叔丁基对苯二酚对亚砷酸钠致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用

目的 探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2)致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用。方法 Chang肝细胞用tBHQ[0(对照)、5、25μmol/L]预处理24h,再用5 μmol/L tBHQ和NaAsO2[0(对照)、30、40、50、60 μmol/L]共同作用24h,采用刃天青钠(Alamar blue)还原法检测细胞活力,结果用实验组Alamar blue还原率与对照组Alamar blue还原率的相对比值表示;Chang肝细胞用tBHQ[0(对照)、5、25 μmol/L]预处理24h,再用5μmol/L tBHQ和NaAso2[0(对照)、40、50 μmol/L]共同作用24h,采用荧光探针2′,7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成,结果用实验组平均荧光强度与对照组平均荧光强度的相对比值表示。结果 30、40、50、60 μmol/L的NaAsO2暴露能够显著降低细胞活力,而tBHQ预处理(5、25 μmol/L)则可明显恢复细胞活力,NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为566.57、55.09、14.50,P均＜0.05）;5、25 μmol/L tBHQ预处理的30、40、50、60 μmol/LNaAsO2组细胞活力(0.75±0.02、0.70±0.04、0.59±0.03、0.43±0.03和0.75±0.02、0.73±0.03、0.65±0.02、0.50±0.02)较相应NaAsO2单独作用组(0.70±0.03、0.64±0.03、0.43±0.03、0.33±0.01)显著升高（P均＜0.05）,25 μmol/L tBHQ 预处理的50、60μmol/L NaAsO2组细胞活力高于相应5μmol/L tBHQ预处理组（P均＜0.05）。40、50 μmol/L的NaAsO2能显著诱导Chang肝细胞内ROS的产生,而tBHQ预处理(5、25 μmol/L)则可使NaAsO2诱导产生的细胞内ROS水平显著下降,NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为181.78、60.55、4.93,P均＜0.05）;5、25 μmol/L tBHQ预处理的40、50 μmol/L NaAsO2组细胞内ROS水平(1.87±0.09、1.80±0.07和1.36±0.11、1.44±0.12)较相应NaAsO2单独作用组(2.30±0.18、2.18±0.17)显著降低(P 均＜ 0.05),25 μmol/L tBHQ预处理的40、50 μmol/L NaAsO2组细胞内ROS水平低于相应5μmol/L tBHQ预处理组（P均＜ 0.05）。结论 tBHQ对NaAsO2诱导的细胞毒性和氧化损伤具有一定的拮抗作用。     

Intravenous administration of glutathione protects parenchymal and non-parenchymal liver cells against reperfusion injury following rat liver transplantation

AIM:To investigate the effects of intravenous administrationof the antioxidant glutathione (GSH) on reperfusion injuryfollowing liver transplantation.METHODS:Livers of male Lewis rats were transplantedafter 24 h of hypothermic preservation in University ofWisconsin solution in a syngeneic setting.During a 2-hreperfusion period either saline (controls,n=8) or GSH(50 or 100 μmol/(h·kg),n=5 each) was continuouslyadministered via the jugular vein.RESULTS:Two hours after starting reperfusion plasmaALT increased to 1 457±281 U/L (mean±SE) in controlsbut to only 908±187 U/L (P<0.05) in animals treated with100 μmol GSH/(h·kg).No protection was conveyed by50μmol GSH/(h·kg).Cytoprotection was confirmed bymorphological findings on electron microscopy:GSHtreatment prevented detachment of sinusoidal endothelialcells (SECs) as well as loss of microvilli and mitochondrialswelling of hepatocytes.Accordingly,postischemic bile flowincreased 2-fold.Intravital fluorescence microscopy revealeda nearly complete restoration of sinusoidal blood flow and asignificant reduction of leukocyte adherence to sinusoidsand postsinusoidal venules.Following infusion of 50μmol and100 μmol GSH/(h·kg),plasma GSH increased to 65±7 mol/Land 97±18 mol/L,but to only 20±3 mol/L in untreated recipients.Furthermore,plasma glutathione disulfide (GSSG) increasedto 7.5±1.0 mol/L in animals treated with 100μmol/(h·kg) GSHbut infusion of 50μmol GSH/(h·kg) did not raise levels ofuntreated controls (1.8±0.5 mol/L vs 2.2±0.2 mol/L).CONCLUSION:Plasma GSH levels above a critical level mayact as a “sink” for ROS produced in the hepatic vasculature during reperfusion of liver grafts.Therefore,GSH can beconsidered a candidate antioxidant for the Drevention ofreperfusion injury after liver transplantation,in particularsince it has a low toxicity in humans.     

黄芩苷对A549肺腺癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨黄芩苷对A549肺腺癌细胞株增殖的抑制作用及其相关机制。方法将浓度为0、25、50、100、200、400μmol/L的黄芩苷作用于经体外培养的A549人肺腺癌细胞株24、48、72 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测黄芩苷对A549肺腺癌细胞的抑制率;收集30μmol/L黄芩苷孵育24 h后的A549肺腺癌细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞周期蛋白(Cyclin)D1、增殖细胞核抗原(PCNA)及p21 mRNA的表达水平,采用Western印迹法检测Cyclin D1、PCNA及p21蛋白的表达水平。结果不同浓度的黄芩苷对A549肺腺癌细胞的增殖均具有不同程度的抑制作用,并且呈剂量效应、时间效应关系。30μmol/L黄芩苷(实验组)作用于A459肺腺癌细胞24 h后,Cyclin D1、PCNA及其蛋白表达水平低于对照组,p21及其蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。结论通过抑制Cyclin D1、PCNA的表达以及促进p21的表达,黄芩苷抑制A549肺腺癌细胞增殖。     

