Taqman技术检测NG、CT、Uu的临床研究

目的：评价Taqman技术检测临床标本中主要性病病原体的应用价值。方法：应用Taqman技术、常规PCR技术及培养法检测100份性病科门诊患者生殖泌尿道拭子标本，比较三种方法检测淋病奈瑟菌（NG），沙眼衣原体（CT），解脲支原体(Uu)的灵敏度。500份性病科门诊患者生殖泌尿道拭子标本同时经Taqman技术及常规PCR技术检测，结果不符者使用培养法验证，以比较Taqman技术及常规PCR技术的特异性。结果：在100份临床标本检测中，Taquman技术、常规PCR及培养法检出阳性率分别为41％，35％，21％。在500份送检标本中，Taqman技术检出阳性标本204份，常规PCR检出阳性标本181份，其中结果不符的41份标本经重复培养验证，37份与Taqman技术检测结果相符。结论：Taqman技术具有良好的敏感性和特异性，集PCR扩增、杂交及荧光自动化检测于一体，实验过程简便、快速、易于质控，是检测性病病原体的有效方法。     

Taqman荧光探针技术检测结核分枝杆菌

目的：比较Taqman荧光探针技术与常规PCR电泳技术检测结核分枝杆菌的灵敏度及特异性，评价Taqman荧光探针技术（Taqman技术）检测临床标本中结菌的应用价值。方法：应用细菌培养法，常规PCR电泳技术与Taqman技术检测300份临床结核病患者痰标本及50份非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果：细菌培养法检测结核阳性率为112/300；常规PCR电泳技术检测结核菌阳性率为169/300，特异性96%；Taqman荧光探针技术检测结核菌阳性率为141/300，特异性100％。结论：Taqman荧光探针技术是一种全新的PCR分子杂交模式，集PCR扩增、荧光探针杂交、荧光检测一体化，在单一管内完成，简便、快速、防污染、敏感性高、特异性强，是结核病辅助诊断的有效方法。     

Taqman技术检测重庆地区2001年度NC、CT、UU的结果分析

目的：调查2001年度重庆地区淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)感染情况。方法：用Taqman技术检测2600例重庆地区性病科患者泌尿生殖道标本NG—DNA、CT—DNA、UU—DNA，观察这三种主要性病病原体的感染率及年龄、性别分布。结果：在2600份临床标本检测中，淋球菌感染率为11．00％、沙眼支原体感染率为15．11％、解脲支原体感染率为8．23％，CT、UU混合感染率为1．73％。男性感染者1846例，女性感染者754例，男女患病比例为2．5：1。性传播疾病患者年龄分布从15岁～60岁以上不等，平均26．4岁。结论：重庆地区性传播疾病中以非淋球菌性泌尿生殖道炎为主，男性患者多于女性，且年龄有年轻化趋势。     

女性生殖道沙眼衣原体解脲支原体感染分析

目的：沙眼衣原体、解脲支原体是性传播疾病的常见病原体，对人类尤其是女性健康造成了极大危害，了解其在女性患者中的感染情况。方法：按常规取女性生殖道感染患者白带标本，使用立明衣原体快速检测试剂及性病支原体快速培养试剂对上述2种病原体进行检测。结果：1310份检测的标本中总的病原体检出率为41．22％(540／1310)，单一病原体感染CT为10．69％，UU为30．53％，合并感染3．05％。结论：CT及UU在女性生殖道感染中有重要地位，应引起人们高度重视。     

实时荧光PCR和RT—PCR方法检测登革病毒的比较研究

目的通过2种检测登革病毒方法的比较，以提高检测登革病毒的灵敏度和特异性。方法利用Taqman MGB技术，根据登革病毒3’端非编码区的一段高度保守序列，设计登革1～4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针，以登革热毒株作为标准，以乙脑毒株作对照，建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法。并对10份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT—PCR及荧光PCR扩增。结果RT—PCR检测10份临床血清标本，2份阳性，阳性率为20％。实时荧光PCR检测登革病毒与乙脑病毒无交叉反应，检测10份临床血清标本，5份阳性，阳性率为50％。从RNA提取到检测结果仅需4h。结论Taqman MGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强，可作为登革病毒的快速检测方法，应用于登革热的临床早期诊断。     

Real time PCR与常规血培养在血流感染未知病原体鉴定中的比较研究

目的：观察real time PCR在血流感染病原体检测中的敏感性和特异性,并与常规血培养对比,探讨其临床应用价值。方法以该院各临床科室收集的108份脓毒血症患者血液标本进行real time PCR检测,同时进行常规血培养,比较两种方法的特异性和敏感性。结果108份标本当中,两种方法检测出12种病原微生物。 Real time PCR共检测出阳性标本25份,阴性标本83份。其中与血培养共同阳性标本9份,共同阴性标本78份。两方法的一致性为80.6%。Real time PCR的阴性预测值是0.94,敏感性64%,特异性83%。16例标本real time PCR阳性而血培养阴性,5例标本血培养阳性而real time PCR阴性。同时,有2病标超出real time PCR的检测范围,而血培养阳性。此外,real time PCR无法检测光滑念珠菌。结论real time PCR虽然能快速检测血液感染中病原微生物,但依然不能完全替代血培养。     

