动脉粥样硬化兔血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道NO直接激活研究

目的:研究NO是否可以直接激活VSMC BKCa以及AS时血管平滑肌细胞BKCa对NO的反应性是否发生改变,为治疗AS提供新思路.方法:3月龄新西兰兔20只,雌雄各半,随机分为实验组(AS组)和对照组(正常组),每组10只.实验组兔喂高脂饲料8周以建立AS模型,对照组兔喂普通饲料8周.以ISMN为外源性NO供体,应用单通道膜片钳技术检测NO对兔VSMC BKCa的直接激活作用及两组兔对NO的反应性差别.结果:在inside-out patches(膜电位 40 mV)下,ISMN显著增加BKCa通道开放事件数,缩短Tc,增加Po,且具有浓度依赖性.10-6 mol·L-1的ISMN(膜电位 40 mV)可分别使AS组和对照组BKCa的Po增加4.917±1.475倍和9.616±3.227倍(P＜0.01).结论:NO对VSMCBKCa有直接激活作用,但在AS时VSMC BKCa对NO的激活敏感性是降低的.     

血管平滑肌钙激活钾通道及其调节机制

在所有离子通道中，钾通道种类最多。就血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＶＳＭＣ）而言，目前正式命名的就有４大类即电压依赖性钾通道（Ｋｖ）、钙激活的钾通道（ＫＣａ）、内向整流钾通道（ＫＩＲ）和ＡＴＰ敏感性钾通道（ＫＡＴＰ）...     

大电导钙激活钾通道对血管平滑肌的作用

大电导钙激活钾通道(BKCa)是血管平滑肌细胞膜电位的主要离子通道,在血管的舒缩及调节细胞功能方面发挥着重要的作用。BKCa通道的激活可使细胞膜发生超极化,从而抑制电压依赖性钙通道的激活及抑制钙离子内流,导致平滑肌舒张。近年来研究发现,BKCa通道的激活、失活和变异与多种疾病的发病有关,如BKCa对糖尿病、失血性休克、高血压、妊娠期高血压疾病等具有调控作用。     

大电导钙激活钾通道对平滑肌的调控作用研究进展

钾通道是组织器官中的一种重要通道,几乎所有的组织中都有该通道的分布,并且它在调节细胞功能方面起着极其重要的作用,例如动作电位的形成和信号传导等。大电导钙激活钾通道(BKca/Maxi K)以其广泛的分布,以及参与调节多种细胞功能吸引了更多研究者的关注。BKca/Maxi K的激活可导致细胞膜的超极化,从而抑制电压依赖性钙通道的激活,抑制钙离子内流,引起平滑肌舒张。近年来研究发现,BKca/Maxi K的激活、失活和变异与多种疾病的发病有关,BKca/Maxi K对心血管平滑肌、子宫平滑肌、呼吸道平滑肌和阴茎勃起等具有调控作用,尤其是其基因疗法对阴茎勃起障碍的治疗逐渐显现出较大的优势。     

葛根素对大鼠肾动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的影响

<正>葛根素是从豆科植物野葛或甘葛根的干燥根中提取的单体,其化学名为8-β-D-葡萄吡喃糖-4,7-二羟基异黄酮。据研究报道,葛根素具有多种药理学活性,包括降低血压[1]、舒张大鼠冠状动脉[2]、改善急性心肌缺血[3]、清除氧自由基[4]等,但关于葛根素对大鼠肾动脉的作用却未见报道。本实验主要研究葛根素对大鼠离体肾动脉的肌源性作用,葛根素对大鼠肾动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)电流的作     

糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞中大电导钙离子激活钾通道电流和钙离子浓度变化

目的探讨糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞中大电导钙离子激活钾通道(BK通道)电流及钙离子浓度的变化。方法 40只SD大鼠随机均分为正常对照组(A组)和糖尿病组(B组)。采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠模型,酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,全细胞膜片钳实验和荧光测定方法分别检测冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流和钙离子浓度。结果与A组相比,当刺激电压大于60mV时,B组冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度明显下降(P<0.05);A组冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度明显低于B组[(103±23)nmol/L vs.(193±22)nmol/L](P<0.05)。结论冠状动脉平滑肌细胞中BK通道电流下降及细胞内钙离子浓度升高可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因。     

