绿脓杆菌制剂抑制肝细胞肝癌生长转移的实验研究

目的 观察绿脓杆菌制剂对裸鼠肝癌生长和转移的抑制作用.方法 将具有肺转移潜能的人MHCC97L肝癌组织块种植于BALB/c nu/nu雄性裸鼠肝脏,建立转移性人肝癌裸鼠原位模型.荷瘤裸鼠随机分为对照组、绿脓杆菌制剂腹腔注射组及皮下注射组.各组均于种植后第3天开始用药,于种植后第6周末处死动物,HE染色观察肿瘤组织坏死情况,荧光Tunel法检测肿瘤组织细胞凋亡情况,测量肿瘤体积,计算抑瘤率、肺转移灶数目及肺转移率.结果 对照组、绿脓杆菌制剂皮下注射组和腹腔注射组肿瘤体积分别为(3.12±0.85)cm~3、(1.90±0.87)cm~3(P>0.05)和(0.79±0.36)cm~3(P<0.05),肺转移率分别为66.7%、66.7%(P>0.05)和0(P<0.01),平均肺转移灶数目分别为2.40±1.85,1.2±0.75(P<0.05)和0(P<0.01),凋亡指数分别为(1.4±0.37)%、(4.1±1.7)%(P<0.05)和(10.3±0.40)%(P<0.01).与对照组比较,绿脓杆菌制剂皮下注射组和腹腔注射组的抑瘤率分别为39.1%和74.7%,腹腔注射组肿瘤组织坏死明显.结论 绿脓杆菌制剂腹腔注射可明显促进肝癌组织坏死及凋亡并抑制其生长和转移.     

自身免疫性前列腺炎大鼠阴茎勃起功能变化的实验研究

目的探讨实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)大鼠的阴茎勃起功能变化及EAP导致阴茎勃起功能障碍(ED)可能的发生机制。方法 SPF级雄性SD大鼠30只,随机分为实验组(n=10)和对照组(n=10),另外10只大鼠用于制备前列腺组织蛋白提纯液。实验组采用多点皮下注射前列腺组织蛋白提纯液和弗氏完全佐剂混合物(1ml),构建大鼠EAP模型,而对照组在相应部位皮下注射等体积的生理盐水。第35天测定大鼠最大阴茎海绵体压力(MaxICP)及颈动脉压力,处死后采集组织标本。检测2组大鼠前列腺组织TNF-α及IL-1β水平,测定2组大鼠阴茎组织中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平、凋亡因子Fas及FasL蛋白的表达水平。对阴茎组织进行荧光TUNEL和Masson染色。结果实验组与对照组大鼠阴茎MaxICP分别为(62.71±2.126) mm Hg、(96.56±2.25) mm Hg;实验组大鼠血清TNF-α及IL-1β水平分别为(17.75±1.96) pg/ml、(225.8±61.04) pg/ml,对照组分别为(11.83±1.94) pg/ml、(88.71±8.15) pg/ml;实验组大鼠阴茎组织中SOD、MDA水平分别为(98.36±3.795) U/mg、(1.381±0.167) nmol/mg,对照组分别为(118.2±3.275)U/mg、(0.9412±0.096) nmol/mg;实验组大鼠阴茎组织中Fas及FasL蛋白表达水平分别为(0.353±0.076)、(0.334±0.028),对照组分别为(0.107±0.013)、(0.201±0.023);实验组、对照组的凋亡指数分别为15.93%、4.74%,大鼠阴茎海绵体平滑肌与胶原面积比值分别为8.28%、24.11%。上述指标两组差异均有统计学意义。结论 EAP大鼠血清中炎症因子升高、阴茎组织氧化应激加剧、凋亡增加、平滑肌与胶原面积比值下降,阴茎ICP下降,这些因素可能共同导致阴茎组织结构与功能受损,进而引起ED。     

慢性前列腺炎患者EPS中IL-2、IL-10和TNF-α的表达的临床意义

目的 探讨慢性前列腺炎患者前列腺液中TNF-α、IL-10和IL-2的表达在慢性前列腺炎中发病的作用,评估这些细胞因子的变化与慢性前列腺炎分类、症状和前列腺液白细胞计数的关系.方法 通过尿常规、前列腺液常规检查、两杯法尿液细菌培养和NIH-CPSI评分,将58例前列腺炎患者按NIH前列腺炎诊断标准进行分型.采用双抗体夹心ELISA法检测患者及12例正常对照组前列腺液中的IL-2、TNF-α、IL-10的含量.用SPSS for Windows 12.0统计软件对测革数据进行统计学分析.结果 对照组、Ⅱ型、Ⅲ a型及Ⅲ b型CPPS患者EPS中TNF-αQ水平分别为(17.8±9.2)pg/ml、(91.5±34.8)pg/ml、(74.9±35.1)pg/ml、(23.9±12.9)pg/ml,IL-10水平分别为(234.9±56.6)pg/ml、(392.7±62.4)pg/ml、(364.1±77.1)pg/ml、(300.4±80.2)pg/ml,IL-2水平分别为(311.4±67.5)pg/ml、(247.7±96.1)pg/ml、(278.2±77.6)pg/ml、(299.7±78.6)pg/ml.Ⅱ型、Ⅲ a型患者EPS中TNF-α和IL-10水平与对照组及Ⅲ b犁比较差异均有统计学意义(P＜0.05),各型CP患者EPS中IL-2水平均低于对照组,但Ⅱ型与对照组比较差别有统计学意义(P＜0.05).TNF-a含量和白细胞计数呈正相关性(r=0.772,P＜0.01),而IL-10含量与患者疼痛评分呈正相关(r=0.549,P＜0.01).结论 慢性前列腺炎患者EPS中TNF-α、IL-10和IL-2表达变化,提示它们参与了前列腺的炎症反应.TNF-α、IL-10有可能成为CP诊断分型的一个依据,而IL-10水平有可能作为患者疗效评估的一个指标.     

