骨膜提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为类成骨细胞

目的 应用骨膜提取物诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为类成骨细胞,为骨组织_丁程提供充足的种子细胞.方法 切取小鼠颅骨骨膜提取物,诱导小鼠骨髓间充质干细胞.诱导分化后的细胞采用ALP染色、RT-PCR、蛋白印迹技术进行检测.结果 形态学观察显示,分化后的MSCs细胞形态从长梭形变成三角形、多角形或立方形;ALP活性...     

骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的相关信号通路研究现状*

背景：研究表明骨髓间充质干细胞被诱导分化成为神经细胞涉及的信号通路复杂多样。 目的：总结分析骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中涉及的信号通路研究进展。 方法：应用计算机检索 CNKI 和Web of Science数据库中 2001-01/2010-12关于骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的文章,以“骨髓间充质干细胞,神经细胞,信号”或“bone marrow mesenchymal stem cells,neural cells,signal”为检索词进行检索,重点对19篇文献进行分析。 结果与结论：细胞信号通路之间的关系错综复杂,相互之间或协调促进,或拮抗抑制,从而使得调节细胞的特异性应答更加精确。多条信号转导通路参与调控骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,BMSCs向神经细胞的诱导分化过程中,所涉及的信号通路也并非独立存在,包括Ca2+信号通路、蛋白激酶 A信号通路、MEK-ERK通路、PI3K/AKt信号通路、MAPK信号通路等,信号通路之间关系复杂,彼此相互关联存在。 关键词：信号通路;骨髓间充质干细胞;神经细胞;分化;综述文献 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.06.035     

间充质干细胞迁移中的信号通路

间充质干细胞因具有多向分化,来源广泛、取材容易和便于自体移植等特点,是一种理想的组织工程干细胞.国内外有关其用于治疗的研究已取得了一定的进展,但是其具体的作用机制仍不是很清楚.近来有关其信号通路的研究较多,本文就其中有关间充质干细胞迁移的相关通路,如PI-3K/AKT信号通路、MAPK/ERK1/2信号通路、Wnt3a信号通路、Jak/STAT信号通路、RhoA-Rho kinase信号通路、SMAD信号通路,进行综述,以便更全面的理解间充质干细胞迁移的机制.     

Notch信号通路调控间充质干细胞的增殖与分化

背景：研究发现,Notch的配体和受体都是细胞膜表面蛋白,是介导细胞间通讯的一种重要蛋白,Notch信号通路在间充质干细胞增殖与分化过程中起着至关重要的调控作用。目的：就Notch信号通路对间充质干细胞增殖与分化过程的调节机制进行综述,总结和阐述Notch信号通路如何调控间充质干细胞的增殖与分化相关研究进展,为未来利用干细胞治疗各种相关疾病提供理论支持。方法：由第一作者应用计算机在中国知网、万方、维普、PubMed、Web of Science和Nature数据库检索涉及Notch信号通路调控间充质干细胞增殖与分化的相关文献,中文检索词为“间充质干细胞,Notch,Notch信号通路,增殖,分化”,英文检索词为“mesenchymal stem cells,MSC,Notch,Notch signaling pathway,proliferation,differentiation”,结合文献追溯法查找部分文献,最终纳入87篇文献进入综述分析。结果与结论：(1)Notch信号通路是一条存在于多细胞生物中保守的信号通路,通过受体与配体结合介导相邻细胞间的通信,在调节细胞分化、增殖、凋亡和...     

大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞

为了观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞(NSCs)的能力,本研究通过贴壁法培养大鼠BMSCs,体外培养扩增纯化后,在细胞传代时用含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、N2、B27的DMEM/F12的培养液制成细胞悬液,并进行诱导,观察诱导后细胞的形态及生长情况,用免疫荧光检测形成的细胞球的巢蛋白(nestin)的表达情况;形成的细胞球在含10%血清的培养液中进一步分化。结果显示:BMSCs在含EGF、bFGF、N2、B27的培养液中,逐渐形成nestin表达阳性的细胞球,在含血清的培养液中能分化为神经元样细胞、星形胶质样细胞及少突胶质样细胞。本研究结果提示经纯化的BMSCs能分化为NSCs,并具有进一步分化的能力。     

