PRF 及所含三因子对大鼠脂肪干细胞增殖和黏附的影响

目的：研究富血小板纤维蛋白（PRF）及其所含三因子 TGF-β1、PDGF-AB、VEGF 分别对大鼠脂肪干细胞（ADSCs）增殖和黏附的影响。方法：将 ADSCs 培养在含有 PRF 膜和不同浓度的 PDFG-AB、TGF-β1、BEGF 中,细胞黏附实验检测培养2 h 后细胞黏附能力,CCK-8法检测培养1～7 d 细胞增殖。结果：黏附实验显示,PRF 组的黏附细胞数显著高于阴性对照组（P ＜0．05）;不同浓度的 PDGF-AB 组内黏附细胞数的差异无统计学意义（P ＞0．05）;不同浓度的 TGF-β1、VEGF 组内黏附细胞数的差异有统计学意义（P ＜0．05）。CCK-8实验表明,PRF 组的细胞增殖在各个时间点（1、3、5、7 d）显著高于阴性对照组（P ＜0．05）;不同浓度的 PDGF-AB、VEGF 组内细胞的增殖差异有显著性（P ＜0．05）;不同浓度的 TGF-β1组细胞增殖的差异无显著性（P ＞0．05）。结论：PRF 能提高 ADSCs 的增殖和黏附的能力。PDGF-AB 和 VEGF 可促进 ADSCs 的增殖;TGF-β1和 VEGF 均可促进 ADSCs 的黏附,并呈一定的量效正相关。     

富血小板纤维蛋白对兔脂肪干细胞成骨分化的影响

目的：体外分离培养兔脂肪干细胞（adipose—derived stem cells,ADSCs）,鉴定其分化能力并观察富血小板纤维蛋白（platelet—rich fibrin,PRF）对ADSCs成骨分化的影响。方法：取新西兰兔腹股沟处的脂肪组织,将其分离获得脂肪干细胞,培养至第三代用于实验。分别以油红O、茜素红染色鉴定其成脂和成骨分化能力。取兔耳中央动脉血一次离心法制备PRF膜。将脂肪干细胞分为2组：对照组不含PRF膜;实验组含PRF膜。用碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测不同时间点PRF对ADSCs成骨分化的影响。结果：脂肪干细胞呈长梭形贴壁生长;油红O及茜素红染色均呈阳性;在不同的时间点,实验组ALP活性值均高于对照组（P〈0．05）。结论：ADSCs具有成骨的潜能,且PRF可以促进ADSCs向成骨细胞分化。     

复合ADSCs/β-TCP组织工程骨与PRF修复下颌骨缺损的实验研究

目的:探讨脂肪干细胞/β-磷酸三钙(ADSCs/β-TCP)组织工程骨复合富血小板纤维蛋白(PRF)在修复下颌骨缺损中的作用。方法:新西兰大白兔27只,采用随机对照动物实验,随机分为3组,每组9只,培养家兔自体ADSCs,制备自体PRF。在每只兔子的双侧下颌骨制备下颌骨缺损模型。A组:将单纯的β-磷酸三钙(β-TCP)植入双侧下颌骨缺损区,B组:将ADSCs/β-TCP植入双侧下颌骨缺损区,C组:将ADSCs/β-TCP与PRF植入双侧下颌骨缺损区。分别于术后2、4、8周分别处死9只大白兔,并通过大体观察、X线片、以及组织切片观察下颌骨缺损的修复情况。结果:C组在2、4、8周3个时间点的成骨情况明显优于其他2组(P<0.01)。A组与B组之间的成骨情况差异无显著性(P>0.05)。结论:ADSCs/β-TCP复合物与PRF联合应用可促进下颌骨缺损的修复。     

富血小板纤维蛋白与富血小板血浆体外释放生长因子的比较及其对脂肪干细胞增殖分化的影响

目的比较富血小板纤维蛋白（PRF）与富血小板血浆（PRP）体外释放生长因子的质量浓度及其对脂肪干细胞（ADSCs）增殖和成骨分化的影响。方法抽取兔耳中央动脉血,一次离心法制备PRF,二次离心法制备PRP,分别将其置于5 mL新鲜的α-MEM培养液中,分别于37 ℃下静置1、7、14、21、28 d,收集PRF与PRP析出液,检测析出液中转化生长因子-β1（TGF-β1）及血小板源性生长因子-AB（PDGF-AB）的质量浓度。将收集的PRF与PRP析出液配置成条件培养液培养ADSCs,观察其对ADSCs增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。结果1）生长因子释放情况：不同时间点的PRF析出液中,14 d时TGF-β1的质量浓度达到最高,7 d时PDGF-AB的质量浓度最高;不同时间点的PRP析出液中,1 d时TGF-β1与PDGF-AB的质量浓度即达最高,以后逐渐下降。2）对ADSCs增殖及ALP活性的影响：PRF析出液中,14 d时对其影响最大;PRP析出液中,1 d时对其影响最大。结论与PRP相比,PRF能够缓慢持久地释放生长因子,更有力地刺激ADSCs的增殖和分化。     