白藜芦醇对酒精诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作用及相关基因表达的变化

目的:探讨白藜芦醇在酒精诱导的HepG2细胞氧化应激中的抗氧化作用,揭示白藜芦醇抗酒精性肝损伤的作用机制.方法:白藜芦醇预处理HepG2细胞24 h后,用酒精诱导氧化应激的产生.MTT方法检测白藜芦醇处理组与对照组HepG2细胞活力;用ELISA试剂盒检测不同实验组的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和细胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;采用RTPCR方法检测抗氧化通路中关键基因SOD1、SOD2和过氧化氢酶的mRNA表达水平.结果:MTT结果显示,与对照组比较,白藜芦醇(12.5、25、50、100μmol/L)对HepG2细胞的细胞毒性均在20%以下,300 mmol/L酒精可致近50%HepG2细胞死亡;25-100μmol/L白藜芦醇可有效对抗300 mmol/L酒精对HepG2引起的细胞毒性作用;SOD活性显示100μmol/L白藜芦醇预处理组SOD含量(0.391±0.011)明显高于非处理组(0.286±0.019),而ROS结果显示酒精诱导组(29234.79±2288)明显高于白藜芦醇25、50、100μmol/L预处理组(18023.26±1359.66;13528.44±1078.99;8219.87±635.99);RT-PCR结果显示,与300mmol/L酒精比较,25、50和100μmol/L白藜芦醇可上调SOD1 mRNA表达量(0.5535±0.0035;0.586±0.0113;0.623±0.0127);12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇均可上调SOD2mRNA表达量(1.249±0.011;1.369±0.028;1.377±0.021;1.401±0.0578);50和100μmol/L白藜芦醇均可上调过氧化氢酶(0.1955±0.004;0.2275±0.00707)mRNA的表达量.结论:本研究提示酒精可诱导氧化应激的产生,而白藜芦醇通过调节抗氧化通路中基因的表达发挥抗氧化功能,从而削弱酒精的细胞损伤作用.     

氧应激对大鼠肝星状细胞增殖的影响及还原型谷胱甘肽的抗氧化作用

目的:探讨氧应激对肝星状细胞增殖的影响及还原型谷胱甘肽的抗氧化作用.方法:分别用不同浓度的次氮基三乙酸铁(Fe-NTa)培养大鼠肝星状细胞,在6,12,24和48h用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测氧应激对肝星状细胞增殖的影响,检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;并用不同浓度的还原型谷胱甘肽与Fe-NTa共同培养细胞,再检测SOD活性.结果:Fe-NTa作用12h与同一时间点的空白对照组比较,500和1000μmol/L组细胞增殖明显增多(A:0.369±0.124,0.485±0.101vs0.285±0.044,P<0.01),作用24和48h各浓度组与同一时间点的空白对照组比较差异显著(P<0.01).无Fe-NTa干预的空白对照组12,24和48h与同样处理的6h组比较,细胞增殖明显增多(A:0.285±0.044,0.253±0.033,0.278±0.037vs0.111±0.005,P<0.01),随着Fe-NTa剂量的增加,作用12,24和48h与同样处理的6h组比较,细胞增殖亦明显增多(P<0.01).200和500μmol/LFe-NTa组与对照组比较,SOD活力明显降低(156.95±21.17,100.92±10.02μkat/Lvs197.74±17.59μkat/L,P<0.01);MDA含量明显升高(1123±217,1549±182mmol/Lvs580±332mmol/L,P<0.01).预先加入GSH的各组与模型组(200μmol/LFe-NTa)比较,SOD活力明显升高(5.42±0.58,6.67±0.18,8.75±0.58μkat/Lvs2.25±0.35μkat/L,P<0.01).结论:氧应激促进HSC增殖有剂量和时间依赖性;且可导致脂质过氧化损伤,还原型谷胱甘肽有抗氧化作用,可对抗脂质过氧化损伤.     

Cariporide对糖基化终末产物所致血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察cariporide对糖基化终末产物所致大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法采用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞。用体外制备的外源性糖基化终末产物和平滑肌细胞共孵育24h,加入不同浓度的cariporide(0.1、1.0和10μmol/L)处理。用噻唑蓝比色法所测得的细胞吸光度值及考马斯亮蓝法测得的细胞总蛋白含量来反映细胞增殖情况,利用2,7-二羧乙基-5,6羧基荧光素及钙荧光探针通过荧光分光光度计分别检测细胞内的pH值及Ca2 浓度。结果糖基化终末产物(10mg/L)与平滑肌细胞共孵24h,与正常对照组比较,细胞吸光度值(0.554±0.032比0.155±0.018)和细胞内总蛋白浓度均显著增加(193.3±10.7μmol/L比127.8±8.2μmol/L,P<0.01);cariporide0.1、1.0和10μmol/L使细胞吸光度值从0.554±0.032分别降至0.402±0.028、0.298±0.020、0.174±0.019;细胞内总蛋白浓度也从(193.3±10.7)μmol/L分别降至(180.9±9.8)μmol/L,(156.4±9.4)μmol/L,(130.6±8.8)μmol/L,同时cariporide也明显降低了糖基化终末产物处理后的平滑肌细胞内pH值及Ca2 水平。结论外源性糖基化终末产物能显著刺激平滑肌细胞的增殖;cariporide对糖基化终末产物诱导的平滑肌细胞增殖具有显著抑制作用,其机制可能与cariporide抑制细胞内糖基化终末产物诱导的pH值及Ca2 水平升高有关。     

