不同浓度异丙酚对大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的影响

目的 研究不同浓度异丙酚对原代培养新生Wister大鼠海马神经细胞缺氧复氧损伤的影响及其相关机制。方法 在96孔无菌培养板上原代培养10d的海马神经细胞随机分为6组:对照组(Con组)为异丙酚溶剂,即含2‰DMSO的生理盐水;异丙酚1μmol／L浓度组(Pro1组);异丙酚10μmol／L浓度组(Pro10组);异丙酚50μmol／L浓度组(Pro50组);异丙酚100μmol／L浓度组(Pro100组)及异丙酚200 μmol／L浓度组(Pro200组)。各组细胞在给药后均接受3 h缺氧和24 h复氧,分别以单溶液细胞增殖测试法和非放射测定法测定细胞存活能力及乳酸脱氢酶(LDH)漏出率。48孔无菌培养板原代培养10 d的海马神经细胞随机分为上述6组,采取同样给药及缺氧复氧模式,用硫代巴比妥酸比色测定法和黄嘌呤氧化酶化学发光测定法分别测定丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 异丙酚各组细胞存活能力高于Con组(P<0.05),而LDH漏出率低于Con组(P<0.05),但异丙酚各组之间差异无显著性。Pro1组和Pro10组MDA浓度低于Con组(P<0.05),随异丙酚浓度进一步增高MDA产生有增多趋势而与Con组相当。Pro1组SOD活性高于Con组(P<0.05),随异丙酚浓度递增各组活性降低,尤其在Pro100和Pro200μmol／L两组。结论 异丙酚在临床相关浓度(1 μmol／L)水平能显著减轻缺氧复氧对     

心肌肽素预先给药对大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的影响

目的 研究心肌肽素(CMP)预先给药对原代培养大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的影响 及相关机制。方法原代培养SD大鼠海马神经元,随机分为4组:对照组、缺氧复氧组、CMP 10 μg／ml 组、CMP 100 μg／ml组。对照组不实行任何处理,缺氧复氧组海马神经缺氧4 h复氧48 h,建立神经元缺 氧复氧损伤模型。CMP 10 μg／ml、CMP 100 μg／ml组缺氧前30 min于培养液中加入相应浓度的CMP,缺 氧复氧组加入相应的溶剂。采用四唑蓝比色法测定神经元的细胞活力,采用细胞免疫化学法测定神 经元Bcl-2蛋白表达水平。结果与对照组比较。缺氧复氧组、CMP10 μg／ml组、CMP100μg／ml组海马 神经元缺氧复氧后细胞活力降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0．05),CMP 100 μg／ml组细胞活力及Bcl-2 蛋白表达高于缺氧复氧组和CMP10μg／ml组(P<0．05),CMP 10μg/ml组与缺氧复氧组之间上述两指 标比较差异无统计学意义(P>0．05)。结论CMP100μg／ml可增强Bcl-2蛋白的表达,减轻缺氧复氧 后海马神经元损伤。     

异丙酚对大鼠海马神经元缺氧复氧时线粒体膜通透性的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠海马神经元缺氧复氧时线粒体膜通透性的影响.方法 原代培养胎鼠海马神经元,随机分为3组:对照组(C组)正常培养;模型组(M组)缺氧低糖培养2 h后复氧;异丙酚组(P组)缺氧低糖培养前加入异丙酚,终浓度20 μmol/L.各组于复氧后即刻、4、8、12和24 h(T1～5)时分别用噻唑蓝比色法测定神经元活力,流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP),于T5时采用激光共聚焦显微镜观察细胞膜与线粒体膜通透性.结果 与C组相比,M组T1-5时神经元活力和MMP降低(P＜0.05),T5时细胞膜与线粒体膜通透性增加;与M组相比,P组T1～4时神经元活力升高,T1～5时MMP增加(P＜0.05),T5时细胞膜与线粒体膜通透性降低,完整性改善.结论 异丙酚可通过提高MMP,改善细胞膜与线粒体膜通透性,增强神经元活力,从而减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤.     

