云南赤芍抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的:初步研究云南赤芍的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法:通过云南赤芍作用于体外培养的2.2.15细胞,观察其对2.2.15细胞两抗原分泌的影响.初步评价其抗HBV作用。结果:云南赤芍作用于2.2.15细胞12d后,药物对2.2.15细胞的半数毒性浓度为3.85g／L,对HBsAg、HBeAg的半数抑制浓度分别为<0.156g／L、0.54g／L,治疗指数分别为>24.68、7.13。结论:云南赤芍在体外细胞培养中对两抗原的分泌有较好的抑制作用。     

人脐血来源树突细胞抗乙型肝炎病毒细胞免疫的体外实验研究

目的借助DC的强大抗原呈递能力,使其负载HBsAg后以激活HBsAg特异性的CTL,从而探索一种可有效活化机体抗HBV细胞免疫的免疫方式。方法从健康产妇分娩的胎儿脐血中分离出单个核细胞,在细胞因子组合的作用下诱导出DC,于体外负载HBsAg后,激活自体T细胞成CTL,于体外培养环境下检测其对表达HBsAg的靶细胞HepG2-S的杀伤效应。结果人脐血来源的单个核细胞可在多种细胞因子的作用下,被诱导为DC。DC在负载HBsAg后可于体外活化HBsAg特异性的CTL。效应细胞为负载HBsAg的DC活化脐血单个核细胞,靶细胞分别为不表达和表达HBsAg的HepG2,当效应细胞和靶细胞比为1:1时出现最大的杀伤效率,CTL对靶细胞的杀伤率分别为(16.36±6.42)%和(78.09±9.66)%,差别有统计学意义(P<0.01)。结论健康人脐血来源的DC,具有较强的抗原呈递功能,可在体外激活产生HBsAg特异性CTL,在表达HBsAg的靶细胞模型上可观察到一定杀伤效果,为人脐血来源DC用于抗HBV治疗进行了有益的探索。     

反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒表达诱导凋亡的体外研究

目的：研究反义脱氧寡核苷酸（ASON）抗乙型肝炎病毒（HBV）复制表达的作用。方法：设计合成针对HBV PreS2的ASON并设非互补序列作对照,以人肝癌细胞系2.2.15细胞为细胞模型,应用ELISA观察了ASON对HBV基因表达的抑制作用,流式细胞仪观察了ASON对宿主细胞凋亡和增殖的影响。应用RIA法和MTT法观察ASON对细胞代谢的影响。结果：ASON可有效地抑制HBV基因的表达,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为66%和91%,而非互补序列对照无抑制作用：ASON可诱导宿主细胞凋亡,用药后第3天和第6天凋亡率分别为6.10%和6.43%,增殖指数分别为37%和36%,RIA和MTT法表明ASON对宿主细胞无细胞毒性作用。结论：ASON不仅以序列特异性方式发挥抗病毒作用,而且可能以凋亡的方式清除HBV。     

肝康栓的体外抗乙型肝炎病毒作用的研究

观察肝康栓对抗乙型肝炎病毒(HBV)体外药效评价,进一步探讨其抗病毒机制.方法:利用乙型肝炎病毒基因转染的2.2.15细胞系,用不同浓度的肝康栓作用于此细胞系,留取培养上清液.用ELISA、PCR技术检测上清液中的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)及乙肝病毒DNA(HBV DNA)的含量作为药物抗HBV效果的观察指标.结果:肝康栓能有效抑制上清液中的HBeAg和DNA浓度,但对HBsAg作用不明显.结论:肝康栓是一种有效的抗乙肝病毒的药物.     

树突状细胞HBsAg疫苗抗乙型肝炎病毒免疫的体外研究

目的 研究人单核细胞来源的树突状细胞（DC）激活的HBsAg特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对表达HBsAg的HepG2/S靶细胞的杀伤效应，以探索DC-HBsAg疫苗在抗乙型肝炎病毒（HBV）中的作用。方法 从健康外周血中分离邮单核细胞，在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素4（IL-4）的作用下培养7d诱导出DC，然后以DC为刺激细胞在体外诱导出HBsAg特异性CTL；将携有HBV-S基因的pLXSN/S重组质粒电击导入肝癌细胞系（HepG2)，建立表达HBsAg的靶细胞模型HepG2/S；用染色法检测HBsAg特异性CTL对HepG2/S靶细胞的杀伤效应。结果 DC激活的HBsAg特异性CTL对HepG2/S靶细胞具有较强的杀伤效应，不同浓度HBsAg(0μg/L，50μg/L和100μg/L）诱导的CTL的杀伤率分别为3.8%,69.5%和85.1%，而CTL对HepG2细胞无明显杀伤效应。结论 由DC激活的HBsAg特异性CTL具有较强制 特异性抗HBV作用。     