游泳运动与药物综合治疗对慢性非细菌性前列腺炎大鼠TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响

目的:观察游泳运动与药物综合治疗对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响。方法:成年雄性健康SD大鼠40只,随机分为正常对照组、CAP模型对照组、药物治疗组、运动治疗组及运动与药物综合治疗组,每组8只。注射消痔灵制备CAP大鼠模型,造模期7 d后药物治疗组和综合治疗组每天给予前列舒通胶囊水溶液(0.016 g/ml)灌胃治疗(剂量为20 ml/kg);运动治疗组和综合治疗组每天于固定时间进行1次游泳运动,第1天35 min/次,每天递增5 min,直至50 min/次,每周6 d,持续4周;正常对照组、CAP模型对照组及运动治疗组给予无菌生理盐水灌胃(剂量同上)。于治疗过程中的第14、28天分别处死各组大鼠4只,并提取前列腺,观察组织病理学改变,制作组织匀浆;采用ELISA法检测组织匀浆内TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。结果:第14天时,正常对照组、CAP模型对照组、药物治疗组、运动治疗组及综合治疗组大鼠前列腺组织匀浆内TNF-α水平依次为(20.36±1.82)、(183.08±8.07)、(118.49±8.06)、(169.63±10.64)、(107.82±7.81)pg/ml,IL-1β依次为(14.64±1.91)、(57.55±3.53)、(42.64±4.64)、(50.45±5.71)、(40.35±6.93)pg/ml,IL-6依次为(70.58±2.09)、(256.15±13.95)、(200.74±9.33)、(245.23±6.49)、(187.04±10.85)ng/L,后面4组的TNF-α、IL-1β和IL-6水平均明显高于正常对照组(P0.05);第28天时,综合治疗组的TNF-α、IL-1β、IL-6水平依次为(29.30±3.78)pg/ml、(16.91±1.24)pg/ml、(88.65±6.74)ng/L,药物治疗组依次为(39.67±3.19)pg/ml、(26.27±3.49)pg/ml、(110.26±6.33)ng/L,综合治疗组的TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著低于药物治疗组(P0.05),并逐渐接近正常对照组[依次为(19.34±1.76)pg/ml、(13.68±1.06)pg/ml、(71.34±2.50)ng/L]水平。在治疗过程的14~28 d,正常对照组大鼠的前列腺病理学检查未见明显变化;模型对照组大鼠前列腺组织表现为明显的慢性炎症的病理变化;各治疗组大鼠前列腺慢性炎症改变均有不同程度缓解,其中综合治疗组的慢性炎症明显减轻。结论:游泳运动能够降低CAP大鼠炎症程度,与药物并用综合治疗可有效降低CAP大鼠TNF-α、IL-1β和IL-6水平,并改善组织学损伤。     

CO2气腹对荷瘤大鼠IL-1β、IL-6和腹膜巨噬细胞功能的影响

目的采用种植性大鼠肝脏肿瘤模型观察CO2气腹对细胞因子和腹膜巨噬细胞功能的影响.方法荷瘤大鼠32只随机分为4组(n=8)对照组(仅麻醉)、开腹组、免气腹组和CO2气腹组.术后2、24 h收集血清,检测血清中的IL-1β、IL-6水平;术后48 h,收集培养腹膜巨噬细胞,检测巨噬细胞产生的TNF-α水平.结果术后2、24 h开腹组IL-6的水平分别为(57.92±2.06)pg/ml,(35.49±1.15)pg/ml,显著高于CO2气腹组(14.64±0.34)pg/ml,(15.39±0.86)pg/ml,免气腹组(24.75±1.53)pg/ml,(17.10±0.97)pg/ml和对照组(17.75±1.60)pg/ml,(14.55±0.25)pg/ml(P＜0.05).术后2 h开腹组IL-1β的水平为(92.63±4.81)pg/ml,显著高于CO2气腹组(57.94±4.46)pg/ml、免气腹组(58.48±3.20)pg/ml和对照组(58.99±2.30)pg/ml(P＜0.05).CO2气腹组腹膜巨噬细胞产生的TNF-α水平为(35.69±3.54)pg/ml,显著低于免气腹组(68.87±4.08)pg/ml、开腹组(82.96±5.39)pg/ml和对照组(66.45±7.96)pg/ml(P＜0.05).结论腹腔镜术后机体应激反应较小,CO2气腹可能抑制腹膜巨噬细胞的功能.     

