mRNA干扰BMI-1对人食管癌细胞放射增敏作用研究

目的 研究BMI-1对食管癌TE-13细胞放射敏感性的影响及其机制。方法 以TE-13细胞为研究对象,分为转染有效BMI-1 mRNA干扰序列(siRNA)即BMI-1 siRNA组、转染阴性对照序列即NC组、未转染即control组。qRT-PCR和蛋白印迹法检测TE-13细胞中BMI-1 mRNA和蛋白表达水平;MTT法和克隆形成实验检测BMI-1对食管癌TE-13细胞增殖和放射敏感性影响;流式细胞术检测BMI-1对TE-13细胞周期、凋亡的影响;蛋白印迹法检测细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达水平。组间差异采用方差分析。结果 BMI-1 siRNA组BMI-1 mRNA和蛋白表达水平均显著低于control、NC组(P=0.000、0.000)。照射后BMI-1 siRNA组肿瘤细胞的增殖水平、克隆形成能力均显著下降(P=0.031、0.000);照射后BMI-1 siRNA组G₂+M期细胞比例显著低于control、NC组(P=0.000、0.000),且凋亡率明显增加(P=0.000、0.000),同时Bcl-2的表达显著降低(P=0.000、0.000),而Bax表达明显增加(P=0.000、0.000)。结论 干扰siRNA抑制了食管癌TE-13细胞中BMI-1基因的表达,消除了G₂+M期阻滞,显著提高了电离辐射后细胞凋亡水平,增加了放射敏感性,该作用可能与Bcl-2和Bax基因表达有关。     

沉默锌指蛋白217基因对食管鳞癌EC9706细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨锌指蛋白217基因(ZNF217)在食管鳞癌侵袭转移中的作用.方法 合成ZENF217基因的siRNA序列并转染对数生长期食管鳞癌EC9706细胞.设置转染无义序列siRNA和未转染EC9706细胞为阴性对照和空白对照.半定量RT-PCR和Western blot方法分别检测转染48 h后3组细胞ZNF217 mRNA和蛋白的表达变化;侵袭小室检测3组细胞穿膜细胞数变化;MTT法分析3组细胞增殖能力的变化.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,转染ZNF217 siRNA组EC9706细胞ZNF217 mRNA和蛋白表达均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);转染ZNF217 siRNA组EC9706细胞穿膜细胞数显著下降,差异有统计学意义(P ＜0.05);ZNF217 siRNA能明显抑制EC9706细胞体外增殖能力(P＜0.05).结论 ZNF217基因表达下降能显著抑制EC9706细胞体外侵袭力和增殖能力,ZNF217基因有望成为食管癌基因治疗的有效靶点.     

HIF-1α对电离辐射诱导人非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡作用及其机制的探讨

目的:探讨HIF-1α对电离辐射诱导人非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制.方法:以HIF-1α抑制剂Echinomycin(EC)预处理人NHL细胞后给予5 GyX线照射,采用Annexin V染色方法检测肿瘤细胞凋亡水平的变化,采用蛋白质印迹法检测各细胞系中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达水平.将HIF-1α siRNA反义转染至NHL细胞中,检测转染后细胞凋亡分数及Caspase-3蛋白表达水平.结果:流式细胞仪检测结果显示,Namalwa细胞空白对照组、单纯照射组(RI)、RI+EC 2 nmol/L组的凋亡率分别为5.27±1.13、13.81±3.12和39.96±6.81,Ramos细胞分别为6.02±1.26、12.98±3.07和40.76±11.58,Raji细胞则为7.16±0.46、17.62±4.94和47.85±10.22,P＜0.01.电离辐射后,转染vector和HIF-1α siRNA的Namalwa细胞凋亡率分别为15.32±3.64和20.20±1.87,Ramos细胞分别为15.05±2.46和21.02±3.12,t值分别为3.99和3.19,P＜0.05 ;而Raji细胞则为10.90±1.65和17.26±0.69,t=5.98,P＜0.01.蛋白质印迹法结果显示,通过EC预处理抑制HIF-1α的表达能够明显上调射线诱导的各NHL细胞系中Caspase-3蛋白表达水平,同时凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低而Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值明显降低,与单纯照射组相比差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:抑制HIF-1α能够增加射线诱导的NHL细胞凋亡,其机制可能与增加Bax蛋白表达而下调Bcl-2蛋白表达有关.     

