心肌细胞缝隙连接蛋白43在线粒体敏感性钾通道介导七氟醚预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注中的作用

目的 评价心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)在线粒体敏感性钾(mito-KATP)通道介导七氟醚预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠40只,体重200～250 g,采用Langendorff灌注模型进行离体心脏灌注.采用随机数字表法,将心脏随机分为5组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(S组)、七氟醚预处理+5-羟葵酸(5-HD)组(SH组)和5-HD组(H组).采用结扎左冠状动脉前降支(LAD) 30 min,恢复灌注120 min的方法制备心脏缺血再灌注模型.各组平衡灌注10 min;然后C组持续灌注,仅于LAD下穿线而不结扎;I/R组继续灌注30 min后结扎LAD;S组、S+H组和H组结扎LAD前30 min时分别用3％七氟醚预先饱和的K-H液、3％七氟醚预先饱和的K-H液+100 μmol/L 5-HD和K-H液+100 μmol/L 5-HD灌注15 min,然后用K-H液冲洗15 min.分别于给药前(T0)、给药结束即刻(T1)、缺血前即刻(T2)、缺血30 min(T3)和再灌注120 min(T4)时,记录HR、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左心室最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室最大下降速率(- dp/dtmax).再灌注结束后,取左心室心肌组织,测定心肌梗死体积,采用免疫组化法测定心肌细胞Cx43表达,采用Western Blot法测定心肌细胞Cx43和磷酸化Cx43(p-Cx43)表达.结果 与C组比较,I/R组、S+H组和H组HR、LVSP、+dp/dtmax和- dp/dtmax降低,LVDP升高,心肌细胞Cx43和p-Cx43表达下调(P＜0.05).与I/R组比较,S组HR、LVSP、+dp/dtmax和- dp/dtmax升高,LVDP和心肌梗死体积降低,心肌细胞Cx43和p-Cx43表达上调(P＜0.05),S+H组和H组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚预处理可能通过开放mito-KATP通道,促进心肌细胞Cx43磷酸化,减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

七氟醚预处理对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠认知功能的影响

目的 探讨七氟醚预处理对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠认知功能的影响.方法 健康SD大鼠60只,雌雄各半,体重300～350 g,随机分为4组:正常对照组(C组,n=6),假手术组(S组,n=18)仅挂线不结扎左冠状动脉;急性心肌缺血再灌注组(IR组,n=18)结扎左冠状动脉30 min后恢复再灌注;七氟醚预处理组(SP组,n=18)吸入七氟醚1.0 MAC 60 min,停止吸入七氟醚后60 min结扎左冠状动脉,缺血30 min后恢复再灌注.分别于左冠状动脉结扎前(T1)、缺血30 min(T2)及再灌注120 min(T3)时抽取股动脉血1 ml,测定血浆丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性.C组随机取3只大鼠,其余各组于再灌注1、3、7 d各随机取3只大鼠测定海马长时程增强(LTP),C组取另外3只大鼠,其余各组于上述时点随机取3只大鼠,测定海马肿瘤坏死因子α(TNF-α)、TNF-α mRNA、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-1β mRNA、血红素氧合酶(HO)-1的表达水平.结果 与C组和S组比较,IR组和SP组LTP降低;与IR组比较,SP组LTP升高(P＜0.05).与C组比较,IR组和SP组HO-1、IL-1β mRNA、IL-1β、TNF-α mRNA表达上调;与S组比较,IR组和SP组IL-1β mRNA及IL-1β表达上调;与IR组比较,SP组TNF-α mRNA、HO-1、IL-1β mRNA及IL-1β表达下调,血浆MDA浓度降低,SOD活性升高(P＜0.05).结论 七氟醚预处理可改善急性心肌缺血再灌注损伤大鼠认知功能,其机制可能与下调TNF-α、IL-1β表达有关.     