富血小板血浆的三次离心法制备及其对脂肪干细胞增殖、成骨矿化的影响

目的 探索高效制备富血小板血浆(PRP)的方法,并观察不同体积分数的PRP对Beagle犬脂肪干细胞(ADSC)体外增殖及其向成骨细胞分化的影响.方法 抽取3只Beagle犬静脉血各40 mL,分别用传统的二次离心法和改良的三次离心法制备PRP,进行血小板计数分析.分别将体积分数为5%、100k、15%、20%的PRP...     

PRF复合自体骨髓间充质干细胞修复兔牙槽骨缺损的研究

目的:观察富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin, PRF)复合自体第3代骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells, BMSCs)修复牙槽骨缺损的能力。方法:取健康雄性2月龄新西兰兔36只,随机分为4组:PRF+BMSCs组、PRF组、BMSCs组、空白对照组,均在全麻下微创拔除下颌左侧中切牙。4组实验动物分别在4、8、12周处死。取其下颌骨进行牙槽骨标本测量,X线观察,组织学观察。结果:牙槽骨标本测量比较:4组牙槽嵴宽度、高度丧失值均存在差异(P＜0.05);析因分析示PRF与BMSCs复合使用修复牙槽骨的效果优于单独使用PRF或BMSCs(P<0.05)。X线、组织学观察表明术后4、8、12周时拔牙窝骨吸收程度:PRF+BMSCs组＜PRF组＜BMSCs组＜空白对照组,PRF+BMSCs组成骨情况均优于PRF组、BMSCs组、空白对照组。结论:PRF复合自体BMSCs可以促进牙槽骨的再生与修复,具有潜在的临床应用价值。     

rhPDGF-BB对糖尿病大鼠骨髓基质干细胞迁移的促进作用

目的: 体外评价不同浓度人重组血小板衍生生长因子BB（recombinant human platelet derived growth factor-BB, rhPDGF-BB）对糖尿病大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）迁移的影响,以及基质细胞衍生因子（stromal cell-derived factor 1,SDF-1）和其G 蛋白偶联受体CXCR4调控作用的相关机制,为rhPDGF-BB应用于临床糖尿病患者相关骨修复再生治疗提供理论基础。方法: 建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠动物模型。体外培养糖尿病大鼠BMSCs,作为对照组。采用Transwell小室趋化模型,以浓度0、10、50、100 ng/mL rhPDGF-BB作用BMSCs,检测其体外趋化作用;定时定量RCR检测BMSCs SDF-1、CXCR4 mRNA的表达变化,筛选出药物最佳作用浓度;应用PI3K/Akt抑制剂,反向证实rhPDGF-BB对BMSCs的SDF-1、CXCR4表达的调节作用。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠,1周后选取大鼠尾静脉血糖浓度高于16.7 mmol/L者为建模成功大鼠。与糖尿病大鼠的BMSCs相比,rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,50 ng/mL rhPDGF-BB为促进糖尿病大鼠BMSCs迁移的最佳作用浓度,PI3K/Akt抑制剂明显抑制糖尿病大鼠BMSCs的迁移。结论: rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,并通过SDF-1/CXCR4轴,调节糖尿病大鼠BMSCs的迁移。     