重组质粒pEgr-P16在EC9706细胞中的辐射诱导凋亡作用

背景与目的:研究pEgr-P16重组质粒在食管癌细胞系EC9706中的辐射诱导凋亡作用.材料与方法:pEgr-P16重组质粒通过脂质体介导转染人食管癌EC9706细胞,定量RT-PCR检测2 Gyγ射线照射后被转染细胞中P16的表达和细胞凋亡率的变化.结果:对照组无P16蛋白表达,转染质粒组细胞接受2Gyγ射线照射后2～24 h P16表达量与时间呈曲线关系,在22 h时P16的mRNA水平最高;P16基因联合放射可诱导食管癌细胞凋亡,凋亡率高于单纯照射组和单纯基因诱导组.结论:γ射线可诱导pEgr-P16重组质粒在人EC9706细胞中表达并显著提高EC9706细胞的凋亡率.本研究结果为食管癌基因-放射治疗的进一步研究奠定了实验基础.     

Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及其对细胞凋亡的影响

背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用.本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响.方法:通过免疫细胞化学方法检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达.采用RT-PCR技术扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1(命名为pcNICD),转染EC9706细胞,利用RT-PCR及Western blot检测稳定转染pcNICD 载体、转染pcDNA3.1空载体及未处理的EC9706细胞中Notch1的表达,另通过流式细胞仪检测未处理、转染pcDNA3.1和转染pcNICD的EC9706细胞的凋亡.结果:EC9706细胞中发现Notch1基因的表达.与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞中Notch1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,大约增加3倍(P＜0.05);但未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中Notch1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞检测结果显示,在未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中,细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05);但与与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比.转染pcNICD的EC9706细胞转染后24 h、48 h和72 h时细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).结论:Notch信号途径的激活引起食管鳞癌EC9706 细胞的凋亡.提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点.     

靶向抑制COX-2基因对胃癌细胞BGC823凋亡及药物敏感性的影响

目的:研究siRNA靶向抑制环氧合酶-2(COX-2)基因后对胃癌细胞BGC823增殖、凋亡及药物敏感性的影响.方法:将COX-2 siRNA(siRNA-COX-2组)及negative control siRNA(siRNA-control组)序列转入细胞BGC823中,检测细胞增殖能力,观察多西紫杉醇(docetaxel艾素)、奥沙利铂(L-OHP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)的药物敏感性变化,及转染前后BGC823细胞COX-2、β-catenin、Bcl-2 mRNA基因和蛋白的表达.结果:siRNA-COX-2组细胞在转染后第四天开始增殖能力下降,与siRNA-control组差异存在明显统计学意义(P＜0.05),而siRNA-control组细胞于BGC823组增殖能力差异无明显统计学意义(P＞0.05).MTT法检测转染后胃癌细胞对艾素、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶的IC50较转染前药物敏感性明显增加.流式细胞术检测转染前后胃癌细胞凋亡率为(3.08％±0.27％vs 16.14％ ±1.89％,P＜0.05),转染后凋亡明显增加(P＜0.05).qRT-PCR法检测发现转染后COX-2、β-catenin、Bcl-2 mRNA基因的表达明显下降,Westernblot检测发现,转染后48小时COX-2蛋白表达达到最低,转染后48小时β-catenin、Bcl-2蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:通过下调COX-2基因的表达,可有效抑制WNT信号通路的激活,同时有效降低Bcl-2基因的表达.抑制COX-2基因后可有效降低胃癌细胞BGC823的细胞增殖能力,可有效提高对艾素、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶的药物敏感性,有效促进细胞凋亡.     

