δ阿片受体在窒息性心跳骤停-复苏大鼠脑损伤中的作用

目的 评价δ阿片受体在窒息性心跳骤停-复苏大鼠脑损伤中的作用.方法 清洁级成年雄性SD大鼠96只,体重300 ～ 350 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=24):假手术组(S组)、模型组(M组)、δ阿片受体激动剂BW373U86组(B组)和δ阿片受体拮抗剂Naltrindole组(N组).采用夹闭气管导管法诱导窒息性心跳骤停,窒息8 min后行纯氧机械通气,同时人工胸外心脏按压,并快速静脉注射肾上腺素0.02 mg/kg和5％碳酸氢钠1 mg/kg,出现自主呼吸、MAP＞50 mm Hg,持续10 min为循环恢复(ROSC).于ROSC即刻B组和N组分别经股静脉注射1 mg/kg BW373U86和Naltrindole;S组和M组以等容量生理盐水替代.于ROSC 3、24、72 h时行神经系统评分(NDS).评分后处死取脑组织,采用RT-PCR法检测海马脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA和酪氨酸激酶受体B(TrkB) mRNA表达水平.于ROSC 72 h时采用HE染色观察海马CA1区神经元组织学分级、计数存活神经元数量.结果 与S组比较,M组、B组和N组BDNF mRNA、TrkB mRNA表达上调,神经元组织学分级升高,NDS降低,存活神经元减少(P＜0.05);与M组比较,B组BDNF mRNA、TrkB mRNA表达上调,N组BDNFmRNA、TrkB mRNA表达下调,B组和N组神经元组织学分级降低,NDS升高,存活神经元增多(P＜ 0.05).与B组相比,N组NDS降低,存活神经元减少,BDNF mRNA、TrkB mRNA表达下调,神经元组织学分级升高(P＜0.05).结论 激活δ阿片受体可减轻窒息性心跳骤停-复苏大鼠脑损伤,其作用机制可能与δ阿片受体激活后促进BDNF及其受体TrkB表达上调有关.     

异丙酚对大鼠窒息性心脏停搏复苏后海马c-JUN氨基末端激酶活化的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠窒息性心脏停搏复苏后海马c-JUN氨基末端激酶(JNK)活化的影响.方法 雄性SD大鼠40只,6月龄,体重350 ～ 380 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=10),假手术组(S组)仅动静脉置管和气管插管而不制备窒息性心脏停搏;窒息性心脏停搏复苏组(CA-CPR组)采用窒息法建立CA-CPR模型;异丙酚组(P组)于窒息前30 min静脉注射异丙酚20mg/kg,继之以40 mg·kg-1 ·h-1的速率静脉输注至复苏开始;生理盐水组(NS组)以等容量生理盐水替代异丙酚,余处理同P组.成功复苏后12 h时,处死大鼠,取脑组织,测定湿/干重(W/D)比;采用免疫组化法和Western blot法测定海马磷酸化JNK(p-JNK)的表达水平,并观察海马病理学结果.结果 与S组比较,CA-CPR组、P组和NS组脑W/D比升高,海马p-JNK表达水平上调(P＜0.05或0.01);与CA-CPR组比较,P组脑W/D比降低,海马p-JNK表达水平下调(P＜0.05或0.01),NS组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).P组海马病理学损伤较CA-CPR组减轻.结论 异丙酚可抑制大鼠窒息性心脏停搏复苏后脑组织JNK的活化,从而减轻脑损伤.     