内毒素血症时小肠黏膜损害的实验研究

目的观察大鼠内毒素血症早期枯否细胞(KC)在小肠黏膜损害中的作用及氯化钆(GdCl3)阻断KC功能后对肠道完整性的影响。方法将大鼠分为3组。A组:单纯注入内毒素;B组注入内毒素之前24h先经静脉注入GdCl3;C组:假手术对照组。注射内毒素后4h处死大鼠,取材并收集胆汁。光镜下观察回肠黏膜的形态学变化。分离大鼠的KC,用RT-PCR检测KC中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)mRNA的表达。采用ELISA检测胆汁和血浆中TNF-α和IL-6水平的变化。结果A组回肠黏膜绒毛上皮表浅坏死,伴中性粒细胞浸润以及上皮脱落;B组回肠黏膜损害明显减少;C组回肠黏膜的形态学无改变。A组KC表达TNF-α和IL-6mRNA显著;B组表达明显减少;C组表达不明显。A组胆汁中TNF-α和IL-6的水平分别为(1032±107)pg/ml和(1185±127pg/ml,血浆中TNF-α和IL-6的水平分别为(207±29)pg/ml和(213±33)pg/ml,显著高于B组犤(521±76)pg/ml和(572±54)pg/ml,(113±18)pg/ml和(147±22)pg/ml犦及C组犤(72±13)pg/ml和(118±22)pg/ml,(67±10)pg/ml和(109±18)pg/ml犦(P均<0.05)。结论内毒素血症早期K释放的TNF-α和IL-6在回肠黏膜损害的启动和进程中可能起重要作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞对细菌性前列腺炎抑制作用的研究

目的 :研究外源性骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大肠埃希菌致大鼠前列腺炎的抑制作用。方法:贴壁选择法分离、培养、扩增BMSCs。将SD大鼠50只随机分为急性细菌性前列腺炎(ABP)组、ABP+BMSCs组、慢性细菌性前列腺炎(CBP)组、CBP+BMSCs组和正常对照组,每组10只。在小动物超声引导下向大鼠前列腺两侧叶内注射大肠埃希菌建立前列腺炎症模型,注入细菌1~14 d为急性炎症期,4~12周为慢性炎症期,对照组注入等量PBS。然后将BMSCs注入ABP+BMSCs组和CBP+BMSCs组大鼠前列腺内,观察移植BMSCs2周后大鼠前列腺病理学变化并做炎症评分,RT-PCR扩增前列腺组织中炎症因子IL-1β、TNF-αmRNA,ELISA检测IL-1β、TNF-α蛋白含量,统计分析各组表达差异。结果:前列腺组织病理学提示炎症组前列腺组织呈典型炎症病理变化,腺管结构改变,间质水肿,炎细胞浸润,纤维组织增生,而BMSCs治疗组大鼠前列腺炎症明显减轻。PCR和ELISA分析显示ABP组IL-1βmRNA(0.829±0.121)、蛋白(271.75±90.59)pg/ml和TNF-αmRNA(0.913±0.094)、蛋白(105.78±19.05)pg/ml含量均显著高于对照组[(0.342±0.087)、(45.76±17.99)pg/ml]、[(0.247±0.054)、(19.42±7.75)pg/ml](P均0.01)及BMSCs治疗组[(0.433±0.072)、(51.34±22.13)pg/ml]、[(0.313±0.076)、(28.38±8.78)pg/ml](P0.01);CBP组IL-1βmRNA(0.975±0.114)、蛋白(265.31±71.34)pg/ml和TNF-αmRNA(0.886±0.084)、蛋白(107.45±26.11)pg/ml含量也均显著高于对照组及BMSCs治疗组[(0.396±0.064)、(56.37±21.22)pg/ml]、[(0.417±0.068)、(29.21±10.22)pg/ml](P均0.01)。结论:注入BMSCs能够减轻大肠埃希菌引起的前列腺炎症反应,其作用可能与减少炎细胞浸润,降低IL-1β、TNF-α水平有关。     

quercetin抑制肝癌增长过程中Fas基因表达变化

目的 探讨三磷酸肌醇(IP3)和Fas基因表达变化在quercetin治疗裸鼠移植人肝癌中的作用.方法 以裸鼠移植人肝癌为研究对象,对照组腹腔注入含0.04%DMSO的RPMI1640培养基0.05 ml/g,Quercetin治疗组腹腔注入quercetin 1 mg·kg-1·d-1,3周后观察肝癌增长情况,并应用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3含量,RT-PCR分析癌组织Fas mRNA表达,Western blotting分析肝癌组织Fas蛋白表达.结果 治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组[体积(15.8±10.1)mm3 vs (52.3±26.5)mm3,t=3.853,P=0.003);重量(44.8±10.4)mg vs(91.3±31.4)mg,t=3.391,P=0.004],IP3含量显著低于对照组[(13.4±1.4)pmol/mg protein vs(35.3±6.6)pmol/mg protein,t=8.322,P=0.000],Fas mRNA表达显著高于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)0.52±0.13 vs 0.36±0.09,t=2.433,P=0.038],Fas蛋白表达显著高于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)1.72±0.27 vs 1.08±0.15,t=5.056,P=0.000].结论 Quercetin能减少IP3生成,上调肝癌组织Fas基因表达,抑制裸鼠移植人肝癌增长.     

