周期蛋白D1正反义表达质粒的构建鉴定及其对哮喘大鼠气道平滑肌增殖的影响

观察哮喘大鼠气道平滑肌周期蛋白D1的表达，并构建大鼠周期蛋白D1 (CyclinD1)正反义表达质粒，转染支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)，探讨CyclinD1在哮喘大鼠ASMC增殖过程中的影响。大鼠雾化吸入卵清蛋白建立哮喘模型，免疫荧光检测CyclinD1的表达。以气道平滑肌条总RNA为模板，通过RT-PCR获取大鼠CyclinD1全长cDNA，插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上，构建CyclinD1正义表达质粒(pcDNA3.1-CyclinD1)和反义表达质粒(pcDNA3.1-asCyclinD1)。用脂质体介导的基因转染方法，将正反义重组体和空质粒(vector)分别转染哮喘大鼠和正常大鼠ASMC，用Western blotting方法鉴定CyclinD1基因的表达。采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)染色等方法观察构建质粒对哮喘大鼠ASMC增殖的影响。结果表明：(1)与对照组相比，哮喘组CyclinD1表达显著增高；(2)酶切鉴定和测序分析证实，试验成功构建了CyclinD1正反义表达质粒。与转染pcDNA3.1-CyclinD1组和vector组相比，转染pcDNA3.1-asCyclinD1组大鼠ASMC中CyclinD1表达水平下降(P<0.01)；(3)与vector组S+G₂M期比例、吸收度(A)值、PCNA阳性表达率相比，转染pcDNA3.1-CyclinD1组增殖指标均明显增加(P<0.01)。转染pcDNA3.1-asCyclinD1组增殖指标均明显下降(P<0.01)。正常组大鼠转染质粒后各组间变化趋势与哮喘组一致。pcDNA3.1-CyclinD1可促进哮喘大鼠ASMC增殖，pcDNA3.1-asCyclinD1可抑制哮喘大鼠ASMC增殖，提示CyclinD1在哮喘ASMC增殖的信号转导中具有重要作用。     

芬太尼通过 ILF3-AS1/miR-132对卵巢癌细胞生长和转移的影响

目的探讨芬太尼对卵巢癌细胞生长和转移的影响及分子机制。方法 2018年 8月至 2019年 10月,体外培养卵巢癌细胞 A2780,用浓度分别为 0、0.5、5、50、500 ng/mL的芬太尼处理,作为不同浓度芬太尼处理组。将过表达的白细胞介素增强结合因子 3反义 RNA1(ILF3-AS1)(pcDNA3.1-ILF3-AS1、对照 pcDNA3.1)、抑制微小 RNA(miRNA/miR)-132表达(抗 -miR-132、对照 anti-miR-NC)的载体分别转染 A2780细胞,并以 500 ng/mL芬太尼处理,记为芬太尼 500+pcDNA3.1-ILF3-AS1组、芬太尼 500+pcDNA3.1组、芬太尼 500+anti-miR-132组、芬太尼 500+anti-miR-NC组。将 pcDNA3.1、pcDNA3.1-ILF3-AS1、si-NC、si-ILF3AS1转染至 A2780细胞中,记为 pcDNA3.1组、 pcDNA3.1-ILF3-AS1组、 si-NC组、 si-ILF3-AS1组。四甲基偶氮唑盐比色法( MTT)检测细胞存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数; Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 ILF3-AS1和 miR-132的表达水平;荧光素酶报告实验检测 ILF3-AS1和 miR-132的靶向关系。结果与 0 ng/mL芬太尼处理组相比, 5、50、500 ng/mL的芬太尼处理的 A2780中 miR-132表达水平显著升高［( 1.39±0.13)、(1.68±0.17)、(2.34±0.23)比( 1.00±     