肝素预抗凝对窒息性心跳骤停大鼠心肺脑复苏效果的影响

目的 评价肝素预抗凝对窒息性心脏停搏大鼠心肺脑复苏效果的影响。方法 SD雄性大鼠70只，8-9周龄，体重350-450 g，随机分为4组：正常对照组（组Ⅰ，n=10）、假手术组（组Ⅱ， n=10）、心跳骤停-复苏组（组Ⅲ，n=25）和预抗凝组（组Ⅳ，n=25），组Ⅳ窒息前静脉注射肝素50 IU／100 g。组Ⅲ、组Ⅳ窒息导致大鼠心脏停搏后5 min开始心肺复苏术。于窒息前（基础值）、复苏成功后即刻、10、30、60min时记录大鼠平均动脉压（MAP）、心率（HR）、直肠温度（RT）和呼气末二氧化碳分压（PETCO2）。记录大鼠心脏停搏、心肺复苏及气管导管拔除的时间。于麻醉前、复苏成功后2、24、48、72 h对大鼠神经系统损伤进行行为学评分（ND评分）。光学显微镜下对复苏成功后72 h大鼠海马、皮层、丘脑、小脑以及壳-尾核进行组织病理损伤评分（HD评分）。结果 MAP、HR、BT和PETCO2基础值组间相比差异无统计学意义（P〉0．05）。与组Ⅲ相比，组Ⅳ复苏成功后即刻MAP明显升高，心脏停搏时间延长，复苏时间以及气管导管拔除时间明显缩短（P〈0．01），心肺复苏成功率及72 h存活率明显升高（P〈0．05），ND和HD评分明显降低（P〈0．05）。结论 肝素预抗凝可明显提高窒息性心跳骤停大鼠心肺复苏的效果，减轻复苏后脑组织损伤，改善心肺脑复苏的转归。     

纳洛酮或肾上腺素对窒息性心跳骤停大鼠心肺复苏的效果

目的比较纳洛酮或肾上腺素对窒息性心跳骤停大鼠心肺复苏的效果。方法健康SD大鼠24只，体重180～220g，雌雄不拘，制备窒息性心跳骤停模型，随机分成3组（n=8）：对照组在常规心肺复苏（CPR）前静脉注射生理盐水1ml，纳洛酮组和肾上腺素组在常规CPR前分别静脉注射纳洛酮1mg／kg和肾上腺素0．04mg／kg。记录在CPR 10min内自主循环恢复（ROSC）情况。结果对照组、纳洛酮组和肾上腺素组ROSC率分别为12．5％、87．5％和87．5％，纳洛酮组和肾上腺素组ROSC率均高于对照组（P〈0．05），纳洛酮组和肾上腺素组间ROSC率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论静脉注射纳洛酮1mg／kg或肾上腺素0．04mg／kg对窒息性心跳骤停大鼠均可有效地进行心肺复苏，且其心肺复苏的早期效果一致。     

戊巴比妥钠和水合氯醛对窒息性心跳骤停大鼠心肺复苏后脑损伤的影响

目的 比较戊巴比妥钠和水合氯醛对窒息性心跳骤停大鼠心肺复苏后脑损伤的影响,为心肺复苏后脑保护的实验选择适宜的麻醉药物.方法 成年雄性SD大鼠160只,日龄70～95 d,体重300～400 g,随机分为2组(n=80):水合氯醛麻醉组(CH组)和戊己比妥钠麻醉组(P3组).各组再分为2个亚组(n=40):无心跳骤停对照组(CH-NR组或PB-NR组)和心跳骤停后心肺复苏组(CH-R组或PB-R组).CH组腹腔注射5%水合氯醛0.35 g/kg诱导麻醉,气管插管后行机械通气,每隔1 h腹腔注射5%水合氯醛0.1 g/kg维持麻醉;PB组腹腔注射0.35%戊巴比妥钠35 mg/kg诱导麻醉,气管插管后行机械通气,每隔1 h腹腔注射0.35%戊巴比妥钠10 mg/kg维持麻醉.CH-R组和PB-R组麻醉后建立窒息性心跳骤停后心肺复苏模型.于自主循环恢复后0.5、3、6、9、24 h(T1～5)时各处死8只大鼠,处死前15 min左侧股静脉注射2%伊文氏蓝(EB)2 ml/kg,处死后取脑组织测定脑组织含水量和EB含量.结果 与CH-NR组相比,CH-R组各时点脑组织含水量和EB含量增加(P<0.05);与PB-NR组相比,PB-R组各时点脑组织含水量和EB含量增加(P<0.05);与CH-R组相比,PB-R组T<2～5>时脑组织含水量降低(P<0.05),EB含量差异无统计学意义(P>0.05).结论 心跳骤停后心肺复苏可导致大鼠脑水肿和血脑屏障通透性增加.戊巴比妥钠较水合氯醛抑制脑水肿的程度大,而二者对血脑屏障通透性的影响无差异.     