组蛋白去乙酰化酶在食管鳞癌中的表达及其表达下调对EC9706细胞生物特性的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase2,HDAC2)在食管鳞癌组织中的表达,并研究其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及分析其相关的分子机制。方法:采用免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中HDAC2蛋白的表达。将特异性针对HDAC2基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和对照siRNA分别转染食管鳞癌EC9706细胞,实验分3组:未处理组、对照siRNA组和HDAC2siRNA组。蛋白质印迹法检测各组EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达。CCK-8计数法检测转染前后细胞的增殖情况。FCM法检测细胞周期和细胞凋亡的变化。蛋白质印迹法检测与细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果:HDAC2蛋白在食管鳞癌组织中表达的阳性率为79.71%,显著高于癌旁不典型增生组织的51.11%和正常食管黏膜组织的23.19%,3者之间差异具有统计学意义(χ2=44.121,P=0.000);此外,HDAC2蛋白表达与患者的年龄和性别无关(P均>0.05),但是与组织学分级、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移均显著相关(P均<0.05)。HDAC2siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达,明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖,促使细胞周期静止在G0/G1期,并诱导细胞凋亡。蛋白质印迹法检测结果显示,HDAC2表达下调能明显提高p21和凋亡相关蛋白bax的表达量,同时降低细胞周期蛋白cyclin D1和bcl-2的表达量。结论:HDAC2可能在食管鳞癌的发生、发展中具有重要作用,其表达下调介导的食管鳞癌细胞增殖抑制、细胞周期静止以及细胞凋亡可能与p21、bax的表达升高和cyclin D1、bcl-2表达降低密切相关。     

siRNA沉默Annexin A2基因表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨siRNA沉默Annexin A2基因表达对鼻咽癌CNE-2(R743)细胞放射敏感性的影响。方法 化学合成Annexin A2基因的siRNA经HiPerFect转染入R743细胞。RT-PCR和蛋白印迹法检测转染前后Annexin A2的mRNA和蛋白表达,克隆形成实验分析转染前后对细胞放射敏感性的影响,流式细胞仪和TUNEL实验分别检测转染前后经X线照射后细胞周期、细胞凋亡情况。结果 RT-PCR和蛋白印迹法结果显示转染组细胞Annexin A2基因及蛋白表达下调。克隆形成实验分析结果表明转染组D₀、D_q、SF₂值均低于单纯照射组和转染对照组,其相应放射增敏比(D₀值比)分别为1.30和1.27。X线照射后转染组细胞G₂+M期比例增加并高于单纯照射组和转染对照组(32.46%、9.42%、9.17%,P=0.000、0.000),转染组凋亡率也高于单纯照射组和转染对照组(35.20%、10.87%、11.33%,P=0.000、0.000)。结论 siRNA沉默Annexin A2基因表达可增强R743细胞放射敏感性,可能与DNA损伤修复、细胞周期时相分布变化有关。     

siRNA阻断Stat3信号促进食管鳞癌细胞株凋亡

目的：研究RNA干扰技术沉默Stat3基因对食管鳞癌细胞（EC9706）中持续性激活Stat3信号的阻断作用及对细胞凋亡的影响。方法：将化学合成的100nM的Stat3 siRNA转染EC9706细胞,RT-PCR检测转染前后Stat3 mRNA的表达,Western blot检测转染前后细胞中Bcl-2、Stat3及磷酸化Stat3（p-Stat3）蛋白的表达,凝胶电泳迁移率（EMSA）检测转染前后活化Stat3蛋白的DNA结合活性,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡的改变情况。结果：Stat3 siRNA转染细胞48h后细胞形态发生明显的改变,RT-PCR及Western blot结果显示Stat3 siRNA干扰后Stat3mRNA及蛋白表达均受到明显抑制, Stat3信号的激活被阻断,活化Stat3蛋白的核结合活性显著下降。转染后细胞中Bcl-2蛋白的表达明显减少。流式细胞术结果证明Stat3 siRNA可明显促进细胞凋亡。结论：Stat3 siRNA能够特异地阻断食管鳞癌细胞中Stat3 信号的持续性激活并促进肿瘤细胞凋亡。     