扯根菜浸膏对TGF-β1肝星状细胞胞内信号转导通路的影响

目的观察扯根菜浸膏对TGF-β1肝星状细胞胞内信号转导通路的影响。方法HSC-T6常规培养后分为正常组、模型组和药物组,用含0.5%FBS的DMEM培养,模型组在相同培养条件下加入TGF-β1刺激,药物组分别用不同浓度药物培养液加TGF-β1刺激,采用Alamar Blue法检测细胞活力,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物细胞毒性;根据Alamar Blue法及MTT的结果,选择药物组用含2mg/ml药物的0.5%FBS培养液加上TGF-β1刺激,24h后采用Western blotting法检测细胞I型胶原、α-肌动蛋白、ERK蛋白表达及磷酸化水平。结果不同浓度扯根菜浸膏均能抑制细胞增殖,在24h增殖抑制明显,以2mg/ml浓度最明显;MTT结果示2mg/ml药物组对细胞无明显的毒性,而10mg/ml、50mg/ml药物组对细胞有明显的毒性;扯根菜浸膏对I型胶原及α-肌动蛋白的表达均有明显抑制,与模型组比较,P0.01;对ERK蛋白表达未见明显抑制,与模型组比较,P0.05;但扯根菜浸膏对磷酸化ERK水平及表达均有明显的抑制,与模型组比较,P0.01。结论扯根菜浸膏能明显抑制肝星状细胞分泌I型胶原及α-肌动蛋白,减少细胞外基质沉积,其部分作用机制可能与抑制TGF-β1的胞内ERK信号转导有关。     

脂质体干扰素的体外抗乙型肝炎病毒效应

本文采用２．２．１５细胞进行脂质体干扰素与干扰素的体外抗乙型肝炎病毒实验，用ＥＬＩＳＡ法测ＨＢｅＡｇ，用反向血凝法及ＥＬＩＳＡ法测ＨＢｓＡｇ，用斑 交法测ＨＢＶ ＤＮＡ，结果证实，脂质体ＩＦＮ体外对ＨＢｅＡｇ的抑制率较ＩＦＮ高，能较好地抑制ＨＢＶ ＤＮＡ，但与ＩＦＮ一样，对ＨＢｓＡｇ无抑制作用。     

中药抗乙型肝炎病毒/丙型肝炎病毒研究新进展

核苷(酸)类似物(NUCs)和干扰素(IFN)α是目前临床上主要用于治疗乙型肝炎和丙型肝炎的药物.考虑到HBV对已有的NUCs均具有耐药现象,且疗程漫长,同时IFNα疗效有限,不良反应大,故开发新的靶位/作用环节的药物具有重要意义.本文就目前发现的一些具有抑制HBV和HCV复制而无严重肝毒性的中草药化学药物做一综述.     

乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片制备的初步实验研究

目的 制备联合检测乙型、丁型肝炎病毒基因芯片并进行杂交验证。方法利用Primer 5.0软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计多对PCR引物，纯化PCR扩增产物，扩增后的产物克隆至pMD18-T载体，提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制备成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术，样品标记后进行杂交。结果运用PCR技术，得到多个乙型、丁型肝炎病毒特异性基因片段。序列分析表明，所扩增的片段均属于HBV、HDV特异基因。杂交结果显示，样品和乙型、丁型肝炎诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论利用PCR扩增产物制备乙型、丁型诊断基因芯片是一种快速、简便的实用方法，有着广阔的应用前景。另外，利用限制性显示技术标记样品可为进一步更多种肝炎病毒的混和检测奠定基础。     