氯化锂通过调节自噬通路促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

目的:研究氯化锂(Li Cl)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)神经分化的影响,并探讨自噬通路在其中的作用。方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,细胞分为Li Cl组和对照组,采用β-巯基乙醇诱导MSCs向神经细胞分化,免疫荧光法和Western blot法检测诱导后神经元标志蛋白神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP-2)以及自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达变化。进一步采用自噬激活剂雷帕霉素(rapamycin)及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预自噬,Western blot法观察NSE和MAP-2的表达变化。结果:诱导分化后,Li Cl组及对照组细胞均有NSE和MAP-2表达,Li Cl组细胞NSE和MAP-2蛋白阳性表达率及表达量均大于对照组(P0.05);此外,Li Cl组细胞LC3阳性荧光点以及LC3-Ⅱ表达量亦多于对照组(P0.05)。加用雷帕霉素可进一步促进Li Cl处理的细胞NSE和MAP-2蛋白的表达(P0.05),而3-MA则抑制Li Cl处理的细胞NSE和MAP-2蛋白的表达(P0.05)。结论:氯化锂可能通过调节自噬通路促进大鼠骨髓骨髓间充质干细胞向神经细胞分化。     

定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞

目的建立体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为成骨细胞的模型,为将MSC3用作骨组织工程的种子细胞奠定基础。方法用成骨添加剂（地塞米松10^-8mol/L、β-甘油磷酸钠10mmol／L、维生素C50mg/L）定向诱导传代大鼠骨髓MSCs分化为成骨细胞,通过形态学、生长曲线、免疫细胞化学及碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞。结果诱导组具有成骨细胞的形态和生长特点,增殖相对缓慢,但与对照组间的差异没有统计学意义（P〉0．05）,碱性磷酸酶活性增强。结论建立了体外定向诱导大鼠骨髓MSCs向成骨细胞转化的模型,成骨添加剂不影响细胞的增殖,可迅速大量获得种子细胞。     

芦丁通过抑制TXNIP/TRX-ROS信号通路促进人脐带间充质干细胞成骨分化

目的 探究芦丁对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)成骨分化的作用,并探究其机制。方法 不同浓度芦丁处理成骨分化的hUCMSCs,通过CCK-8检测细胞增殖活性,通过茜素红染色检测细胞矿化结节形成,通过碱性磷酸酶染色检测细胞碱性磷酸酶活性,通过Western blot检测细胞成骨相关蛋白和TXNIP/TRX信号通路蛋白表达,通过ROS探针检测细胞ROS水平。结果 芦丁剂量依赖的促进hUCMSCs增殖,能增加hUCMSCs矿化结节形成及ALP活性;芦丁处理增加hUCMSCs成骨相关蛋白RUNX2和OPN蛋白表达水平,降低hUCMSCs ROS水平和TXNIP蛋白表达,增加TRX蛋白表达。结论 芦丁促进hUCMSCs增殖及成骨分化,其机制可能与其抑制TXNIP/TRX-ROS信号通路有关。     

影响骨髓间充质干细胞成骨分化的力学信号传导机制研究进展

骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell,BMSC)是一种具有多向分化潜能的成体干细胞,适量的力学刺激能促进BMSC向成骨细胞分化。近几年来,一些学者利用力学刺激作用于体外培养的BMSC,促进其向成骨细胞分化,并且对其诱导分化的机制进行了大量研究。尽管这一机制目前尚不十分清楚,但是已有的研究表明,多条信号通路参与了该力学信号传导。本文就国内外近几年来关于力学信号影响BMSC成骨分化的信号转导机制研究进展做一综述。     

辛伐他汀可刺激骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:辛伐他汀可显著刺激骨髓间充质干细胞成骨分化,但机制不明.近年研究证实p38 MAPK信号通路参与调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的过程.目的:观察p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路在辛伐他汀体外干预刺激骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用....     