亚砷酸钠诱导人膀胱上皮永生化细胞氧化损伤作用观察

目的 观察亚砷酸钠(NaAsO2)诱导人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)氧化损伤作用.方法 以不同浓度NaAsO2[0(对照)、1、2、4、8、10μmol/L]对SV-HUC-1细胞染砷24 h,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,采用酶联免疫吸附实验(EHSA法)检测细胞内硝基酪氨酸(NT)含量和细胞培养液中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)水平.结果 1、2、4、8、10 μmol/L染砷组SV-HUC-1细胞ROS水平(81.76±4.91、95.23±2.17、126.61±17.95、126.74±27.77、114.18±9.65)明显高于对照组(69.84±1.28,P＜ 0.05或＜ 0.01),ROS水平与染砷剂量呈显著正相关(r=0.818,P＜ 0.01).10 μmol/L染砷组SV-HUC-1细胞内NT含量[ (919.66±206.33)μg/L]显著高于对照组[(238.19±38.28) μg/L,P＜ 0.01],NT含量与染砷剂量呈显著正相关(r=0.617,P＜0.01).各组细胞培养液中8-OHdG含量比较,差异无统计学意义(F=2.127,P＞0.05).结论 NaAsO2能够引起SV-HUC-1细胞氧化损伤.     

依泽替米贝对血管平滑肌源性荷脂细胞胆固醇蓄积的影响

目的观察依泽替米贝对血管平滑肌源性的荷脂细胞胆固醇蓄积的影响。方法采用20mg/L胆固醇、β-环糊精混合物处理培养的大鼠主动脉平滑肌细胞建立荷脂细胞模型,用不同浓度的依泽替米贝(3、10μmol/L和30μmol/L)处理荷脂细胞24h,随后用30μmol/L的依泽替米贝处理荷脂细胞不同的时间(0、6、12、24h和48h)。通过高效液相色谱仪检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇的含量;油红O染色观察细胞内胆固醇蓄积的情况。结果(1)3、10μmol/L和30μmol/L依泽替米贝处理荷脂细胞后,细胞内总胆固醇含量分别为110.8±3.56、90.5±2.30mg/g和60.9±1.86mg/g,游离胆固醇含量分别为85.5±3.12、74.6±2.89mg/g和53.8±1.56mg/g;与模型组比较,中、高剂量组总胆固醇、游离胆固醇差异均有显著性(P<0.05),随浓度升高,两者都有降低趋势(趋势性χ2检验,P=0.007),且30μmol/L组作用最佳。(2)选择30μmol/L依泽替米贝处理荷脂细胞0、6、12、24h和48h,各时间点细胞内总胆固醇含量分别为120.1±2.37、117.9±3.05、80.3±2.81、69.2±1.56mg/g和72.1±2.98mg/g,随着时间的延长,总胆固醇浓度逐渐降低,两者呈负相关(r=-0.776,P<0.05);游离胆固醇含量分别为92.9±2.11、90.7±3.76、71.4±2.57、60.1±1.21mg/g和64.2±2.48mg/g,随着时间的延长,游离胆固醇浓度逐渐降低,两者呈负相关(r=-0.786,P<0.05);与0h组比较,12、24h和48h组差异均有显著性(P<0.01),并呈时间依赖性,24h组效果最显著。结论依泽替米贝能降低血管平滑肌源性荷脂细胞胆固醇蓄积。     

重症急性胰腺炎患者血浆内皮素-1、一氧化氮的动态变化及前列地尔的干预作用

目的:观察重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)患者血浆内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(nitric oxide,NO)的动态变化及前列地尔对其表达的影响.方法:60例SAP患者,随机分成两组,每组30例,对照组在一般治疗的基础上单用生长抑素治疗,联合组为生长抑素联合前列地尔治疗.在入院即刻、发病12、24、48、72 h、1 wk分别检测两组患者血浆ET-1及NO浓度,并计算ET-1/NO值.结果:两组患者血浆ET-1及NO水平均呈先升高再下降的趋势,12 h时达到高峰后逐渐下降,72 h时仍维持在高水平,1 wk后下降至低于入院即刻水平.入院即刻至发病24 h时两组E T-1及N O水平变化趋势类似(E T-1:入院即刻:97.7 ng/L±14.9 ng/L vs 98.8 ng/L±15.6n g/L;12 h:157.4 n g/L±14.4 n g/L v s 160.3ng/L±15.8 ng/L;24 h:146.0 ng/L±18.8 ng/L v s 146.4 n g/L±19.2 n g/L;N O:入院即刻:29.0μmol/L±4.4μmol/L vs 29.7μmol/L±6.0μmol/L;12 h:40.2μmol/L±3.9μmol/L vs41.2μmol/L±5.5μmol/L;24 h:39.7μmol/L±4.7μmol/L vs 39.7μmol/L±4.6μmol/L;均P0.05),48 h后ET-1水平联合组下降较对照组更明显(48 h:134.1 ng/L±18.5 ng/L vs 128.3 ng/L±17.8 ng/L;72 h:99.5 ng/L±16.6 n g/L v s 109.8 n g/L±17.3 n g/L;1 w k:71.4 n g/L±12.1 n g/L v s 78.8 n g/L±13.3ng/L;均P0.05),而NO水平48 h后对照组较联合组下降更明显(48 h:30.1μmol/L±4.9μmol/L vs 33.8μmol/L±4.1μmol/L;72 h:22.2μmol/L±4.8μmol/L vs 28.0μmol/L±4.2μmol/L;1 wk:17.0μmol/L±3.7μmol/L vs 20.2μmol/L±3.4μmol/L;均P0.05).结论:ET-1、NO是介导SAP微循环障碍的重要因素,前列地尔能改善胰腺微循环,可能是通过影响ET-1、NO的表达起作用.     