siRNA抑制食管癌EC9706细胞CXCR4基因表达的实验

目的运用RNAi技术沉默食管癌EC9706细胞CXCR4（chemokine receptor4）基因表达,观察其对肿瘤细胞的生长和转移影响。方法设计CXCR4 基因为靶向的siRNA ,构建siRNA表达载体,通过脂质体将siRNA表达载体转入EC9706细胞。荧光定量PCR法检测细胞CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞周期; MTT法检测细胞侵袭和增殖的情况。结果构建出CXCR4 基因为靶向的siRNA表达载体pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1和pRNAT-U6.2/Lenti -siCX2;荧光定量PCR结果显示,转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1的EC9706细胞和转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX2的EC9706细胞与对照组相比CXCR4 mRNA的表达水平明显降低（P＜0.01）;细胞生长速度较对照组明显减慢（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示：转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1的EC9706S期细胞比例低于对照组(P＜0.05)。结论沉默CXCR4基因表达对食管癌EC9706细胞的生长和侵袭、转移有明显的抑制作用。     

干扰GTPBP4基因对食管癌EC9706细胞放射敏感性影响

目的:探讨沉默GTPBP4基因对人食管癌EC9706细胞系放射敏感性影响。方法:通过GEO数据库分析食管癌患者组织中GTPBP4的表达情况。利用重组质粒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术转染食管癌EC9706细胞系,使细胞中GTPBP4基因沉默,观察GTPBP4基因沉默对EC9706细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响。通...     

调控食管癌癌胚抗原基因表达对溶瘤腺病毒H101抗癌作用的影响

目的 研究调控食管癌癌胚抗原(CEA)基因表达对溶瘤腺病毒H101抗癌作用的影响,探讨影响H101敏感性的内在因素.方法 选择CEA低表达的EC9706细胞株(EC9706-SCEA)和CEA过表达的EC9706细胞株(EC9706-CEA)复苏培养,细胞生长实验检测调控EC9706细胞CEA基因表达对细胞生长的影响,通过细胞毒性实验和裸鼠体内实验检测H101对不同CEA表达水平EC9706细胞的杀伤效果.结果 细胞生长实验表明,EC9706-SCEA、EC9706-CEA和EC9706细胞群体倍增时间分别为(30.9±2.0)h、(31.1±2.5)h和(29.1±2.6)h,差异无统计学意义(P＞0.05).细胞毒性实验显示,当感染复数(MOI) ≥0.01 PFU时,H101对EC9706-SCEA细胞的抑制率明显高于EC9706、EC9706-CEA、EC9706-siCon和EC9706 -Con细胞(P＜0.05).不同时间各组裸鼠移植瘤体积测定显示,H101对治疗组裸鼠皮下移植瘤的生长均有抑制作用,但其对EC9706-SCEA治疗组移植瘤生长的抑制作用(抑瘤率为61.5％ ～ 74.5％)显著强于EC9706治疗组(抑瘤率为35.5％ ～44.8％)和EC9706-CEA治疗组(抑瘤率为32.3％～38.5％),差异有统计学意义(p＜0.05).结论 溶瘤病毒H101对EC9706-SCEA细胞的杀伤力明显增强.沉默CEA基因的表达,有望成为提高溶瘤病毒H101抗癌效果的新途径.     

LNC01852通过调控Bcl-2对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

目的:探究长链非编码RNA LNC01852对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:选取人食管癌细胞系EC9706、KYSE30、TE-13和人食管黏膜上皮细胞系HET-1A为研究对象,分别采用siRNA基因敲减技术、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）、MTS细胞增殖实验、克隆形成实验和流式细胞术细胞凋亡实验观察LNC01852对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡能力以及对p53-Bcl-2/Bax凋亡信号通路标志分子mRNA和蛋白表达的影响。结果:qRT-PCR结果表明,人食管癌细胞系中LNC01852的表达较食管黏膜上皮细胞系HET-1A明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;MTS细胞增殖实验、克隆形成实验和流式细胞术细胞凋亡实验结果表明,转染siLNC01852能够明显抑制人食管癌EC9706细胞中LNC01852的表达,同时抑制细胞的增殖能力和菌落形成能力,并促进细胞发生凋亡;此外,qRT-PCR和Western blot结果进一步证实,敲减LNC01852能够明显上调人食管癌EC9706细胞中促凋亡分子p53和Bax的mRNA和蛋白表达,同时明显抑制抗凋亡分子Bcl-2的mRNA和蛋白表达,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:LNC01852通过介导p53-Bcl-2/Bax凋亡信号影响人食管癌细胞增殖和凋亡,提示靶向LNC01852及其下游p53-Bcl-2/Bax凋亡信号,有望为临床食管癌治疗提供新的靶点和理论依据。     