力生长因子促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化

BACKGROUND:Mechano growth factor has the potential to activate muscle satellite cells and promote myogenic cell growth, and has dual roles in maintaining bone mass and repairing bone defects. OBJECTIVE:To explore the mechanism underlying osteogenic differentiation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells promoted by the mechano growth factor. METHODS:The best concentration and time of mechano growth factor to promote osteogenic differentiation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells were detected by MTT. The mRNA and protein expressions of alkaline phosphatase and osteocalcin were detected by qPCR and western blot, respectively. The phosphorylation level of AKT and mTOR were detected by western blot assay. RESULTS AND CONCLUSION:The best concentration and time of mechano growth factor was 45 μg/L and 5 days for promoting the osteogenic differentiation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells. The expressions of alkaline phosphatase and osteocalcin at mRNA and protein levels were highest after 4-hour intervention with 45 μg/L mechano growth factor, and meanwhile, the phosphorylation levels of mTOR and AKT were also highest. These findings indicate that the mechano growth factor can promote the differentiation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells into osteoblasts via PI3K/AKT pathway, and its best concentration and time are 45 μg/L and 4 hours, respectively.     

骨髓间充质干细胞诱导分化成骨方法的研究与进展

背景：骨髓间充质干细胞具有良好的成骨分化潜能,移植入体内后可分化为骨、软骨、肌肉、脂肪、肝脏和神经等多种细胞。 目的：综述大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化成骨最新方法进展。 方法：分别以“骨髓间充质干细胞,成骨细胞,诱导分化”、 “bone mesenchymal stem cells ,osteoblast cells,osteogenic differentiation”为检索词,应用计算机检索CHKD期刊全文数据库,PubMed数据库和万方数据库1995至2011年有关文章。纳入有关骨髓间充质干细胞的文献。排除内容重复和缺乏原创性文献。保留34篇文献做进一步分析。 结果与结论：骨髓间充质干细胞在适当的生长因子诱导下可以快速地向成骨细胞分化和增殖。在体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化需要特定的诱导条件、优良的诱导剂以及合适的剂量。骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化受许多自身调控因素(控制基因表达的转录因子)和环境调控因素(分泌因素、细胞外基质,化学因素、细胞与细胞间的相互作用)的影响,这些调控因素并不是孤立存在的,而是相互联系、相互作用,共同调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。     

体外诱导人骨髓基质干细胞向角膜上皮样细胞的分化

目的探讨体外诱导人骨髓基质干细胞(HMSCs)向角膜上皮样细胞分化的可能性。方法组织块培养法原代培养人眼角膜基质细胞(HCFs)并进行传代培养;密度梯度离心法分离、培养HMSCs;倒置相差显微镜观察细胞的形态学特征;免疫细胞化学对细胞进行鉴定。利用角膜上皮细胞生长的微环境对处于共培养体系的HMSCs进行诱导培养;免疫细胞化学检测角膜上皮细胞的特异性分子标志角蛋白12(CK12)在分化细胞的原位表达;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测分化细胞CK12 m RNA的表达,用单独培养的HMSCs做对照。结果HMSCs和HCFs贴壁生长,以梭形为主,接近汇合的细胞排列有一定方向性,呈漩涡状;HMSCs阳性表达CD29;HCFs阳性表达波形纤维蛋白;随着共培养时间的延长,HMSCs形状逐渐由长梭形变为不规则多边形,与上皮细胞的形态相似;免疫细胞化学和RT-PCR分别在蛋白和基因水平证实分化细胞表达CK12。结论在一定诱导条件下,体外培养的HMSCs可向具有角膜上皮细胞表型的上皮样细胞分化。     

体外定向诱导人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的研究

目的:建立体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为成骨细胞的模型。方法:采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC,体外扩增,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达,应用地塞米松、β-甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞,检测碱性磷酸酶(AP)活性、钙沉积、骨桥蛋白的表达鉴定成骨细胞,比较P3和P10代MSC成骨分化的能力。结果:MSC在体外扩增原代可获得(5-6)×10⁵个细胞,10代可获得2×10¹⁰个细胞。流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD59、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD33、CD34、CD45、CD38、CD80、CD86、CD117表达为阴性。加入成骨诱导剂,细胞形态发生变化,AP活性增强,骨桥蛋白表达阳性,钙沉积逐渐出现。P3和P10代的MSC均有良好的分化为成骨细胞的能力。结论:成人骨髓间质干细胞在体外可分化为成骨细胞。     