IL-37 对宫颈癌HeLa 细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨炎症抑制因子IL-37 对宫颈癌HeLa 细胞株增殖和凋亡的影响。方法　将携带有目的基因IL-37 的过表达载体转染入体外培养的HeLa 细胞，用MTT 法检测细胞的增殖情况，流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率，以野生型HeLa 细胞以及转染空载体的HeLa 细胞作为阴性对照和空载体对照。结果　荧光显微镜观察结果显示IL-37 质粒成功转染HeLa 细胞。MTT 检测结果显示，转染后12 h 至96 h，转染组OD 值明显低于空载体对照组（P<0.01），而空载体对照组和阴性对照组的OD 值无明显差异；流式细胞仪检测测结果显示，转染组细胞早期凋亡率较空载体对照组显著升高（P<0.05），而空载体对照组和阴性对照组的早期凋亡率无显著性差异。结论　过表达IL-37 的HeLa 细胞株构建成功。IL-37 可抑制宫颈癌HeLa 的增殖并诱导其凋亡。     

STC 1 过表达抑制人宫颈癌CaSki 细胞增殖

目的研究STC1基因对人宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响。方法 CaSki细胞分为3组：实验组转染pcDNA3.1（＋）-STC1质粒;空载体转染pcDNA3.1（＋）空载体;空白对照组不加任何干扰。挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及Western blot检测细胞中STC1基因表达水平;MTT法检测转染STC1基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染STC1基因后细胞周期的变化。结果稳定转染后,与空载体组相比,实验组STC1基因的表达水平显著提高（P﹤0.01）,CaSki细胞存活率下降（P﹤0.05）,G1期细胞比例显著上升（P﹤0.05）,细胞出现G1期阻滞。结论 STC1基因与CaSki细胞增殖相关,其高表达引起的宫颈癌细胞增殖速度降低可能与其所致的细胞G1期延长有关。     

靶向KDR siRNA与5-氟尿嘧啶对PC3细胞增殖的协同抑制

目的研究以KDR为靶标的小干扰RNA(siRNA)与化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用抑制PC3细胞增殖的作用。方法已构建了Psilencer3.1-KDR siRNA表达载体,采用脂质体介导的基因法转染PC3细胞,MTT法检测细胞生长速度的变化和流式细胞仪检测细胞周期的变化,以未转染和转染阴性对照质粒pSilencer3.1-NC的PC3细胞为对照,MTT法检测细胞在含5-FU[(0～1.56×106)nmol/L]的培养液中48h后的生存率,并计算IC50。结果转染pSilencer3.1-KDR后PC3细胞生长速度明显变慢,PC3细胞的G0/G1期百分率明显增高,而S期和G2、M期的细胞减少,与其余组相比具有统计学差异(P<0.01)。MTT结果显示,pSilencer3.1-KDR细胞组5-FU的IC50,为(898.34±44.34)nmol/L(P<0.01)。结论 KDRsiRNA与5-FU联用,可显著增强对PC3细胞增殖的抑制,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

RhoC基因转染对胆管癌QBC939细胞生物学行为的影响

目的将人RhoC正义、反义基因真核表达载体转染胆管癌QBC939细胞株,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭能力的影响。方法以脂质体将包含正义、反义RhoC cDNA真核表达载体,分别转染人胆管癌QBC939细胞。应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化,Boyden小室侵袭实验检测侵袭及运动能力的变化。结果正义RhoC基因能促进胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞减少;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。反义RhoC基因能抑制胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞增加;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著减弱。结论RhoC基因能够促进胆管癌QBC939细胞株的体外增殖和侵袭能力,反义RhoC基因可抑制胆管癌QBC939细胞的增殖和侵袭能力。     

苦参碱通过lncRNA CASC11/miR-381-3p轴调控宫颈癌细胞的恶性生物学行为的研究

目的 探讨苦参碱是否通过调控lncRNA CASC11/miR-381-3p的表达,调控宫颈癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法 宫颈癌细胞SiHa分别转染pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1-lncRNA CASC11、mimics阴性对照和miR-381-3p mimics,经不同质量浓度(25、50和100 mg·L^-1)的苦参碱处理后,采用qRT-PCR试验检测细胞中lncRNA CASC11和miR-381-3p表达,CCK-8试验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室试验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶试验验证lncRNA CASC11和miR-381-3p的靶向关系,Western blot试验检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 lncRNA CASC11在宫颈癌细胞中高表达,miR-381-3p在宫颈癌细胞中低表达;不同质量浓度的苦参碱均能抑制SiHa细胞增殖、迁...     

