脊髓趋化因子配体2在大鼠胫骨癌痛中的作用

目的 探讨脊髓趋化因子配体2(CCL2)在大鼠骨癌痛中的作用.方法 健康成年雌性SD大鼠84只,体重160～ 180g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=28):正常对照组(C组)、假手术组(S组)和骨癌痛组(P组).P组胫骨骨髓腔内注射Walker-256乳腺癌细胞混悬液制备大鼠胫骨癌痛模型;S组胫骨骨髓腔内注射生理盐水;C组不作任何处理.于接种前ld、接种后l、3、7、10、14和21 d时,测定机械性刺激阈值.于接种前ld、接种后7、14和21'd时痛阈测定结束后,各组随机处死6只大鼠,取L4～6脊髓组织,采用ELISA法测定CCL2含量,反映其表达.接种后14 d时痛阈测定结束后,P组随机取4只大鼠,采用免疫荧光双标染色法观察脊髓背角CCL2与离子钙接头蛋白分子-1(小胶质细胞特异性标记物)、胶质纤维酸性蛋白(星形胶质细胞特异性标记物)和神经元特异核蛋白(神经元特异性标记物)的共表达情况.结果 与C组和S组相比,P组接种后7～21 d时机械性刺激痛阚下降,接种后7、14和21 d时脊髓CCL2表达上调(P＜0.05).骨癌痛大鼠脊髓背角CCL2在小胶质细胞和星形胶质细胞中存在表达,而在神经元中无表达.结论 脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞中释放的CCL2参与了大鼠胫骨癌痛的发生发展.     

脊髓趋化因子CXC配体13在大鼠神经病理性痛中的作用

目的 评价脊髓趋化因子CXC配体13(CXCL13)在大鼠神经病理性痛中的作用.方法 雄性成年SD大鼠108只,体重150～200g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=27):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(NC-siRNA)组(NS组)和CXCL13-siRNA组(CS组).NP组、NS组和CS组采用结扎L5脊神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型,S组仅暴露L5脊神经,但不结扎.NS组和CS组分别鞘内注射NC-siRNA慢病毒和CXCL13-siRNA慢病毒10μl.分别于术后3、7和14 d时测定机械痛阈,然后处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫荧光法检测CXCL13和Neun的共表达情况以及星形胶质细胞活化情况.采用Western blot法测定CXCL13和GFAP的蛋白表达,采用RT-PCR法测定CXCL13和GFAP的mRNA表达.结果 与S组比较,NP、NS组和CS组术后各时点机械痛阈下降,脊髓CXCL13和GFAP的蛋白及其mRNA表达上调(P＜0.05);与NP组比较,CS组术后各时点机械痛阈升高,脊髓CXCL13和GFAP的蛋白及其mRNA表达下调(P＜0.05),NS组各时点机械痛阈、脊髓CXCL13和GFAP的蛋白及其mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓CXCL13通过激活星形胶质细胞参与大鼠神经病理性痛的形成和维持.     

胫骨癌痛大鼠脊髓背角5-羟色胺水平的变化

目的 评价胫骨癌痛大鼠脊髓背角5-羟色胺(5-HT)水平的变化.方法 雌性SD大鼠60只,体重160～180 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=20):对照组(C组)、假手术组(S组)和胫骨癌痛组(P组).C组不做任何处理;S组于右侧胫骨上段骨髓腔注射D-hank液10 μl;P组于右侧胫骨上段骨髓腔接种Walker 256大鼠乳腺癌细胞悬液10μl制备胫骨癌痛模型.于接种前1d、接种后3、5、7、9、11、14、16、18和21 d时测定机械痛阈.于接种前1 d、接种后7、14和21 d时,每组痛阈测定结束后随机处死大鼠4只,取脊髓组织,采用高效液相色谱法测定脊髓背角5-HT含量;接种后14 d取接种侧胫骨组织,光镜下观察胫骨破坏情况.脊髓背角5-HT含量与机械痛阈进行直线相关分析.结果 与C组和S组比较,P组接种后7～21 d时机械痛阈降低,接种后7、14和21 d时脊髓背角5-HT含量升高(P＜0.05),且5-HT含量与机械痛阈呈负相关(r=-0.973,P＜0.05).C组和S组各时点机械痛阈和脊髓背角5-HT含量比较差异无统计学意义(P＞0.05).光镜下P组大鼠术侧胫骨骨质严重破坏.结论 大鼠胫骨癌痛的形成与维持可能与脊髓背角5-HT水平升高有关.