地氟醚、七氟醚和异氟醚预处理对兔心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 研究地氟醚，七氟醚和异氟醚预处理对兔心肌缺血／再灌注损害的影响。方法 35只大白兔，阻断左冠状动脉前降支缺血50min，开放再灌注120min，随机分为5组。3个预处理组分别吸入1.5MAC地氟醚，七氟醚和异氟醚20min，继之10min，药物排出；C＋地氟醚组于地氟醚预处理前10min静注KATP通道阻断剂Glybenclamide 2mg/kg；对照组无任何处理。实验中监测血流动力学变化，实验结束用氯化硝基四氮唑蓝光法测定心肌梗死范围。结果 缺血和再灌注早期，HR，MAP，CO，LVSP，LVEDP和RPP各组间无统计学差异；再灌后期，对照组LVEDP明显高于各项处理组。与对照组比，地氟醚，七氟醚，异氟醚和G＋地氟醚各组，分别缩小心肌梗死范围41．3％，47．2％，31．7％和17．8％，G＋地氟醚组心肌梗范围明显高于地氟醚组。结论 地氟醚，七氟醚和异氟醚预处理不同程度缩小兔心肌梗死范围，KATP通道部分介导了其心肌保护。     

七氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的 评价七氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠45只,体重250～ 280 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=15):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚后处理组(Spo组).I/R组和Spo组采用结扎左冠状动脉前降支30 min时进行再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型,S组仅在左冠状动脉前降支下穿线.Spo组进行七氟醚后处理,于再灌注前1 min时吸八七氟醚,呼气末浓度2.5％,持续5min.于再灌注120 min时取左室心肌组织,测定缺血危险区和梗死区体积,计算缺血危险区和梗死区体积百分比.取左室缺血危险区心肌组织,测定心肌细胞凋亡指数,测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的蛋白及其mRNA的表达,计算Bcl-2/Bax比值.结果 与S组比较,I/R组心肌梗死区体积百分比和心肌细胞凋亡指数升高,Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.05);与I/R组比较,Spo组心肌梗死区体积百分比和心肌细胞凋亡指数降低,Bax蛋白及mRNA表达下调,Bcl-2蛋白及mRNA表达上调,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.05).结论 七氟醚后处理通过上调Bcl-2表达,下调BBax表达,改善Bcl-2/Bax平衡,抑制心肌细胞凋亡,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响

目的 探讨七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响.方法 成年雄性SD大鼠64只,体重270～350 g,随机分为4组(n=16):假手术组(S组)仅穿线不结扎,心肌缺血再灌注组(I/R组)阻断左冠状动脉前降支缺血30 min,恢复灌注2 h制备心肌缺血再灌注损伤模型,七氟烷组(Sevo组)吸入2.5%七氟烷30 min,七氟烷预处理+心肌缺血再灌注组(SR组)吸入2.5%七氟烷30 min,15 min后制备模型.于再灌注2 h时随机取4只大鼠处死取左心室,采用氯化三苯四唑染色法测定心肌梗死范围,随机取4只大鼠处死取左心室,采用TUNEL法检测凋亡心肌细胞,计算凋亡指数,于缺血前即刻和再灌注2 h时分别随机取4只大鼠处死取左心室,采用Western blot法测定Bcl-2及caspase-3的蛋白表达水平.结果 与S组相比,再灌注2 h时I/R组和SR组心肌梗死范围增大,心肌细胞凋亡指数升高,caspase-3蛋白表达上调,Sevo组Bcl-2蛋白表达上调,I/R组Bcl-2蛋白表达下调,Sevo组和SR组缺血前即刻Bcl-2蛋白表达上凋(P＜0.05);与I/R组相比,再灌注2 h时SR组心肌梗死范围缩小、心肌细胞凋亡指数降低,Sevo组和SR组Bcl-2蛋白表达上调,SR组caspase-3蛋白表达下调(P＜0.05);与缺血前即刻相比,I/R组和SR组再灌注2 h时Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达上调(P＜0.05).结论 七氟烷预处理可通过抑制细胞凋亡减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