DOC-2基因对卵巢癌细胞周期的影响

目的:探讨DOC-2基因对卵巢癌细胞周期的影响.方法:将卵巢癌细胞(TC-1)和转染空载体的卵巢癌细胞(TC-pcDNA3.1)作为对照组,与转染DOC-2的卵巢癌细胞(TC-p93)同时进行消化收集后,经流式细胞仪检测,对比各组间细胞周期的改变.结果:TC-1细胞经DOC-2转染后,其受阻于G1期的细胞增多,同时S期细胞相应减少,而单纯转染空载体对细胞周期并不产生明显影响.结论:DOC-2基因可改变卵巢癌细胞TC-1的细胞周期,它可能会成治疗卵巢癌的目的基因之一.     

FasL反义RNA在人食管癌TE11细胞中的表达及意义

目的 采用反义RNA技术,构建人FasL反义RNA重组逆转录病毒载体.以FasL表达阳性的人食管癌细胞株TE11为模型,研究反义RNA重组逆转录病毒表达载体对细胞FasL的阻断作用.方法 将人FasL全基因序列的DNA片段反向插入逆转录病毒pLXSN质粒上的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ位点间,建立重组质粒pL(FasL-AS)SN.将pL(FasL-AS)SN导入包装细胞PA317中,经G418筛选后收获培养上清,转染TE11细胞,建立TE11-hFasL-AS细胞系.用PCR技术检测pL(FasL-AS)SN中目的基因FasL的插入及其在TE11细胞中的整合;用RT-PCR法检测TE11细胞经重组病毒感染前后FasL mRAN表达量的变化;采用流式细胞仪检测TE11和TE11-hFasL-AS细胞FasL的表达及其对U937细胞凋亡的诱导.结果 将pL(FasL-AS)SN转染TE11细胞后,FasL反义RNA已整合至TEll细胞(TE11-hFasL-AS)中;TE11-hFasL-AS细胞FasL mRAN及蛋白的表达水平均显著下降(P＜0.01);与TE11-hFasL-AS细胞混合培养后,U937细胞凋亡率明显低于未转染组(P＜0.01).结论 成功构建了人FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体,用该载体转染的TE11细胞中FasL的表达水平明显受抑,为Fas/FasL参与的体内许多病理进程的机制研究及临床应用提供实验基础.     

体外导入IL-2R反义RNA表达质粒对小鼠脾细胞活化增殖的影响

目的　观察导入白细胞介素 2受体 (IL 2R)反义RNA真核表达质粒对体外培养的小鼠脾细胞活化增殖的影响及其机制的探讨。方法　用粘附辅助脂质体法把IL 2R反义RNA真核表达质粒转染脾细胞 ,用丝裂原刺激脾细胞活化增殖 ,MTT法检测细胞生长情况。狭线杂交法检测IL 2RmRNA的表达水平 ,流式细胞仪检测IL 2R的蛋白表达水平。结果　转染各重组质粒后 ,脾细胞的生长增殖受到明显抑制 ,且 pcAnti mIL 2Rαβ与 pciAnti mIL 2Rαβ组抑制率较 pcAnti mIL 2Rα及pcAnti mIL 2Rβ组的大 ,pcAnti mIL 2Rα组抑制率较pcAnti mIL 2Rβ的大。转染各重组质粒对NIH3T3细胞生长增殖无影响。转染各重组质粒后IL 2RmRNA及蛋白表达水平明显降低。结论　IL 2R反义RNA能有效抑制体外培养的小鼠脾细胞的生长 ,IL 2Rαβ融合基因反义RNA较α、β单基因反义RNA的抑制率高 ,IL 2Rα反义RNA较 β反义RNA抑制率高。初步推断 ,IL 2R反义RNA抑制细胞生长的作用是特异的 ,只针对功能性表达IL 2R的细胞。反义RNA封闭IL 2R的表达很可能是其抑制脾细胞活化增殖的直接原因     

sKDR真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

研究获取可溶性血管内皮生长因子受体2(sKDR)基因构建sKDR的真核表达载体,观察sKDR对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响.方法提取HUVECs总RNA,利用RT - PCR方法扩增KDR胞外免疫球蛋白1-3区基因片段,将其插入真核表达质粒pcDNA3.1中,测序鉴定基因序列正确后,用脂质体法将重组质粒p...     