大鼠窒息性心跳骤停-心肺复苏改良模型的评价

目的 评价大鼠窒息性心跳骤停-心肺复苏改良模型.方法 雄性SD大鼠15只,2～3月龄,体重350～400 g,麻醉后经口气管插管,机械通气,连续监测心电图、MAP、HR、PETCO2和直肠温度,并维持在正常范围内.静脉注射维库溴铵2 ms/kg后机械通气,5～8 min后再次静脉注射维库溴铵1 mg/kg,1 min后停止机械通气,制备窒息性心跳骤停模型.窒息8 min后,开始药物和标准胸外按压进行心肺复苏(CPR).记录从窒息到心跳骤停的时间、CPR到自主循环恢复的时间、拔管时间,并记录CPR成功及复苏成功后3 d生存的情况.结果 窒息8 min可造成至少4～5 min心跳骤停.CPR开始后2 min内可逆转心跳骤停,使自主循环恢复(MAP>60 mm Hg).从窒息到心跳骤停的时间为(116±12)s,从CPR到自主循环恢复的时间为(42±12)s,拔管时间为(6.9±1.4)h.CPR成功率93%,复苏成功后3 d生存率86%.与窒息前比较,自主循环恢复后即刻、10 min时MAP、HR和PETCO2升高(P<0.05或0.01).结论 大鼠窒息性心跳骤停-心肺复苏改良模型成功率及复苏成功后3 d生存率高,模型稳定,可重复性好,可作为CPR研究的实验动物模型.     

窒息性心跳骤停大鼠复苏后肾组织水通道蛋白3表达的变化

目的 评价窒息性心跳骤停大鼠复苏后肾组织水通道蛋白3(AQP-3)表达的变化.方法 成年雄性Wistar大鼠20只,体重220～280 g,随机分为对照组(C组)和复苏组(R组),每组10只:R组建立窒息性心跳骤停模型,复苏采用心脏按压160次/min,静脉注射碳酸氢钠0.1 mEq/100 g+肾上腺素5μg/100 g+生理盐水0.5 ml/100 g.C组行机械通气但不建立心跳骤停模型.R组于复苏成功后1 h(T1)、3 h(T2)随机处死5只大鼠,取下腔静脉血测定血清肌酐、尿素浓度;取右侧肾脏,Westernblot法检测肾组织AQP-3表达.结果 R组T1、T2时复苏时间、血清肌酐、尿素差异无统计学意义(P0.05);与C组比较,R组T1、T2时AQP-3表达下调(P<0.05);与T1时比较,R组T2时AQP-3表达下调(P<0.05).结论 窒息性心跳骤停大鼠复苏后肾组织AQP-3表达下调早于血液肌酐、尿素浓度的改变,提示肾组织AQP-3表达反映肾功能改变的灵敏度较高.     

氯胺酮联合亚低温对窒息性心跳骤停大鼠复苏后脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨氯胺酮联合亚低温对窒息性心跳骤停大鼠复苏后脑缺血再灌注损伤的影响.方法 健康Wistar大鼠50只,4.0～4.5个月,雌雄各半,体重410～510 g,随机分为5组(n=10):假手术组(S组)仅经动、静脉穿刺置管;窒息性心跳骤停组(ACA组)制备窒息性脑缺血模型;氯胺酮组(K组)窒息前5 min腹腔注射氯胺酮100 mg/kg;亚低温组(MH组):窒息开始后维持直肠温30～35℃;氯胺酮+亚低温组(K+MH组):窒息前5 min腹腔注射氯胺酮100 mg/kg,窒息开始后维持直肠温30～35 ℃.成功复苏后,取脑组织,测定脑含水量和海马神经元p-caspase-3的表达水平.结果 与S组比较,ACA组和K组脑含水量升高,p-caspase-3表达上调,MH组和K+MH组p-caspase-3表达上调(P＜0.01),脑含水量差异无统计学意义(P＞0.05);与ACA组比较,MH组和K+MH组脑含水量降低,p-caspase-3表达下调,K组p-caspase-3表达下调(P＜0.01),脑含水量差异无统计学意义(P＞0.05);与K组比较,K+MH组脑含水量降低,p-caspase-3表达下凋,MH组脑含水量降低(P＜0.01),p-caspase-3表达差异无统计学意义(P＞0.05);与MH组比较,K+MH组p-caspase-3表达下调(P＜0.01),脑含水量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 氯胺酮联合亚低温可减轻窒息性心跳骤停大鼠复苏后的脑缺血再灌注损伤,该效应较两者单独应用时增强.     