亚砷酸钠对人类黑色素瘤G361细胞系酪氨酸酶mRNA表达的影响

目的 研究亚砷酸钠(NaAsO2)对人类黑色素瘤G361细胞系酪氨酸酶(TYR)mRNA表达的影响.方法 将体外培养的G361细胞分别暴露于短时(12、24、48 h)低剂量(0.1、1.0μmol/L)、短时(3、6、12、24、48 h)高剂量(5.0、10.0μmol/L)及长时(8、16周)低剂量(0.1μmol/L)下,以荧光实时定量PCR方法测定细胞TYR mRNA表达水平.结果 染毒剂量较低(0.1、1.0μmol/L)、作用时间较短(12、24、48 h)时,黑色素瘤G361细胞TYRmRNA表达水平同一时段各剂量组问比较差异无统计学意义(F值分别为0.173、0.687、2.869,P＞0.05).染毒剂量较高(5.0、10.0μmol/L)、作用12、24、48 h时,细胞TYR mRNA表达水平同一时段各剂量组间比较差异有统计学意义(F值分别为81.056、7.616、24.132,P＜0.05或＜0.01);其中,与对照组比较,除5.0、10.0μmol/L组3、6 h及5.0μmol/L组12 h外,其余各组TYR mRNA相对表达水平比同一时段的对照组明显降低(P＜0.05),0.1μmol/L组染毒8周时细胞TYR mRNA表达水平(138.71±4.56)明显高于对照组(100.00±8.06),两组比较差异有统计学意义(t=-7.238,P＜0.01).结论 NaAsO2暴露可通过引起色素代谢关键酶TYR mRNA表达水平改变而影响色素代谢过程.     

谷胱甘肽转移酶μ基因缺失和氧化损伤与系统性红斑狼疮相关性研究

目的　检测系统性红斑狼疮 (SLE)患者谷胱甘肽转移酶 μ(GSTμ)基因缺失及血中一氧化氮 (NO)、脂质过氧化物 (LPO)、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和谷胱甘肽 (GSH)含量 ,分析其与SLE发病之间的关系。方法　用PCR法检测 87例SLE患者和 40名健康对照组的GSTμ基因 ,用化学分析法测上述 5项指标。 结果　SLE患者GSTμ基因缺失率达 6 9 0 % ,明显高于对照组的 47 5 %。SLE活动期NO(79± 18) μmol/L、LPO (10 4± 2 0 ) μmol/L明显高于稳定期和对照组的水平。SLE活动期SOD (12 86± 2 5 2 ) μU/L、GSH Px (78± 14)U/mg、GSH (0 37±0 0 5 )mg/ g明显低于稳定期及对照组水平。在SLE稳定期GSH (1 0 0± 0 14)mg/ g ,仍明显低于对照组水平。血清NO水平与LPO呈显著直线正相关 ,与SOD、GSH Px、GSH呈显著直线负相关。抗dsDNA与NO、LPO呈显著直线正相关。在SLE活动期 ,GSTμ基因缺失者LPO (11 4± 2 2 ) μmol/L明显高于GSTμ基因携带者的水平 ,SOD (1111± 2 18) μU/L、GSH Px (6 7± 14)U/mg、GSH (0 2 4±0 0 4)mg/g明显低于GSTμ基因携带者的水平。在SLE稳定期GSTμ基因缺失者的SOD和GSH水平仍低于GSTμ基因携带者。 结论　GSTμ基因缺失可能是SLE发病的遗传因素之一 ,SLE     

波动性高糖与持续性高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激的影响

目的比较不同浓度波动性高糖与持续性高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激的影响。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞,取生长良好的对数期细胞用于实验,换用不同条件培养液,分7组进行试验。（1）5．5mmol／L葡萄糖对照组（N组）;（2）25mmol／L持续高糖组（H．组）;（3）33mmol／L持续高糖组（H2组）;（4）5．5／25mmol／L波动葡萄糖组（F．组）;（5）5．5／33mmol／L波动葡萄糖组（F2组）;（6）25mmol／L渗透压对照组（P,组）;（7）33mmol／L渗透压对照组（P2组）。培养72h后以分光光度比色法检测总过氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量。采用单因素方差分析法进行统计学分析。结果（1）SOD活性：与N组[（32．1±5．0）mU／L1比较,H1、H2组和F1、F2组作用于人视网膜色素上皮细胞72h后降低,分别为（19．9±2．4）、（20．5±1．7）、（12．8±2．5）、（10．9±1．7）mU／L,差异有统计学意义（F=31．56,均P〈0．01）,且以F1、F2组下降幅度更为显著;（2）GSH含量：与N组[（135±18）mg／L]比较,H1、H2组和F1、F2组降低,分别为（97±6）、（92±7）、（70±7）、（71±7）mg／L,差异有统计学意义（F=36．368,均P〈0．01）,且以F1、F2组下降幅度更为显著;（3）MDA含量：与N组[（3．3±0．9）mmol／L]比较,H1、H2组和F1、F2组升高,分别为（13．0±2．0）、（11．2±3．3）、（17．0±1．4）、（19．5±0．5）mmol／L,差异有统计学意义（F=75．642,均P〈0．01）,且以F1、F2组升高幅度更为显著;（4）波动性高糖组与持续性高糖组相比,SOD活性降低,GSH表达量下降,MDA含量均升高,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论波动性高糖较持续性高糖对人视网膜色素上皮细胞有更强的氧化损伤效应。     