HMGB1对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 观察HMGB1对人宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响并研究其可能的作用机制.方法 构建HMGB1高表达质粒和RNA干扰质粒,将HMGB1高表达质粒与RNA干扰质粒分别转染到HeLa细胞中,采用MTT实验、PI单染流式细胞术和Annexin V-PI双标法流式细胞术检测HeLa细胞的增殖活性、细胞周期和凋亡情况.采用RT-PCR和western blot法检测HMGB1基因沉默对Caspase-3、bcl-2 和细胞色素C表达的影响.结果 HMGB1高表达载体(pEGFP-N1-HMGB1)与阴性对照质粒分别转染到HeLa细胞,RT-PCR和Western blot结果显示HMGB1重组质粒转染HeLa后可明显增加HMGB1的mRNA 及蛋白表达(P＜0.05).HMGB1干扰病毒载体(HMGB1 SiRNA)与空白病毒载体分别转染到HeLa细胞中,RT-PCR和Western blot结果显示HMGB1 SiRNA转染HeLa后可明显抑制HMGB1的mRNA及蛋白表达(P＜0.05).MTT法检测HMGB1高表达及基因沉默后HeLa的细胞生长曲线,结果显示HMGB1高表达可明显提高HeLa的细胞生长速度(P＜0.05),HMGB1沉默后HeLa的细胞生长明显受到抑制(P＜0.05).PI 染色流式细胞仪结果显示:HMGB1过表达后,细胞正常增殖周期被加速(P＜0.05);HMGB1沉默后,细胞增殖周期被抑制(P＜0.05).Annexin V-PI双标法流式细胞仪结果显示,HMGB1过表达后,HeLa细胞凋亡率明显下降(P＜0.05);HMGB1沉默后,HeLa细胞凋亡率明显上升(P＜0.05).RT-PCR方法检测不同细胞组Caspase-3和bcl-2 mRNA的表达,结果显示:HMGB1基因沉默后,Caspase-3 mRNA的表达明显增加(P＜0.05),bcl-2 mRNA的表达明显减少(P＜0.05).Western blot结果显示:HMGB1 基因沉默后,细胞色素C和Caspase-3蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达水平减少(P＜0.05).结论 HMGB1可提高HeLa细胞生长速度、增殖周期,抑制HeLa细胞凋亡.HMGB1基因沉默可抑制Hela细胞增殖,促进其凋亡.影响Caspase-3—细胞色素C途径及调节bcl-2的表达可能是其主要作用机制.     

黄芩素对miR-183/Kif2a介导乳腺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨黄芩素对miR-183/Kif2a介导的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的作用及可能机制。方法噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测黄芩素对乳腺癌细胞增殖活性的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测细胞中miR-183和Kif2a信使RNA的表达,在线靶基因预测软件预测miR-183和Kif2a的靶向关系。转染miR-183抑制剂和pcDNA 3.1-Kif2a,黄芩素处理细胞后,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡,蛋白质免疫印记技术(western blot,WB)检测细胞中G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、p21、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(C-Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(C-Caspase-9)蛋白表达。结果经黄芩素处理后的乳腺癌细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞中miR-183水平升高(P<0.05),Kif2a信使RNA水平降低(P<0.05)。miR-183靶向结合Kif2a并负向调控Kif2a的表达(P<0.05)。miR-183抑制剂或pcDNA 3.1-Kif2a转染可以逆转黄芩素对乳腺癌增殖、凋亡以及C-Caspase-3、C-Caspase-9、Cyclin D1、p21蛋白表达的作用。结论黄芩素通过miR-183/Kif2a调控乳腺癌细胞增殖和凋亡。     

