完全弗氏佐剂诱导脾脏T淋巴细胞凋亡预防非肥胖性糖尿病鼠1型糖尿病

为探讨脾脏T淋巴细胞凋亡在完全弗氏佐剂（CFA）预防非肥胖性糖尿病（NOD）鼠糖尿病中的作用，42只NOD雌鼠随机分成CFA组（21只）和磷酸盐缓冲盐水（PBS）组（21只），3周龄时于鼠后脚板注射CFA50μl/只和PBS50μl／只。按不同的观察时间分6周、12周和30周3个观察组。采用TUNEL末端标记法和免疫组织化学方法观察脾脏T淋巴细胞凋亡情况。结果显示：CFA诱导脾脏成熟的CD4^ T淋巴细胞凋亡，但不能诱导成熟的CD8^ T淋巴细胞凋亡；CFA能预防NOD鼠糖尿病的发生。提示CFA可通过诱导脾脏T淋巴细胞凋亡，以减少外周的CD4^ T淋巴细胞，达到预防NOD鼠1型糖尿病。     

脂质体与完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎探讨

目的 :探讨完全弗氏佐剂 (CFA)、不完全弗氏佐剂 (IFA)、大复层脂质体 (LML)、小单层阳离子脂质体(DOTAP)对NOD鼠胰岛炎和糖尿病发病的影响。方法 :①将 3周龄的NOD雌鼠随机分为 3组 ,分别给予CFA后脚板注射 (n =16 ) ,IFA和PBS乳化后腹腔注射 (n =16 ) ,单独PBS后脚板注射 (n =16 )。观察 12周龄胰岛病理及 30周龄糖尿病发病情况。②将 3周龄的NOD雌鼠随机分为 3组 ,分别给予大复层脂质体 (LML) (n =13) ,小单层阳离子脂质体 (DOTAP) (n =13) ,单独PBS腹腔注射 (n =13) ,同上观察胰岛病理及糖尿病发病情况。结果 :①CFA后脚板注射能明显降低胰岛炎计分 ,减少糖尿病的发生。 30周龄时 ,CFA组的发病率明显低于PBS后脚板注射对照组 (分别为9 2 %和 81 8% ,P =0 .0 0 1)。 12周龄时 ,CFA组胰岛炎计分明显低于对照组 [分别为 (0 0 5± 0 0 2 )和 (0 5 4± 0 11) ,P<0 .0 0 1]。②LML腹腔注射能明显降低胰岛炎计分。 12周龄时 ,LML组胰岛炎计分明显低于PBS腹腔注射对照组 [分别为 (0 16± 0 0 2 )和 (0 5 8± 0 0 6 ) ,P <0 .0 0 1]。 30周龄时 ,LML组糖尿病发生率为 6 0 % ,对照组为 90 % ,两组间无统计学差异。③在预防胰岛炎的作用上 ,CFA优于LML。结论 :CFA后脚板注射可预防NOD鼠发生糖尿病并减     

完全弗氏佐剂抑制NOD鼠胰岛β细胞凋亡及其机制

目的:探讨完全弗氏佐剂( complete Freund’s adjuvant, CFA)对非肥胖糖尿病( nonobese dia-betic, NOD)鼠胰岛β细胞凋亡及凋亡相关基因Fas,FasL和Bcl-x表达的影响。方法:将4周龄NOD雌鼠随机分为CFA组(n=5)和生理盐水( NS)对照组(n=5 ) ,给CFA组鼠后脚板注射50μLCFA,对照者鼠后脚板注射等量NS。监测血糖,若血糖连续2 d≥11.1 mmol /L即诊断为糖尿病。当NOD鼠发生糖尿病或至30周龄时,处死动物,取胰腺组织制成薄切片,HE染色观察胰岛炎,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记( TUNEL)及ABC免疫组织化学双标记染色观察并计数凋亡的胰岛β细胞,ABC免疫组织化学法染色观察并记数Fas,FasL和Bcl-x表达阳性细胞。结果:至NOD鼠30周龄时,CFA处理组鼠无1只发生糖尿病,对照组鼠有3只发生糖尿病;CFA处理组的胰岛炎积分低于NS对照组(1.820±0.962 vs. 3.020±1.040,P<0.05 ) ;CFA处理组胰岛β细胞凋亡率、Fas阳性细胞率、FasL阳性细胞率均低于NS对照组[ (10.2±2.8) % vs. (15.9±6.5) %,(54.9±14.5)% vs.(75.7±12.9) %,(20.3±10.4) % vs. (27.9±12.0) %,P<0.05] ,Bcl-x阳性细胞率高于NS对照组[ (74.9±10.7) % vs. (66.0±18.3) %,P<0.05]。结论:CFA能够减轻NOD鼠胰岛β细胞凋亡,其机制与减少促凋亡基因Fas和FasL表达及增加抑制凋亡基因Bcl-x表达有关。     