小电导钙激活钾通道与房颤关系的研究进展

房颤是临床上最常见的心律失常,它与心血管疾病的发病率和病死率密切相关。目前对房颤发病机制包括"折返"学说和"驱动伴颤动样传导"理论,以及在此基础上发展起来的"肺静脉波"学说和"房颤致房颤"理论。小电导钙激活钾通道(Small conductance calcium-activated potassium channel,SK channel)在哺乳动物心脏中呈心房选择性表达,并在心肌动作电位复极末期起作用。目前研究表明小电导钙激活钾通道参与房颤的发生维持,但其具体作用及机制仍有争议,本文就近年的研究成果做一综述。     

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

目的:探讨阿托伐他汀对自发性高血压大鼠(SHR)动脉血压及肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channel,BKCa,MaxiK)的影响。方法:选取雄性9周龄SHR12只,随机分为阿托伐他汀组(AVT组)、蒸馏水组(DW组),每组6只,以Wistar-Kyoto大鼠为对照组(WKY组)(n=6)。AVT组以AVT加适量蒸馏水灌胃10周(50 mg.kg-1.d-1)。观察给药前后大鼠腹主动脉血压的变化,测定大鼠血清TC、TG及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。利用膜片钳全细胞模式记录肠系膜动脉平滑肌细胞钾电流、用四乙胺阻断大电导钙激活钾通道后的电流、膜电容,以计算BKCa电流值、电流密度。结果:AVT组腹主动脉血压明显低于DW组[(171±8)mmHgvs(190±10)mmHg,P<0.01](1 mmHg=0.133 kPa);与DW组相比,AVT组肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa电容减低[(23.8±2.6)pFvs(30.0±2.5)pF,P<0.01]而电流密度则显著高于DW组[(13.2±1.2)pA...     

大电导钙激活钾通道功能调控机制的研究进展

大电导钙激活钾通道（也称作BKCa,MaxiK或Slo-1）是钾离子通道家族重要的成员之一。它具有大单通道电导、分布广泛、受膜电位和胞内钙离子双重调控等特点,参与许多重要的生理活动。     

缬沙坦干预对缺氧性肺动脉高压大鼠大电导钙激活钾通道的影响

目的：观察缬沙坦对缺氧性肺动脉高压（PAH）大鼠肺动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（large-conductance calcium-activated potassiumchannel,BKCa,MaxiK）的影响。方法：选取二级健康7周龄雄性SD大鼠30只,随机分为A组：对照组,B组：PAH模型组,C组：缬沙坦干预组。测定3组大鼠肺动脉平均压（PAMP）,利用膜片钳全细胞模式记录肠系膜动脉平滑肌细胞膜电容、钾电流以及用四乙胺阻断BKCa后的电流,以计算BKCa电流值及其电流密度值,免疫组织化学染色观察BKCa蛋白的表达。结果：B组PAMP明显高于A组（P〈0.01）,而膜电容、BKCa电流和电流密度及BKCa蛋白表达平均积分吸光度（iOD）值均明显低于A组（P〈0.05）。与B组相比较,给予缬沙坦干预后,C组的PAMP显著下降（P〈0.01）,BKCa电流和电流密度均有不同程度增加（P〈0.05）,而BKCa蛋白表达iOD值则无明显变化。结论：缬沙坦可有效降低缺氧性肺动脉高压大鼠的肺动脉压力,其机制可能是通过增加肺动脉平滑肌细胞BKCa的活性实现的。     