复方玄驹胶囊治疗自身免疫性前列腺炎大鼠的实验研究

目的:研究复方玄驹胶囊对自身免疫性前列腺炎大鼠的治疗效果。方法:健康Wistar大鼠60只,随机分为5组,对照组、低浓度蛋白免疫模型组、低浓度蛋白免疫+复方玄驹胶囊全方治疗组、高浓度蛋白免疫模型组、高浓度蛋白免疫+复方玄驹胶囊全方治疗组。除对照组外,其余4组用高低两种浓度(15 mg/ml及80 mg/ml)的同种大鼠前列腺匀浆蛋白提纯液进行注射造模。造模(30 d)成功后,对照组和模型组生理盐水[1 ml/(200 g·d)]灌胃,治疗组用生理盐水溶解的复方玄驹胶囊全方[0.068 g/(ml·d)]灌胃,随后分别于30、45、60 d分批处死大鼠。用ELISA法检测大鼠血清中的IL-8、IL-10及TNF-α的表达,并观察大鼠前列腺组织病理切片。结果:与模型组相比,经复方玄驹胶囊全方灌胃治疗的高浓度蛋白免疫大鼠血清中IL-8、TNF-α在造模45 d时由(148.54±17.23)pg/ml、(62.14±5.59)pg/ml下降到(100.77±11.08)pg/ml、(32.63±2.91)pg/ml(P0.05);60 d时由(143.69±17.28)pg/ml、(59.38±5.50)pg/ml降到(95.77±10.53)pg/ml、(29.63±2.66)pg/ml(P0.05)。低浓度组造模45 d时IL-8、TNF-α亦由(128.47±12.21)pg/ml、(40.43±3.64)pg/ml下降至(111.76±10.07)pg/ml、(35.44±3.17)pg/ml(P0.05),60 d时由(131.07±10.93)pg/ml、(43.34±3.91)pg/ml降至(97.46±8.75)pg/ml、(30.44±2.75)pg/ml(P0.05)。高浓度蛋白免疫的治疗组大鼠血清IL-10在造模45 d、60 d分别由(189.14±16.78)pg/ml、(184.14±15.89)pg/ml上升至(230.48±29.96)pg/ml、(248.48±31.03)pg/ml(P0.05),低浓度组由(223.14±17.87)pg/ml、(224.14±17.93)pg/ml升高至(231.42±23.18)pg/ml、(249.42±24.97)pg/ml(P0.05)。病理切片示对照组无明显变化;实验组病理切片显示大鼠前列腺组织腺体结构破坏,炎性细胞浸润;治疗组治疗15 d后光镜下观察病变逐步改善,腺腔增大,上皮细胞轻度增生,间质中无明显炎性细胞浸润,可见少量纤维组织。结论:复方玄驹胶囊能降低自身免疫性前列腺炎大鼠前列腺组织炎性改变,并有效改善炎性因子表达,对大鼠自身免疫性前列腺炎有一定疗效。     

急性胰腺炎大鼠TNF-α和IL-10mRNA的表达及其意义

目的:探讨急性胰腺炎大鼠胰腺组织中TNF-αmRNA和IL-10 mRNA的表达及其对疾病发展和转归的意义。方法:以牛磺胆酸钠制备大鼠急性水肿性胰腺炎(AEP)模型20只和急性坏死性胰腺炎(ANP)模型20只,另取10只正常大鼠作为对照。造模12h后各处死10只大鼠,检测血清和胰腺组织TNF-α和IL-10水平及其胰腺组织中的mRNA转录水平,并观察胰腺组织的病理变化。结果:正常组、AEP组和ANP组的血清TNF-α水平分别为126pg/ml、186pg/ml和337pg/ml,组织TNF-α水平分别为118pg/ml、210pg/ml和443pg/ml。正常大鼠血清和胰腺组织中无法检测到IL－10,而AEP和ANP组血清IL－10水平为660pg/ml和124pg/ml,组织IL－10水平为669pg/ml和202pg/ml。AEP大鼠组织中IL-10mRNA表达增强,ANP大鼠TNF-α mRNA表达增强。结论:AP大鼠胰腺组织中TNF-α和IL-10 mRNA的表达与其在血清和胰腺组织中的浓度成正比,而急性胰腺炎时胰腺本身可能就是产生细胞因子的主要器官。     

辅助性T细胞亚群分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用

目的 探讨前列腺液(EPS)中CD+4T细胞亚群辅助性T细胞(Th细胞)分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用. 方法门诊诊断前列腺炎患者76例,年龄18～47岁,平均32岁.患者均有慢性前列腺炎典型临床症状,病程均＞3个月.按美国国立卫生院分类方法分为ⅢA型组(47例)、ⅢB型组(29例).其中ⅢA型组根据炎症程度又分为ⅢAl组(轻度炎症26例)和ⅢA2组(重度炎症21例).另设健康对照组(16例),年龄19～45岁,平均31岁.采用双抗体夹心酶联免疫法检测EPS中Th1类细胞因子(IFN-γ)、Th2类细胞因子(IL-4)水平及Th1/Th2比值(IFN-γ/IL-4),比较各组问差异.结果 ⅢA、ⅢB组IFN-γ水平[(134.78±43.67),(109.82±30.09)pg/m1]与对照组[(60.63±15.16)pg/m1]比较,差异有统计学意义(P＜0.05),ⅢA组较ⅢB组升高更明显(P＜0.05);ⅢA组IL-4水平[(51.99±20.59)pg/m1]与对照组[(53.88±17.92)pg/m1]比较差异无统计学意义P＞0.05),ⅢB组IL-4水平[(76.40±17.99)pg/m1]明显上调(P＜0.05);ⅢA组IFN-γ/IL-4水平(2.94±1.12)明显高于对照组(1.20±0.48,P＜0.05),Ⅲ B组(1.49±0.48)无明显改变(P＞0.05).与对照组比较,Ⅲ A1组IL-4水平[(63.03±18.86)pg/m1]无明显变化(P＞0.05),而ⅢA2组水平[(30.20±13.16)pg/m1]显著下调(P＜0.05);ⅢA1组和m A2组IFN-γ水平均明显上调[(127.65±36.57),(143.49±50.76)pg/m1],P＜0.05),但2组间差异无统计学意义(P＞0.05);ⅢA2组IFN-γ/IL-4明显高于ⅢA1组(3.67±0.82 vs 2.34±0.97,P＜0.05).结论 ⅢA型前列腺炎Th1细胞分化占优势,Th1/Th2平衡向Th1漂移,以细胞免疫反应为主;Th细胞分化也参与了ⅢB型前列腺炎的发病,但Th1/Th2处于相对平衡状态.Th1的优势分化可能是导致前列腺局部炎症发展的原因之一.     