胰岛细胞bcl-2,PCNA表达与完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的关系

Ｎｏｎｏｂｅｓｅｄｉａｂｅｔｉｃ（ＮＯＤ）小鼠是一种遗传性Ⅰ型糖尿病的啮齿动物模型,它从５周龄起自发地出现自身免疫性胰岛炎,１４周龄后可自发Ⅰ型糖尿病［１］。ＮＯＤ鼠糖尿病与人类Ⅰ型糖尿病有许多相似之处［１］。由于ＮＯＤ鼠糖尿病系一器官特异性自身免疫性疾病,改变其免疫病理过程可能预防胰岛炎和糖尿病的发生。国外一些学者对完全弗氏佐剂（ｃｏｍｐｌｅｔｅＦｒｅｕｎｄ’ｓａｄｊｕｖａｎｔ,ＣＦＡ）预防ＮＯＤ鼠胰岛炎和糖尿病的发生进行了较深入研究［２,３］。ｂｃｌ２蛋白能抑制细胞凋亡和延长细胞寿命［４…     

空肠弯曲杆菌与弗氏完全佐剂诱导系统性红斑狼疮样小鼠模型的建立

目的 建立系统性红斑狼疮小鼠模型.方法 利用空肠弯曲杆菌(CJ-朝1株)弗氏完全佐剂建立了系统性红斑狼疮模型(SLE)小鼠模型,并检测了淋巴细胞转化指数、dsDNA、器官组织病理切片、血清TNF-α和MMP-9.结果 经过初次免疫和再次免疫后模型小鼠体重明显减轻,状态比较差.淋巴细胞转化指数增加,dsDNA水平明显增高,器官组织病理有炎症改变,血清TNF-α和MMP-9的水平明显增高.结论 该模型具有系统性红斑狼疮的某些症状,为SLE的研究提供了的实验资料.     

链佐星-弗氏完全佐剂制作大鼠糖尿病肾病模型

目的 探讨建立适合于糖尿病肾病并发症及其治疗学研究的病理模型制作方法.方法 雄性Wistar大鼠ip链佐星30mg/kg,d2每只ip弗氏完全佐剂(CFA)0.1mL,链佐星和CFA均每周1次,连续3周,血糖稳定升高后给予高脂饲量喂养达14周.14周后收集尿液、采集血清、制备肾匀浆,测定尿液、血清中与糖尿病肾病相关的指标;HE、PA5染色观察肾脏病理变化;免疫组织化学染色观察TGFβ-1在肾脏中的表达.结果 造模成功后血糖保持16mmol/L达14周;模型动物尿量明显增加,尿液24h微白蛋白、总蛋白排出量增加,肌酐排出量减少;血清中肌酐、尿素氮、AGEs含量显著升高,肌酐清除率降低;模型动物体质量明显降低,肾脏质量、肾指数、山梨醇含量、肾组织匀浆中NO含量明显增加;病理组织学研究表明模型动物肾小球呈分叶状,系膜区增宽,基质明显增多,分布不均,毛细血管基底膜增厚,TGFβ-1在肾小球表达增多.结论 此模型具有糖尿病肾病的特点,可作为糖尿病肾病研究的动物模型.     