肝素对窒息性心跳骤停-复苏致大鼠心肌损伤的影响

目的 探讨窒息性心跳骤停大鼠心肺复苏时应用肝素抗凝对心肌损伤的影响.方法 健康雌性SD大鼠30只,12～16周龄,体重450～500 g,随机分为3组(n=10):假手术组(S组)、常规心肺复苏组(AD组)和常规心肺复苏+肝素抗凝组(AD+Hep组).制备窒息性心跳骤停模型,窒息8min后行心肺复苏(胸外心脏按压200次/min与药物复苏同时进行,复苏时间2min),AD+Hep组常规药物复苏同时静脉注射肝素0.5 mg/kg(0.1 ml/kg),AD组静脉注射与肝素等容量的生理盐水,S组只行动静脉置管和气管插管.自主循环恢复(ROSC)后2 h,取股动脉血2ml后处死大鼠,取心肌组织,测定血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)浓度、心肌丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,电镜下观察心肌超微结构.记录从窒息到心跳骤停时间、心肺复苏开始到ROSC时间.结果 与S组比较,AD组和AD+Hep组心肌MDA含量升高,SOD活性降低,血清cTnI浓度升高(P<0.05或0.01),心肌病理损伤明显.与AD组比较,AD+Hep组心肺复苏开始到ROSC时间缩短,心肌MDA含量降低,SOD活性升高,血清cTnI浓度降低(P<0.05或0.01),心肌病理损伤减轻.结论 窒息性心跳骤停大鼠心肺复苏时应用肝素抗凝可减轻心跳骤停.复苏致心肌损伤,其机制可能与抑制脂质过氧化反应有关.     

神经病理性痛大鼠背根神经节JNK的表达

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节C-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)的表达.方法 雄性SD大鼠88只,体重200～250 g.随机分为2组(n=44):假手术组(SH组)和慢性压迫性损伤组(CCI组).结扎大鼠右侧坐骨神经建立CCI模型.各组取8只大鼠,于CCI前、CCI后1、3、5、7、14 d时,测定热刺激缩足反射潜伏期(TWL).各组于CCI前、CCI后1、3、5、7、14 d时,各取6只大鼠测定背根神经节磷酸化JNK(p-JNK)的表达.结果 与CCI前比较,CCI组CCI后各时点TWL降低,p-JNK表达增加(P＜0.01);与SH组比较,CCI组CCI后3、5、7、14 d时TWL降低,p-JNK表达增加(P＜0.01).结论 背根神经节JNK表达升高可能参与了大鼠神经病理性痛的形成.     

大鼠窒息性心脏停搏复苏后心肌微小RNA表达的变化

目的 探讨大鼠窒息性心脏停搏复苏(CA-CPR)后心肌微小RNA (miRNA)表达的动态变化.方法 清洁级成年雄性SD大鼠64只,体重250 ～ 330 g,采用随机数字表法,将其分为2组(n=32),对照组(C组)和CA-CPR组.采用窒息法建立CA-CPR模型.CA-CPR组于自主循环恢复后3、6、12和24 h(T1-4)时,C组于相应时点取血样,测定血清CK-MB和cTnI浓度,相应时点取心尖部心肌组织,采用Real-Time PCR法检测心肌组织miRNA.以相对于C组心肌miRNA 2倍强度的变化作为CA-CPR组miRNA表达上调或下调的标准.记录大鼠均发生表达变化的miRNA.结果 与C组比较,CA-CPR组各时点血清CK-MB和cTnI浓度升高(P＜0.01);CA-CPR组血清CK-MB浓度T3时达峰值,血清cTnI浓度持续升高(P＜0.05或P＜0.01).自主循环恢复后持续性变化的miRNA有8个,分别为miRNA-1、miRNA-21、miRNA126、miRNA-133a、miRNA-206、miRNA-210、miRNA-320及miRNA-499.miRNA-1各时点表达均上调,T2时最高;miRNA-21各时点表达均下调,T2时最低;miRNA126、miRNA-133a、miRNA-206、miRNA-210和miRNA-499 T1、T2时表达下调,T2时最低,T3、T4时表达上调;miRNA-320T1 ～T3时表达上调,T2时最高,T4时表达下调(P＜0.05或0.01).结论 心脏停搏大鼠复苏后有8个miRNA表达发生变化,且变化方式(上调/下调)、趋势不同,但表达变化方式改变的时点相似.     