人胎肝细胞体外感染HCV的定性研究

目的：通过定性研究探讨人胎肝细胞在体外与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）阳性血清共培养２４ｈ是否能感染ＨＣＶ。方法：人胎肝细胞在体外与ＨＣＶ阳性血清共培养２４ｈ后,采用原位ＲＴ－ＰＣＲ技术对其进行ＨＣＶ定性检测。结果：通过原位ＲＴ－ＰＣＲ技术检测,发现人胎肝细胞内ＨＣＶ正、负链ＲＮＡ均为阳性。此外,将人胎肝细胞在体外与ＨＣＶ阳性血清共培养２４ｈ并经多次洗涤后继续培养的上清液加入到新鲜分离的正常人胎肝细胞培养     

中草药抗鸭乙型肝炎病毒的效果

采用鸭乙型肝炎动物模型对叶下珠、虎杖、五味子等中草药乙醇提取物进行了抗嗜肝DNA病毒效果评价。将一日龄北京鸭注乙肝病毒后随机分组,每组给予不同剂量药物,分别在给药前To、给药7天(T7).给药15天(T15)和停药后7天(P7)等不同时间,取血测定血清中DHBVDNA.对照组以生理盐水代替药物。结果显示出这些药物均有不同程度的抗DHBV治疗效果.尤以叶下珠为好.呈现出剂量反应关系;将这些药物联合作用.结果显示出比单味药有更好的治疗效果。     

肝苏颗粒浸膏粉抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的：观察肝苏颗粒浸膏粉（以下简称肝苏）体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的作用,为临床治疗乙肝病毒感染提供实验依据,方法：采用重庆鸭乙型肝炎动物模型,用肝苏口服治疗4W,停药观察1W,检测用药前后血清的DHBVDNA,DHBsAg,转氨酶（ALT,AST）及肝组织病理变化,结果：肝苏各剂量组用药后血清DHBV DNA滴度显著降低或极显著降低（P＜0．05或P＜0．01）,停药1W后中,小剂量组血清DHBV DNA有明显回升现象,而大剂量组DHBV DNA回升现象不明显,其抗病毒效果与剂量大小有一定的关系,用药前后血清DHBsAg O,D值（490nm)的变化与DNA滴度改变相似,此外,肝脏病理学检查及治疗4W,停药1W后血清ALT,AST检查未发现该药对鸭肝组织有明显的毒性损害,结论：连续用肝苏1个月在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用。     

初步探讨丙型肝炎病毒体外感染的致病机理

目的:初步探讨原代培养肝细胞对HCV的易感性,并在此基础上观察HCV感染后肝细胞形态学的变化。方法:用HCV RNA阳性血清与培养肝细胞共同孵育后,收集不同时相点标本,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、分别细胞内或上清中正负链RNA,免疫组化检测细胞内HCV NS3、NS5抗原的表达以及原位杂交检测细胞内HCV负链RNA,同时在电镜下观察细胞形态学变化。结果:接种感染血清后第3～5d,即可在细胞内或培养上清中检出HCV正负链RNA;感染肝细胞内可见HCV NS3、NS5抗原表达,阳性物质位于胞浆中;原位杂交法证实细胞内存在负链RNA,也位于胞浆中;光镜下未发现感染细胞形态学变化,电镜下发现胞浆内含有大量的脂肪空泡、多泡体,并可见疑似病毒样结构。结论:HCV不但能感染树鼩肝细胞,而且在体外能直接致细胞病变。     

Prevalence of Occult Hepatitis B Virus in Plasma and Peripheral Blood Mononuclear Cell Compartments of Patients With Chronic Hepatitis C Infection in Tehran-Iran

Background

Occult hepatitis B virus (HBV) infection (OBI) is frequently reported in patients with chronic hepatitis C virus (HCV) infection. An association between OBI and more liver damage, cirrhosis, hepatocellular carcinoma, and reduced response to interferon therapy in patients with HCV infection is suggested.

Objectives

The aim of this study was to determine the prevalence of occult HBV, and evaluate its clinical influence on patients with chronic HCV.

Patients and Methods

A cohort study including50 patients with positive results for HCV, and negative results for HBsAg tests was performed. The patients were divided into two groups: one group had positive results for both HCV and occult HBV tests (n = 18), and the other had positive results for HCV, but negative findings for occult HBV (n = 32). All were treated with PEG-IFN alpha-2a and Ribavirin. Presence of HCV RNA was followed in these patients.