体外循环手术后血浆PAF、IL-8、IFN-γ的变化及其意义

目的 探讨体外循环手术后患者血浆中血小板激活因子 （platelet activating factor,PAF）、γ-干扰素（inter-feron-γ,IFN-γ） 及白细胞介素8 （interleukin-8,IL-8） 的变化及其意义。 方法 选择2012年6月至2013年6月在三峡大学第一临床医学院行体外循环手术的75例患者为研究对象。根据术后是否发生急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征 （acute lung injury/acute respiratory distress syndrome ,ALI/ARDS）,将75例患者分为两组,ALI/ARDS组：28例,男20例、女8例,（53.6±8.2） 岁;对照组：47例,男32例、女15例,（56.9±11.8） 岁,术后未发生ALI/ARDS。采用酶联免疫吸附测定 （enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA） 法检测体外循环手术患者血浆中PAF、IL-8及IFN-γ不同时间段的浓度变化,并进行相关性分析。 结果 ALI/ARDS组患者血浆IL-8、IFN-γ于术后48 h达高峰,以后呈逐渐下降趋势;PAF于术后96 h达高峰,以后有降低趋势。术后ALI/ARDS组患者血浆PAF ［术后96 h：（16 029.5±4 203.7） mU/ml vs. （4 520.1±312.2） mU/ml,P＜0.05］、IL-8 ［术后48 h： （48 580.5±8 095.8） pg/ml vs.（5 990.5±1 179.0） pg/ml ,P＜0.05］、IFN-γ ［术后48 h：（258.5±76.1） pg/ml vs. （26.1±11.5） pg/ml,P＜0.05］于术后48 h、96 h、144 h的表达均较对照组明显升高。 结论 体外循环手术后血浆PAF、IL-8和IFN-γ发生明显改变,这可能与体外循环手术后ALI/ARDS的发生有关。     

肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液白细胞介素-4、白细胞介素-6、干扰素-γ水平与病情和肺功能的关系

目的:分析肺炎支原体肺炎(MPP)患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)水平与病情和肺功能的关系。方法:选取徐州市儿童医院2019年5月至2020年10月收治的109例MPP患儿(研究组)和102例急性支气管异物患儿(对照组),均实施支气管肺泡灌洗术。研究组MPP患儿根据病情分为轻症组(85例)和重症组(24例),并根据患儿肺功能损伤程度分为肺功能正常组(26例)、轻度损伤组(32例)、中度损伤组(30例)和重度损伤组(21例)。取入组患儿BALF,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-4、IL-6、IFN-γ水平并进行比较;比较研究组不同病情、不同肺功能损伤患儿BALF中IL-4、IL-6和IFN-γ水平:两组间比较采用成组设计资料t检验;多组间整体比较采用方差分析后组间两两比较采用LSD-t检验。应用Pearson相关分析研究组患儿BALF中IL-4、IL-6、IFN-γ水平与肺功能的关系。结果:研究组患儿BALF中IL-4、IL-6、IFN-γ水平均高于对照组[IL-4:(142.4±24.7)pg/ml vs.(73.2±13.0)pg/ml,t=25.159、P<0.001;IL-6:(56.4±10.3)pg/ml vs.(11.2±2.3)pg/ml,t=43.399、P<0.001;IFN-γ:(90.2±16.3)pg/ml vs.(41.8±6.8)pg/ml,t=27.857、P<0.001]。研究组中重症组患儿BALF中IL-4、IL-6、IFN-γ水平分别为(200.7±36.7)pg/ml、(103.3±16.8)pg/ml和(113.5±21.9)pg/ml,均显著高于轻症组[(125.9±22.4)pg/ml、(43.1±7.8)pg/ml和(83.6±14.1)pg/ml](IL-4:t=12.378、P<0.001,IL-6:t=25.010、P<0.001,IFN-γ:t=8.035、P<0.001),差异有统计学意义。研究组中肺功能正常组患儿BALF中IL-4、IL-6和IFN-γ水平分别为(81.6±15.5)pg/ml、(20.4±4.2)pg/ml和(74.7±11.9)pg/ml,轻度损伤者分别为(102.5±19.9)pg/ml、(48.9±8.2)pg/ml和(89.2±11.1)pg/ml,中度损伤者分别为(145.7±25.2)pg/ml、(60.2±10.2)pg/ml和(95.4±12.8)pg/ml,重度损伤者分别为(273.7±42.1)pg/ml、(106.9±17.6)pg/ml和(103.2±13.2)pg/ml。肺功能轻度、中度、重度损伤组患儿BALF中IL-4、IL-6和IFN-γ水平均高于肺功能正常组(P均<0.05),肺功能中度、重度损伤组患儿以上指标水平均高于肺功能轻度损伤组(P均<0.05),肺功能重度损伤患儿均高于肺功能中度损伤者(IL-4:t=13.581、P<0.001,IL-6:t=11.956、P<0.001,IFN-γ:t=2.117、P=0.039),差异均有统计学意义。研究组患儿BALF中IL-4、IL-6、IFN-γ水平与1秒用力呼气容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)、呼气流量峰值(PEF)均呈负相关(IL-4与FEV_(1)、FEV_(1)/FVC、PEF相关性:r=-0.834、P=0.025,r=-0.810、P=0.009,r=-0.901、P=0.002;IL-6与FEV_(1)、FEV_(1)/FVC、PEF:r=-0.816、P=0.003,r=-0.795、P=0.012,r=-0.743、P=0.007;IFN-γ与FEV_(1)、FEV_(1)/FVC、PEF:r=-0.756、P=0.012,r=-0.738、P=0.010,r=-0.725、P=0.017)。结论:MPP患儿BALF中IL-4、IL-6和IFN-γ水平均偏高,且3个指标水平与病情、肺功能均有关。     