性别因素对七氟醚后处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨性别因素对七氟醚后处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 SD大鼠60只,雄雌各半,2月龄,雄性大鼠随机分为对照组(MC组)和七氟醚后处理组(MS组),雌性大鼠随机分为对照组(FC组)和七氟醚后处理组(FS组),每组15只.建立大鼠离体心脏灌注模型,采用全心缺血40 min,再灌注2 h的方法制备缺血再灌注模型.对照组心脏再灌注时给予含氧K-H缓冲液,七氟醚后处理组在复灌的前10min灌注经3%七氟醚饱和的含氧K-H缓冲液,余110 min灌注含氧K-H缓冲液.于缺血前、再灌注期间记录HR、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室发展压(LVDP),再灌注5 min时测定冠状动脉流出液LDH活性和心肌梗死面积,再灌注10 min时测定心肌总蛋白激酶B(t-Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达,计算p-Akt与t-Akt比值(p-Akt/t-Akt).结果 与MC组比较,MS组和FC组LVDP升高,LVEDP降低,冠状动脉流出液LDH活性降低,心肌梗死面积减小,心肌p-Akt表达上调,p-Akt/t-Akt升高(P＜0.05);与MS组比较,FS组LVDP降低,LVEDP和冠状动脉流出液LDH活性升高,心肌梗死面积增大(P＜0.05);FC组和FS组LVDP和LVEDP比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚后处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤存在性别差异,对雄性大鼠的心肌保护作用强于雌性大鼠,该差异可能与心肌Akt的活化水平有关.     

七氟醚预处理联合后处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响

目的 探讨七氟醚预处理联合后处理对大鼠缺血-再灌注损伤心肌的保护作用及其相关机制.方法 清洁级成年雄性SD大鼠40只,体重230～270 g,采用随机数字表法,将其均分为五组:假手术组(S组)、心肌缺血-再灌注组(IR组)、七氟醚预处理组(SP1组)、七氟醚后处理组(SP2组)、七氟醚预处理联合后处理组(SS组).除S组外均采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血-再灌注模型,S组只穿线,不结扎;SP1和SP2组分别于缺血前30min、再灌注前10 min吸入2.5％七氟醚15 min,洗脱15 min;SS组于缺血前30 min和再灌注前10min均吸入2.5％七氟醚15 min,洗脱15 min.于缺血前30 min、缺血30 min、再灌注120 min时记录HR和MAP,计算RPP(SBP×HR).于再灌注120 min时取心脏制病理切片,光镜下观察各组心肌病理学变化,测定凋亡指数(AI),检测心肌组织SOD和MDA含量,免疫组化法检测心肌组织TNF-α和caspase-3的表达.结果 与S组比较,其余四组再灌注120 min时MAP和RPP明显降低,AI明显升高,心肌组织SOD含量明显降低,MDA含量明显升高,TNF-α和caspase-3表达明显增高(P＜0.05);与IR组比较,SP1组、SP2组和SS组AI明显降低,心肌组织SOD含量明显升高,MDA含量明显降低,TNF-α和caspase-3表达明显降低(P＜0.05);与SP1组和SP2组比较,SS组AI明显降低,心肌组织SOD含量明显升高,MDA含量明显降低,TNF-α和caspase-3表达明显降低(P＜0.05).结论 与单纯七氟醚预处理或后处理比较,两种方法联合应用可使心肌组织AI降低,SOD含量升高,MDA含量降低,TNF-α和caspase-3的表达降低,从而进一步减轻了大鼠心肌缺血-再灌注损伤.     

缝隙连接蛋白43与心肌缺血／再灌注损伤机制的研究进展

背景研究表明,心肌缺血／再灌注（ischemia／reperfusion,I／R）损伤的发病机制与氧自由基过量产生、钙超载、线粒体损伤及心肌细胞凋亡等密切相关,最新研究发现缝隙连接（gapjunction,GJ）也参与心肌I／R损伤。目的现主要针对GJ连接蛋白（connexin,Cx）43与心肌I／R损伤的关系作一综述。内容Cx43在心肌I／R损伤中参与心肌保护作用,其机制可能与钙超载、在线粒体中的分布及细胞凋亡等因素相关。趋向未来研究需要进一步探究Cx43与心肌细胞凋亡之间的关系,同时为临床实际工作提供依据。     