脂肪干细胞对TNF-α诱导的牙周膜干细胞炎症因子表达的影响

目的 观察脂肪干细胞对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的牙周膜干细胞炎症因子表达的影响,以期为脂肪干细胞应用于牙周炎治疗提供理论指导.方法 培养、鉴定脂肪干细胞和牙周膜干细胞.采用Transwell细胞共培养系统,上、下室均接种第3代细胞.实验分3组:A组:牙周膜干细胞对照组,上、下室均接种牙周膜干细胞;B组:肿瘤坏死因子-α诱导组,上、下室均接种牙周膜干细胞,下室加入10ng/mL肿瘤坏死因子-α;C组:肿瘤坏死因子-α联合脂肪干细胞干预组,上室脂肪干细胞,下室牙周膜干细胞,下室加入10 ng/mL肿瘤坏死因子-α.逆转录聚合酶链反应检测牙周膜干细胞白介素-6、白介素-8和肿瘤坏死因子-α的mRNA表达.结果 B组较A组白介素-6、白介素-8和肿瘤坏死因子-α的表达均增加,且均在2h时达到峰值(P〈0.05).2h时C组较B组白介素-6、白介素-8和肿瘤坏死因子-α的表达明显下降(P〈0.05).结论 脂肪干细胞能抑制TNF-α诱导的牙周膜干细胞的炎症反应.     

富血小板纤维蛋白对牙髓干细胞体外增殖与分化特性的影响

目的:探讨不同浓度富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)对犬牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)体外增殖及成牙本质/成骨分化能力的影响.方法:酶消法分离培养犬DPSCs,经流式细胞术和多向分化鉴定后分别在含自体PRF体积比为1/8、2/8、3/8的3种浓度的培养基中进行培养;采用MTT法检测1、2、3、4、5、6、7d各时间点的细胞增殖活性;实时定量PCR检测培养7、14、21 d时ALP、DSPP、DMPl mRNA的表达水平.结果:成功分离并获得克隆化培养的犬DPSCs,DPSCs具有成骨和成脂分化能力;3种浓度PRF均能促进DPSCs的增殖,1周内促增殖作用有时间依赖性而无PRF浓度依赖性;不同浓度PRF可通过上调成牙本质/成骨早期标志基因ALP、DSPP mRNA及晚期标志基因DMP1mRNA的表达来促进犬DPSCs成牙本质/成骨向分化,该效应既具时间依赖性又具有PRF浓度依赖性.结论:自体PRF可以不同方式同时促进犬DPSCs的增殖及分化.     

富血小板血浆对人真皮细胞增殖及PDGF、TGF-β和VEGF表达的影响

目的:研究富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hFbs)增殖、分化及胞质中PDGF、TGF-β和VEGF表达量的影响。方法:2次离心法制备PRP,成骨诱导条件下hFbs培养液中加入不同浓度PRP于第12天、21天钙-钴法染色,第21天茜素红染色;免疫细胞化学法检测加不同浓度PRP后第4天细胞PDGF、TGF-β和VEGF的表达;碱性磷酸酶染色(ALP)检测细胞活性;CCK-8法检测有和无成骨诱导条件下不同浓度PRP对细胞增殖的影响。结果:茜素红染色显示,2.8%PRP组钙结节形成最明显;钙-钴法染色显示,2.8%PRP组矿化作用最强;免疫细胞化学结果表明PDGF表达存在剂量依赖性,TGF-β和VEGF表达虽无剂量依赖性,但有适宜浓度的要求;ALP染色表明3%PRP组细胞增殖明显,活性最强。CCK-8检测表明各浓度PRP对hFbs均有促增殖作用,PRP加成骨诱导组比单纯PRP组表现出更明显的促增殖作用,其中4.8%PRP促增殖作用最强。结论:适宜浓度的PRP可促进hFbs增殖,但相关因子的表达存在适宜浓度的要求,PRP通过促进细胞增殖,增加相关因子表达促进创伤愈合。     

大鼠脂肪干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞的研究

目的：研究脂肪组织来源干细胞（adipose tissue-derived stem cells，ADSCs）在体外分离培养、诱导分化为成骨细胞的能力，探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性。方法：从SD大鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织，通过Ⅰ型胶原酶消化法获取原代ADSCs，适时传代。逐日倒置显微镜下观察细胞形态及增殖特征。第3代细胞用成骨诱导培养基向成骨细胞诱导分化，并进行碱性磷酸酶染色、VonKossa染色及免疫细胞化学染色鉴定成骨细胞特性。结果：从大鼠脂肪组织中分离培养出ADSCs，体外形态类似成纤维细胞，增殖迅速。在地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠及1，25-（OH）2 VitD，诱导下，ADSCs表现出成骨细胞特性：ALP活性显著增高，Von Kossa染色出现钙化结节，OC、Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色阳性。结论：ADSCs易于分离培养，体外扩增迅速，经矿化诱导后可分化为成骨细胞，可作为骨组织工程的种子细胞。     

Effects of transforming growth factor beta 1 on the plasminogen activation system,collagen and integrin synthesis,and proliferation of rabbit mandibular condylar chondrocytes