Abstract：

Objective To investigate the change in 5-hydroxytryptomine (5-HT) content in spinal dorsal horn in a rat model of tibial bone cancer pain (BCP). Methods Sixty female SD rats weighing 160-180 g were randomly divided into 3 groups ( n = 20 each): control group (group C), sham operation group (group S) and BCP group. BCP was induced by intra-tibial inoculation of 10 μl Walker 256 breast cancer cell suspension in group BCP, while group S received intra-tibial inoculation of 10 μl D-hank solution. Paw withdrawal threshold to mechanical stimulation with yon Frey filaments (MWT) was measured 1 d before (baseline) and at 3, 5, 7, 9, 11,14, 16, 18 and 21 d after breast cancer cell inoculation. At 1 d before and 7, 14 and 21 d after breast cancer cell inoculation, four animals in each group were sacrificed after measurement of MWT. Their lumber segments of the spinal cord were removed for assay of 5-HT content in spinal dorsal horn using HPLC with fluorescence detector.HE staining was used to detect the damage to the tibia. Correlation between the 5-HT content and MWT was analyzed. Results MWT was significantly decreased after breast cancer cell inoculation in group BCP ( P ＜ 0.05).Microscopic examination showed serious bone destruction of tibia at the injection site in group BCP, while no bone destruction was found in groups C and S. 5-HT content in spinal dorsal horn was significantly higher in group BCP than in groups C and S (P ＜ 0.05). There was strong negative linear correlation between 5-HT content in spinal dorsal horn and MWT ( r = - 0.973, P ＜ 0.05 ). Conclusion The 5- HT content in spinal dorsal horn is significantly increased in rats with tibial BCP and is involved in the development of BCP.     

脊髓CC趋化因子配体2在大鼠吗啡镇痛耐受中的作用

目的 观察脊髓CC趋化因子配体2[chemokine （C-C motif） ligand 2,CCL2）]蛋白在大鼠吗啡镇痛耐受过程中的作用.方法 成功鞘内置管Sprague-Dawley （SD）大鼠按随机数字表法分成10组（每组6只）：IgG＋吗啡（IgG＋MOR）组、CCL2中和抗体＋吗啡（CCL2 neutralizine antibody＋MOR）组、IgG＋生理盐水（IgG＋NS）组、CCL2中和抗体＋生理盐水（CCL2neutralizine antibody＋NS）组、CCL2中和抗体4＋吗啡（CCL2 neutralizine antibody 4＋MOR）组、IgG4＋吗啡（IgG4＋MOR）组、IgG4＋生理盐水（IgG4＋NS）组、CCL2中和抗体8＋吗啡（CCL2 neutralizine antibody 8＋MOR）组、IgG8＋吗啡（IgG8＋MOR）组、IgG8＋生理盐水（IgG8＋NS）组.连续7d鞘内注射吗啡（15 μg）建立吗啡耐受的动物模型.采用50℃热水甩尾潜伏期法（tail flick latency,TFL）和机械反射阈值法（mechanical withdrawal threshold,MWT）观察CCL2在吗啡的镇痛耐受中作用;应用酶联免疫法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测吗啡耐受过程中脊髓背角CCL2免疫活性表达变化.结果 在吗啡注射3、5、7 d时,与IgG＋MOR组大鼠最大镇痛效应百分率（percent of maximal possible potential effect,％MPE）[％MPETFL：3 d（55±6）％、5 d（27±4）％、7 d（17±3）％;％MPENWT：3 d（54±6）％、5 d（27±4）％、7 d（17±4）％]比较,CCL2 neutralizine antibody＋MOR组大鼠％MPE明显增加[（％MPETFL：3 d（65±6）％、5 d（47±4）％、7 d（42±4）％;％MPEMWT：3 d（65±5）、5 d（46±4）、7 d（41±4）（P＜0.01）],与IgG4＋MOR组[％MPETFL：5 d（27.3±3.6）％、7 d（17±3）％;％MPEMWT：5 d（27±4）％、7 d（17±3）％]比较,CCL2 neutralizine antibody 4＋MOR组大鼠％MPE明显增加[％MPETFL：5 d（46±4）％、7 d（43±4）％; ％MPEMWT：5 d（45±4）％、7 d（44±4）％ （P＜0.01）];在吗啡注射9、11 d时,与IgG8 ＋MOR组[％MPETFL：9 d（16±3）％、11 d（15±4）％;％MPEMWT：9 d（16±     

骨癌痛大鼠脊髓CX3CR1表达的变化

目的 评价骨癌痛大鼠脊髓趋化因子Fractalkine受体1(CX3CRl)表达的变化.方法 雌性未交配SD大鼠650只,体重150～180 g,随机分为3组:对照组(n=10)、假手术组(n=10)和骨癌痛组(n=40).对照组不给予任何处理,假手术组、骨癌痛组分别在左胫骨上端注射Hank液和Walker 256乳腺癌细胞5 μl.对照组和假手术组于术前1 d、术后6、12、18 d时测定机械痛阈和双后肢负重;骨癌痛组于术前1 d、术后6、12、18 d时各取10只大鼠测定机械痛阈和双后肢负重.对照组和假手术组于术后18 d时,骨癌痛组于术后6、12、18 d时各处死10只大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定CX3CR1阳性细胞计数,采用Western blot法测定CX3CR1表达.结果 与对照组和假手术组比较,骨癌痛组术后各时点机械痛阈降低,双后肢负重差,CX3CR1阳性细胞计数升高,CX3CR1表达上调(P<0.01).结论 脊髓CX3CR1可能参与了大鼠骨癌痛的发生和维持.     

趋化因子CCL2中和抗体在大鼠胫骨癌痛治疗中的作用

目的观察鞘内注射趋化因子CCL2中和抗体在胫骨癌痛大鼠治疗中的作用,并探讨可能的机制。方法 40只雌性SD大鼠随机均分为五组:假手术组(Ⅰ组)、假手术+CCL2中和抗体组(Ⅱ组)、骨癌痛组(Ⅲ组)、骨癌痛+controlIgG组(Ⅳ组)和骨癌痛+CCL2中和抗体组(Ⅴ组)。Walker256乳腺癌细胞注入胫骨骨髓腔建立大鼠胫骨癌痛模型。术后10～12d鞘内注射CCL2中和抗体或对照IgG(10μg/15μl)。测定术前1d,术后1、3、5、7、10、14、21d各组大鼠自由行走痛评分。另取30只大鼠,分组同前(n=6),术后14d取材,免疫荧光染色法测定脊髓背角星形胶质细胞标志物(GFAP)的平均光密度值(MOD)。结果与Ⅲ组相比,Ⅴ组大鼠术后10、14和21d自由行走痛评分明显降低,术后14dMOD值明显降低(P<0.01),Ⅳ组对应时点各值无明显变化。结论胫骨癌痛大鼠鞘内注射CCL2中和抗体能显著减轻自由行走痛并抑制脊髓星形胶质细胞的活化。CCL2可能通过激活脊髓星形胶质细胞参与大鼠胫骨癌痛维持的调控。     

胫骨癌痛大鼠脊髓细胞外信号调节激酶5活性的变化

目的 评价胫骨癌痛大鼠脊髓细胞外信号调节激酶5(ERK5)活性的变化.方法 雌性未交配SD大鼠108只,体重160～ 180 9,采用随机数字表法,将其分为3组(n=36):对照组(C组)、假手术组(S组)和胫骨癌痛组(BCP组).BCP组胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞混悬液制备大鼠胫骨癌痛模型;S组胫骨骨髓腔内注射等容量生理盐水;C组不作任何处理.于接种前1d、接种后3、5、7、14和21 d时,测定机械痛阈.C组和S组于接种后21 d痛阈测定结束后随机处死6只大鼠,BCP组分别于接种后3、5、7、14和21 d痛阈测定结束后随机处死6只大鼠,取脊髓组织,采用Westernblot法测定脊髓背角磷酸化ERK5(p-ERK5)、ERK5和Fos蛋白的表达.结果 C组和S组各时点机械痛阈、脊髓背角p-ERK5、ERK5和Fos蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05).与C组和S组比较,BCP组接种后7-21 d时机械痛阈下降,接种后5-21 d时脊髓p-ERK5和Fos蛋白表达上调(P＜0.05),ERK5表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠胫骨骨髓腔内注射肿瘤细胞可能通过增强脊髓ERK5活性,导致其下游Fos蛋白的释放,从而诱发骨癌痛.     

蛛网膜下腔注射甲氨蝶呤对大鼠胫骨癌痛的影响

目的 评价蛛网膜下腔注射甲氨蝶呤对大鼠胫骨癌痛的影响.方法 雌性未交配SD大鼠48只,体重150～180 g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=8):假手术+人工脑脊液组(SA组)、假手术+甲氨蝶呤200μg组(SM200组)、骨癌痛+人工脑脊液组(CA组)和骨癌痛+不同剂量甲氨蝶呤组(CM1～3组).CA组和CM1～3组采用胫骨骨髓腔内注射Walker-256乳腺癌细胞制备胫骨癌痛模型,于注射Walker-256乳腺癌细胞后第7天经L5.6蛛网膜下腔分别注射人工脑脊液、甲氨蝶呤50、100和200 μg; SA组和SM200组骨髓腔内注射等体积生理盐水,于相同时点经L5.6蛛网膜下腔分别注射人工脑脊液和甲氨蝶呤200 μg.于注射Walker-256乳腺癌细胞或生理盐水前l d(基础值)、注射Walker-256乳腺癌细胞或生理盐水后第7天(T0)、给药后2、4、8h及1、2、3、5、7 d(Tl～8)时测定大鼠缩足反应阈值(MWT).结果 与基础值比较,CA组和CM1～3组各时点MWT下降(P＜0.05);与T0时比较,CA组T5～8时MWT下降,CM1组T3-5时MWT升高,CM2组T2～6时MWT升高,CM3组T2～7时MWT升高(P＜0.05);与SA组比较,CA组和CM1～3组MWT下降(P＜0.05);与CA组比较,CM1组T4～7时MWT升高,CM2组和CM3组T3-7时MWT升高(P＜0.05).结论 蛛网膜下腔注射甲氨蝶呤可减轻大鼠胫骨癌痛,其效应与甲氨蝶呤剂量有关.     

脊髓背角γ-氨基丁酸转运体-1在大鼠骨癌痛中的作用

目的 评价脊髓背角γ-氨基丁酸转运体-1 (GAT-1)在大鼠骨癌痛中的作用.方法 清洁级健康雌性SD大鼠80只,体重150～180 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=16):假手术组(Ⅰ组);骨癌痛组(Ⅱ组)采用胫骨上段骨髓腔接种Walker-256乳腺癌细胞的方法制备大鼠骨癌痛模型;假手术+ GAT-1选择性抑制剂NO-711组(Ⅲ组)和骨癌痛+NO-711(Ⅳ组)于术后第14天鞘内注射NO-711 20 μg,1次.d,连续3d;骨癌痛+生理盐水组(Ⅴ组)于术后第14天鞘内注射10μl生理盐水,1次/d,连续3d.于术前1d、术后第3、5、7、10、14、16天时测定大鼠机械痛阈,术后第16天机械痛阈测定后处死大鼠,取腰段脊髓,采用Western blot法检测脊髓GAT-1的表达,采用免疫荧光双标法观察Ⅰ组和Ⅱ组大鼠患侧脊髓GAT-1和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应阳性产物的共表达.结果 与Ⅰ组和Ⅲ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组术后第7～ 16天机械痛阈降低,Ⅱ组和Ⅴ组术后GAT-1表达上调(P＜0.05);与Ⅱ组和Ⅴ组比较,Ⅳ组术后第16天鞘内给药后机械痛阈升高,脊髓背角GAT-1表达下调(P＜0.05);与Ⅰ组比较,Ⅱ组患侧脊髓GFAP和GAT-1共表达增加(P＜0.05).结论 脊髓背角GAT-1的表达上调参与了大鼠骨癌痛的形成与维持,该作用可能与脊髓星形胶质细胞的活化有关.     

胫骨癌痛大鼠脊髓星形胶质细胞的活化

目的 观察胫骨癌痛大鼠脊髓星形胶质细胞的活化情况,探讨骨癌痛产生与维持的机制.方法 Walker 256乳腺癌细胞经大鼠体内腹水传代增殖,种植于大鼠左侧胫骨建立胫骨癌痛模型.雌性SD大鼠35只,体重150-180 g,随机分为3组:对照组(C组,n=5)、热杀死肿瘤细胞组(K组.n=15)、胫骨癌痛组(P组,n=15).C组选取5只大鼠,K组和P组于种植后第6天、第12天和第18天随机取5只大鼠测定左后足机械痛阈,随后处死大鼠,取左侧L4-6脊髓组织,采用免疫组化方法检测脊髓背角胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平.结果 与C组比较,K组大鼠左后足机械痛阈及左侧脊髓背角GFAP表达差异无统计学意义(P>0.05).与K组比较,P组于种植癌细胞后第6天、第12天及第18天时大鼠左后足机械痛阈降低,左侧脊髓背角GFAP表达升高(P<0.01).与种植癌细胞后第6天比较,种植癌细胞后第12、18天时P组大鼠左后足机械痛阈下降,左侧脊髓背角GFAP表达升高(P<0.01),而P组种植癌细胞后第12天与第18天比较,大鼠左后足机械痛阈与脊髓背角GFAP表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 脊髓星形胶质细胞的活化与胫骨癌痛的产生与维持有关.     

脊髓原钙粘蛋白20在大鼠骨癌痛形成中的作用

目的 探讨脊髓原钙粘蛋白20 (PCDH20)在大鼠骨癌痛形成中的作用.方法 SPF级雌性SD大鼠36只,体重180 ～ 200 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=9):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、慢病毒对照组(LC组)、PCDH20 siRNA-LV组(P组).LC组和P组分别于脊髓内注射对照慢病毒和PCDH20 siRNA慢病毒4μl.1周后建立骨癌痛模型,采用右侧胫骨上段骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞的方法制备.于病毒注射前1 d(T1)、骨癌痛模型建立前1 d(T2)、模型建立后7、14和21 d(T3、T4、T5)时测定机械缩足阈值(MWT).骨癌痛模型建立后21 d MWT测定结束后,取术侧胫骨,HE染色后光镜下观察胫骨癌细胞侵犯情况;取脊髓组织,采用免疫组化法和Western blot法测定脊髓PCDH20和突触后致密物蛋白质95(PSD95)蛋白的表达水平,采用RT-PCR法测定脊髓PCDH20和PSD95 mRNA的表达水平.结果 BCP组、LC组及P组肿瘤细胞突破骨髓腔,侵犯骨皮质,骨皮质结构严重破坏;与S组比较,BCP组、LC组和P组T3～T5时MWT明显降低,BCP组和LC组脊髓PCDH20和PSD95 mRNA及其蛋白表达水平明显上调,P组脊髓PCDH20蛋白水平上调(P＜0.05);与BCP组比较,LC组各时点MWT、脊髓PCDH20和PSD95 mRNA及其蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05),P组T4和T5时MWT明显升高,脊髓PCDH20和PSD95 mRNA及其蛋白表达水平下调(P＜0.05).结论 PCDH20通过调控大鼠脊髓PSD95的表达,调节兴奋性突触的功能,从而参与骨癌痛的形成.     

脊髓胶质细胞在小鼠骨癌痛形成中的作用

目的 评价脊髓胶质细胞在小鼠骨癌痛形成中的作用.方法 健康雄性C3H/He小鼠40只,周龄8～10周,体重18～22 g,随机分为4组(n=10):假手术组(S组)、骨癌痛组(B组)、PBS组(P组)和米诺环素组(M组).S组跟骨骨髓腔内注射PBS 10 μl;余3组跟骨骨髓腔内注射含2×105个骨纤维肉瘤细胞的PBS 10 μl制备骨癌痛模型,于造模前即刻开始PBS组鞘内注射PBS 5μl,M组鞘内注射米诺环素(用PBS溶解为0.2 mmol/L)5μl,1次/d,连续11 d.于造模前1 d、造模后即刻、3、5、7、9、11 d时测定机械痛阈;于造模后3、7、9、11 d机械痛阈测定结束后测定冷痛阈.痛阈测定结束后处死小鼠,取脊髓组织,测定神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CD11b的表达水平.结果 与S组比较,B组和P组造模后3-11 d时、M组造模后3、5 d时机械痛阈升高,B组、P组和M组造模后7～11 d时冷痛阈升高,脊髓CD11b和GFAP表达上调(P<0.05).与B组比较,M组造模后3-11 d时机械痛阈降低,造模后7-11 d时冷痛阈降低,脊髓CD11b和GFAP表达下调(P<0.05).结论 脊髓胶质细胞(星形胶质细胞和小胶质细胞)的激活参与了小鼠骨癌痛的形成.     

骨癌痛大鼠脊髓背角T细胞死亡相关基因8表达的变化

目的 探讨骨癌痛大鼠脊髓背角T细胞死亡相关基因8(TDAG8)表达的变化.方法 雌性未交配SD大鼠224只,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组:正常对照组(Ⅰ组,n＝64)、生理盐水组(Ⅱ组,n＝64)和骨癌痛组(Ⅲ组,n＝96).采用左侧胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌肿瘤细胞的方法建立骨癌痛模型.Ⅲ组于接种前1天(基础状态)及接种后第1、3、6、9、12、15、18天、Ⅰ组和Ⅱ组于相应时点取8只大鼠,测定左后肢机械缩足阈值(MWT).Ⅲ组于接种前1天(基础状态)及接种后第6、9、12、15、18天各处死16只,Ⅰ组和Ⅱ组相应于接种后第18天处死16只,取L4～6脊髓,免疫组化染色法测定脊髓背角TDAG8阳性细胞计数,实时定量PCR法检测脊髓TDAG8 mRNA的表达.结果 与Ⅰ组及基础值相比,Ⅲ组接种后第6～ 18天MWT降低,脊髓背角TD-AG8阳性细胞计数升高,脊髓TDAG8 mRNA表达上调(P<0.01),Ⅱ组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨癌痛大鼠脊髓TDAG8表达上调,该变化可能是骨癌痛形成的机制.     

脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S在大鼠骨癌痛维持中的作用

目的 探讨脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S(CatS)在大鼠骨癌痛维持中的作用.方法 雌性未交配SD大鼠50只,4～6周龄,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将其分为5组(n=10):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、假手术+CatS抑制剂吗啉亮氨酸高苯丙氨酸乙烯基苯基砜(LHVS)组(S+L组)、骨癌痛+二甲基亚砜组(BCP+D组)和骨癌痛+LHVS组(BCP+L组).左侧胫骨骨髓腔内接种浓度为2×107/ml Walker256细胞5μl制备大鼠骨癌痛模型.分别于造模后10、11、12d时S+L组和BCP+L组鞘内注射LHVS 50 nmol/10l,1次/d,BCP+D组给予等容量二甲基亚砜.分别于造模前1d(基础状态)及造模后3、6、9、10、11、12 d(T0-6)测定机械缩爪反应阈(MWT),分别于鞘内给药前、鞘内给药后0.5、1.0、3.0、6.0、9.0、12.0、24.0 h时测定(MWT).处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定OX-42表达.结果 与S组比较,BCP组、BCP+D组和BCP+L组T2-6时MWT降低,脊髓背角OX-42表达上调(P＜0.01),S+L组MWT和脊髓背角OX-42表达差异无统计学意义(P＞0.05);与BCP组比较,BCP+L组T4-6时MWT升高,脊髓背角OX-42表达下调(P＜0.01),BCP+D组MWT和脊髓背角0X-42表达差异无统计学意义(P＞0.05).S+L组和BCP+D组鞘内给药后3.0、6.0、9.0h时MWT低于BCP+D组(P＜0.01).结论 脊髓背角小胶质细胞CatS激活参与了大鼠骨癌痛的维持.     

脊髓背角P2Y1受体在大鼠骨癌痛形成中的作用

目的 评价脊髓背角P2Y1受体在大鼠骨癌痛形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雌性SD大鼠90只,体重150～180 g,随机分为5组(n=18):假手术组(Ⅰ组)、骨癌痛组(Ⅱ组)、假手术+P2Y1受体特异性拮抗剂MRS 2179组(Ⅲ组)、骨癌痛+生理盐水组(Ⅳ组)和骨癌痛+MRS2179组(Ⅴ组).采用胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌细胞的方法制备骨癌痛模型.Ⅲ组和Ⅴ组术后第7～9天鞘内注射MRS2179 100 pmol/10μl,1次/d,Ⅳ组注射等体积生理盐水.于术前及术后第3、7、9、12、15、18天给药后测定机械痛阈,于术后第9天测定机械痛阈后处死6只大鼠,取L4～6脊髓背角,测定P2Y1受体和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 与Ⅰ组和Ⅲ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组术后第7～18天机械痛阈降低,P2Y1受体和p-ERK1/2表达上调(P＜0.01);与Ⅱ组和Ⅳ组比较,Ⅴ组术后第9～18天机械痛阈升高,P2Y1受体和p-ERK1/2表达下调(P＜0.01).结论 脊髓背角P2Y1受体参与了大鼠骨癌痛的形成,可能与ERK1/2的激活有关.