平滑肌细胞膜的钙激活Cl~-通道

在多种平滑肌上都已发现Ｃａ２＋激活Ｃｌ－通道。胞内游离钙升高是钙激活氯通道的必要条件。多种刺激剂诱导胞内钙库释放钙而同时激活钾通道［ＩＫ（Ｃａ）］和氯通道［ＩＣｌ（Ｃａ）］。平滑肌细胞上激活ＩＣｌ（Ｃａ）的［Ｃａ２＋］ｉ阈值因动物种属和组织差异而不同。用荧光指示剂直接测定大鼠门静脉平滑肌细胞上的［Ｃａ２＋］ｉ得出激活ＩＫ（Ｃａ）的最小［Ｃａ２＋］ｉ应大于７０～８０μｍｏｌ·Ｌ－１,比激活ＩＣｌ（Ｃａ）的最低浓度１８０μｍｏｌ·Ｌ－１要小,因此认为ＩＫ（Ｃａ）要比ＩＣｌ（Ｃａ）对［Ｃａ２＋］ｉ更敏感。胞外钙通过电压依赖性钙通道进入胞内,［Ｃａ２＋］ｉ升高也能激活氯通道。Ｇ蛋白与某些受体偶联激活胞内第二信使ＩＰ３而激活氯通道。钙激活氯通道的电导很小,从全细胞电流分析应小于１０ｐＳ。平滑肌细胞上的氯平衡电位（ＥＣｌ）正于静息膜电位,因此Ｃｌ－通道开放Ｃｌ－外流驱动膜电位向ＥＣｌ方向靠近,形成膜的去极化。Ｃａ２＋激活Ｃｌ－通道开放使细胞膜去极化并引起细胞的兴奋,这种通道在由激素或神经递质引起平滑肌细胞的兴奋过程中起重要作用。     

平滑肌细胞膜的钙激活Cl^1通道

在多种平滑肌上都已发现Ｃａ＾２＋激活Ｃｌ＾－通道。胞内游离钙升高是钙激活氯通道的必要条件。多种刺激剂诱导胞内钙库释放钙而同时激活钾通道〖ＩＫ（Ｃａ）〗和氯通道〖ＩＣｌ（Ｃａ）〗。平滑肌细胞上激活ＩＣｌ（Ｃａ）的〖Ｃａ＾２＋〗ｉ阈值因动物种属和组织差异而不同。用荧光指示剂直接测定大鼠门静脉平滑肌细胞上的〖Ｃａ＾２＋〗ｉ得出激活Ｉｋ（Ｃａ）的最小〖Ｃａ＾２＋〗ｉ应大于７０～８０μｍｏｌ．Ｌ＾－１,比激     

瞬时受体电位通道C3/6与大电导钙激活钾通道在肾小球足细胞表面转运中的作用

由Slo1基因编码的大电导钙激活钾通道(BKCa)与各种瞬时受体电位通道C(TRPCs)在许多细胞系上共表达,其中包括肾小球的足细胞(脏层上皮细胞)。在本实验中,通过免疫共沉淀和谷胱甘肽S-转移酶(GST)pull-down方法证实在分化的足细胞系上的BKCa通道与内源性的TRPC3/6通道相联系。2种TRPC通道在足细胞上与Slo1共定位,并且在人胚肾(HEK)293T细胞上TRPC通道蛋白与Slo1瞬时共表达。在     

神经元上的小电导钙激活钾通道的研究进展

小电导的钙激活钾通道 (SK)具有K+ 选择性 ,Ca2 + 高敏性和电压不依赖等特性 ,广泛分布在神经元上。参与产生慢后超级化电位 ,通过放电频率适应影响神经元的放电功能。SK通道主要包括SK1,SK2 ,SK3 3种通道 ,通道活性受Ca2 + ,钙调蛋白 (CaM )以及一些神经递质的调节。SK通道的改变可能与学习记忆失调 ,精神分裂症以及神经肌肉失调等疾病有关     

钙激活钾通道α亚单位与高血压关系的研究

了解调节血管张力的靶点及内源性活性物质配体的BKca通道的特性,有助于深入研究通道特性及临床治疗药物筛选。用脂质体（lipofectamine2000）转染法转染BKca表达质粒pcDNA3.1-BKca筛选稳定表达单克隆细胞系研究其基本的生理学特性,同时建立BKca动力学研究模型。建立稳定转染BKca通道α亚单位的HEK293细胞系,通过膜片钳记录到与天然细胞BKca电生理BKca相似电流,可以用于分析通道动力模型及药物动力学作用机制。成功建立稳定转染BKca通道α亚单位的HEK293细胞系,膜片钳实验证明具有典型的BKca电生理特性,同时建立细胞系可以较好的运用于BKca通道功能调控研究和动力学参数分析。     