实时荧光定量PCR在生殖泌尿道疾病诊断中的应用

目的:探讨荧光定量PCR在生殖泌尿道疾病诊断中的应用。方法:采用FQ-PCR法对4160例泌尿生殖道感染疑似患者同时进行UU、CT、HSVⅡ型、NG和HPV检测。结果:5种性病病原体的感染率比较差异有统计学意义(P<0.01);另外男女的UU感染率比较差异有统计学意义(P<0.05),而CT感染率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:荧光定量PCR技术检测常见性病病原体,具有简便、快捷、准确、特异性高等优点,对临床诊断治疗及流行病学调查有重要意义。     

多种PCR-微孔板核酸杂交法同时检测三种病原体DNA的临床应用

目的：应用一种同时检测沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌三种病原体DNA的方法对临床标本进行检测方法：采用多重PCR-核酸探针杂交技术，对泌尿生殖系统传播疾病（STD）有症状者分泌物，用同一份处理标本与常规PCR法比较。结果：检测186分标本，沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌检出率分别为24.1％、50.0％和29.0％，并有25.2％的双重感染和6.6％的三重复合感染。结论：本法快捷、特异性好，同时确诊多重感染。     

生殖道解脲支原体检测方法的比较及应用

目的：分析荧光定量PCR法与液体培养法对生殖道解脲支原体的检出率及临床应用。方法：收集1299例患者生殖道分泌物标本,其中302例标本同时采用荧光定量PCR法和液体培养法检测Uu,997例标本仅采用荧光定量PCR法检测Uu。结果：荧光定量PCR法和液体培养法同时检测302例标本,PCR法检出Uu 116例,阳性率为38．41％,液体培养法检出Uu 81例,阳性率为26．82％,PCR法阳性率显著高于培养法（X2＝9．23, P＜0．05）。结论：女性感染Uu阳性率较男性要高。Q－PCR法Uu检出率高于液体培养法,临床应二种方法结合使用。     

2018-2019年青海省脑炎脑膜炎症候群病例脑脊液病原学检测结果分析

目的通过对脑炎脑膜炎症候群脑脊液标本进行培养鉴定,以及应用荧光定量PCR检测细菌性脑膜炎病原体DNA进行分群,从而了解全省脑炎脑膜炎症候群病原流行特征及变异变迁规律。方法依据《脑炎脑膜炎症候群病原学监测技术方案》检测技术,对全省两家哨点医院脑炎脑膜炎症候群急性期病例的脑脊液标本174份进行病原学培养鉴定和核酸检测(培养阴性的标本做PCR检测)。结果 2018-2019共检测脑炎脑膜炎症候群脑脊液标本174份,经培养鉴定:有菌生长16份,其中目标菌检出3株,其它菌13株。158份脑脊液培养检测结果阴性的标本做荧光定量PCR检测,脑炎奈瑟菌和肺炎链球菌均为阴性,检出流感嗜血杆菌6份。结论青海省两家哨点医院脑炎脑膜炎标本病原体检出率比较低。荧光定量PCR可用于细菌性脑炎脑膜炎病原体的检测、鉴别分群,可为临床提供科学的诊断依据。     

荧光PCR对从业人员肠道致病菌筛查的评价

目的评价荧光PCR法用于食品及公共场所从业人员肠道致病菌的筛查。方法随机采集12780份从业人员肛拭子标本用荧光PCR检测,以传统分离培养方法作为“金标法”进行对照,分析灵敏性和特异性。结果在12780份标本中,荧光PCR检测出沙门菌阳性14份,阳性率为1.10‰,培养法检测出10份,阳性率为0.78‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100％,特异性为99.97％。荧光PCR检测出志贺菌18份,阳性率为1.41‰,培养法检测出3份,阳性率为0.23‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100％,特异性为99.88％。结论荧光PCR法灵敏度性高,特异性强,简便快速,为从业人员健康检查提供了一套快速的筛查方法,值得广泛推广应用。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在泌尿生殖道淋病中的应用

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SAT）检测泌尿生殖道淋病的灵敏度、特异度以及监测疗效的实用性。方法回顾性分析12816例因怀疑泌尿道淋球菌感染需行淋球菌检测受试者临床资料,其中淋球菌培养检测6323例,基于SAT开发的淋球菌核酸检测试剂盒（NG-SAT）检测7107例,比较2种检测方法的阳性率;再以淋球菌培养法为金标准,计算同时行以上2种检测的614例患者NG-SAT检测尿液样本的灵敏度和特异度;对2种检测结果有差别的标本,进行荧光定量DNA杂交及聚合酶链反应法（FQ-PCR）复测与分析;对检测结果阳性的患者进行头孢曲松治疗,待症状消失后3d再次行以上2种检测。结果NG-SAT检测尿液标本的灵敏度为100.0%,特异度为98.2%。2种检测结果有差别的标本7份,均为SAT检测阳性、淋球菌培养阴性;FQ-PCR复测结果显示6份阳性、1份阴性。179例患者经头孢曲松治疗后,NG-SAT检测阳性15例,淋球菌培养阳性7例。结论NG-SAT检测尿液中淋球菌简便、准确,且能准确判断预后,值得临床推广应用。     