异氟醚、七氟醚和地氟醚预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠海马CBS/H2S、iNOS/NO和HO-1/CO的影响

目的 研究异氟醚、七氟醚和地氟醚预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠海马CBS／H，S、iNOS／NO和HO-1／CO的影响，探讨吸入麻醉药脑保护作用的机制。方法30只Wistar大鼠随机分为5组（n=6）：对照组（C组）、脑缺血再灌注组（I／R组）、异氟醚组（I组）、七氟醚组（S组）和地氟醚组（D组）。采用四动脉阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。Ⅰ组、S组和D组夹闭两侧颈总动脉前分别吸入氧气＋0．65MAC的异氟醚、七氟醚和地氟醚30min，C组和I／R组吸入氧气。缺血20min，再灌注12h后处死大鼠，取海马，测定大鼠海马组织中HS、NO、CO、cAMP和cGMP含量和CBS，iNOS和HO活性以及CBS—mRNA、iNOS，mRNA和HO—1-mRNA的表达水平；电镜下观察海马线粒体的变化。结果与C组相比，I／R组海马组织CO、H2S、NO、cAMP、cGMP含量和HO、CBS、iNOS活性升高，CBS—mRNA、iNOS-mRNA和HO-1-mRNA表达升高，海马神经细胞线粒体变性率升高（P〈0．01）；与I／R组相比，Ⅰ组、D组和S组CO含量和HO活性升高，H2S、NO、cAMP含量和CBS、iNOS活性降低，CBS—mRNA和iNOS-mRNA表达降低而HO-1-mRNA表达升高，线粒体变性率降低（P〈0．05或0．01）。结论 异氟醚、七氟醚和地氟醚预处理可通过抑制CBS／142S、iNOS／NO，激活HO-1／CO，减轻了大鼠脑缺血再灌注损伤。     

七氟醚预处理对大鼠肺缺血再灌注时肺组织血管紧张素转化酶mRNA表达的影响

目的 探讨七氟醚预处理对大鼠肺缺血再灌注时肺组织血管紧张素转化酶(ACE) mRNA表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠54只,体重250 ～ 320 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=18):假手术组(S组)仅游离左肺门,但不阻断;肺缺血再灌注组(I/R组)采用阻断左肺门45 min后再灌注120 min的方法制备大鼠肺缺血再灌注模型;七氟醚预处理组(SP组)吸入2.1％七氟醚30min,停止吸入后10 min时后制备肺缺血再灌注模型.于再灌注30、60和120 min时随机取6只大鼠,处死取肺组织,测定湿/干重比(W/D比),采用比色法测定髓过氧化物酶(MPO)活性,采用RT-PCR法测定ACE mRNA的表达,光镜下观察肺组织病理学结果.结果 与S组比较,I/R组和SP组再灌注各时点肺组织W/D比、MPO活性和ACE mRNA表达水平均升高(P＜0.05);与I/R组比较,SP组再灌注各时点肺组织W/D比、MPO活性和ACE mRNA表达水平降低(P＜0.05).SP组肺组织病理学损伤较I/R组减轻.结论 七氟醚预处理可能通过下调ACE mRNA的表达从而减轻大鼠肺缺血再灌注损伤.     

