金黄色葡萄球菌黏附到Bcap-37上皮细胞促进TLR4的表达

目的:研究金黄色葡萄球菌对乳腺上皮细胞的黏附及Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法:用不同浓度的金黄色葡萄球菌作用Bcap-37细胞,用平板活菌计数观察金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞的黏附作用;RT-PCR法检测金黄色葡萄球菌作用Bcap-37细胞后TLR4 mRNA的表达变化;流式细胞术分析Bcap-37细胞表面TLR4的表达变化.结果:金黄色葡萄球菌黏附乳腺上皮细胞具有显著的时间和剂量依赖性(P＜0.01),作用60 min达到饱和黏附后不再增加.金黄色葡萄球菌作用Bcap-37细胞后,TLR 4 mRNA和蛋白表达量随着作用时间延长而逐渐增高,分别在4h和6h达到高峰之后又逐渐下降(P＜0.05).结论:金黄色葡萄球菌能够黏附乳腺上皮细胞,并且可以上调Bcap-37细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达.     

亚硒酸钠对Bcap-37人乳腺癌细胞体外增殖及3种酶细胞化学的影响

目的 观察体外培养中亚硒酸钠的浓度变化和培养时间的延长对Bcap-37人乳腺癌细胞增殖及酶活性的影响。方法 在体外培养Bcap-37人乳腺癌细胞中加入不同浓度的亚硒酸钠,常规染色显示其形态和增殖情况及各组Bcap-37人乳腺癌细胞内的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和非特异性酯酶活性。结果 2umol／L的亚硒酸钠对肿瘤细胞的生长具有一定的抑制作用,而10umol／L、50umol／L的亚硒酸钠具有一定的细胞毒性。Bcap-37人乳腺癌细胞内的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、非特异性酯酶活性随着硒浓度的加大,培养时间的延长呈下降趋势,并且10umol／L、50umol／L亚硒酸钠培养2d后,3种酶的活性完全消失。结论 硒对肿瘤细胞的生长和酶的活性都具有抑制作用,并且两者之间存在着一致性。     

TLR2介导的BV-2细胞TNF-α及IFN-α的表达

目的:观察HCV阳性血清处理后TLR2 mRNA的表达及TLR2蛋白阻断前后TNF-α、IFN-α的表达.方法:细胞分为空白对照组、正常对照组及实验组,每组分为4h、8h、16 h及24h,同时设TLR2阻断组及其对照组,采用RT-qPCR方法检测各组各时间点TLR2mRNA的表达变化,并采用ELISA方法检测各时间点及TLR2阻断后组培养上清液中TNF-α、IFN-α水平.结果:HCV阳性血清处理后各时间点TLR2 mRNA表达均显著增加,空白对照组、正常对照组与实验组之间TLR2mRNA表达有统计学差异(P ＜0.05); TLR2蛋白阻断前后TNF-α、IFN-α的表达有统计学差异(P＜0.05).结论:HCV阳性血清处理可能激活TLR2,TLR2可能通过下游大量炎性因子如TNF-α、IFN-α等参与BV-2抗HCV免疫.     

Fasudil通过TLR4通路抑制脂多糖诱导的小鼠BV-2小胶质细胞TNF-α和IL-1β的表达

目的探讨Fasudil对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞系促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞系,实验分为PBS对照组、LPS刺激组、LPS联合Fasudil干预组,ELISA检测细胞TNF-α、IL-1β的释放,Griess法检测NO释放水平,流式细胞术检测Toll样受体4(TLR4)、TLR2蛋白表达。结果 LPS刺激BV-2细胞可导致TNF-α、IL-1β和NO的释放明显增加,还可导致炎性信号通路中的受体TLR4表达明显增加。Fasudil能明显抑制炎性因子的释放和TLR4的表达。结论 Fasudil可抑制LPS诱导的小胶质细胞NO、TNF-α和IL-1β释放,其作用机制可能与Fasudil下调TLR4通路有关。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B对豚鼠哮喘模型Th1/Th2细胞因子的影响

目的研究金黄色葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal Enterotoxin B,SEB)对豚鼠支气管哮喘(简称哮喘)模型气道炎症及Th1/Th2细胞因子的影响。方法27只豚鼠随机分为对照组,模型组,SEB组各9只,用卵白蛋白(OVA)建立哮喘模型。末次激发豚鼠24-48 h内处理,支气管肺泡灌洗,直接记数总白细胞和嗜酸性粒细胞,观察肺组织病理改变,分装冻存支气管肺泡灌洗液做细胞因子检测。结果SEB组豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量为(2.6±0.64)×106,显著低于模型组的(13.0±1.8)×106(P<0.01);肺组织哮喘炎症反应也轻于模型组;SEB组肺泡灌洗液中Th1细胞因子IFNγ-浓度(126.41±5.17)pg/mL,高于模型组(86.52±5.10)pg/mL(P<0.05);而Th2细胞因子IL-4浓度(50.02±2.79)pg/mL低于模型组(78.30±3.88)pg/mL(P<0.05)。结论SEB能减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量,可以通过调节Th1/Th2细胞因子的比值来减轻气道哮喘炎症反应。     