肝星状细胞对同种异体胰岛移植物的保护作用

目的 研究小鼠肝星状细胞对同种异体胰岛移植物的保护作用.方法 将糖尿病小鼠随机分为三组,分别为糖尿病组、单纯胰岛移植组及与肝星状细胞共同移植组.单纯移植组于肾被膜下移植入同种异体胰岛300个;共同移植组移植入肝星状细胞(3×105个)与同种异体胰岛(300个)混合物.分别于移植术后监测受体小鼠血糖值及正常血糖维持时间;血糖正常一周后移植组及糖尿病组小鼠分别采血检测血清中TGF-β,TNF-α,IL-1β,IFN-γ的含量,同时取出移植物进行免疫组织化学检测.结果 术后共同移植组受体正常血糖维持时间为(23.75±8.96)d,单纯胰岛移植组受体正常血糖维持时间为(11.9±6.92)d,差异有统计学意义(P<0.05);三组受体血清中TNF-α、IL-1β、IFN-γ含量差异无统计学意义(P>0.05),共同移植组受体血清中TGF-β含量为(2292.31±5.87)pg/ml,单纯移植组为(1246.55±38.91)pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理学结果显示共同移植组胰岛素表达量大,并且在移植物周围有生物包膜形成.结论 在同种异体移植模型中,肝星状细胞可能通过高分泌TGF-β、局部形成包囊等方式保护胰岛移植物并延长其存活时间.     

γ干扰素与肿瘤坏死因子α对肠上皮屏障功能影响的实验研究

目的 观察炎症介质γ干扰素及TNF-α联合作用对肠上皮屏障功能的影响并探讨其分子机制.方法建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型,分别在预处理的24孔板与6孔板中采用DMEM培养基培养.将2种培养板中细胞均按随机数字表法分为对照组(常规培养)、γ干扰素组(加入终浓度为10 ng/mL γ干扰素培养)、TNF-α组(加入终浓度为10 ng/mL TNF-α培养)、γ干扰素+TNF-α组(加入终浓度均为10 ng/mL的γ干扰素与TNF-α培养).24孔板细胞处理后0 h(即刻)及6、12、24、36、48 h,用电阻测定仪检测肠上皮细胞跨上皮电阻(TER);于48 h分别采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖荧光示踪法与免疫荧光法,检测肠上皮细胞通透性及紧密连接咬合蛋白的分布与形态变化.6孔板细胞处理24 h时,用蛋白质印迹法检测咬合蛋白、磷酸化肌球蛋白轻链(pMLC)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)蛋白表达.对数据进行单因素方差分析与t检验.结果 (1)对照组各时相点肠上皮细胞TER无明显变化(F=0.86,P＞0.05);γ干扰素组与TNF-α组TER虽逐渐降低,但与处理后0 h比较差异均无统计学意义(F值分别为1.69、2.47,P值均大于0.05);γ干扰素+TNF-α组TER从24 h起显著低于处理后0 h(t=4.97,P＜0.05),并明显低于其余3组(F=11.54,P＜0.05).(2)γ干扰素+TNF-α组的肠上皮细胞通透性[(1197±215)pmo1]显著高于对照组、γ干扰素组与TNF-α组[(303±93)、(328±76)、(797±177)pmol,t值分别为4.8、5.0、6.9,P值均小于0.01].(3)24 h时各组咬合蛋白表达量无明显变化(F=0.26,P＞0.05).48 h时对照组咬合蛋白排列规则;γ干扰素组及TNF-α组咬合蛋白排列不规则;而γ干扰素+TNF-α组咬合蛋白排列不连续,发生明显重分布,胞质内分布增加.(4)γ干扰素+TNF-α组pMLC蛋白表达量(0.95±0.05)显著高于对照组、γ干扰素组与TNF-α组(0.57±0.12、0.56±0.07、0.59±0.10,F=17.97,P＜0.01),MLCK蛋白表达量(1.57±0.36)也显著高于其余3组(0.85±0.18、1.04±0.23、1.00±0.07,F=9.05,P＜0.05).结论γ干扰素与TNF-α联合作用通过增加MLCK及pMLC蛋白表达,引起肠上皮屏障功能损害.