七氟醚延迟预处理对大鼠缺血再灌注心肌ARC表达的影响

目的 评价七氟醚延迟预处理对大鼠缺血再灌注心肌带有Caspase富集功能域的凋亡抑制蛋白(ARC)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠64只,体重270～350 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=16):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚+假手术组(S-S组)和七氟醚延迟预处理+心肌缺血再灌注组(S-VR组).S-S组和S-I/R组分别吸入33%氧气和2.5%七氟醚2 h,停止吸入后24 h行假手术或心肌缺血再灌注;I/R组和S-I/R组采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h的方法制备心肌缺血再灌注模型.于再灌注2 h时处死8只大鼠,取左心室组织,测定心肌梗死范围及细胞凋亡情况,计算凋亡指数,于缺血前即刻及再灌注2 h时各处死4只大鼠,取左心室组织,测定ARC及Caspase-8的表达水平.结果 与S组比较,I/R组和S-I/R组心肌梗死范围及细胞凋亡指数升高,缺血前即刻S-S组和S-I/R组ARC表达上调,再灌注2 h时I/R组Caspese-8、表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,S-I/R组心肌梗死范围和细胞凋亡指数降低,再灌注2 h时S-S组和S-I/R组ARC表达上调,Caspase-8表达下调(P＜0.05).结论 七氟醚延迟预处理可上调心肌ARC表达,减少细胞凋亡的发生,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effects of sevoflurane delayed preconditioning on caspase recruitment domain (ARC) expression during myocardial ischemia-reperfusion (I/R) in rats. Methods Sixty-four adult male SD rats weighing 270-350 g were randomly divided into 4 groups ( n = 16 each): sham operation (group S); myocardial I/R group; sevoflurane + sham operation group (group S-S) and sevoflurane delayed preconditioning + myocardial I/R group (group S-I/R) . Myocardial I/R was induced by occlusion of anterior descending branch of left coronary artery for 30 min followed by 2 h of reperfusion in groups I/R and S-I/R. Group S-S inhaled 33% oxygen for 2 h, and sham operation was performed 24 h later. Group S-I/R inhaled 2.5% sevoflurane for 2 h, and then myocardial I/R was induced 24 h later. Eight animals were sacrificed at the end of 2 h reperfusion in each group and the hearts removed for determination of myocardial infarct size (IS) as a percentage of area at risk (AAR) by triphenyl tetrazolium chloride staining (IS/AAR) . Myocardial apoptosis was detected using TUNEL and apoptosis index was calculated. Another 4 animals were sacrificed immediately before ischemia and at the end of 2 h reperfusion to determine the expression of ARC and Caspase-8 in myocardium by Western blot. Results Compared with group S, the infarct size and apoptosis index were significantly increased in groups I/R and S-I/R, and ARC expression was up-regulated immediately before ischemia in groups S-S and S-I/R, and Caspase-8 expression was up-regulated at 2 h of reperfusion in group I/R ( P ＜ 0.05) . Compared with group I/R, the infarct size and apoptosis index were significantly decreased in group S-I/R, and ARC expression was up-regulated, while Caspase-8 expression was down-regulated at 2 h of reperfusion in groups S-S and S-I/R ( P ＜ 0.05) . Conclusion Sevoflurane delayed preconditioning can attenuate myocardial I/R injury through up-regulating the ARC expression and decreasing the myocardial apoptosis.     

七氟醚预处理对小鼠心肌缺血再灌注时环氧化酶-2表达的影响:在体和离体实验

目的 通过在体和离体实验评价七氟醚预处理对小鼠心肌缺血再灌注时环氧化酶-2(COX-2)表达的影响.方法 在体实验健康成年小鼠54只,体重约250 g,6～8周龄,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=18):对照组(C组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚预处理组(SP组).采用结扎左冠状动脉30 min再灌注的方法制备心肌缺血再灌注模型.SP组小鼠吸入2.0％七氟醚,15min/次,共3次,间隔15 min.七氟醚预处理后90 min制备心肌缺血再灌注模型.再灌注6、9h时,取心肌组织分别采用Western blot法测定COX-2表达,采用分光光度法测定心肌caspase-3的活性.再灌注24h时测定左室舒张末压(LVEDP).细胞实验采用随机数字表法,将H9C2细胞随机分为3组,每组6皿:对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)和七氟醚预处理组(SP组).H9C2细胞置于95％N2+ 5％CO2培养箱中孵育14 h后,置于95％O2+ 5％CO2培养箱中孵育3h,建立缺氧复氧模型.SP组H9C2细胞培养基中加入2.0 mmol/L七氟醚,每次孵育15 min,共3次,间隔15 min.七氟醚预处理结束后15 min建立缺氧复氧模型.复氧3h时采用Western blot法测定细胞COX-2的表达水平,采用比色法测定上清液和细胞裂解液LDH活性,计算LDH释放量.结果 在体实验:与C组比较,I/R组和SP组LVEDP升高,心肌组织caspase-3活性增强,COX-2表达上调(P＜0.01);与I/R组比较,SP组LVEDP降低,心肌组织caspase-3活性减弱,COX-2表达下调(P＜0.01).细胞实验结果:与C组比较,H/R组和SP组H9C2细胞COX-2表达上调,LDH释放量增加(P＜0.01);与H/R组比较,SP组H9C2细胞COX-2表达下调,LDH释放量减少(P＜0.01).结论 七氟醚预处理可通过直接下调心肌COX-2的表达,抑制细胞凋亡减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤.     