钙激活钾通道α亚单位与高血压关系的研究

了解调节血管张力的靶点及内源性活性物质配体的BKca通道的特性,有助于深入研究通道特性及临床治疗药物筛选。用脂质体(lipofectamine2000)转染法转染BKca表达质粒pcDNA3.1-BKca筛选稳定表达单克隆细胞系研究其基本的生理学特性,同时建立BKca动力学研究模型。建立稳定转染BKca通道α亚单位的HEK293细胞系,通过膜片钳记录到与天然细胞BKca电生理BKca相似电流,可以用于分析通道动力模型及药物动力学作用机制。成功建立稳定转染BKca通道α亚单位的HEK293细胞系,膜片钳实验证明具有典型的BKca电生理特性,同时建立细胞系可以较好的运用于BKca通道功能调控研究和动力学参数分析。     

脱氢表雄甾酮对COPD大鼠支气管平滑肌细胞钙激活性钾通道的激活作用

目的:对比研究正常及慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠支气管平滑肌细胞钙激活性钾(KCa)通道的活性,观察脱氢表雄甾酮(DHEA)对COPD大鼠支气管平滑肌细胞KCa通道的作用。方法:38只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=20)和COPD组(n=18),在相对密闭舱内吸入纸烟建立COPD动物模型,采用急性酶分离法分离大鼠支气管平滑肌细胞,应用膜片钳技术,在对称性高钾溶液中,于急性分离的大鼠支气管平滑肌细胞的内面向外式膜片上,分离出KCa电流,比较COPD和对照组的活性,记录DHEA对COPD大鼠支气管平滑肌细胞膜KCa通道活性的激活作用。结果:COPD组KCa活性明显比正常组低(P<0.01),DHEA可明显激活COPD组大鼠支气管平滑肌的KCa电流(P<0.01)。结论:COPD大鼠支气管平滑肌细胞KCa通道活性降低可能在COPD发病机制中起着一定作用,DHEA可以直接激活COPD大鼠支气管平滑肌KCa活性,松驰COPD大鼠支气管平滑肌。     

粉防己碱对肺动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的双重作用

目的：研究粉防己碱（Ｔｅｔ）对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活钾（Ｋｃａ）通道的影响。方法 内面朝外膜片箝单通道记录法,结果：Ｔｅｔ７．５和１５μｍｏｌ．Ｌ＾－１使Ｋｃａ的开放概率由０．２５１±０．０１２增加到０．３４０±０．０１３和０．４１５±０．０１１（Ｐ〈０．０１）,关闭时间由（６１±１５）ｍｓ缩短到（３３±１０）和（２８±１１）ｍｓ（Ｐ〈０．０１）Ｔｅｔ３０μｍｏｌ．Ｌ＾－１使开放概率和开放时间     

WNK4激酶通过激酶依赖途径抑制大电导钙激活钾通道的活性

WNK（with no lysine（k））激酶是一类新型丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶亚型。WNK家族的两种突变型会导致以高血压、高血钾、代谢性酸中毒为临床特征的Ⅱ型假性低醛固酮血症（PHAⅡ）。这些临床症状表明WNK对肾脏远曲小管主要的钾离子转运体包括肾外部髓质钾通道（ROMK）和钙激活钾通道（MaxiKorBK）可能有调节作用。最新研究表明,WNK4激酶不仅抑制ROMK通道功能,并且PHAⅡ型突变的WNK4激酶能够增强对非洲爪蟾卵的ROMK通道功能的抑制。目标：为确定WNK激酶是否会影响MaxiK通道功能,我们研究稳定表达MaxiK通道α亚基的HEK293细胞（HEK293-MaxiK）中的WNK4激酶对MaxiK通道功能的影响。方法：用CD4、WNK4野生型或者WNK4激酶失活变异体型D321A分别转染HEK293-MaxiK,2至4天后用细胞粘附式膜片钳记录单离子通道的活动。     

酸敏感离子通道对大电导钙激活钾通道的抑制及其相互作用

酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)是神经细胞的非电压门控阳离子通道,广泛分布于中枢及外周神经系统,参与痛觉、触觉、酸味觉的形成。在突触可塑性、学习记忆功能、炎症及脑缺血等生理病理过程中发挥重要作用。