抑制USP9x表达增强食管癌Ec9706-R细胞的放射敏感性

背景与目的：泛素特异性蛋白酶9x（ubiquitin-specific protease 9x,USP9x）与多种肿瘤的发生、发展以及肿瘤细胞的放射抗拒相关。研究发现,USP9x的表达与食管鳞状细胞癌的浸润深度和淋巴结转移相关,但其食管癌细胞放射抗拒作用尚未见报道。探究USP9x对放射抗拒食管癌Ec9706-R细胞放射敏感性的作用及其机制。方法：首先通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测放射线照射后Ec9706-R细胞及其亲本细胞Ec-9706中USP9x和抗髓样细胞白血病-1（myeloid cell leukemia-1,Mcl-1）mRNA表达和蛋白水平。然后将Ec9706-R细胞随机分成3组：放射（irradiation,IR）组、IR+对照siRNA组（IR+si-NC组,转染Control siRNA）和IR+USP9x siRNA组（IR+si-USP9x组,转染USP9x siRNA）,各组细胞均使用一定量的6 MV-X射线照射。噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测不同剂量（0、2、4、6和8 Gy）6 MV-X射线照射下各组细胞的活力。Transwell、流式细胞术、RTFQ-PCR和Western blot分别检测3组细胞在6 Gy照射下的细胞迁移、凋亡、Mcl-1 mRNA表达和蛋白水平以及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和DNA损伤修复相关基因核苷酸切除修复交叉互补基因1（excision repair cross-complementing gene 1,ERCC1）蛋白水平。结果：放射后Ec9706-R和Ec-9706细胞中USP9x和Mcl-1 mRNA表达和蛋白水平均增加,Ec9706-R细胞尤为显著（P<0.05）。与IR组相比,IR+si-USP9x组中细胞活力、迁移细胞数目、PCNA、ERCC1和Mcl-1的表达均降低,细胞凋亡增加（P<0.05）。但是与IR组相比,IR+si-NC组中上述指标均无显著变化（P>0.05）。结论：抑制USP9x表达能够增强放射抗拒食管癌Ec9706-R细胞的放射敏感性,这可能是通过下调Mcl-1的表达发挥作用的。     

沉默EC9706核干细胞因子基因对裸鼠移植瘤生长的作用

观察由RNAi诱导的EC9706核干细胞因子（NS）基因沉默对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠15只,分为3组,siRNA干预组皮下注入pRNAT-U6.1-siNS2转染的EC9706细胞,无关siRNA对照组皮下注入pRNAT-U6.1-siC转染的EC9706细胞,空白对照组皮下注入正常EC9706细胞,接种5周分别测定各组裸鼠移植瘤体积,并应用RT-PCR技术检测裸鼠移植瘤组织中NS mRNA的表达。结果:无关siRNA对照组及空白对照组于第4天在接种部位出现肉眼可见的肿块,siRNA干预组于第6天在接种部位发现肉眼可见肿块。第5周各组裸鼠成瘤率均为100%。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组瘤体大小分别为（1 806.40±77.75） mm3、（1 702.20±88.60） mm3和（847.00±82.25） mm3,3组相比差异有统计学意义（P<0.05）。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组移植瘤组织中NS mRNA的表达量分别为0.681±0.033、0.685±0.034和0.497±0.056,3组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论:沉默EC9706细胞的NS基因可抑制裸鼠移植瘤生长,降低裸鼠体内NS mRNA的表达。沉默NS基因有可能成为治疗食管癌的新策略。      