用多元PCR检测老年患者院内肺部感染的病原

对３０例老年院内肺部感染患者的痰标本分别进行多元ＰＣＲ、一元ＰＣＲ和常规培养检测绿脓杆菌、流感杆菌和肺炎链球菌。结果表明：（１）多元ＰＣＲ的检测结果与一元ＰＣＲ的完全一致，但前者更快速、简便；（２）ＰＣＲ阳性检出率为６６．６７％（２０／３０），细菌培养的为３３．３３％（１０／３０），二者差异显著（Ｐ〈０．０１）。说明多元ＰＣＲ特异性好，敏感性强，比一元ＰＣＲ尤其是细菌培养大大节省时间，更适合检测混     

16SrRNA基因检测在新生儿化脓性脑膜炎早期诊断中的应用

目的:探讨脑脊液中16SrRNA基因检测在新生儿化脓性脑膜炎早期诊断中的应用价值。方法:对疑似化脓性脑膜炎的40例患儿的脑脊液进行16SrRNA基因PCR检测,并同时做脑脊液常规、生化及细菌培养,将其结果进行比较。结果:40例患儿脑脊液16SrRNA基因PCR检测阳性率32.5%(13/40),脑脊液细菌培养阳性率0%(0/40)。根据脑脊液常规、生化检测参数临床诊断为化脓性脑膜炎的患者为12.5%(5/40)。16SrRNA基因PCR检测阳性率明显高于脑脊液培养和临床诊断(P<0.05)。结论:16SrRNA基因PCR检测方法特异性强、敏感性高,可为临床新生儿化脓性脑膜炎的早期诊断提供可靠的依据。     

聚合酶链反应检测慢性前列腺炎患者前列腺液中沙眼衣原体

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１３４例慢性前列腺炎病人的前列腺液进行沙眼衣原体ＤＮＡ重复序列检测，结果阳性率为２９．１％（３９／１３４）。非慢性前列腺炎其他泌尿生殖道疾病患者的前列腺液１５例作为对照，均未出现阳性反应。用ＰＣＲ检测沙眼衣原体敏感性高（检测３．８５ｐｇＤＮＡ，在引物扩增片段５１７ｂｐ仍有可见的扩增信号），特异性强（与数种细菌、病毒、支原体、弓形虫均未出现沙眼衣原体待异性沉淀带），提示本法可用于临床诊断，在一定程度上替代培养技术，成为监测沙眼衣原体感染的实验室手段。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用分析

目的采用统计学方法评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)在临床淋球菌检测中的应用。方法以淋球菌培养法为标准对照,采用实时荧光核酸恒温扩增技术同时对150例疑似患者的生殖道拭子标本和尿液标本进行检测,对结果进行统计学分析比较,并用PCR法进行验证。结果使用SAT检测的生殖道拭子和尿液阳性检出均为110例,培养法阳性检出为108例,其中培养法检出阴性的2例通过PCR验证为阳性。两种取样方式的SAT检测法和培养法三者阳性率差异均无统计学意义(P0.05);以培养法为金标准,SAT检测拭子的敏感度为100.0%,特异度为95.2%;SAT检测尿液标本的敏感度为100.0%,特异度为95.2%。结论采用实时荧光核酸恒温扩增技术对生殖道拭子和尿道标本的检测效果与培养法相比,阳性率高,敏感度较高,且尿道标本收集方法比较简便,患者依从性好,可代替拭子道取样方法,此方法可在临床推广应用。     

荧光PCR技术批量快速筛查肠道致病菌混合样本的研究

目的：寻找从业人员肠道传染病菌的快速筛查技术方法。方法以参加健康体检的从业人员作为研究对象,采集健康体检从业人员的肛拭子标本,采用荧光PCR技术批量快速筛查肠道致病菌混合样本的方法进行沙门氏菌和志贺氏菌检测,并与国家标准方法进行对照,比较两种检测方法的检出率结果。结果58176份样本中,共检出52份沙门菌阳性标本,阳性率为0.89‰,检出51份志贺氏菌阳性标本,阳性率为0.88‰。合计共检出致病菌103份,检出率为1.77‰。荧光PCR对沙门菌和志贺氏菌的灵敏度达到了100%,特异性也保持在99%以上。结论采用荧光PCR技术进行肠道致病菌的快速筛查能缩短检验时间,检验准确性高,从而有效阻断肠道传染病的传播和食物中毒的发生。