The objective of this study was to identify the mechanism by which mandibular condyle chondrocytes regulate the extracellular matrix. Primary rabbit condylar chondrocytes were isolated, cultured, and treated with transforming growth factor beta 1 (TGF-β1). Cells were then assayed for the following: urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its inhibitor (PAI-1), collagen types I and II, β1 integrin expression, and proliferative activity. TGF-β1 induced synthesis of collagen type II, αVβ1 integrin, and PAI-1. TGF-β1 induced the growth of chondrocytes and suppressed the synthesis of uPA. Chondrocyte regulation of the extracellular matrix is mediated by TGF-β1. Synthesis of collagen type II, αVβ1 integrin, and PAI-1 is induced, while uPA is suppressed. Also, TGF-β1 induces cellular growth.     

SD大鼠脂肪组织来源干细胞体外生物学特性研究

目的：体外培养并鉴定脂肪组织来源干细胞,为相关实验研究奠定基础。方法：分离SD大鼠腹股沟脂肪组织,经过胶原酶消化,加入脂肪组织来源干细胞条件培养基中培养,用流式细胞仪检测分离的脂肪组织来源干细胞并通过诱导检测分离细胞的多向分化潜能。结果：分离培养的细胞具有不断增殖能力,有多向分化能力,存在脂肪组织来源干细胞的相关标志分子。结论：成功建立了脂肪组织来源干细胞的分离培养方法,可用于进一步的实验研究。     

Impact of incubation method on the release of growth factors in non-Ca2+-activated PRP,Ca2+-activated PRP,PRF and A-PRF

The aim of this study was to investigate the influence of different incubation methods on the growth factor content of lysates of platelet-rich fibrin (PRF), advanced-platelet-rich fibrin (A-PRF) and platelet-rich plasma (PRP) products. A comparison of related studies suggests that the method of sample preparation has a significant influence on growth factor content. There are few reports on the comparison of non-Ca²⁺-activated PRP, Ca²⁺-activated PRP, A-PRF, and PRF, along with a lack of information on the release of PDGF-BB, TGF-β1, and VEGF among the different incubation methods.The lysate preparation was made of non-Ca²⁺-activated PRP, Ca²⁺-activated PRP, PRF, and A-PRF, using a room-temperature, 37 °C, or freeze–thaw–freeze incubation method. Afterwards the VEGF, PDGF-BB, and TGF-β1 content was investigated by running ELISA tests.Growth factor levels were significantly increased in the non-Ca²⁺-activated PRP with freeze–thaw–freeze incubation, and in the PRF preparation there was a significant disadvantage to using room temperature incubation for releasing growth factors.In conclusion, the freeze–thaw–freeze method is sufficient for releasing growth factors, and calcium activation is not necessary. Finally, the study demonstrates the possibility of preparing PRP products from platelet concentrates, so that preoperative blood sampling might not be required.     

TGF-β3转染脂肪干细胞复合OGP-HA-ChS支架对兔髁突受损软骨的修复作用

目的: 探讨TGF-β3转染脂肪干细胞ADSCs复合OGP（成骨多肽）-HA（透明质酸）-ChS（硫酸软骨素）支架修复兔髁突受损软骨的可行性。方法: 分离培养兔ADSCs,利用重组腺病毒构建携带TGF-β3基因表达载体,并转染至兔ADSCs。14 d后,观察细胞荧光表达情况并计算病毒转染效率,Western 印迹检测TGF-β3蛋白表达。50只大白兔随机分为5组,A组为空白组,B组为TGF-β3转染ADSCs组,C组为OGP-HA-ChS支架组,D组为ADSCs复合OGP-HA-ChS组。E组为TGF-β3转染ADSCs复合OGP-HA-ChS组,兔颞下颌关节骨关节病模型制备完成后,按照实验分组进行材料移植。各组动物分别于材料移植第3、9周后取材,制备标本并行髁突软骨扫描电镜、组织学观察及实时荧光定量PCR检测。采用SPSS17.0 软件包对数据进行统计学分析。结果: 扫描电镜与组织学观察可见,D、E组软骨病变修复改善情况优于B、C组。与模型组比较,实时定量 PCR结果显示,E组MMP-3 表达与A组相对持平但低于C、D组,差异有显著性（P<0.05);E组 TIMP-1 表达与A组相对持平但高于C、D组,差异有显著性（P<0.05)。结论: TGF-β3转染ADSCs复合OGP-HA-ChS支架对兔髁突受损软骨具有修复作用。