AMP-活化蛋白激酶对氧葡萄糖剥夺复氧PC12细胞HMGB1释放及其介导的BY2细胞炎性反应的影响

目的 探讨调节AMP-活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)对PCl2细胞氧葡萄糖剥夺复氧(oxygen glucose deprivation and reoxygenation,OGD/R)后高迁移率族蛋白l(high mobility group box l,HMGB1)释放及其介导的BV2细胞炎性反应的影响.方法 分别培养PCl2和BV2细胞,应用PCl2细胞建立氧葡萄糖剥夺12 h复氧24 h模型,分别给予5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(5-aminoimidazole-4-c arboxamide,AICAR)5、50和100 μmol/L以及Compound C 0.1、l和10 μmol/L激活或抑制AMPK磷酸化后,应用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测PC12细胞活性,酶联免疫吸附法检测PC12细胞培养基中HMGB1释放水平.将各组OGD/R后PC12培养基分别作用于BV2细胞正常培养24 h.分别采用免疫印迹法和酶联免疫吸附法检测BV2细胞中NF-κB抑制蛋白(inh~itor of NF-κB,IκB)磷酸化水平和TNF-α释放水平.结果 OGD/R后,PC12细胞活性显著降低[(68.84 ±6.60)％对(100.04±8.82)％;P＜0.01],AMPK磷酸化水平显著增高(1.95±0.39对1.00±0.20;P＜0.05),细胞外HMGB1释放显著增多[(287.66±26.42) pg/μl对(53.05±9.11) pg/μl;P ＜0.01].与OGD/R组比较,AICAR 100 μmol/L能显著增高OGD/R后PC12细胞存活率[(78.60±3.75)％对(68.84±6.60)％;P＜0.05]、促进AMPK磷酸化(3.32±0.66对1.95 ±0.39;P＜ 0.01)和减少细胞外HMGB1的释放[(164.06±12.77) pg/μl对(287.66±26.42) pg/μl;P＜0.01].相比之下,Compound C 10 μmol/L则会显著降低PC12细胞存活率[(40.44±3.79)％对(68.84±6.60)％;P＜0.01]、抑制AMPK磷酸化(1.07±0.21对1.95±0.39;P＜0.05)和增加HMGB1的释放[(337.97±18.90) pg/μl对(287.66±26.42) pg/μl;P＜0.01].AICAR 100 μmol/L组条件培养基能显著抑制BV2细胞的IκB磷酸化(1.68±0.51对3.09±0.10;P＜0.05)和减少TNF-α释放[(669.53±38.58) pg/μl对(841.76±45.82) pg/μ1;P＜0.05];Compound C 10 μmol/L组条件培养基则能显著促进BV2细胞IκB磷酸化(4.98±1.24对3.09 ±0.10;P ＜0.01)和增加TNF-α释放[(1 035.32±128.06) pg/μl对(841.76±45.82) pg/μl;P＜0.05].结论 促进AMPK磷酸化激活能减少PC12细胞OGD/R后HMGB1的释放、抑制其介导的BV2细胞NF-κB炎症通路激活并且减少TNF-α释放,从而减轻神经炎性损伤;相反,抑制AMPK磷酸化则会促进PC12细胞OGD/R后HMGB1释放和加重其介导的BV2细胞炎性反应.     

老年人不同甲状腺功能状态下脂代谢特征与氧化应激的关系

目的 探讨老年人不同甲状腺功能状态下脂代谢特征与氧化应激的关系.方法 初诊老年甲状腺疾病患者86例[甲状腺功能亢进(甲亢)47例,甲状腺功能减退(甲减)39例]、非老年甲状腺疾病患者83例(甲亢43例,甲减40例)和老年健康对照组20例.检测空腹血浆丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD),氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)水平,同时测定血脂指标及甲状腺功能,计算SOD/MDA比值.结果 老年甲亢组血脂各组分均高于非老年甲亢组、低于老年对照组(P＜0.05或P＜0.01);老年甲亢组与非老年甲亢组、老年对照组比较,丙二醛[分别为(10.23±6.29)、(7.37±4.58)μmol/L和(3.66±2.53)μmol/L]、游离脂肪酸(FFA)[分别为(0.86±0.58)、(0.61±0.46)mmol/L和(0.45士0.12)mmol/L]和SOD显著升高(P＜0.01或P＜0.05).老年甲减组与非老年甲减组和老年对照组比较,MDA[(9.03±5.98)、(6.59±3.18)μmol/L和(3.66±2.53)μmol/L]、OX-LDL[(387.36±71.04)、(355.22±45.01)μg/L和(324.53±56.19)μg/L]及部分血脂组分均显著增高(P＜0.05或P＜O.01).老年甲亢组、甲减组SOD/MDA比值均低于老年对照组和非老年组(均为P＜0.01).多元回归分析,甲亢组游离甲状腺素(FT4)和FFA是影响MDA的因素,甲减组非HDL-C和LDL-C与MDA独立相关.结论 初诊老年甲亢和甲减患者氧化应激增强,氧化损伤程度与脂代谢紊乱有关.     