七氟醚后处理对慢性心肌梗死大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 评价七氟醚后处理对慢性心肌梗死大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠,在体结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,6周后开胸取心脏,建立离体心脏灌注模型.取模型制备成功的心脏80个,采用随机数字表法,将心脏随机分为8组(n=10),Ⅰ组K-H液持续灌注90 min;Ⅱ组全心缺血30 min,再灌注60 min;Ⅲ组～Ⅵ组全心缺血30 min,再灌注最初15 min灌注含磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002 15 μmol/L、丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK1/2)抑制剂PD98059 20 μmol/L、0.02％二甲基亚砜及经3％七氟醚饱和的K-H液,随后更换为K-H液再灌注45 min;Ⅶ组和Ⅷ组全心缺血30 min,再灌注最初15 min灌注3％七氟醚饱和的K-H液,同时分别给予LY294002 15 μmol/L和PD98059 20 μmol/L,随后更换为K-H液再灌注45 min.于平衡灌注20 min、缺血前即刻、再灌注15、30和60 min(T0-4)时测定冠状动脉流量(CF)、记录左室发展压(LVDP)、左室最大收缩速率(+dp/dt)、左室最大舒张速率(-dp/dt)、左室舒张末期压力(LVEDP)及心率(HR);于T04时收集冠状动脉流出液,测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性;于T4时测定急性心肌梗死面积,于T2时取左心室,测定蛋白激酶B(PKB/Akt)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化表达水平及心肌细胞mPTP的开放程度.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组～Ⅷ组再灌注时LVDP、±dp/dt、HR和CF降低,LVEDP升高,急性心肌梗死面积增大,冠状动脉流出液LDH和CKMB活性升高,心肌细胞mPTP开放程度增加(P＜0.05);与Ⅱ组比较,Ⅵ组再灌注时LVDP、±dp/dt、HR和CF升高,LVEDP降低,急性心肌梗死面积减小,冠状动脉流出液LDH和CK-MB活性降低,心肌PKB/Akt和ERK1/2磷酸化水平增强,心肌细胞mPTP开放程度降低(P＜0.05),其余组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3％七氟醚后处理可减轻慢性心肌梗死大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与激活PI3K-PKB/Akt和MEK1/2-ERK1/2,从而抑制心肌细胞mPTP开放有关.     

异氟醚预处理和异丙酚预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价异氟醚预处理和异丙酚预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性Wistar大鼠36只,体重250～300 g,随机分为4组(n=9):缺血再灌注组(I/R组)、异氟醚预处理组(Ⅰ组)、异丙酚预处理组(P组)和异氟醚预处理联合异丙酚预处理组(I+P组).Ⅰ组异氟醚预处理方法:吸入1.6%异氟醚10 min,停止吸入5 min,共重复2次;P组异丙酚预处理方法:静脉输注异丙酚37.5 mg·kg~(-1)·h~(-1) 10 min,停止输注5 min,共重复2次;I+P组同时进行异氟醚预处理和异丙酚预处理.预处理后立即结扎左冠状动脉前降支60 min,随后松开进行再灌注,I/R组只进行缺血再灌注.再灌注120 min时每组取1只大鼠,取心肌组织,透射电镜下观察心肌细胞超微结构;各组其余大鼠处死后,取左心室,采用TUNEL法测定心肌细胞凋亡情况,计算凋亡指数,并测定心肌细胞线粒体活性氧(ROS)水平.结果 各组均可见凋亡小体,I组、P组和I+P组心肌损伤程度轻于I/R组.与I/R组比较,I组、P组和I+P组心肌细胞凋亡指数和ROS水平降低(P＜0.05),而I组、P组和I+P组间上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异氟醚预处理或异丙酚预处理及两种方法联合应用时减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的效应相似.     