心跳骤停期间及心肺复苏前后前脑M受体变化的实验研究

目的 探讨心跳聚停（ＣＡ）期间及心肺复苏（ＣＰＲ）前后前脑Ｍ受体变化的规律。方法 采用窒息致大鼠ＣＡ的动物模型,５５只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随发为正常对照组（ｎ＝８）、手术对照组（ｎ＝７）、ＣＡ１组（ｎ＝８）;窒息１０ｍｉｎ,ＣＡ２组（ｎ＝８）;窒息３０ｍｉｎ,以及ＣＰＲ前组（ｎ＝８）;窒息１０ｍｉｎ和ＣＰＲ后组（ｎ＝９）：窒息１０ｍｉｎ后复苏,自主循环恢复后继续机械通气３０ｍｉｎ,实验结束时断头取脑,     

JNK信号通路在异氟醚预处理和七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在异氟醚预处理和七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖(OGD)损伤中的作用.方法雄性成年SD大鼠,体重270～290 g,断头处死,剥离海马,制备海马脑片.取大鼠海马脑片96张,采用随机数字表法,将其随机分为8组(n=12):对照组(C组)、OGD组、异氟醚预处理组(Iso组)、七氟醚预处理组(Sevo组)、SP600125+异氟醚预处理组(SP+Iso组)、SP600125+七氟醚预处理组(SP+Sevo组)、二甲基亚砜(DMSO)+异氟醚预处理组(DMSO+Iso组)和DMSO+七氟醚预处理组(DMSO+Sevo组).采用电生理技术,细胞外记录CA1区群锋电位(PS)波幅,计算PS恢复程度.采用碘化丙啶染色法,测定细胞活力.结果 与C组比较,其余各组PS恢复程度和细胞活力降低(P＜0.01);与OGD组比较,Iso组、Sevo组、SP+Iso.组、SP+Sevo组、DMSO+Iso组和DMSO+Sevo组PS恢复程度和细胞活力升高(P＜0.01);与180组比较,SP+Iso组PS恢复程度和细胞活力升高(P＜0.01),DMSO+Iso组PS恢复程度和细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05);与Sevo组比较,SP+Sevo组PS恢复程度和细胞活力升高(P＜0.01),DMSO+Sevo组PS恢复程度和细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异氟醚预处理和七氟醚预处理可通过抑制JNK信号通路,减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤.

Abstract：

Objective To evaluate the role of c-Jun N-terminal kinase (JNK) signaling pathway in the protective effect of isoflurane preconditioning and sevoflurane preconditioning against oxygen-glucose deprivation (OGD) injury in rat hippocampal slices. Methods Male adult SD rats weighing 270-290 g were anesthetized with ether and decapitated. The hippocampi were removed and sagittally sliced (400 μm thick) and placed in artificial cerebral spinal fluid aerated with 95% O2-5% CO2 . Ninety-six hippocampal slices were randomly divided into 8 groups (n = 12 each): control group (group C), OGD group, isoflurane preconditioning group (group Iso),sevoflurane preconditioning group (group Sevo) , SP600125 + isoflurane preconditioning group (group SP + Iso),SP600125 +sevoflurane preconditioning group (group SP + Sevo), DMSO + isoflurane preconditioning group (group DMSO + Iso) and DMSO + sevoflurane preconditioning group (group DMSO + Sevo). Electrophysiological technique was used to record the amplitude of population spike ( PS) in the stratum pyramidale of CA1 region and the degree of recovery of PS was calculated. The cell viability was determined by propidium iodide staining. Results Compared with group C, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly decreased in the other groups ( P ＜ 0.01) . Compared with group OGD, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly increased in groups Iso, Sevo, SP+Iso, SP+Sevo, DMSO+ Iso and DMSO + Sevo (P＜ 0.01). Compared with group Iso, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly increased in group SP+Iso ( P ＜ 0.01) , while no significant change was found in group DMSO + Iso ( P ＞ 0.05) . Compared with group Sevo, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly increased in group SP + Sevo ( P ＜ 0.01) , while no significant change was found in group DMSO + Sevo ( P ＞ 0.05). Conclusion Isoflurane preconditioning and sevoflurane preconditioning can attenuate the OGD injury to rat hippocampal slices through inhibiting JNK signaling pathway.