七叶皂苷钠抑制人甲状腺未分化癌HTh74细胞株增殖作用的研究

目的 研究七叶皂苷钠对人甲状腺未分化癌HTh74细胞株增殖的潜在抑制作用及其分子机制.方法 以不同浓度的七叶皂苷钠(0,20,40,60,80 μmol/L)处理HTh74细胞48 h后,观察细胞形态变化;以不同浓度的七叶皂苷钠(0,20,40,60,80 μmol/L)处理HTh74细胞24h、48 h和72 h后,噻唑蓝比色(MTT)法检测七叶皂苷钠对HTh74细胞株增殖的抑制效应并计算细胞增殖率及半数抑制率(IC50);以不同浓度的七叶皂苷钠(0,5,10,15,20,25 μmol/L)处理HTh74细胞48 h后,Western印迹检测七叶皂苷钠引起的蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)以及细胞周期相关蛋白的表达.结果 七叶皂苷钠作用后,细胞发生明显皱缩,且作用浓度越高细胞皱缩越明显;MTT法结果显示,七叶皂苷钠对HTh74细胞有显著的生长抑制作用,呈现典型的时间与剂量依赖性,80 μmol/L七叶皂苷钠作用24 h,对细胞的生长抑制作用有统计学意义(F=111.4,P＜0.01),而40 μmol/L作用48 h及72 h时,细胞生长均受到抑制(F=543.6,722.1,P＜0.01),并且48 h的IC50为69.4μmol/L,72 h的IC50为32.5μmol/L;七叶皂苷钠作用48 h后Akt、p-Akt和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2的表达显著降低,并呈现剂量依赖效应.与未经处理的细胞相比,低浓度(5 μmol/L和10 μmol/L)七叶皂苷钠处理时Akt和p-Akt的表达水平已开始降低(F=613.9,P＜0.05),而从15 μmol/L开始,CDK2表达的降低有统计学意义(F=208.9,208.3,P＜0.05).CDK1、CDK6、细胞周期蛋白D以及细胞周期蛋白E的表达在各处理组间差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 七叶皂苷钠可抑制人甲状腺未分化癌HTh74细胞的增殖,可能是通过调节Akt、p-Akt以及CDK2等蛋白的表达实现的.     

老年人血尿酸水平与氧化应激能力的关系

目的 探讨老年人血尿酸水平与氧化应激能力的关系.方法 收集60～83岁老年人118例,根据血尿酸水平分为3组,正常对照组血尿酸为142～416 μmol/L,高尿酸Ⅰ组为417～470μmol/L,高尿酸Ⅱ组为＞470μmol/L.检测血清黄嘌呤氧化酶(XO)活力、总抗氧化能力(TAOC)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活力和血清过氧化氢(H2O2)水平等氧化应激指标,多元回归分析氧化应激指标与血尿酸、年龄、血脂等因素的关系.结果 (1)对照组、高尿酸血症Ⅰ和Ⅱ组TAOC分别为(8.40±2.09)、(8.13±1.92)U/ml和(7.95±1.54)U/ml,SOD活性分别为(80.57±15.44)、(81.37±11.92)U/ml和(87.45±11.aS)U/ml,组问比较差异均无统计学意义;高尿酸血症Ⅰ和Ⅱ组的XO活力分别为(7.81±1.84)U/ml和(9.17±1.68)U/ml,较对照组的(9.32±1.87)U/ml显著增高(均为P＜0.05);血H202水平3组分别为(122.5±33.8)、(149.5±25.7)μmol/L和(150.7士23.1)μmol/L,组间比较差异有统计学意义(均为P＜0.05).(2)多元逐步回归分析显示,年龄、三酰甘油和血尿酸与TAOC呈负相关,血尿酸水平与XO活性呈正相关,年龄、血尿酸与H2O2水平呈正相关(均为P＜0.05).结论 血尿酸水平升高的老年人群中,存在与XO活性相关的氧化应激.     