PI3K-Akt信号通路在七氟醚预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇-3-激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-Akt)信号通路在七氟醚预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠96只,体重220～280g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=16):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(SP组)、渥曼青霉素组(W组)、二甲基亚砜组(D组)和七氟醚预处理+渥曼青霉素组(SW组).采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型.S组继续灌注180 min;I/R组平衡灌注30 min,缺血30 min,恢复灌注120 min;其余各组先平衡灌注15 min,SP组、W组、DMSO组和SW组分别用含2.4%七氟醚、100 nmol/L渥曼青霉察、20 μmol/L二甲基亚砜、2.4%七氟醚和100 nmol/L渥曼青霉素的K-H液灌注10 min,然后洗脱5 min,缺血30 min,恢复灌注120 min.各组随机取8个心脏,于平衡灌注末和再灌注15 min时,记录HR、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax).再灌注15 min时取心肌组织,采用TUNEL法检测细胞凋亡,计算凋亡指数;采用Western blot法测定磷酸化Akt(p-Akt)表达.再灌注120 min时,取8个心脏,采用TIC染色法测定心肌梗死体积.结果 与S组比较,其余各组HR、LVDP和±dp/dtmax降低,LVEDP升高,I/R组、SP组和D组心肌p-Akt表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,SP组LVDP和±dp/dtmax升高,LVEDP和凋亡指数降低,心肌p-Akt表达上调,心肌梗死体积减小(P＜0.05),SW组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚预处理可通过激活PI3K-Akt信号通路减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the role of phosphatidyl-inositol 3-kinase-Akt (PI3k-Akt) signal pathway in the attenuation of ischemia-reperfusion (I/R) injury by sevoflurane preconditioning in isolated rat hearts. Methods Ninety-six adult male SD rats weighing 220-280 g were randomly divided into 6 groups ( n = 16 each): sham operation group (group S); I/R group; sevoflurane preconditioning group (group SP); wortmannin group (group W); dimethyl sulfoxide (DMSO) group (group D) and sevoflurane preconditioning + wortmannin group (group SW) . Their hearts were excised and perfused in a Langendorff apparatus with K-H solution saturated with 95%O2-5%C02 at 37 ℃ . The hearts were continuously perfused for 180 min in group S. After 15 min of equilibration, the isolated hearts were subjected to 30 min of ischemia followed by 120 min of reperfusion in SP, W, D and SW groups. Croups SP, W, D and SW received 10 min of perfusion with K-H solution containing 2. 4% sevoflurane, 100 nmol/L wortmannin, 20 μmol/L DMSO, and 2.4% sevoflurane + 100 nmol/L wortmannin, respectively, followed by 5 min washout before I/R. Eight hearts in each group were selected and HR, left ventricular end-diabetic pressure (LVEDP), left ventricular developed pressure (LVDP), and ± dp/dtmax were recorded at the end of equilibration and at 15 min of reperfusion, Myocardial tissues were obtained at 15 min of reperfusion for determination of apoptosis (by TUNEL) and phosphorylated Akt (p-Akt) expression (by Western blot) . Another 8 hearts were selected at 120 min of reperfusion for determination of myocardial infarct size by TTC staining. Result Compared with group S, LVDP and ± dp/dt,^ were significantly decreased and LVEDP was significantly increased in groups I/R, SP, W, D and SW, and myocardial p-Akt expression was up-regulated in groups I/R, SP and D ( P ＜ 0.05). Compared with group I/R, LVDP and ± dp/dtmax were significantly increased, LVEDP and apoptosis index were significantly decreased, myocardial p-Akt expression was up-regulated, and myocardial infarct size was significantly reduced in group SP (P ＜0.05) . Conclusion Activation of PI3K-Akt signal pathway is involved in the attenuation of I/R injury by sevoflurane reconditioning in isolated rat hearts.