马钱子碱抗肝细胞癌作用的实验研究

目的 探讨马钱子碱抗肝细胞癌的作用及其机制.方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,加入不同浓度的马钱子碱(2.5～400μg/ml),细胞培养72 h,MTT法测定细胞生长抑制率.Western blotting和荧光定量RT-PCR技术分别测定培养24、48、72 h肝癌细胞PCNA、Cyclin D1、FAS基因mRNA和蛋白表达.结果 随着马钱子碱用量逐渐增加,对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用增强,马钱子碱用量为320 μg/ml时对肝癌细胞生长抑制率接近100%.马钱子碱作用肝癌细胞24 h与作用48 h相比,Fas蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(分别F=2.547,1.582,均P＞0.05),作用72 h时差异有统计学意义(分别F=1.036,1.137,均P＜0.05);PCNA和Cyclin D1的mRNA和蛋白表达各时间点差异无统计学意义(PCNA分别F=3.612,2.174,3.029;Cyclin D1分别F=2.361,2.915,1.976,均P＞0.05).结论 马钱子碱抑制肝癌细胞生长,可能通过肝癌细胞FAS基因和蛋白表达增加,诱导肝癌细胞凋亡发挥抑制作用,而与PCNA和Cyclin D1作用无关.

Abstract：

Objective To study the effect of brucine on the growth of a hepatocellular carcinoma cell line in vitro. Methods Brucine was added into a liver cancer cell line of SMMC-7721 in vitro, at drug concentration of brucine from 2. 5 μg/ml to 400 μg/ml. The inhibition rate of cell growth was measured by MTT technique after the cells were cultured for 72 hours. The protein and mRNA expression of PCNA,cyclin D1 and FAS were respectively assayed with Western blotting and fluorescent quantitation RT-PCR techniques at 24, 48, 72 h. Results The inhibition rate of liver cancer cell was near 100% when the brucine concentration was at 320 μg/ml. The protein and mRNA expression of FAS were of no significant difference at 24 h vs 48 h ( seperately F = 2. 547,1. 582, all P ＞ 0. 05 ), and significant difference existed at 24 h vs 72 h( seperately F = 1. 036, 1. 137, all P ＜ 0. 05 ). The protein and mRNA expression of PCNA,Cyclin D1 were of no significant difference between various time period( seperately PCNA F = 3.612,2. 174,3.029;Cyclin D1 F=2.361,2.915,1.976,all P＞0.05). Conclusions Brucine inhibits the growth of liver cancer cells, by inducing increased apoptosis of the cells probably through FAS overexpression.     

马钱子碱抗肝细胞癌侵袭转移作用的实验研究

马钱子碱（Brucine）是马钱子主要成分之一,是一种弱碱性生物碱,水溶性差,作为活血通络和＂以毒攻毒＂代表药物,对T淋巴细胞增殖有促进作用,对小鼠淋巴细胞功能有剂量依赖性的功能调节作用,具有明显的抑瘤作用和很强的镇痛作用。马钱子碱是否具有抗肝细胞癌侵袭转移作用尚不清楚,本研究通过体外培养肝癌细胞,观察马钱子碱抗肝癌侵袭转移作用。     

马钱子对人肝癌细胞生长的影响及其作用机制

目的 探讨马钱子对人肝癌细胞生长影响及作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,分别加入5％、10％、20％的马钱子药物血清,噻唑蓝(MTT)比色法测定对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用.20％马钱子药物血清作用肝癌细胞SMMC-77210、24、48 h后,分别收集细胞,提取蛋白和总RNA,应用Westem blot和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Fas、Cyclin D1、PCNA蛋白和mRNA表达.结果 20％马钱子药物血清对人肝癌细胞72 h的生长抑制率为(54.94±8.19)％,与5％、10％浓度抑制率(19.928±7.653)％、(29.020 ±6.100)％比较差异有统计学意义(F=18.23,P＜0.01).药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Fas蛋白表达分别为(0.302±0.009)、(0.399±0.021),与对照组(0.226±0.022)比较,差异有统计学意义(F=68.25,P＜0.05);药物血清作用48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 PCNA蛋白表达为(0.7457±0.0386),与对照组、24 h(0.8529±0.0099、0.9016±0.0139)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Cyclin D1 mRNA表达分别为0.045 680 ±0.038 130、0.026 714±0.019934,与对照组(0.145246±0.048543)比较,差异有统计学意义(F=8.671,P＜0.05);药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Cyclin D1蛋白表达,PCNA、Fas mRNA表达变化差异无统计学意义(F =68.25,P＞0.05).结论 马钱子具有抑制人肝癌细胞增殖作用,其抑制效应与药物血清浓度成正相关;通过上调肝癌细胞Fas蛋白和下调PCNA蛋白及Cyclin D1 mRNA表达,是马钱子抑制肝癌细胞增殖的机制之一.     

TRAIL的抗肝细胞癌作用研究

目的 探讨TRAIL对HCC的治疗作用。方法 用不同浓度TRAIL处理肝癌细胞株HepG2、SMMC7721，观察经药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。采用分子克隆技术构建了真核表达质粒pIRES-EGFP-TRAIL，转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721细胞，观察其疗效。体内实验建立裸鼠肝癌模型，观察TRAn。的抑癌作用。结果TRAR，(100ng／m1)处理24h，肝癌细胞凋亡发生率约10％，而Jurkat细胞凋亡率达70％以上，胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50％。真核表达质粒TRAIL体外转染肝癌细胞后对肝癌细胞的生长无显著性的抑制作用。体内直接瘤体注射pIRES-EGFP-TRAIL可有效的导入TRAIL基因并获得高表达，但对裸鼠肝癌无明显抑制作用。结论 肝细胞癌对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象，提示HCC中存在抑制TRAIL诱导凋亡的因素，单一的TRAIL疗HCC疗效有限。     

肝细胞癌根治性切除术后患者创面植入氟尿嘧啶微粒的护理

目的总结肝细胞癌根治性切除术后残肝创面植入氟尿嘧啶患者的护理要点。方法对62例肝细胞癌行肝切除后患者术中肝创面植入氟尿嘧啶微粒,术后加强病情观察,积极处理局部疼痛、胃肠道反应、口腔黏膜炎、骨髓抑制、感染等不良反应,对并发腹腔积液、胸腔积液、肾功能不全、胆漏的患者加强观察及护理。结果全组无手术死亡,发生腹腔积液、胸腔积液、肾功能不全、胆漏各1例,经对症治疗均缓解。随访至2014年1月31日。患者术后1、2年的无瘤生存率为83.9%、72.6%。结论对肝细胞癌根治性切除术后残肝创面植入氟尿嘧啶患者加强不良反应和并发症的观察与护理,提高了区域性化疗的安全性和患者的耐受性,保证了治疗效果。     

肝细胞癌抗血管生成研究进展

肝细胞肝癌 (hepatocellular carcinoma,HCC)是恶度最高的恶性肿瘤之一 ,预后较差 ,手术切除是其治疗的主要手段 ,而术后复发转移仍是治疗失败的主要原因。 HCC是典型的多血管肿瘤 ,血管生成被认为是其恶性生物学行为基础 ,抗血管生成治疗有望成为改善预后乃至攻克 HCC的一种全     

导入免疫效应蛋白基因增强自然杀伤细胞抗肝细胞癌作用的研究

目的 观察民入免疫效应蛋白NKG5－SV基因增强肝癌患者自然杀伤（NK）细胞抗肝细胞肝癌的效应。方法 以逆转录病毒为载体,将NKG5－SV导入肝癌患者的NK细胞,MTT法检测不同NK细胞的杀伤活性,测量小分子DNA片段定量检测凋亡。以LCI－D20裸鼠人肝癌转移模型为材料,研究肝癌切除术中脾内或切缘注射生理盐水、NK－LacZ细胞、NK－NKG5－SV细胞对肝癌切除术后转移复发的影响。结果 与NK细胞相比,NK－NKG5－SV细胞对SMMC－7721、HepG2肝癌细胞的杀伤活性明显增强,而K－LacZ细胞则无明显改变。对LO2细胞的杀伤活性和诱导SMMC－7721细胞凋亡产生的降解DNA三种NK细胞组无区别。术中无论切缘注射还是脾注射,NK－NKG5－SV细胞组肝癌肝内和远处的复发转移均少于对照组和NK－LacZ细胞组。结论 转染NKG5－SV基因的NK细胞对肝癌细胞的杀伤能力明显增强,肝癌切除术中无论切缘注射还是脾内注射均可抑制肝癌切除术后在转移复发。     

索拉菲尼联合树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞抗肝细胞癌生长作用的实验研究

目的观察索拉菲尼联合树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞抗肝细胞癌生长作用。方法体外培养细胞因子诱导杀伤细胞与树突状细胞,采用不同剂量索拉菲尼6.9μmol/L、13.8μmol/L、20.8μmol/L联合树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞作用于小鼠H22肝癌细胞,应用酶联免疫分析技术测定二者联合对肝癌细胞增殖抑制率。结果随着索拉非尼剂量增加,对H22肝癌细胞增殖抑制作用增强,与索拉非尼相比,抑制率差异具有统计学意义(F=1.236,P0.05;4.4 mg/ml剂量除外);索拉非尼在13.25 mg/ml时联合DC-CIK细胞对肝癌细胞增殖抑制作用最强,与索拉非尼4.4 mg/ml剂量联合DC-CIK细胞作用相比,抑制率差异具有统计学意义(F=2.175,P0.05)。结论索拉非尼联合树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞共同作用于肝癌细胞,能够提高索拉非尼杀伤肝癌细胞作用,且对肝癌细胞增殖抑制作用呈现剂量依赖性,为进一步提高分子靶向药物临床治疗肝细胞癌的疗效提供了理论依据。     

纳米微粒光敏剂光动力治疗结肠癌的实验研究

目的探讨普通光敏剂profrinⅡ纳米化后光动力疗法（PDT）对结肠癌的生长抑制作用。方法超声乳化法构建profrinⅡ纳米微粒，建立人结肠癌LOVO细胞裸鼠种植瘤模型，把荷瘤裸鼠分为对照组：不注射光敏剂，不用激光照射；纳米微粒光敏剂组：注射profrinⅡ纳米微粒悬液，不用激光照射；普通光敏剂PDT组：注射profrinⅡ后3h，激光照射30min；纳米微粒光敏剂PDT组：profrinⅡ纳米微粒悬液注射后3h，激光照射30min。经小鼠尾静脉注入profrinⅡ纳米微粒（30mg／kg体重），光敏化3h后用半导体激光仪垂直照射肿瘤30min（能量密度9J／cm^2）。然后连续观察肿瘤体积的变化及荷瘤裸鼠生存时间，瘤体苏木精-伊红染色病理分析。结果纳米微粒光敏剂PDT组在治疗后早期产生明显的抑制肿瘤增殖作用，瘤体组织坏死，腺腔样结构解离破坏，微血管坏死，血栓形成。纳米微粒光敏剂PDT组与对照组和纳米微粒光敏剂组相比，延命率提高65．2％和58．3％（P〈0．05），抑瘤率增加87．9％和87．5％（P〈0．05）；与普通光敏剂PDT组相比，延命率提高18．8％（P〈0．05），抑瘤率增加56．0％（P〈0．05）。结论纳米微粒光敏剂PDT可明显抑制裸鼠结肠种植瘤生长，延长荷瘤裸鼠生存期。     

肝细胞癌的外科治疗

肝细胞癌的外科治疗廖传佳，刘允怡肝细胞癌或肝癌为世界上最常见的癌症，占肝新生物的９０％和所有癌症的１０％。它可能是最常见的男性恶性肿瘤，每年有一百万人死于该病。肝细胞癌发生率（每１０万男性／年）在加拿大、法国、大不列颠和澳大利亚南部少于２例，新加坡为...     

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目的 介绍用肝门区域血管阻断法切除最大径１０～３０ｃｍ,且经病理证实的肝细胞癌９６例的经验。复发的相关因素和疗效。方法 用肝门务砭解剖法游离阻断相应血管如肝右叶或右叶多亚役切除阻断肝动脉（ＨＡ）和门静脉（ＰＶ）右支（５４例次）,中叶切除阻断睡ＰＶ右前支和ＨＡ和ＰＶ左内支（１０例次）、左叶切除阻断ＨＡ和ＰＶ左支（１１例次）,左外段切除阻断ＨＡ和ＰＶ左外支（１５例次）。结果 （１）手术死亡率３．１％;     

三氧化二砷抗肝癌作用及其肾毒性作用的实验研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）抗肝癌作用及其对肾脏的毒副作用并探讨其作用机制。方法：二乙基亚硝胺灌胃制备大鼠肝癌模型。以As2O3或顺铂注射于大鼠腹腔，第7、14、28天获取肝癌结节，光、电镜下观察肝癌细胞形态学变化，流式细胞仪检测凋亡及细胞动力学变化。第28天获取肾脏，光镜下观察肾脏组织形态学变化，免疫组织化学SP法检测bcl-2、增殖细胞核抗原（PCNA）表达变化。结果：As2O3诱导大鼠肝癌细胞凋亡，出现典型形态学改变；引起肝癌细胞凋亡率上开，中剂量组（1mg/kg体重）显著上升，明显高于顺铂组（P＝0．000）。顺铂组大鼠肾脏（4／7）镜下出现肾小管上皮细胞浊肿、变性，集合管内蛋白管型出现，而砷剂组无明显改变（P＝0．013）；砷剂组肾上管上皮细胞bcl-2表达增加（P＝0．005），PCNA标记指数无明显改变，顺铂组PCNA LI明显升高（P＝0．001）。结论：As2O3可诱导大鼠肝癌细胞凋亡，且优于顺铂；与顺铂相比，无明显肾毒性。     

解剖性肝切除术治疗原发性肝癌的安全性及疗效探讨

目的探讨解剖性肝切除术治疗原发性肝癌的安全性以及临床疗效。方法38例肝切除术治疗原发性肝癌的患者分为2组：解剖性肝切除术组15例，非解剖性肝切除术组23例，对两组病例的手术和随访情况进行分析评价。结果两组患者均无手术死亡，术中出血、并发症发生率、住院时间差异无统计学意义。解剖性肝切除标本切缘满意率（〉2cm）较高、术后近期复发率显著降低，1年无瘤生存率高于非解剖性肝切除。结论解剖性肝切除术是治疗原发性肝癌安全有效的术式，对有适应证的病例应尽可能采用此种手术方式，有望获得较好的疗效。     

血管内皮生长因子反义核酸对肝癌生长的抑制作用

目的　探讨血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在实体肿瘤中的作用。方法　应用分子克隆技术构建人全长ＶＥＧＦｃＤＮＡ反义基因真核表达载体,并用脂质体法转入人肝癌细胞系（ＨｅｐＧ２） ,观察转染后肝癌细胞在裸鼠体内的生长及瘤体内微血管的通透性。结果　各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间无明显差别,但反义核酸转染组肿瘤的生长速度及瘤体的重量均明显落后于其他组,肿瘤内血管的通透性也显著降低。结论　ＶＥＧＦ在实体肿瘤的生长过程中起着十分重要的作用。     

Medico-economic study of the management of hepatocellular carcinoma by chemo-embolization

PurposeThis study has two aims. The first is to compare conventional lipiodol chemo-embolization (Trans Arterial Chemo-Embolization – TACE) to one using pre-loaded particles (Trans Arterial Chemo-Embolisation-Drug Eluted Bead – TACE-DEB) using a cost minimization study. The second is to define the fundable nature of TACE-DEB and the conditions under which it is cost-effective.Materials and methodsRetrospective study of patients treated by chemo-embolization (n = 31: TACE; n = 32: TACE-DEB) during the year 2010. The cost minimization study was conducted from the hospital perspective. Direct medical costs were calculated and compared using the readjusted ENCC (National Studies of Costs by Common Methodology) method. The affordability of the two techniques and definition of a cost-effective hypothesis (break-even point) were also established.ResultsAll DRGs combined, lengths of stay (TACE: 4.90 ± 3.36; TACE-DEB: 5.03 ± 3.36) does not change significantly. An average upper mean cost for TACE-DEB is described (TACE: 2869.05 €; TACE-DEB: 3960.10 €). The affordability calculations in the study show that, overall, TACE-DEB can be funded regardless of DRG. A ratio of 1.3 procedures using the conventional (TACE) method would enable TACE-DEB procedures to be funded.ConclusionThis medico-economic analysis demonstrates that the TACE-DEB procedure is fundable.     

经导管动脉化疗栓塞在肝细胞癌骨转移治疗中的应用初探

目的初步探讨经动脉化疗栓塞术（TACE）治疗原发性肝细胞癌（HCC）骨转移瘤的应用价值。方法收集中山大学附属第一医院伴有骨转移瘤的HCC患者15例,3例（20．0％）为多发性骨转移,12例（80．0％）为单发转移。TACE治疗骨转移瘤前后行影像学检查,以目测模拟法（VAS法）对局部疼痛程度进行分级,治疗后随访3个月以上。结果所有患者成功行局部骨转移灶TACE治疗,术中无并发症。15例患者术前VAS评分均在7分以上,术后局部疼痛均有不同程度缓解。按VAS评分标准,1个月后随访完全缓解3例,明显缓解7例,轻度缓解5例。治疗后3个月疼痛缓解的有效率为80．0％,至6个月时总体有效率仍达58．3％。影像学评价的治疗有效率达86．7％。TACE后1个月5例患者AFP下降〉50％,8例下降〉30％,2例下降〉20％。术后3个月生存率为100％,6个月生存率为80％。结论TACE可有效控制肝细胞癌骨转移灶的局部生长、缓解疼痛,有助于患者生存质量的提高。     