DOC-2基因对卵巢癌细胞周期的影响

目的 :探讨DOC 2基因对卵巢癌细胞周期的影响。方法 :将卵巢癌细胞 (TC 1)和转染空载体的卵巢癌细胞 (TC pcDNA3 1)作为对照组 ,与转染DOC 2的卵巢癌细胞 (TC p93 )同时进行消化收集后 ,经流式细胞仪检测 ,对比各组间细胞周期的改变。结果 :TC 1细胞经DOC 2转染后 ,其受阻于G1期的细胞增多 ,同时S期细胞相应减少 ,而单纯转染空载体对细胞周期并不产生明显影响。结论 :DOC 2基因可改变卵巢癌细胞TC 1的细胞周期 ,它可能会成治疗卵巢癌的目的基因之一     

p53iF向凋亡调控因子（PUMA）在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡过程中的作用

目的研究吉西他滨体外对人胰腺癌AsPC－1细胞生长的作用机制。方法用脂质体转染法将PUMA反义核酸（反义PUMAeDNA）的真核表达载体pcDNA3．1-PUMAAS和空载体pcDNA3．1－导入AsPC－1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆。将转染载体的AsPC—1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC－1细胞分别暴露于浓度1、5、10和15mol／L的吉西他滨中作用72h。RT-PCR和Western blotting检测不同组细胞经吉西他滨作用72h后的PUMA表达;MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞的凋亡。结果吉西他滨促进AsPC－1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上讽当细胞转染PUMA反义核酸抑制PUMA表述后,受吉西他滨作用的细胞出现PUMA蛋白表达明显降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖。结论吉西他滨促进体外AsPC—1细胞凋亡,并抑制其生长,其诱导凋亡与上调PUMA有关。     

尿激酶受体反义RNA真核表达质粒的构建

目的构建尿激酶受体(UPAR)基因pcDNA3.1(-)真核表达质粒,为进一步研究通过UPAR干预类风湿关节炎的发生发展提供实验基础。方法取冰冻保存的小鼠肝癌组织,应用TRIzol法提取总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA浓度和纯度。使用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒获得目的基因(UPAR)cDNA片段。用CaCl2法诱导感受态细胞。将真核载体pcDNA3.1(-)在多克隆位点处用HindⅢ、BamHⅠ双酶切线性化,切胶纯化回收;将纯化回收的pcDNA3.1(-)线性化载体和UPAR基因片段定向及反向连接,构建以pcDNA3.1(-)为载体的反义UPAR基因表达质粒;转化JM109大肠杆菌;酶切证实的阳性克隆行测序分析。结果琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,见28S,18S条带完整,而且28S条带亮度为18S的1倍左右,认为RNA完整性良好,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA纯度A260/A280=1.9051,认为RNA纯度良好;RNA浓度为450mg/L;阳性克隆经双酶切后行10g/L琼脂糖电泳,在DNAMarker500bp和5.3bp附近可见两条明显条带,与所需目的片段大小相符,证实为阳性克隆,重组质粒构建成功;DNA测序结果与预期目的片段序列一致。结论反义UPAR真核表达重组质粒构建成功。     