DHT对卵巢癌细胞IL-6、IL-8及其受体表达的调节作用

目的 初步探讨雄激素对卵巢癌细胞IL-6、IL-8及其受体表达的调节作用及作用机制.方法 选择兼有雄激素受体(AR)、IL-6和IL-8及其受体表达的卵巢癌细胞系SKOV-3和OVCAR-3作为研究模型,观察5a-二氢睾酮(DHT)对IL-6、IL-8及其受体表达以及NF-κB加转录的调节作用.结果 DHT可促进卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌及相应mRNA表达,并增强IL-6基因启动子的转录活性,DHT的上述作用可被AR阻断剂氟他胺完全阻断.DHT显著提高卵巢癌细胞NF-κB加亚单位p50、p65(RelA)mRNA的表达水平,其中对后者的作用与对IL-6、IL-8 mRNA的作用相平行.此外,DHT尚能调节IL-6、IL-8受体的表达.结论 雄激素可能通过NF-κB信号传导途径促进卵巢癌细胞IL-6、IL-8的分泌,同时对二者受体的表达也有一定的凋节作用.     

姜黄素对肺炎链球菌诱导BEAS-2B细胞SLPI、TNF-α和IL-1β表达的影响

目的:探讨姜黄素(Cur)及其衍生物Y20和6B对肺炎链球菌(SP)诱导的BEAS-2B细胞分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的调节及可能机制。方法:建立体外SP感染模型,采用q PCR检测对照组、感染组以及Cur、Y20和6B处理组在感染1、3、6和9 h SLPI及感染3、6和9 h TNF-α和IL-1β的mRNA水平,ELISA法检测TNF-α和IL-1β的蛋白分泌水平,Western blot实验检测各时点Toll样受体2(TLR2)和磷酸化核因子κB(NF-κB)p65的蛋白水平。结果:q PCR结果显示,Cur、Y20和6B药物处理组SLPI的mRNA表达较SP感染组增加(P0.05),TNF-α和IL-1β的mRNA表达较SP感染组明显下降(P0.05);ELISA结果显示,感染不同时点的TNF-α和IL-1β含量在药物处理组中均下降(P0.05);Western blot结果显示,SP感染3、6和9 h在药物处理组中TLR2和p-NF-κB p65的蛋白水平较感染组下降(P0.05)。结论:在不同感染时间,Cur、Y20和6B促进SP感染的BEAS-2B细胞SLPI表达,减少TNF-α和IL-1β分泌,其机制可能与抑制TLR2表达、下调NF-κB转录活性有关。     

TNF-α对肠上皮细胞PIgR、NF-κB亚单位表达影响

目的:研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞表达多聚免疫球蛋白受体(pIgR)和核因子-κB(NF-κB)亚单位RelA/RelB的影响。方法:采用Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达pIgR、RelA和RelB的变化。结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后pIgR、RelA和RelB基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:TNF-α促进肠上皮细胞表达pIgR、NF-κB亚单位基因表达,TNF-α通过NF-κB通路激活pIgR基因的转录。     

核因子-κB对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响

目的: 探讨核因子-κB(NF-κB)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖、凋亡和转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达的影响。方法: 体外培养ASMCs，以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,将ASMCs分为对照组、TNF-α组和TNF-α+PDTC组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β₁ mRNA表达，Western blotting检测NF-κB、TGF-β₁的表达，免疫细胞化学染色法检测PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位，四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMCs增殖，Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡。结果: （1）TNF-α组ASMCs的NF-κB活性显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组NF-κB活性显著低于TNF-α组 (P<0.01)。（2）TNF-α组ASMCs增殖显著高于对照组(P<0.01),TNF-α＋PDTC组的增殖反应显著低于TNF-α组(P<0.01)；TNF-α+PDTC组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01)。（3）TNF-α组ASMCs的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01)，TNF-α+PDTC组的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著低于TNF-α组(P<0.01)。（4）TNF-α组ASMCs的TGF-β₁的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α＋PDTC组（P<0.01）。结论: NF-κB活化可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β₁的表达和分泌。     

五味子多糖对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子和细胞外基质FN和COLⅠ表达的影响

目的：探讨五味子多糖（SCP）对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子和细胞基质（ECM）表达的影响。方法：体外培养人肾小球系膜细胞,采用4 ng/ml TGF-β1诱导人肾小球系膜细胞构建系膜增生性肾炎细胞模型,分为正常对照（Con）组、模型（TGF-β1）组、SCP低、中、高浓度（SCP-L、SCP-M、SCP-H）组,MTT检测细胞增殖活性,ELISA检测炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量,qRT-PCR和Western blot分析纤连蛋白（FN）和Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）表达,Western blot评估TLR4/NF-κB信号传导途径关键蛋白表达。结果：与Con组相比,TGF-β1组细胞增殖活性明显升高,IL-6、IL-1β、TNF-α和MCP-1含量明显升高,FN、COLⅠ、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子（MyD88）和磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)表达明显上调（P<0.05）;与TGF-β1组相比,不同浓度SCP干预均能够抑制细胞增殖活性,降低IL-6、IL-1β、TNF-α和M...     

阿魏酸钠对TNF-α致内皮细胞NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的 :探讨阿魏酸钠对TNF α致内皮细胞NF κB和ICAM 1表达的影响及可能机制。方法 :通过免疫组化技术观察阿魏酸钠对TNF α对培养内皮细胞 (ECV30 4)的NF κB和ICAM 1表达的影响。结果 :TNF α能使细胞核内NF κB及细胞表面ICAM 1表达明显增高 ,阿魏酸钠和TNF α共同作用后 ,可使内皮细胞核内NF κB及细胞表面ICAM 1表达显著降低。结论 :阿魏酸钠可显著减轻TNF α所致内皮细胞的损害 ,其机理可能与抑制内皮细胞NF κB活化 ,减少ICAM 1表达有关。     

感染性早产小鼠胎盘TLR4，NF-κB和TNF-α的表达及NAC的干预作用研究

目的:通过研究感染性早产小鼠胎盘Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4),核转录因子-kappaB p65(Nuclear factor-kappaB p65,NF-κBp65)和肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的表达以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)的干预影响,探讨一种预防小鼠感染性早产发生的新策略.方法:利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法检测早产小鼠胎盘TLR4、NF-κBp65、TNF-α mRNA和蛋白的表达,以及NAC干预后早产率、TLR4、NF-κBp65和TNF-α的表达变化.结果:对照组都有TLR4、NF-κBp65、TNF-α的少量表达,LPS模型组和对照组相比三者表达都显著升高(P＜0.05);NAC+LPS和模型组相比,TLR4表达无明显变化,而NF-κBp65和TNF-α表达明显减少(P＜0.05),并且早产率也明显下降(P＜0.05);LPS+NAC治疗组和模型组相比无统计学意义.结论:NAC可以降低感染性早产小鼠胎盘NF-κBp65和TNF-α的表达,在早产的预防中有一定作用.     

TLR3激动剂对B细胞功能的影响

目的观察TLR3激动剂Poly I:C对B细胞功能的影响,包括细胞增殖、共刺激分子表达、细胞因子和抗体的分泌情况。方法利用免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD19+B细胞,RT-PCR法证实其表达TLR3。体外用Poly I:C刺激B细胞一定时间后,CFSE分裂法检测B细胞增殖,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞表面共刺激分子表达,CBA(cytometric bead ar-ray)法或ELISA法检测培养上清中细胞因子含量,CBA法检测B细胞分泌Ig的亚型。结果 Poly I:C可以促进B细胞增殖,上调B细胞表面CD40、CD80、CD86和MHC II类分子的表达,促进IL-6和TNF-α的高分泌,诱导IgG1κ抗体的产生。结论 Poly I:C可以通过促进增殖、细胞因子分泌,诱导抗体产生和上调共刺激分子表达等多方面调节B细胞功能。     

IL-1β通过诱导TLR4表达增强协同LPS刺激引起的狼疮小鼠B细胞的功能异常

目的:探索IL-1β对SLE模型小鼠脾脏B细胞功能的影响。方法:磁珠分选纯化正常小鼠及SLE模型小鼠脾脏B细胞。用不同浓度的IL-1β或LPS联合IL-1β处理分选的B细胞后,CCK8检测B细胞增殖情况,流式细胞仪检测B细胞的活化及TLR4的表达,实时定量PCR方法分析细胞因子的表达。结果:获得的B细胞纯度高达95%。IL-1β不影响正常小鼠和SLE小鼠脾脏B细胞的增殖,也不影响共刺激分子CD80和CD86的表达。但IL-1β可上调SLE小鼠B细胞中CD40、CD69、IL-6及IL-10的表达。进一步,IL-1β与LPS协同可增强SLE小鼠B细胞的CD40及CD69表达。IL-1β还可上调SLE小鼠B细胞中TLR4的表达。结论:IL-1β可能通过诱导TLR4表达来增强LPS刺激引起的SLE小鼠的B细胞功能异常,提示控制感染和抑制炎症可能达到减缓SLE病程的目的。     