吸入不同浓度异氟醚对老龄大鼠海马细胞色素c表达的影响

目的 评价吸入不同浓度异氟醚对老龄大鼠海马细胞色素c(Cyt c)表达的影响.方法 健康雄性老龄SD大鼠63只,月龄20月,体重500～600 g,随机分为3组(n=21),对照组(C组):吸入30%氧气2 h;0.75%异氟醚组(L组):吸入0.75%异氟醚和30%氧气的混合气体2 h;1.5%异氟醚组(I2组):吸入1.5%异氟醚和30%氧气的混合气体2 h.分别于麻醉30 min、1和2 h时,各组取5只大鼠,取动脉血样行血气分析.于麻醉结束后24 h时,各组取8只大鼠,测定认知功能;取8只大鼠,分别采用免疫组化法和Western blot法测定海马Cyt c 的表达水平.结果 与C组比较,Ⅰ1组和Ⅰ2组逃避潜伏期延长,原平台象限停留时间缩短,穿越原平台次数减少,海马Cyt c表达上调(P＜0.05);与Ⅰ1组比较,Ⅰ2组逃避潜伏期、原平台象限停留时间缩短和穿越原平台次数差异无统计学意义(P＞0.05),海马Cyt c表达上调(P＜0.05).结论 吸入异氟醚可通过上调海马Cyt c的表达导致老龄大鼠认知功能障碍.     

二氮嗪预先给药对原代培养大鼠海马神经元缺氧/复氧损伤的保护机制

目的研究ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪预先给药对新生Wistar大鼠原代培养海马神经元缺氧/复氧损伤的保护机制。方法原代培养的新生大鼠海马神经元随机分为2组,二氮嗪组(Dia组),缺氧前给予50μmol/L二氮嗪;对照组(Con组),给予二氮嗪的赋形剂,即含2‰二甲基亚砜的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液;分别在缺氧3 h/复氧24 h和缺氧3 h/复氧48 h后,测定神经元存活能力及LDH漏出率;在缺氧3 h/复氧24 h后,测定丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;在缺氧3 h、缺氧3 h/复氧24 h和缺氧3 h/复氧48 h时,测定早期神经元凋亡率和死亡率。结果与Con组比较,Dia 组缺氧3 h复氧24 h时神经元存活能力升高,缺氧3 h/复氧48 h时LDH漏出率降低,缺氧3 h/复氧24 h培养液中MDA浓度降低,SOD活性升高(P<0.05或0.01);缺氧复氧各时点Dia组神经元坏死率降低,神经元凋亡率升高(P<0.05或0.01)。结论50 μmol/L二氮嗪预先给药减轻原代培养新生Wistar 大鼠海马神经元缺氧/复氧损伤的机制与增加SOD活性有关。     

异丙酚对原代培养海马神经元缺氧反应的影响

目的 观察不同浓度异丙酚对原代培养海马神经元缺氧反应的影响。方法 培养12d海马神经元,随机分为四组：正常对照组、缺氧组、缺氧加异丙酚50μmol/L组,缺氧加异丙酚500μmol/L组。测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出率及c-fos免疫组化。结果 位于细胞核内的c-fos阳性蛋白缺氧前染色为浅紫色,缺氧后呈紫黑色且阳性细胞数量增加（P＜0．01）,而加入异丙酚后能减少这种反应。缺氧组LDH漏出率较正常组增加（P＜0．01）,异丙酚组能降低缺氧组增加的LDH漏出率（P＜0．05）,且与异丙酚剂量有关。结论 异丙酚能提高体外海马神经元的缺氧耐力,减少LDH漏出率和c-fos蛋白过度表达。     

二氮嗪预处理对缺氧复氧后大鼠海马神经元凋亡的影响

目的研究线粒体内膜ATP敏感性钾通道（Mito-KAw）特异性开放剂二氮嗪预处理对缺氧复氧后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法取离体培养的大鼠海马神经元，随机分为4组：对照组（A组）、二氮嗪30μmol／L组（B组）、二氮嗪1（30μmol／L组（C组）、二氮嗪100μmol／L＋Mito-KATP特异性阻断剂5．羟葵酸100μmol／L组（D组），各组神经元每天给予相应药物预处理1h，连续3d，继而缺氧4h复氧24h，观察神经元的活力、凋亡率、Bax和Bd．2蛋白的表达水平。结果与其它3组比较，C组海马神经元活力增强，凋亡率降低，Bcl．2蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平下降（P〈0．01）。结论100μmol／L二氮嗪预处理通过改善Bcl-2与Bax蛋白表达的失衡，降低神经元的凋亡，对大鼠海马缺氧复氧神经元产生了保护效应。     