Abstract：

Objective To investigate the effect of combination of interferon-gamma (IFN-γ) and tumor necrosis factor-alpha ( TNF-α ) on intestinal epithelial barrier function. Methods The Caco-2 monolayers were cultured in DMEM nutrient solution, and then they were inoculated in 24-well or 6-well plate with Transwell inserts. They were divided into control group ( ordinary treatment), IFN-γ group ( with addition of 10 ng/mL IFN-γ), TNF-α group (with addition of 10 ng/mL TNF-α), and IFN-γ plus TNF-α group (with addition of 10 ng/mL TNF-α and 10 ng/mL IFN-γ ). Monolayers inoculated in 24-well plate were collected for determination of transepithelial electrical resistance (TER) with an ohmmeter at post treatment hour (PTH) 0, 6, 12, 24, 36, and 48, the permeability of monolayers with fluorescein isothiocyahate-labeled dextran (FITC-dextran) tracer method at PTH 48, the distribution and morphological change of tight junction occludin with immunofluorescence assay at PTH 48. Monolayers inoculated in 6-well plate were collected for determination of protein expression of occludin, myosin light chain kinase (MLCK), and phosphorylated MLC (pMLC) with Western blot at PTH 24. Data were processed with one-way analysis of vaiiance and t test. Results ( 1 ) There was no obvious difference in TER in control group at each time point ( F = 0. 86, P ＞ 0.05 ). TER in IFN-γgroup and TNF-α group were gradually decreased during PTH 6-48,but showed no statistical difference as compared with that at PTH 0 ( with F value respectively 1.69, 2.47,P values all above 0.05 ). TER in IFN-γplus TNF-α group was significantly decreased from PTH 24 as compared with that at PTH0 ( t =4.97, P ＜0.05) and that in each of the other three groups ( F =11.54,P ＜ 0.05 ). (2) The permeability of monolayers in IFN-γplus TNF-α group [( 1197 ± 215 ) pmol] was significantly higher than that in control group, IFN-γ group, and TNF-α group [( 303 ± 93 ), ( 328 ± 76),(797 ± 177) pmol, with t value respectively 4.8, 5.0, 6.9, P values all below 0.01]. (3) There was no statistical difference in occludin expression at PTH 24 among four groups ( F = 0.26, P ＞ 0.05). The occludin in control group at PTH 48 was regular in arrangement, while that in IFN-γand TNF-α groups was irregular in arrangement. The arrangement of occludin in IFN-γ plus TNF-c group at PTH 48 was interrupted,with obvious redistribution in cytoplasm. (4) The protein expression of pMLC in IFN-γ plus TNF-α group (0.95 ±0.05) was significantly higher than that in control group, IFN-γ group, or TNF-α group (0.57 ±0.12, 0.56 ±0.07, 0.59 ±0. 10, respectively, F = 17.97, P ＜0.01). The protein expression of MLCK in IFN-γplus TNF-α group (1.57 ±0.36) was also significantly higher than that in control, IFN-γ, TNF-α groups (0.85 ± 0.18, 1.04 ± 0. 23, 1.00 ± 0.07, respectively, F = 9.05, P ＜ 0.05 ). Conclusions Combination of IFN-γand TNF-α can induce intestinal epithelial barrier dysfunction by up-regulating MLCK protein expression and promoting MLC phosphorylation.     

靶向OX40基因的siRNA抑制大鼠肝脏移植排斥反应的研究

目的 探讨RNA干扰阻断OX40-OX40L共刺激通路对大鼠移植肝存活时间的影响.方法 制作原位肝脏移植物大鼠模型,供体DA大鼠,受体Lewis大鼠.移植术毕时将5 ml含5×109pfu的pLVTHM-OX40-siRNA重组慢病毒经阴茎背静脉在10秒内注射受鼠体内,术后观察受鼠存活时间,移植肝脏进行组织病理学检查,采用ELISA法检测大鼠外周血IL-2、IFN-γ的水平,并进行受者大鼠脾细胞对供者大鼠脾细胞的混和淋巴细胞反应(MLR). 结果转染组大鼠肝脏移植物的存活时间为(74.0±9.3)d,明显长于对照组(7.3±0.5)d和未转染组(7.5±0.5)d;转染组移植肝组织炎细胞浸润、间质水肿、肝组织坏死程度较对照组和未转染组减轻;耐受组大鼠脾脏中T淋巴细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力较对照组降低(t=25.1,P＜0.01);移植术后第7 d,转染组血清IL-2浓度为(46±8.4)pg/ml,IFN-γ浓度为(202.7±14.6)pg/ml,均显著低于对照组和未转染组(分别t=176.4,45.5,P＜0.01).结论 转染靶向OX40的siRNA,可通过阻断OX40-OX40L共刺激通路,抑制大鼠肝脏移植后的排斥反应,延长大鼠移植肝的存活时间.     