NF-κB"decoy"寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6表达的影响

目的 :研究NF -κB“decoy”寡核苷酸 (ODNs)对LPS诱导小鼠巨噬细胞株J774 1细胞的TNF -α和IL - 6表达的影响 ,探讨F -κB“decoy”寡核苷酸防治LPS诱导急性炎性损伤的可行性。方法 :巨噬细胞株J774 1细胞接种于 6孔板中 ,4× 10 5个细胞/孔 ,37℃、5 %CO2 培养过夜 ,待细胞汇合至 80 % ,用无血清、无抗生素 16 4 0培养液洗涤细胞两次后随机分为 4组。内毒素刺激组 :用含 1mg/LLPS的培养液刺激 ,不加治疗 ;NODN治疗组 :用含 1mg/LLPS的培养液刺激 3h ,然后用脂质体介导 1μmol/L(终浓度 )NF -κB“decoy”ODNs治疗 ;SO…     

TLR介导BCG和猪苓多糖激活巨噬细胞株J774 NF-κB的表达

目的通过观察BCG和猪苓多糖作用后的巨噬细胞株J774免疫分子的表达,探讨猪苓多糖协同BCG启动非特异性免疫反应机制和可能的激活途径。方法应用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜,定量和定性分析体外猪苓多糖协同BCG与巨噬细胞株J774相互作用后,TLR和CD14分子的表达及NF-κB在巨噬细胞中表达的核／浆荧光强度比。结果J774细胞在BCG和猪苓多糖作用后表达TLR4,而不表达TLR2。TLR4的表达在3h出现谷值,6h达峰值,之后迅速下降,到24h～48h时再缓慢上升。BCG加猪苓多糖组TLR4的表达高于BCG组（P〈0．05）。CD14的表达也是6h达峰值,随后缓慢下降,BCG加猪苓多糖组作用24h观察,CD14的表达都高于BCG组（P〈0．05）。NF-κB的表达细胞浆和胞核在3～6h几乎同步达到峰值,之后下降。BCG组、PPS组及BCG＋PPS组细胞核／浆荧光强度比均在6h处出现谷值,而在12h处出现一个峰值,随后下降。而PPS组及BCG＋PPS组在12～24h缓慢下降,同BCG组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。各实验组细胞的核／浆荧光强度比（Fc／Fn）增大,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论猪苓多糖能协同BCG,通过TLR4与CD14一起将胞外信号转导至胞内,从而使NF-κB迅速从胞浆移位到胞核,调节相应靶基因的表达。     

金黄色葡萄球菌及其肠毒素B对慢性实验性哮喘小鼠的影响

目的探索金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）对实验性支气管哮喘小鼠肺组织Th0细胞分化的在体调节和对气道炎症的作用。方法32只15～17dBALB／c小鼠，随机分为4组：对照组、模型组、金黄色葡萄球菌组、金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）组。用卵蛋白（OVA）致敏和激发建立小鼠慢性哮喘模型，在致敏前14d对幼年鼠做金黄色葡萄球菌或SEB预防性腹腔注射。观察记录小鼠的耗氧量、肺组织切片、支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞及相关细胞因子等的改变。结果金黄色葡萄球菌组与模型组相比，肺组织病理切片结构紊乱减轻、炎症细胞明显减少，小鼠耗氧量降低（5．24±0．12vs5．59±0．18），BALF中IL-4水平明显下降（44．94±4．51vs29．37±4．17），IFN-γ水平明显增加（19．61±3．83vs29．33±4．04），SEB组也有上述作用（耗氧量：5．09±0.20；细胞介素4：36．68±5．10；γ干扰素：24．27±3．46）。结论金黄色葡萄球菌能明显减轻实验性哮喘的气道炎症，纠正哮喘小鼠肺组织中Th1／Th2细胞因子的失衡，其作用可能是通过其分泌的SEB。     

黄连解毒汤对变应性鼻炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路及黏膜杯状细胞的影响

目的:探究黄连解毒汤对变应性鼻炎大鼠黏膜杯状细胞及Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法:卵白蛋白制备变应性鼻炎大鼠模型,模型制作成功后分为:模型组,黄连解毒汤低、中、高剂量组,以及阳性对照组.黄连解毒汤低、中、高剂量组分别按5、10和20 g/kg生药量灌胃,阳性对照组给予丙酸氟替...