异丙酚对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的观察异丙酚对谷氨酸诱导体外培养大鼠海马神经元损伤的影响。方法酶消化法分离Wistar新生大鼠海马,培养12 d的海马神经元随机分为三组(n=5),正常对照组(Con组)、谷氨酸100 μmol/L孵育24 h组(Glu组)、谷氨酸100 μmol/L孵育24 h后异丙酚500 μmol/L再孵育24 h组 (Pro-Glu组)。四甲基氮唑蓝法测定细胞存活率,免疫细胞化学法测定c-fos蛋白表达,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果与Con组比较,Glu组及Pro-Glu组的细胞存活率下降,c-fos蛋白在细胞核内表达呈紫黑色且数量增加,细胞凋亡率增高(P<0．05或0．01);与Glu组比较,Pro-Glu组c-fos阳性蛋白减少,细胞凋亡率降低,细胞存活率增高(P<0．05)。结论异丙酚通过降低细胞凋亡率和c-fos阳性蛋白表达,提高细胞存活率,对谷氨酸诱导的海马神经元损伤起一定保护作用。     

异丙酚预先给药对BV-2细胞缺氧复氧时TLR4表达的影响

目的 评价异丙酚对BV-2细胞缺氧复氧时Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 小鼠小胶质细胞(BV-2细胞)于6孔培养板中培养4～6 d后随机分为4组(n=4),正常对照组(C组)不给予任何处理;缺氧复氧组(A/R组)缺氧3 h、复氧12 h;缺氧复氧+25μmol/L异丙酚组(P25组)和缺氧复氧+100μmol/L异丙酚组(P100组)于缺氧前30 min加入异丙酚,终浓度分别为25、100μmol/L.于复氧12 h时收集细胞,测定TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和TLR4蛋白水平;收集细胞上清液,测定TNF-α水平.结果 与C组比较,A/R组、P25组和P100组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、TLR4蛋白和TNF-α水平均升高(P<0.01);与MR组比较,P25组和P100组TLR4 mRNA、NF-κB mBNA、TLB4蛋白和TNF-α水平均下降(P<0.01);与P25组比较,P100组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、TLR4蛋白和TNF-α水平均降低(P<0.01).结论 异丙酚25、100 μmol/L预先给药可抑制BV-2细胞缺氧复氧时TLR4 mRNA表达上调.     

异丙酚对缺氧复氧后大鼠海马神经元诱生型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察异丙酚对原代培养海马神经元缺氧复氧后诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达及存活率的影响。方法 原代培养SD大鼠海马神经元随机分为四组:正常对照组、缺氧组、缺氧 异丙酚4μg/ml组、缺氧 异丙酚12μg/ml组。MTT法测定体外缺氧4h复氧24h后海马神经元的存活率,免疫细胞化学法测定iNOS表达的程度。结果 与缺氧组比较,两异丙酚组缺氧复氧后海马神经元的存活率提高(P<0.05),iNOS表达的灰度值降低(P<0.05或0.01),iNOS阳性表达率降低,并呈剂量依赖性(P<0.01)。结论 异丙酚可降低大鼠海马神经元缺氧复氧后iNOS的表达,提高存活率。     

异丙酚对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用

目的研究异丙酚对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 以原代培养的新生大鼠海马神经细胞作为研究对象,建立缺氧模型,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个海马神经元内Ca2 浓度随缺氧或加入谷氨酸、KCl前后的实时变化。结果 异丙酚可明显降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率(P<0.01),异丙酚对缺氧、谷氨酸和高浓度KCl诱发的神经细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的升高有抑制作用(P<0.05)。结论异丙酚对离体培养的大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用,其作用机制部分与异丙酚抑制[Ca2 ]i异常升高有关。     