分泌型丛生蛋白通过抑制线粒体自噬缓解H2O2诱导的心肌细胞损伤 #br#

目的 探讨分泌型丛生蛋白（sCLU）对心肌细胞氧化损伤的影响及其机制。方法 采用大鼠心肌细胞 H9C2。实验1分为Control组（仅更换培养基）和H2O2组（100 µmol/L H2O2处理）。实验2分为Control组、pcDNA3.1组 （转染 pcDNA3.1 对照空质粒）、pcDNA3.1-sCLU 组（转染 pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒）、H2O2组（100 µmol/L H2O2处 理）、H2O2+pcDNA3.1 组（pcDNA3.1 对照空质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）、H2O2+pcDNA3.1-sCLU 组 （pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）。实验 3 分为 DMSO 组（加入 1% 体积分数 的 DMSO）、Mdivi-1 组（10 µmol/L 的 Mdivi-1 处理）、H2O2+DMSO 组（加入 1% 体积分数的 DMSO 处理 30 min 后加入 100 µmol/L的H2O2处理）、H2O2+Mdivi-1组（10 µmol/L的Mdivi-1处理30 min后加入100 µmol/L的H2O2处理）、H2O2+ pcDNA3.1-sCLU 组（pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）、H2O2+pcDNA3.1-sCLU+ Mdivi-1组（pcDNA3.1-sCLU过表达质粒转染48 h后加入10 µmol/L的Mdivi-1处理30 min,再加入100 µmol/L H2O2 处理）。采用MTT法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二 醛（MDA）水平。DFCH-DA荧光探针测定细胞活性氧（ROS）水平。实时定量聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验 检测细胞中sCLU表达,Western blot法检测CLU、PINK1、Parkin和LC3蛋白表达水平。结果 （1）实验1。与Control 组比较,H2O2组细胞中sCLU mRNA、细胞培养上清中sCLU蛋白及细胞中CLU蛋白相对表达水平均降低（P＜0.01）。 （2）实验2。与Control组比较,H2O2组细胞活力、SOD水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均降低,细胞凋亡率、ROS水平、MDA 水平、PINK1和Parkin蛋白表达水平均升高（P＜0.05）;与H2O2组比较,H2O2+pcDNA3.1-sCLU组细胞活力、SOD水平、 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均升高,细胞凋亡率、ROS水平、MDA水平、PINK1和Parkin蛋白表达水平均降低（P＜0.05）。（3） 实验3。与DMSO组比较,Mdivi-1组细胞活力与细胞凋亡率差异无统计学意义;H2O2+DMSO组细胞活力下降,细胞 凋亡率升高（P＜0.05）。与H2O2+DMSO组比较,H2O2+Mdivi-1组、H2O2+pcDNA3.1-sCLU组和H2O2+pcDNA3.1-sCLU+ Mdivi-1 组细胞活力均升高,细胞凋亡率均下降（P＜0.05）。与 H2O2+Mdivi-1 组比较,H2O2+pcDNA3.1-sCLU 组和 H 2O2+pcDNA3.1-sCLU+Mdivi-1组细胞活力差异无统计学意义,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。结论 sCLU对氧化应 激条下的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与线粒体自噬的抑制有关。     

miR-214对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:通过构建miR-214的真核表达载体,研究其对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:以A549细胞基因组DNA为模板,扩增得到miR-214前体序列,插入表达载体pcDNA3.1(+)克隆获得pcDNA3.1(+)-miR-214。将真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-214转染到A549细胞中,并采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)对其表达情况进行验证。采用MTT和transwell小室等方法分别检测转染重组质粒pcDNA3.1(+)-miR-214对A549细胞增殖能力和侵袭能力的影响。结果:成功构建了miR-214稳定过表达的真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-214;real-time PCR检测结果表明,转染pcDNA3.1(+)-miR-214后A549细胞中miR-214过表达(P<0.05)。miR-214过表达后A549细胞的增殖和侵袭能力均明显降低。结论:miR-214在A549细胞中过表达能够抑制细胞的增殖和侵袭能力,为进一步深入研究miR-214在肿瘤中的作用机制提供了实验依据。     

RNA沉默PI3K、AKT基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的比较

目的探讨RNA技术分别沉默PI3K、AKT基因表达对人卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的比较,从而为卵巢癌的基因治疗提供有效的理论依据。方法体外合成PI3Kp110α、AKT序列特异性双链RNA(dsRNA),用lipofectamin2000转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪法检测细胞凋亡率。结果 MTT法检测siRNA-AKT组细胞增殖能力降低大于siRNA-PI3K组,差异有统计学意义(P<0.05),而流式细胞术检测siRNA-AKT组细胞凋亡率则高于siRNA-PI3K组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外合成靶向AKT的siRNA更能有效地抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖及诱导细胞凋亡。PI3K通路并非AKT激活的唯一途径。     

LncRNA PSMA3-AS1调节miR-140-3p/DDX5轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(PSMA3-AS1)调节miR-140-3p/DEAD box p68 RNA解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测40例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5表达。将A549细胞分为：control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1和DDX5的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC...