C-met-siRNA在肝癌细胞株MHCC97-H侵袭和转移中的作用

目的探讨c—met-siRNA对肝细胞癌生长和侵袭的影响。方法采用脂质体法将pSuppressorRetro／c—met—siRNA导入包装细胞Phoenix A中获得含c-met-siRNA的逆转录病毒颗粒，进一步感染靶细胞MHCC97-H，Western blot检测c—Met的表达，通过生长曲线、运动试验及侵袭试验比较转染前后细胞的生长、运动及侵袭能力。结果肝细胞癌MHCC97-H细胞中c—Met的表达显著降低；细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制。结论c—met—siRNA能抑制肝细胞癌细胞MHCC97-H的生长、运动及侵袭，这对肝细胞癌的生长、转移具有重要的临床意义。     

环状RNA在肝细胞癌发生发展及诊疗中的作用

肝细胞癌(HCC)作为原发性肝癌最常见的类型,是一种具有侵袭性且致命的恶性肿瘤,其发生发展是一个多基因参与、多步骤、多阶段的过程。环状RNA(circRNA)作为一类内源性非编码RNA,主要通过吸附微小RNA(miRNA)或者RNA结合蛋白(RBP)发挥“海绵作用”,进而调控下游靶基因表达。本文全面介绍了circRNA在HCC信号转导、免疫、代谢、耐药、HBV相关HCC中的作用及意义,及其作为HCC的生物标志物或治疗靶点的潜在价值,为HCC的诊断和治疗提供新思路。     

微小RNA-223及其标靶基因c-myc在肝癌发病中的作用

目的 探讨微小RNA-223(miR-223)对原癌基因c-myc的调控及其在肝癌发病中的作用.方法 通过实时定量聚合酶链反应和Western blot检测正常肝脏组织、癌旁组织、肝癌组织及肝癌HepG2细胞、胎肝L02细胞中miR-223和c-myc的mRNA和蛋白质表达水平.构建miR-223模拟物(mimics)上调肝癌细胞HepG2中miR-223表达后,实时定量聚合酶链反应和Western blot 检测HepG2细胞中c-myc表达水平的变化.分别用独立样本t检验和单因素方差分析进行两组及多组数据间的比较,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 miR-223在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.055±0.015、0.030±0.008和0.020±0.016,肝癌组织低于正常肝组织(t=-0.031,P＜0.05).miR-223在HepG2细胞中的表达较L02细胞下调(0.005±0.003比0.011±0.006,t=12.74,P＜0.01).c-myc mRNA在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.029±0.023、0.136±0.071和0.425±0.026,肝癌组织高于正常肝组织(t=-0.317,P＜0.05);c-myc蛋白在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.137±O.015、0.299±0.033和0.439±0.027,差异有统计学意义(F=103.35,P＜0.01).miR-223 mimics转染HepG2细胞后,c-myc蛋白在空白组、转染组和阴性对照组的相对表达量分别为0.423±0.041、0.116±0.015和0.432±0.034,转染组较其他两组明显降低(F=94.93,P＜0.05).结论 miR-223在肝癌组织中表达下调,丧失其对c-myc表达的抑制而导致c-myc异常高表达可能是肝癌发生的重要机制.

Abstract：

Objective To investigate the regulatory role of microRNA-223 (miR-223) on c-myc and its role in hepatocarcinogenesis.Method miR-223 and c-myc mRNA expressions in normal tissue,paraneoplastic tissue,liver cancer tissue and liver cancer cells were tested with microRNA microarray and quantitative real-time PCR (qRT-PCR).C-myc protein expression was detected by Western blot.MiR-223mimic was transfected into HepG2 cells and the expression changes of c-myc mRNA and protein were tested with qRT-PCR and Western blot respectively.Results MiR-223 was down-regulated by 61.53% and 30.77% respectively in hepatocellular carcinoma and adjacent tissues as compared to normal liver tissues and the expression of miR-223 was also decreased in HepG2 cell as compared to fetal liver cells L02,whereas the expressions of c-myc mRNA and protein increased in paraneoplastic and HCC tissues compared with normal liver tissues.It prompts that the expressions of miR-223 and c-myc are negatively correlated.No obvious difference found among c-myc mRNA expressions after miR-223 mimics transfection.Conclusions The cmyc abnormal high-expression may play a dynamic role in hepatocarcinogenesis due to the miR-223 downregulation.     

microRNA与原发性肝细胞癌发生机制相关性的研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类长约19-22个核苷酸的内源性非编码的小分子RNA,通过对靶基因转录后水平的负性调控作用,从而降低靶基因的表达水平.近年研究发现miRNA参与调节肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡等多个生物学过程,其突变、缺失或表达水平的异常与人类肿瘤发生发展密切相关.本文就miRNA和人原发性肝细胞癌发生的相关性研究的最新进展作一综述.     

上皮间质转化标志物E-cadherin和Vimentin在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的 检测上皮间质转化(EMT)标志物E-cadherin和Vimentin在原发性肝癌及相邻正常组织中的蛋白表达水平,探讨E-adherin和Vimentin表达差异与肝癌转移相关性及预测临床预后意义. 方法 收集30例原发性肝癌患者肝癌组织及相邻正常组织,Western blot荧光发光法定量检测E-cadherin,Vimentin蛋白在肝癌组织及相邻正常组织的表达,分析二者的蛋白表达相互关系及其与临床病理特征的相关性;同时采用免疫组织化学法检测Twist,Vimentin,E-cadherin在肝癌组织及相邻正常组织中的表达.数据统计采用配对t检验,Mann-Whitney U检验,spearman等级相关分析.结果 E-cadherin蛋白在原发性肝癌中肝癌组织较相邻正常组织表达显著降低,相对表达量为0.082±0.063对比0.226±0.215,差异具有统计学意义,t=-4.050,P＜0.01;其在门静脉癌栓患者肝癌组织中表达较无门静脉癌栓者降低(P=0.001),其在TNMⅢ期患者肝癌组织中表达较TNM Ⅰ/Ⅱ期表达降低(P=0.003);Vimentin蛋白在原发性肝癌中癌组织表达较相邻正常组织表达增高(P=0.002),Vimentin蛋白表达与E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.509,P=0.004),Vimentin蛋白表达与门静脉癌栓(P＜0.01)、TNM分期(P＜0.01)、Milan标准(P=0.005)存在相关性;免疫组织化学结果显示E-cadherin在癌组织中几乎不表达,在相邻正常组织细胞膜上高表达,Vimentin和Twist均在肝癌组织细胞中高表达,而在相邻正常组织不表达.结论 EMT标志物E-cadherin和Vimentin蛋白在原发性肝癌中的表达与患者门静脉癌栓、TNM分期等临床特征密切相关,E-cadherin和Vimentin可作为预测肝癌转移复发及评估临床预后的有效指标.     

环状RNA在肝细胞癌发生发展中的作用

肝细胞癌(HCC)是世界上常见的恶性肿瘤之一,研究调控HCC的侵袭迁移机制对于其临床诊断和治疗具有重要意义。环状RNA(circRNA)作为非编码RNA家族的重要成员,因其环状结构高度稳定,在肝细胞中起microRNA(miRNA)海绵作用,以竞争内源性RNA机制调控miRNA或促进靶基因表达,在HCC进展中起重要作用。探讨circRNA在HCC发病中的作用机制,将有助于筛选HCC诊断标志物和研发治疗的有效靶点。     

肝癌外泌体源性miRNA表达及其临床价值

肝细胞癌(HCC)早期诊断和有效治疗,仍然是困扰医学界的难题。外泌体是直径为40~100 nm的微小囊泡,内含蛋白质、脂质和核酸,作为信息物质交换的转运载体,在调控生物分子功能、维持细胞内环境中起重要作用。HCC外泌体功能包括胞间信息交换、新血管生成、癌细胞转移与多药耐药等,可介导微小RNA(miRNA)转化以调控肿瘤进展的微环境,进而影响癌细胞的病理生理学行为。外泌体源性miRNA可用于HCC监测或为早期诊断潜在特异标志物,且可作为HCC治疗靶目标,具有开发应用前景。现综述HCC外泌体源性miRNA研究的新进展。     

E-选择素及其配体表达对肝癌转移的临床意义

目的 探讨E-选择索(E-selectin)及其配体在肝癌细胞与内皮细胞黏附中的作用和二者表达的临床意义;并筛选可能阻断黏附作用的药物. 方法 收集78例肝细胞癌患者的临床资料,采用免疫组织化学方法检测E-selectin、sLeX、sLeA、CD44v6的表达情况,按临床特征分组并比较各组E-selectin、sLeX、sLeA、CD44v6的阳性表达率差异.体外实验采用实时荧光定量PCR检测E-selectin和细胞间黏附分子(ICAM)-1在ED25、ECV304两种内皮细胞中的表达;黏附实验检测肝癌细胞HepG2与ED25、ECV304两种内皮细胞的黏附活性,并检测不同药物对黏附作用的影响.对临床资料数据采用χ2检验、Kaplan-Meier生存分析与Wilcoxon检验;对体外实验计量数据进行方差分析.结果 E-selectin在肝癌病灶内血管内皮细胞中的阳性表达率为70.51%,sLeX、sLeA、CDJ44v6在肝癌细胞中的阳性表达率分别为64.10%、69.23%、62.90%.sLeX、sLeA、CD44v6表达阴性患者的平均生存期显著长于阳性患者(P值均<0.05).有门静脉癌栓、术前肝外转移、卫星病灶、术后3个月内复发各组E-selectin、sLeX、sLeA的阳性表达率差异均有统计学意义(P值均<0.05);而肿瘤大小、血清AFP水平均与E-selectin、sLeX、sLeA的阳性表达率无相关性;病理分级Ⅲ～Ⅳ级组与Ⅰ～Ⅱ级组的E-selectin和CD44v6的阳性表达率差异均有统计学意义(P值均<0.05).CD44v6的表达特点是术后3个月内复发者有较高的阳性率,有卫星灶者阳性率也较高.E-selectin和ICAM-1可高表达于活化后的ED25和ECV304细胞;且能介导HepG2细胞与ED25和ECV304细胞的黏附,地塞米松,丹参酮ⅡA都具有较强的抗黏附能力,且抗黏附作用随着浓度的增加而增强.结论 E-selectin、sLeX.sLeA、CD44v6的表达与患者的预后,门静脉癌栓等临床特征密切相关,可作为临床预后和术后早期复发的评估依据.E-selectin、ICAM-1及其配体可增强肝癌细胞与内皮细胞的黏附,促进肝癌转移;地塞米松、丹参酮ⅡA可阻断其黏附作用.     

miR-409-3p在肝癌HepG2细胞中的表达及其在细胞增殖中的作用机制

目的 本研究旨在明确miR-409-3p在肝癌细胞系中的表达及其意义,并探讨可能的分子机制。方法 利用实时荧光定量PCR的方法检测miR-409-3p在正常肝细胞LO2,以及HepG2、BEL-7402、SMMC-7721、MHCC-97H四种肝癌细胞中的表达差异。阳离子脂质体法将miR-409-3p mimics及microRNA mimics control瞬时转染至肝癌细胞株HepG2中,利用CCK8法、平板克隆、流式细胞术检测miR-409-3p对体外癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。Western Blot检测过表达miR-409-3p的HepG2细胞中c-Met蛋白的表达变化,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK法。结果 基于TCGA肝癌microRNA表达谱数据,肝癌组织中miR-409-3p的表达水平显著低于癌旁组织(t=7.752,P<0.05)。与在LO2中的表达水平相比,miR-409-3p在HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H、BEL-7402中的表达水平均明显降...     

肝内转移和多中心发生的多结节肝癌蛋白质表达谱的差异分析

目的 比较分析多结节肝癌的肝内转移癌灶和多中心发生癌灶的蛋白质表达谱,为更加准确的分子分型方法提供实验依据. 方法对5例肝内转移(IM)和6例多中心发生(MO)的多结节肝癌按照结节大小分为IM1、IM2、MO1、MO2四组,联合双向凝胶电泳与质谱技术分析多结节肝癌的蛋白质表达谱;并用Westem blot验证质谱结果.结果 双向凝胶电泳联合质谱技术鉴定IM1、IM2、MO1、MO2四组共30个差异蛋白质点,确认为25种差异表达的蛋白质;Gene Ontology 分类显示其与细胞运动、信号转导、氧化还原、脂类代谢、氨基酸代谢等有关. 结论多结节肝癌肝内转移和多中心发生的蛋白质表达不同;双向凝胶电泳联合质谱技术可作为二者分子分型的方法,有利于临床医师对肝癌患者实施治疗和判断预后.     

膜型基质金属蛋白酶-1与肝细胞癌侵袭转移性的关系

目的 探索膜型基质金属蛋白酶－１（ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｔｙｐｅ１ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,ＭＴ１－ＭＭＰ）与肝细胞癌（ＨＣＣ）侵袭转移性的关系及以ＭＴ１－ＭＭＰ来判断肝细胞癌侵袭转移性的可能性和方法。方法 通过ＲＴ－ＰＣＲ对正常肝、ＨＣＣ及其癌旁组织、癌栓组织,裸鼠人肝癌高、低转移模型中的ＭＴ１－ＭＭＰｍＲＮＡ进行半定量研究,并与ＨＣＣ侵龚转移的病理指标进行统计分析,结果 正     

肝癌诊断与预后判断的分子标志物

自20世纪80年代开始,肝癌发病率不断攀升.肝癌在全世界的发病率位居男性各类肿瘤的第五位,其病死率更是高居第二位;在我国广大农村地区,肝癌的病死率位居男性各类恶性肿瘤病死率的首位.值得关注的是,女性肝癌的发病率呈现上升的趋势.依据美国癌症协会的最新统计资料,2008年肝癌新发病例约70万,85%的患者来自发展中国家.肝癌是恶性程度高、预后极差的肿瘤之一,仅2008年就有695 500人死于肝癌.肝癌的发病率和病死率高居不下,给原本经济不发达,医疗资源缺乏的发展中国家带来了沉重的经济和社会负担.     

肝癌转移相关的骨桥蛋白表达及其糖基化的改变

目的 检测骨桥蛋白(OPN)在不同转移潜能肝癌细胞株及肝癌组织中的蛋白表达水平及其糖基化水平,探讨OPN糖基化改变与肝癌转移的相关性及其意义. 方法 用免疫组织化学和Western blot法检测人肝癌组织(非转移组6例、转移组7例)及不同转移潜能人肝癌细胞株(L02、Hep3B、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6)中OPN蛋白水平;采用免疫沉淀技术纯化肝癌组织中的OPN蛋白,并采用多重凝集素印迹技术检测转移与非转移肝癌组织中OPN糖基化水平差异.数据统计采用t检验和方差分析.结果 OPN在不同转移潜能肝癌细胞株的表达差异具有统计学意义(F=5.04,P＜0.01).在肝癌组织中,转移组OPN蛋白表达水平明显高于非转移组(t=2.447,P＜0.05),相对吸光度值分别为0.69±0.21和0.45±0.14.免疫沉淀技术成功纯化肝癌组织中的OPN蛋白,后续的凝集素印迹结果显示:与非转移组相比,转移组OPN蛋白对凝集素朝鲜槐、红腰果E型、蔓陀罗、刀豆素A的亲和力较低(P值均＜0.05).结论 OPN蛋白表达水平与肝癌转移潜能增强呈正相关;OPN蛋白的α2,3-唾液酸、平分型GlcNAc、多天线、偏二天线的糖链、高甘露糖型N-糖等糖基化水平改变可能与肝癌转移潜能增高有关.     

细胞间黏附分子-1异常表达与肝癌的侵袭生长和转移

肝细胞性肝癌(HCC)的侵袭生长和转移是治疗失败和死亡的主要原因.HCC转移的发生是多步骤、复杂的生物学过程,在体内受到多种因素调节.通常认为HCC转移的过程是原发部位的癌细胞脱离原发病灶进入血流,在远端的转移部位附着于内皮细胞后开始生长,破坏基底膜完整性,形成浸润性生长.现有的研究结果表明,在HCC的转移过程中多种细胞黏附分子(cell adhesion molecule,CAM)参与其中,并发挥重要作用[1].随着肿瘤免疫学及多种"组学"如基因组学、蛋白质组学、转录组学等新技术的进展,关于CAM与肝癌转移发生机制研究的进展较快.本文综述了与肝癌细胞侵袭生长和远处转移密切相关的细胞间黏附分子-l(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的研究进展.     

骨桥蛋白:一个值得关注的肝癌转移复发预测指标与干预靶点

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)最早从骨基质中分离得到,为一种分泌型非胶原化糖蛋白,富含唾液酸,其部分生物学功能与趋化因子相似.人类编码OPN的基因是一个单一编码基因,具有7个外显子,延伸至大约8 kb核苷酸序列,位于人染色体4q13.OPN为一酸性糖蛋白,富含丝氨酸、天冬氨酸和谷氨酸基,含有一段特殊的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)结构域;相对分子质量约为4.4×104.OPN约含30个单糖,其中10个被唾液酸化;其糖基化特点为1个N-连接寡糖链和6个O-连接寡糖链;整个分子磷酸化位点超过28个.OPN参与体内许多生理和病理过程,例如动脉粥样硬化、骨的重塑、血管发生、组织的损伤与修复、动脉内膜增生、心肌坏死、肾结石、肾间质纤维化和某些自身免疫性疾病.