吡格列酮联合胰高血糖素样肽-1治疗对db/db糖尿病小鼠胰岛β细胞的影响

目的 评价胰高血糖素样肽类似物利拉鲁肽与胰岛素增敏剂吡格列酮联合治疗db/db小鼠糖尿病的效果.方法 35只8周龄,体重(35.3±2.5)g的雄性db/db小鼠分为(1)对照组(n=8):给予生理盐水0.1 ml,2次/d;(2)吡格列酮组(n=9):给予吡格列酮(饲料中含0.02%吡格列酮)+生理盐水0.1 ml,2次/d;(3)利拉鲁肽组(n=9):给予利拉鲁肽300 mg/kg,2次/d;(4)联合治疗组(n=9):给予吡格列酮(饲料中含0.02%吡格列酮)+利拉鲁肽300mg/kg,2次/d.利拉鲁肽用灭菌生理盐水稀释后皮下注射,每天8:00和16:00给药,持续4周.行腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(ITT),评价胰岛β细胞的增殖.采用单因素方差分析进行数据统计分析.结果 干预4周后,联合治疗组糖化血红蛋白(4.5±0.6)%,糖耐量试验血糖曲线下面积(1814±91)mmol·min·L-1,游离脂肪酸(202.0±20.4)μmol/L,TG(0.81±0.28)mmol/L均明显低于对照组[(7.3±0.4)%,(4042±183)mmol·min·L-1,(272.5±21.7)μmol/L,(1.35±0.21)mmol/L],P值均＜0.05;胰岛素曲线下面积(1639±372)μg·min·L-1,脂联素(16.7±2.0)mg/L,胰岛组织切片胰岛素阳性面积(59.5±1.5)%和胰岛新生β细胞比例(2.4±0.5)%均显著高于对照组[(834±201)μg·min·L-1,(10.2±1.8)mg/L,(22.4±1.5)%和(0.8±0.3)%],P值均＜0.05.且联合治疗组上述指标均低于或高于单药治疗组.联合治疗显著改善胰岛β细胞和α细胞分布,恢复正常的胰岛形态.结论 吡格列酮联合利拉鲁肽治疗相比单药更好地改善db/db小鼠糖脂代谢,保护胰岛β细胞功能并促进其增殖.

Abstract：

ObjectivesTo evaluate the effect of combination of liraglutide,a glucagon-like peptide-1 analogue and pioglitazone,an insulin sensitizer,on diabetic db/db mice.Methods Thirty-five 8-week old male db/db mice were divided into control group (n = 8 ),pioglitazone group (n =9 ),liraglutide group (n =9) and combined therapeutic group (n =9),which was given normal saline 0.1 ml,2/d,pioglitazone 24 mg· kg-1 · d-1 (feed contained 0.02％ pioglitazone) + normal saline 0.1 ml,2/d,liraglutide 300 mg/kg,2/d,and pioglitazone 20 mg · kg-1 · d -1 ( feed contained 0.02％ pioglitazone) +liraglutide 300 mg/kg,2/d,respectively.Liraglutide were given at 8:00 and 16:00 via subcutaneous injection after having been diluted with sterilized normal saline.Effect on glucose,lipid metabolism and islet β-cell preservation were assessed after 4 weeks.Oneway ANOVA was adopted for statistical analysis.Results Combination therapy displayed promising anti-hyperglycemic[glycosylated hemoglobin Alc: (4.5 ± 0.6)％vs.(7.3 ±0.4)％,P ＜ 0.001].Glucose tolerance were improved assessed by area under curve(AUC) of glucose by intraperitoneal glucose tolerance test (IPGTT)[(1814 ±91 ) mmol · min · L-1 vs.(4042 ±183) mmol · min · L-1,P ＜0.001];insulin release response to glucose were also preserved as AUC of insulin by IPGTT was higher[( 1639 ±372) μg · min · L-1 vs.(834 ±201 )μg · min · L-1].Combination therapy also reduced circulated free fatty acids and TG[( 202.0 ± 20.4 ) μmol/L vs.( 272.5 ± 21.7 )μmol/L,(0.81 ± 0.28) mmol/L vs.( 1.35 ± 0.21 ) mmol/L],and increased plasma adiponectin [(16.7±2.0)mg/L vs.(10.2±1.8)mg/L].All P value ＜0.05.Islet immunohistochemistry showed that combination therapy significantly increased insulin positive area were[( 59.5 ± 1.5 ) ％ vs.( 22.4 ±1.5) ％]and ratio of Brdu positive β-cells was three folds than vehicle-treated mice[( 2.4 ± 0.5 ) ％ vs.(0.8 ±0.3)％],both greater than each single treatment.Combined therapy significantly improved islet β cell/α cell distribution,which led to islet recovery.Conclusions Combined therapy improves glucose and lipid metabolism,preserves islet β-cell function and stimulates β-cell proliferation,greater than either liraglutide or pioglitazone treatment alone.     

生长抑素及质子泵抑制剂对大鼠胰腺腺泡细胞慢活化电压依赖性钾离子通道的影响

目的 通过检测慢活化电压依赖性外向钾离子通道电流(Iks)的变化,探讨生长抑素及质子泵抑制剂(PPI)对胰腺腺泡细胞慢活化电压依赖性钾离子通道及胰腺外分泌的影响.方法 分离SD大鼠胰腺组织,取得胰腺腺泡细胞悬液,用EPC10膜片钳放大器记录电压钳制下的不同组别胰腺腺泡细胞Iks的电流值并比较其间差异.分组如下:冲洗液处理为对照组,5μmol/L和20μmol/L 293B组,5 nmol/L促胰液素组,5 nmol/L促胰液素+100 nmol/L或10 nmol/L或1 nmol/L生长抑素组,0.3 mmol/L 8溴—环单磷酸腺苷(8Br-cAMP)组,0.3 mmol/L 8Br-cAMP+100 nmol/L生长抑素组,1 μmol/L乙酰胆碱(Ach)组,1μmol/L Ach+100 nmol/L生长抑素组,5 nmol/L促胰液素+10-5mol/L或10-6mol/L或10-7mol/L奥美拉唑组,1μmol/L Ach+10-5 mol/L或10-6 mol/L或10-7 mol/L奥美拉唑组.组间比较采用单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 大鼠胰腺腺泡细胞静息膜电位为(-40±0.8)mV,当去极化至+10 mV时,对照组的Iks为(420.0±3.2) pA.经5 μmol/L和20 μmol/L 293B作用后,大鼠胰腺腺泡细胞Iks减少为对照组的(60.4±4.2)％和(30.2±3.1)％(F=6.87,P＜0.05).5 nmol/L促胰液素刺激后,Iks增加为(823.0±2.2)pA,分别加入100 nmol/L、10 nmol/L和1 nmol/L生长抑素,Iks降低至(510.0±3.2)pA,(584.0±2.8)pA和(789.0±6.9)pA(F=5.67,P＜0.05);分别加入10-5 mol/L、10-6 mol/L和10-7mol/L奥美拉唑后,Iks峰值未见明显变化,分别为(806.5±3.6)pA,(814.8±3.2) pA和(816.3±2.9) pA (P＞0.05).1 μmol/L Ach刺激后,Iks的峰值为(966.0±3.2) pA;加入100 nmol/L生长抑素后,Iks峰值为(942.0±6.3)pA;分别加入10-5 mol/L,10-6 mol/L和10-7 mol/L奥美拉唑后,其Iks峰值未见明显变化,分别为(956.3±10.3) pA,(957.5±8.6)pA和(960.0±8.4)pA (P＞0.05).结论 生长抑素能抑制胰腺腺泡细胞慢活化电压依赖性钾离子通道的开放,PPI对该通道没有明显抑制作用.     