原发性肝癌三种根治性方法疗效的多中心对比研究

目的 探讨肝切除、原位肝移植及射频消融三种疗法对原发性肝癌的治疗效果,以便为原发性肝癌的治疗选择恰当的方法.方法 广州市三家医院近5年来采用射频消融、肝切除及原位肝移植治疗原发性肝癌患者1198例.接受上述三种不同治疗方案的患者分别分为三组,Ⅰ组为小肝癌组,Ⅱ组为大肝癌无血管侵犯组,Ⅲ组为大肝癌并血管侵犯组.分别比较三组间1、2、3年治疗后生存率,3年肿瘤复发率;并对接受上述三种疗法各组患者肝功能Child-Pugh分级进行比较.结果 符合米兰标准的小肝癌患者行肝移植较肝切除3年生存率高(P<0.05),复发率低(P<0.05);射频消融者3年生存率及复发率均比肝切除好(P<0.05);射频消融的疗效及复发率与肝移植差异无统计学意义(P>0.05);但接受射频消融及肝切除者肝功能绝大部分为Child A级,而肝移植者大部分为B及C级(P<0.01).超出米兰标准的大肝癌进行肝移植、肝切除或射频消融效果差异无统计学意义(P>0.05),但肝移植的3年复发率偏低(P<0.05).结论 对于符合米兰标准的小肝癌患者,肝移植的中远期疗效优于肝切除;射频消融(3 cm以下肿瘤)疗效比肝切除好;射频消融的疗效及复发率与肝移植相当;但接受射频消融及肝切除者肝功能绝大部分为Child A级,而肝移植者大部分为B及C级.因而小肝癌合并肝功能不全者或衰竭者肝移植应为首选.超出米兰标准的大肝癌进行肝移植、肝切除或射频消融效果差别不大,但肝移植三年复发率偏低,在供肝短缺的情况下不主张首选肝移植.

Abstract：

Objective Partial hepatectomy, liver transplantation, and radio frequency ablation for hepatocellular carcinoma (HCC) were compared to select the most suitable method for HCC. Methods 1198 patients with HCC in 3 hospitals in Guangzhou were divided into 3 groups: group Ⅰ , small HCC; group Ⅱ > HCC without vascular invasions and group Ⅲ , HCC with vascular invasion. The patients either received partial hepatectomy, transplantation or ablation. The 1-, 2- or 3-year survival rates, the 3-year recurrent rates and Child-Pugh grades in the 3 groups were compared. Results For small HCC, there was a significant increase in the 3-year survival rate (P<0. 05) and a significant decease in the recurrent rate (P<0. 05) in patients who received transplantation, compared with those who received hepatic resection. Patients who received ablation had a higher 3-year survival rate and a lower recurrence (P<0. 05) in comparison with those who received hepatectomy. There was no significant difference(P<0. 05) between transplantation and ablation, but there were more Child A patients who received hepatectomy and ablation, and more Child B and C patients who received transplantation. For advanced HCC, there was no significant different in the 3-year survival rates for the 3 therapies, but the 3-year recurrence was lower (P<0. 05) in the transplantation group. Conclusions For small HCC, superiority of transplantation versus resection was obvious. Ablation (diameter <3 cm) was also superior to resection, whereas ablation was as effective as transplantation. There were more Child B and C patients in the transplantation group than the ablation and resection groups. Therefore, small HCC with hepatic decompensation should receive liver transplantation. Transplantation was advantageous in having less tumor recurrent but there was no difference in the 3 therapies for advanced HCC.     

精准医疗时代肝细胞肝癌诊疗策略

组学和临床数据的更新及检测技术的进步为精准医疗的实施提供了信息和技术支持。在这种理念下,通过对异质性疾病进行精细的亚组分类,可实现诊疗策略的精准应用,提高治疗效果,减少不必要的副作用。精准医疗理念在肿瘤领域发展较快,并对高度异质的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊疗策略产生一定影响。本文针对精准医疗理念下HCC诊疗策略的更新及存在的问题进行概述,包括HCC的人群预防、高危人群筛查、早期诊断、分期、治疗方案的选择、疗效及预后评估等,为HCC的精准医疗提供新的思路。     

逆行法肝切除术在肝癌手术中的应用

目的探讨逆行法肝切除术的切除率及其安全性。方法1994年6月至2005年12月同一手术组共切除难切性肝癌574例,其中用逆行法切除543例（甲组）,用传统方法切除31例（乙组）作为对照。结果两组均无围手术期死亡,甲组术中失血量和术后并发症发生率均明显低于乙组（P〈0.01）。结论难切性肝癌行逆行肝切除术可明显提高切除率和安全性。