Results

HBV-DNA was detected using nested-PCR in 20% of plasma and 32.6% of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) compartments. No significant differences were observed between patients with and without occult HBV for sex, age, duration of HCV infection, histological markers, presence of anti-HBc, HCV viral load, and HCV genotype. The response rate was significantly higher in patients with positive results for HBV-DNA test compared to those with negative findings (100% vs. 71.9 %, P < 0.05).

Conclusions

In conclusion, occult HBV was found in 36% of patients with negative results for HBsAg, but positive results for HCV. Detection of HBV-DNA in both PBMCs and plasma together in comparison with plasma alone provided more true identification of OBI.The SVR rate was significantly higher in coinfected patients than mono-infected ones.     

919糖浆抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的:研究919糖浆时鸭乙型肝炎的体内抗病毒作用。方法:以感染鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的武汉麻鸭为实验动物模型。使1d龄武汉麻鸭感染DHBV,7d后用Dot-EIA法筛选出DHBsAg强阳性鸭。随机分组后给予919糖浆治疗14d,于感染后第7d(为用药前)、用药7d、14d及停药后3d分别采血,采用斑点杂交方法检测血清DHBVDNA。结果。用药919糖浆7d、14d鸭血清DHBV DNA OD值均明显低于给药前,有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。停药3d后没有反跳现象。结论:919糖浆有一定的抑制DHBV DNA复制作用。     

海珠益肝胶囊抗乙型肝炎病毒疗效观察

目的:观察海珠益肝胶囊的抗乙型肝炎病毒作用。方法:应用海珠益肝胶囊治疗慢性乙型肝炎患者73例,并设赛若金对照组37例。结果:治疗组HBeAg、HBV DNA的阴转率为50％、59.7％,HBV DNA定量水平明显下降,与对照组疗效相当。结论:海珠益肝胶囊能够抑制乙肝病毒的复制,有较好的抗乙肝病毒作用。     

苏南地区乙型肝炎病毒S基因序列的多态性研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)S基因序列的多态性,为研究HBV-S基因变异提供参照指导。方法:采用聚合酶链反应技术对81例乙型肝炎表面抗原阳性的HBV感染者的S基因进行扩增,再对扩增产物进行DNA测序,将结果与标准序列进行比较分析。结果:81价标本中,测得adr型38例,adw型43例,未发现有ayr及ayw型。38例adr型中氨基酸第121～125位点(AA121～125)、AA127～130、AA132、AA135～160高度保守,而AA126为异亮氨酸(Ile),也可为苏氨酸(Thr)或丝氨酸(Ser);AA131多为Thr,少数为天冬酰胺(Asn),1例为脯氨酸(Pro),AA133多为蛋氨酸,少数为Thr;AA134为苯丙氨酸,仅1例为精氨酸。43例adw型中,AA131均为Thr,而非Asn;AA126为Thr,也可为丙氨酸(Ala),少数为Ser;AA127多为Pro,少数为Thr;AA123为Thr,少数为Ala或Ile;AA141多为赖氨酸,少数为谷氨酸;AA133、AA140分别为Thr、Ile各1例。其他位点则高度保守。结论:HBV亚型分布具有地域性,苏南地区多以adw和adr型为主。HBV-S基因(“a”决定簇)序列存在多态性,其中adw亚型略为明显。     

海珠益肝胶囊抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的:研究海珠益肝胶囊对鸭乙型肝炎的抗病毒作用.方法:使1日龄北京麻鸭感染鸭乙型肝炎病毒(DHBV),7天后用Dot-EIA法筛选出DHBsAg强阳性鸭.随机分成5组:海珠益肝胶囊大、中、小3个剂量组、以生理盐水灌胃的模型组和以无环鸟苷(ACV)灌胃的对照组.每组6只,各组雏鸭均灌胃10天.用药前、用药5天、10天及停药后3天分别采血,采用斑点杂交法检测血清DHBV DNA.结果:用海珠益肝胶囊5天、10天时鸭血清DHBV DNA其OD值均明显低于给药前,差异有显著性意义(P＜0.05).与对照组相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论:海珠益肝胶囊有一定的抑制DHBV DNA复制的作用.