缬沙坦联合氨氯地平或氢氯噻嗪对老年高血压患者血压变异性的影响

目的 比较缬沙坦联合氨氯地平或氢氯噻嗪对老年高血压患者血压变异性及一氧化氮、内皮素的影响.方法选取61例2、3级老年高血压患者,随机分为两组,分别给予缬沙坦+氨氯地平或缬沙坦+氢氯噻嗪行降压治疗,观察入选时、治疗第8周和第16周各种相关指示的变化.人选时检测血脂、空腹血糖、血尿酸,试验各个阶段监测24 h动态血压,检测血浆一氧化氮、内皮素水平.结果在患者入选时、治疗第8周和第16周三个时间点,缬沙坦+氨氯地平组和缬沙坦+氢氯噻嗪组24 h血压及白昼血压比较差异无统计学意义.治疗第16周,缬沙坦+氨氯地平组晨峰收缩压较缬沙坦+氢氯嚷嗪组明显降低[(22.6±8.8)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)比(26.3±13.7)mm Hg,P＜0.05];缬沙坦+氨氯地平组及缬沙坦+氢氯噻嗪组24 h收缩压变异性(SBPV)进行性降低[缬沙坦+氨氯地平组:(12.5±2.8)mm Hg比(10.2 ±2.2)mm Hg比(8.8±1.6)mm Hg,P＜0.01;缬沙坦±氢氯噻嗪组:(12.5±2.5)mmHg比(10.7±2.2)mm Hg比(9.6±2.0)mmHg,P＜0.01],缬沙坦+氨氯地平组及缬沙坦+氢氯噻嗪组白昼SBPV明显降低[缬沙坦+氨氯地平组:(12.2±3.0)mm Hg比(10.1±2.3)mm Hg比(8.4±1.9)mm Hg,P＜0.01;缬沙坦+氢氯噻嗪组:(11.8±2.7)mm Hg比(10.4±1.9)mm Hg比(9.6±2.2)mm Hg,P＜0.01],缬沙坦+氨氯地平组24 h舒张压变异性(DBPV)显著降低[(15.5±3.4)mm Hg比(13.0±3.5)mm Hg比(12.3±2.5)mm Hg,P＜0.01],缬沙坦+氢氯噻嗪组24 h DBPV无显著性变化;缬沙坦+氨氯地平组第16周白昼SBPV低于缬沙坦+氢氯噻嗪组[(8.4±1.9)mm Hg比(9.6 ±2.2)mm Hg,p＜0.05],缬沙坦+氨氯地平第8周、第16周的24 h DBPV、白昼DBPV低于缬沙坦+氢氯噻嗪组(P ＜0.01～0.05);缬沙坦+氨氯地平组一氧化氮进行性升高[(27.3±13.6)μmol/L比(47.2±16.3)μmol/L比(69.5±18.9)μmol/L,P＜0.01]、内皮素进行性降低[(45.3±8.0)ng/L比(37.4±3.9)ng/L比(34.2±4.4)ng/L,P＜0.01];缬沙坦+氢氯噻嗪组一氧化氮进行性升高[(33.5±13.9)μmol/L 比(49.7±21.9)μmol/L比(66.7 ±24.7)μmol/L,P＜0.01]、内皮素显著降低[(46.6±10.4)ng/L比(37.0±5.4)ng/L比(36.1±8.2)ng/L,P＜0.01].治疗第8周,缬沙坦+氨氯地平组收缩压变异性的降幅与一氧化氮的升幅有相关性(r =0.401,P=0.025).结论缬沙坦联合氨氯地平或氢氯噻嗪均能降低老年高血压患者血压变异性、改善血管内皮功能,缬沙坦联合氨氯地平可能更适合于老年高血压患者.     

碘铁联合缺乏对大鼠血脂水平的影响

目的 通过控制碘、铁摄入量,造成缺铁、缺碘模型,研究碘、铁缺乏对大鼠血脂水平的影响.方法 将Sprauge-Dawley (SD)雄性大鼠随机分为4组:正常对照组(N组,饲料碘含量362.0 μg/kg,铁含量93.3 mg/kg),碘缺乏组(ID组,饲料碘含量61.4 μg/kg,铁含量93.3 mg/kg),铁缺乏...