阳性表达率分别为29.7%和40.5%。AT1R表达与Survivin、p53蛋白表达呈正相关(P<0.01)。结论:AT1R参与了肺鳞癌、腺癌的恶性增殖和侵袭,其表达能为肺癌诊断、治疗、判断预后提供新的依据。     

p53基因245位点突变对非小细胞肺癌细胞H1299的影响

背景与目的:p53基因突变是肺腺癌发生中的常见的分子生物学事件,第245位点突变为其突变热点之一,因此研究p53基因第245位点突变可能为肺腺痛的诊断、治疗提供一定的理论基础.本研究旨在研究肺癌常见的245位点突变对p53缺失的人肺腺癌细胞系H1299的影响.方法:应用流式细胞术观察脂质体瞬时转染p53基因第245突变体(G245V)对细胞凋亡的影响,同时用稳定转染观察克隆形成率和生长曲线的不同.结果:转染G245V突变体的H1299细胞凋亡平均数低于转染野生型p53基因的细胞,差异有统计学意义(P<0.001);大中克隆形成数量比导入野生型p53基因的细胞大中克隆形成数量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);细胞的生长速度也明显加快.结论:p53基因第245位点发生突变后基本丧失了野生型p53的功能,是肿瘤细胞增殖的原因之一.     

睑板腺癌组织p21、p53蛋白表达及临床意义

目的研究p21、p53蛋白在睑板腺癌组织中表达及临床意义。方法选取80例睑板腺癌患者,取其睑板腺癌组织及其中40例患者的癌旁组织作为检测标本。免疫组化法检测p21、p53蛋白的阳性表达率。睑板腺癌患者睑板腺癌组织p21、p53蛋白表达情况影响因素的多因素分析采用Logistic回归分析。相关性分析采用Spearman相关性分析。结果睑板腺癌组织中p21、p53蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。不同分化程度、淋巴结转移情况、局部浸润情况和复发情况睑板腺癌患者睑板腺癌组织p21、p53蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移、局部浸润和复发是睑板腺癌患者睑板腺癌组织p21蛋白阳性表达的独立危险因素(P<0.05);淋巴结转移、局部浸润是睑板腺癌患者睑板腺癌组织p 53蛋白阳性表达的独立危险因素(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,睑板腺癌组织中p21蛋白与p53蛋白表达呈正相关(r=0.413,P<0.01)。结论p21、p53蛋白在睑板腺癌组织表达水平明显较高,其中p21蛋白对早期疾病和预后均存在一定影响,而p53蛋白仅对疾病早期有一定影响,且p21、p53蛋白在睑板腺癌发生、发展过程中具有协同作用。     

肺腺癌组织EGFR突变与p53和COX-2表达相关性及其临床意义

目的 针对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)敏感突变的酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)治疗已成为肺癌精准治疗的典范,但多数患者在EGFR-TKI治疗有效后的8～16个月不可避免会出现获得性耐药.本研究探讨p53和COX-2在EGFR突变型晚期肺腺癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系,并观察其表达对EGFR-TKI疗效的影响.方法 选取2014-03-01-2016-01-31于郑州大学第二附属医院病理确诊为EGFR突变型晚期肺腺癌并接受EGFR-TKI治疗的43例患者,利用免疫组织化学法检测p53和COX-2在EGFR突变型晚期肺腺癌组织中的表达;x2检验分析其与临床特征之间的相关性;生存分析采用Kaplan-Meier法;并进一步对影响患者无进展生存期(progression-free survival,PFS)的因素采用Cox比例风险回归模型分析.结果 43例EGFR突变型晚期肺腺癌患者中,p53、COX-2表达阳性率分别为41.8％和53.4％.p53表达随年龄增长(x2=3.939,P=0.047)及肿瘤分化程度减低(x2=4.182,P=0.041)而升高.COX-2表达与年龄、性别、吸烟史、肿瘤分化程度、临床分期及EGFR基因突变类型均未见明显相关性(P＞0.05).p53与COX-2表达无明显相关性,P＞0.05.患者接受EGFR-TKI治疗后,p53阴性组和阳性组中位PFS分别为12.0和7.5个月,差异有统计学意义,x2=4.726,P=0.030;COX-2阴性组和阳性组中位PFS分别为12.0和10.0个月,差异有统计学意义,x2=5.578,P=0.018.进一步行多因素Cox比例风险回归模型分析显示,p53 (HR=0.450,P=0.046)和COX-2(HR=0.424,P=0.021)表达均为EGFR突变型晚期肺腺癌患者PFS的独立影响因素.结论 EGFR突变型晚期肺腺癌组织中,p53和COX-2表达可能促进肿瘤进展,有望成为EGFR-TKI疗效的预测因子.     

宣威地区与非宣威地区肺癌患者临床流行病学特征及病理类型特点分析

目的:分析宣威地区与非宣威地区的肺癌临床流行病学与病理特征。方法:以云南省肿瘤医院（昆明医科大学第三附属医院）2015年3月至2015年5月手术治疗的肺癌患者为研究对象,共295例,收集患者相关信息。将其分为宣威地区、非宣威地区进行统计。对患者的临床资料进行回顾性分析,包含病理类型、年龄、性别、吸烟史等。结果:宣威地区、非宣威地区肺癌患者男女比例为1.19∶1和1.69∶1。宣威地区患者平均年龄为［53.41±8.74(34~85)］岁,中位年龄53岁。非宣威地区肺癌患者平均年龄为［58.68±8.63(38~78)］岁,中位年龄59岁。宣威地区肺癌高发年龄为40~59岁段。宣威地区I期肺癌患者占比、T1期肺癌患者占比、N0期肺癌患者占比均高于非宣威地区。宣威地区男性腺癌鳞癌比远高于非宣威地区,差异有显著统计学意义。结论:宣威地区女性肺癌发病率更高,发病年龄更趋年轻化,腺癌比例高,吸烟与宣威地区男性腺癌高发关系不密切。