LIGHT／INF—γ基因配比转染HepG2细胞对其凋亡及Fas／FasL系统表达的影响

目的：观察脂质体介导的LIGHT和IFN—γ配比转染HepG2细胞后对其凋亡及Fas和FasL表达的影响。方法：将HepG2细胞分为LIGHT单独转染组、LIGHT和IFN—γ联合转染组和空白对照组，以脂质体为中介转染HepG2细胞；分别于转染后12、24和48h收集HepG2细胞，流式细胞术检测转染后HepG2细胞的凋亡率及Fas和FasL的表达。结果：LIGHT基因转染HepG2细胞能明显促进其凋亡，随时间延长凋亡率增加；Fas和FasL在HepG2细胞高表达，以Fas升高程度显著。结论：LIGHT和IFN—γ联合转染HepG2，其凋亡效果优于LIGHT单独转染，主要是通过上调Fas的表达来促进HepG2细胞凋亡。     

血清胰岛素样生长因子-Ⅱ、血管内皮生长因子、白细胞介素一Ⅱ和干扰素-γ水平在肝癌微波消融治疗前后的变化

目的 观察大鼠在肝癌微波消融治疗前后血清胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅱ、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-2和干扰素(IFN)-γ水平的变化.方法 80只SD大鼠,随机分4组,正常组除抽血检测外不做任何处理,其余3组行肝癌细胞种植,对照组尾动脉抽血检测,手术组行手术切除肿瘤,消融组消融肿瘤,ELISA法测定血清IGF-Ⅱ、VEGF、IL-2和IFN-γ水平并比较3周后4组间IGF-Ⅱ、VEGF、IL-2和IFN-γ水平的变化情况.结果 对照组第5周较第3周时血清IGF-Ⅱ[(1.93±0.45) μg/L比(1.16±0.21)μg/L]和VEGF[(395.72±55.28)ng/L比(248.43±1.71)ng/L,P<0.05].经手术治疗或微波消融治疗后血清IGF-Ⅱ(0.65±0.18比0.73±0.16)和VEGF[(129.35±51.46)ng/L比(135.63±33.37)ng/L]水平明显下降,而IL-2、IFN-γ水平则明显升高.结论 IGF-Ⅱ可直接或通过增加VEGF的合成促进肿瘤血管形成,可作为原发性肝癌的诊断、判断愈后与跟踪随访的重要指标.微波消融治疗肝癌是一种有效的方法.     

间质性膀胱炎与1型/2型辅助性T淋巴细胞漂移的相关研究

目的 探讨间质性膀胱炎(IC)患者血浆及膀胱黏膜1型/2型辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2)与免疫调节失衡的关系.方法 女性IC患者血浆及黏膜标本16例,输尿管结石患者标本16例作为对照组.2组患者性别及年龄匹配.IC患者符合美国糖尿病、消化及肾病协会诊断标准.依据盆腔疼痛和尿急/尿频症状评分(PUF评分)结果分为低评分(0～20分)和高评分(21～35分)2组.采用酶联免疫吸附试验和免疫组化染色检测2组患者血浆和膀胱黏膜中Th1(IFN-γ和IL2)和Th2(IL-4和IL-10)细胞因子表达情况. 结果①IC患者血浆IFN-γ、IL-2表达量分别为(4.57±2.92)、(17.52±7.52)pg/ml,对照组分别为(4.11±2.27)、(20.99±5.09)pg/ml,2组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);IC患者血浆IL-4、IL-10表达量分别为(O.34±0.22)、(4.37±2.34)pg/ml,对照组分别为(0.14±0.07)、(1.18±0.61)pg/ml,2组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).②IC患者和对照组膀胱黏膜标本中IFN-γ、IL-2表达强度比较χ2值=1.900、0.514,差异均无统计学意义(P＞0.05);2组IL-4、IL-10表达强度比较χ2值=8.237、8.209,差异均有统计学意义(P＜0.05).③IC患者PUF低评分组血浆IL-4、IL-10表达量分别为(0.16±0.11)、(2.42±1.27)pg/ml,高评分组分别为(0.53±0.12)、(6.31±1.21)pg/ml,2组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).2组膀胱黏膜标本IL-4表达强度比较χ2＝7.608,γ3＝0.467,差异有统计学意义(P＜0.05);IL-10表达强度比较χ2＝8.844,γ3＝0.517,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IC患者存在免疫调节失衡,Th2介导的体液免疫反应增强,且免疫失衡随症状程度而加重.     

胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞与IL-4、IFN-γ的关系

目的 研究胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞比例与IL-4、IFN-γ含量变化及其相互关系.方法 分别应用流式细胞仪及ELISA法检测25例胰腺癌患者和45名健康人外周血中CD4-CD8-T细胞比例和IL-4、IFN-γ的含量.结果 25例胰腺癌患者CD4-CD8-T细胞占CD3+T细胞的比例为(4.2±1.7)%,45名健康人CD4-CD8-T细胞占CD3+T细胞的比例为(6.3±2.6)%,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).胰腺癌患者外周血中IL-4含量为(86.3±23.3)fg/L,健康对照组外周血中IL-4含量为(56.2±9.2)fg/L,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).胰腺癌患者外周血中IFN-γ含量为(16.4±4.8)fg/L,健康对照组外周血中IFN-γ含量为(27.4±3.8)fg/L,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).胰腺癌患者手术后CD4-CD8-T细胞比例显著高于术前(P＜0.01).胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞比例与IL-4含量呈负相关,与IFN-γ含量呈正相关;胰腺癌患者CD4-CD8-T细胞比例、IL-4含量与肿瘤临床分期有关(P＜0.05),与肿瘤分化程度均无关(P＞0.05),IFN-γ含量与肿瘤临床分期和肿瘤分化程度均无关(P＞0.05).结论 CD4-CD8-T细胞在胰腺癌患者外周血中比例降低,CD4-CD8-T细胞可能通过影响IFN-γ的分泌参与胰腺癌的发生和发展.