异丙酚对大鼠海马神经元钾离子通道的影响

目的 采用大鼠海马神经元作为研究对象,研究异丙酚对神经元的瞬间外向钾通道、延迟整流钾通道的影响,以探讨静脉麻醉药作用的可能机制。方法 在急性分离的大鼠海马锥体神经元上,利用全细胞膜片钳技术,记录瞬间外向、延迟整流两种钾离子通道的电流。研究异丙酚对这些通道电流幅度和通道动力学的作用。结果 异丙酚对上述通道电流均具有抑制作用,呈可逆性和浓度依赖性,并对离子通道的激活和失活曲线有一定的影响。异丙酚对瞬间外向钾通道和延迟整流钾通道作用的EC50分别为(71±18)和(37±18)μmol·-1,最大抑制率分别为52％±3％和32％±5％。结论 异丙酚对海马神经元上的瞬间外向钾电流、延迟整流钾电流有不同程度抑制作用。异丙酚对锥体神经元兴奋性的影响,可能与影响记忆功能有关。     

异丙酚混合氯胺酮对大鼠海马神经元钠电流的影响

目的研究异丙酚混合氯胺酮对大鼠海马神经元钠电流的影响。方法酶消化法急性分离SD大鼠(出生10～14 d)海马神经元,全细胞膜片钳技术记录不同浓度氯胺酮、异丙酚或异丙酚混合氯胺酮对海马神经元钠电流的影响。结果在钳制电压-80 mV、刺激电压0 mV条件下,5．6- 560μmol·L-1异丙酚对钠电流的抑制作用逐渐增加,其抑制钠电流的IC50为(44±4)μmol·L-1;0．18 mmol·L-1氯胺酮对钠电流没有影响,0．54、1．8、5．4、10．8 mmol·L-1氯胺酮对钠电流均有抑制作用,其抑制钠电流的IC50为(2．7±0．7)mmol·L-1。1/4和3/4 IC50的异丙酚与0．54、1．8、5．4、10．8 mmol·L-1氯胺酮混合应用抑制钠电流的IC50分别为1．14±0．21、(0．97±0．32)mmol·L-1,异丙酚与氯胺酮混合应用产生相加作用。结论异丙酚混合氯胺酮对抑制大鼠海马神经元钠电流产生相加作用。     

异丙酚对大鼠海马CA1缺血神经元持续钠电流的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠海马CA1缺血神经元持续钠电流的影响。方法 酶消化法急性分离SD大鼠海马CA1锥体细胞,通过低氧和无糖法制备神经元缺血模型,全细胞膜片钳技术记录异丙酚对缺血神经元持续钠电流的影响。结果 神经元缺血5 min后持续钠电流显著增强。异丙酚10μmol/L和100μmol/L均能明显抑制缺血引起的持续钠电流增强(与0μmmol/L组比,P<0.01),此作用为异丙酚100μmol/L较10μmol/L儿更强(P<0.05)。结论 异丙酚能够抑制体外脑缺血时海马神经元持续钠电流,这可能是其产生脑保护作用的机制之一。     

异丙酚对大鼠海马神经元高电压激活钙电流的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠海马神经元高电压激活钙电流[Ica(HVA)]的影响.方法 原代培养Wistar大鼠海马神经元,采用全细胞膜片钳技术测定Ica(HVA).记录不同浓度(3、10、30、100、300 μmol/L)异丙酚下Ica(HVA)的峰电流密度,计算Ica(HVA)抑制率,并绘制异丙酚的浓度-效应曲线,计算半数抑制浓度(IC50)和Hill系数.并记录20 μmol/L异丙酚对Ica(HVA)激活和失活动力学的影响.结果 异丙酚3 μmol/L给药前、后Ica(HVA)峰电流密度差异无统计学意义(P＞0.05);10、30、100、300 μmol/L异丙酚对Ica(HVA)峰电流密度抑制率分别为(24±6)%、(33±5)%、(36±7)%、(38±3)%.与给药前相比,异丙酚呈浓度依赖性地抑制Ica(HVA)峰电流密度(P＜0.05).IC50为3.8 μmol/L,Hill系数为0.35.给药前、后最大激活膜电位为(4.0±2.0)mV和(3.8±1.6)mV,半数失活电压为(-32±5)mV和(-35±4)mV,斜率因子为31±5和35±6,给药前、后比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可显著抑制大鼠海马神经元Ica(HVA),异丙酚对中枢神经系统的作用可能与抑制Ica(HVA)有关.