放射抗拒食管癌细胞系的建立及抗拒机制研究

[目的]建立食管癌放射抗拒细胞系模型并观察食管癌细胞经射线反复照射后放射敏感性的变化。[方法]60Coγ射线对食管癌EC9706细胞系进行照射,每次2Gy,共照射30次,采用克隆形成实验等测定所得的EC9706R60细胞亚系及其亲代细胞EC9706的放射敏感性,检测细胞周期特征、细胞凋亡率及SP细胞(side population cells)比例。[结果]与亲代EC9706细胞相比,EC9706R60细胞显示出明显放射抗性,其D0、Dq及N值增大,细胞存活曲线肩区增宽,EC9706R60细胞的放射抗性(D0)是EC9706的1.375倍(P<0.05)。EC9706R60细胞S期比例较其EC9706细胞明显增高(32.1%vs.3.8%),G0/G1期比例则明显下降(67.9%vs.96.2%)。食管癌细胞EC9706在经30Gy照射后12h细胞凋亡达到峰值11.17%,经60Gy照射后降低到最低点0.99%。EC9706R60细胞SP细胞的比例较EC9706明显增高。[结论]EC9706R60细胞显示出与亲代细胞不同的细胞周期特征,放射抗拒性与SP细胞的比例存在一定关联。高的放射诱导凋亡率可能意味着放射越...     

索拉非尼对食管癌EC9706细胞的生长抑制作用

目的 探讨索拉非尼（sorafenib）体外对EC9706细胞生长抑制作用及其机制。方法 qRTPCR检测sorafenib作用后MMP-2、MMP-9、TIMP1、AKT和Bcl-2 mRNA的表达;Western blot检测sorafenib作用后AKT、p-AKT、Bcl-2、MMP-2和TIMP1蛋白表达水平的变化;Hoechst/PI 染色荧光显微镜观察sorafenib诱导的细胞凋亡/坏死;细胞划痕实验观察sorafenib对EC9706细胞的迁移抑制作用。结果 与对照组相比,qRT-PCR显示sorafenib下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2 mRNA表达,上调TIMP1 mRNA 表达（P<0.05）;Western blot显示sorafenib降低MMP-2、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达水平,上调TIMP1蛋白表达水平（P<0.05）;荧光显微镜观察发现sorafenib诱导红染细胞增加（P<0.05）;细胞划痕实验发现sorafenib作用后划痕明显变宽,并且具有浓度依赖性（P<0.05）。结论 索拉非尼能够上调TIMP1表达水平、下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2表达水平,可以抑制食管鳞癌EC9706细胞的迁移、促进凋亡坏死,这些可能是其产生抗肿瘤作用的机制之一。     

CXCL12对宫颈癌细胞放射敏感性影响的实验研究

目的 探讨趋化因子12（CXCL12）在调控宫颈癌放疗敏感性中的作用。方法 采用阳离子脂质体法将CXCL12 siRNA转染至宫颈癌HeLa细胞（siRNA转染组）,另设置空白对照组和阴性对照组。采用不同剂量（4、8 Gy）照射上述各组HeLa细胞, CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法和实时荧光定量PCR（QPCR）检测CXCL12表达变化,流式细胞仪检测CD44表达。结果 接受4 、8 Gy照射后siRNA转染组的细胞存活率分别为62.0％和44.0％,低于阴性对照组的79.0％和59.0％,差异有统计学意义（P＜0.05）;接受4 、8 Gy照射后siRNA转染组的细胞凋亡率分别为28.0％和51.0％,高于阴性对照组的21.0％和39.0％,差异有统计学意义（P＜0.05）。接受4 、8 Gy照射后siRNA转染组的CD44蛋白表达量为1.33±0.02和1.40±0.01,低于阴性对照组的1.55±0.02和1.85±0.02,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 沉默CXCL12可通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡来增加宫颈癌细胞的放射敏感性,CXCL12可能为宫颈癌放疗提供新的增敏靶点。