人骨髓间质干细胞向造血细胞分化潜能的实验研究

目的:在体研究人骨髓间质干细胞(hBMMSCs)向造血细胞分化的潜能。方法:将hBMMSCs经尾静脉注射给环磷酰胺处理的严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠,利用流式激活细胞分析系统(FACS)检测hBMMSCs输注后存活35d的SCID小鼠外周血、骨髓和脾脏中人源性造血细胞的表型和水平。结果:hBMMSCs输注组外周血(PB)、骨髓(BM)和脾脏(spleen)中可检测到人CD45⁺/H-2D^d-、CD34⁺/H-2D^d-细胞,而对照组PB、BM和脾脏均未检测到上述表型的人造血细胞。结论:hBMMSCs具有向造血细胞分化的潜能。     

微模式化基底上大鼠骨髓间充质干细胞的增殖、分化和迁移

目的　利用微模式化基底研究基底几何微结构对骨髓间充质干细胞增殖、分化及迁移过程的影响。方法　设计制作微模式化基底,用以控制细胞的铺展形态和面积。比较不同模式控制下大鼠骨髓间充质干细胞的增殖、分化和迁移数据。结果　细胞铺展宽度狭小可抑制骨髓间充质干细胞的增殖,细胞铺展形状可以调节其向成骨细胞分化的进程,细胞铺展面积受限时迁移增强,其增殖迁移行为减弱与成骨细胞诱导因子地塞米松的作用有关。结论　细胞铺展的几何形状和面积是骨髓间充质干细胞增殖、分化及迁移过程中的重要调节因子。     

血小板衍生生长因子BB诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

背景:研究表明,小鼠前破骨细胞分泌的血小板衍生生长因子BB可以促进成骨细胞和成血管细胞形成,尚无血小板衍生生长因子BB是否可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的相关研究.目的:探讨血小板衍生生长因子BB诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的可行性.方法:①体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,第3代细胞经流式鉴定其...     

人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞诱导的体外实验研究

目的 探讨成肌细胞条件培养液体外诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞分化的可行性.方法 B超引导下穿刺抽得孕中期羊水,体外培养、分离得到羊水来源间充质干细胞.鼠成肌细胞体外培养后收集上清液,检测上清液中半乳糖凝集素-1（Galectin-1）含量,并制备成肌细胞条件培养液.实验组于成肌细胞条件培养液中培养,对照组于成肌细胞诱导培养液中培养.观察2组细胞形态学变化,免疫荧光染色、RT-PCR检测成肌细胞特异性标志物Pax7、MyoD、肌结蛋白（Desmin）、肌钙蛋白Ⅰ（Tn Ⅰ）及mRNA表达情况.结果 倒置相差显微镜下可见实验组细胞诱导第18天出现折光性强、体积较小的细胞,呈多角形,并带有突起,且逐渐成长条形;可见少量多核细胞.对照组细胞呈扁平多角形,胞体较大.诱导24 d免疫荧光染色及RT-PCR提示实验组细胞不同程度表达Pax7、MyoD、Desmin、TnⅠ及mRNA;对照组呈阴性.成肌细胞培养上清液中半乳糖凝集素-1含量较低.结论 成肌细胞条件培养液能诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞样细胞分化.     

心肌营养素1诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

目的: 探索心肌营养素1(CT-1)对小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法: 获取、扩增稳定的成体西藏小型猪MSCs,鉴定成脂、成骨潜能。分4组诱导向心肌样细胞分化,包括空白对照组、5-氮杂胞苷(5-Aza)组、CT-1组、5-Aza和CT-1合用组。取诱导后4周的细胞加肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)抗体,进行免疫荧光染色,最后计数红色荧光阳性染色率。结果: 分组诱导分化结果,合用组的诱导分化心肌样细胞α-actin阳性率为29.90%±4.76%,明显大于5-Aza组(17.73%±2.35%,P<0.01)、CT-1组(6.63%±0.55%,P<0.01)和空白对照组(1.62%±0.09%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.05)。cTnT红色荧光染色结果显示:合用组的诱导分化心肌样细胞cTnT阳性率为36.50%±4.09%,明显大于5-Aza组(14.37%±1.65%,P<0.01)、CT-1组(7.50%±0.61%,P<0.01)和空白对照组(1.12%±0.23%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.01)。结论: 适宜浓度的5-Aza(10 μmol/L)和CT-1(0.1 μg/L)能够在体外诱导小型藏猪骨髓MSCs转化为心肌样细胞,诱导后的细胞获得部分心肌细胞特异性蛋白的表达。CT-1与5-Aza联合可明显提高诱导率。