磷酸钙及不完全弗氏佐剂与乙肝核酸疫苗混合免疫小鼠的研究

目的：观察磷酸钙与不完全弗氏佐剂混合作为乙肝核酸疫苗的佐剂能否提高乙肝核酸疫苗的免疫效果。方法：将乙肝核酸疫苗与磷酸钙形成共沉物,再与不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,不同时间内观察小鼠外周血中ＨＢｓＡｇ与抗一ＨＢＳ的变化,从而观察小鼠的免疫应答。结果：两种佐剂能提高乙肝核酸疫苗的免疫效果。结论：核酸疫苗免疫中使用佐剂值得进一步研究。     

完全弗氏佐剂致炎性痛大鼠脊髓背角Fos蛋白的表达

目的:探讨完全弗氏佐剂(CFA)所致炎性痛大鼠Fos蛋白在脊髓背角痛觉传导通路中的表达及意义.方法:64只SD大鼠随机均分为两组,于右后肢踝关节外侧皮下分别注射0.9%生理盐水(NS)或CFA 50 μl,每组取8只观察注射前后热缩足反射潜伏期(TWL)的变化;余48只以免疫组化法检测脊髓背角Fos蛋白表达.结果:大鼠注射CFA后TWL逐渐降低,并在12 h时达最低点(下降62%),持续3 d后缓慢上升,14 d时基本恢复至基础水平;NS组脊髓背角Fos蛋白散在表达,而CFA组中1 h后Fos蛋白最先在大鼠右侧脊髓背角Ⅰ～Ⅱ层表达(P<0.01),4 h时Ⅴ～Ⅵ层蛋白表达逐渐增多(P<0.01),12 h时脊髓全层蛋白表达最多,至14 d时背角各层少见Fos蛋白.结论:50 μl CFA能诱导大鼠产生为期2周的炎性痛病程.炎症期间脊髓背角Fos蛋白的持续表达与外周痛觉信号的传导和中枢的调控有关.     

Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较

目的对Ⅱ型胶原蛋白（ＣⅡ－Ａ）和弗氏完全佐剂（Ａ－Ａ）大鼠关节炎模型在大体外观和足部组织病理学切片等方面进行观察比较。方法分别采用Ⅱ型胶原蛋白和弗氏完全佐剂诱导建立大鼠关节炎模型,利用排水法对大鼠足部体积进行测定,并将大鼠后足进行组织病理学切片观察。结果从大体外观和足部病理切片上两种大鼠模型均显示出有明显的病变,但ＣⅡ－Ａ大鼠与Ａ－Ａ大鼠比较,滑膜增生及软骨破坏等继发性病变特征更为明显,关节炎持续时间也较长,更接近于人的类风湿性关节炎。结论ＣⅡ－Ａ大鼠模型与Ａ－Ａ相比是研究ＲＡ较为理想的动物模型。     

弗氏完全佐剂肌肉注射诱发炎性痛敏及免疫应答的转录组测序分析

目的 观察弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant, CFA)肌肉注射后1～15 d的炎性反应,明确免疫应答反应的发生,通过分析转录组学的差异,为肌肉炎性反应及其诱发的痛觉敏化研究提供重要的参考。方法 90只Wistar大鼠随机分为正常组和CFA注射后第1天(MD1)、第3天(MD3)、第5天(MD5)、第7天(MD7)、第9天(MD9)、第11天(MD11)、第13天(MD13)和第15天(MD15)模型组。在模型组大鼠左侧股二头肌肌腹注入200μL的CFA,观察各组大鼠左侧足底的机械痛阈值和热痛阈值变化;采用电化学发光法检测各组大鼠肌肉组织和外周血中炎性因子的含量;使用HE染色对正常组、MD3和MD13组大鼠注射侧局部肌肉组织进行形态学观察;采用基因组学的方法,分析这两组大鼠差异基因的表达。结果 (1)股二头肌肌肉注射CFA可诱发同侧足底持续的机械痛敏和热痛敏。(2)CFA肌肉注射后24 h后,外周血和局部组织中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量明显升高,局部组织中促炎因子含量在注射后第13天再次明显升高。(3)在CFA注射后第3天局部组织以中性粒细胞...     

咯利普兰对NOD小鼠T淋巴细胞凋亡的影响

目的　通过对非肥胖型糖尿病 (NOD)小鼠T淋巴细胞凋亡率的分析 ,探讨咯利普兰 (rolipram)对 1型糖尿病的免疫调节机制。方法　将经环磷酰胺 (CYP)加速过的 60只体重相近的 4周龄雌性NOD小鼠随机分为两组 ,干预组给予咯利普兰 ( 8mg·kg-1) ,每日 2次 ,连续 30d ;对照组给予等次等量的磷酸盐缓冲溶液 (PBS)。将小鼠脾细胞制成单细胞悬液 ,通过DNA梯度图谱定性和流式细胞仪定量法分析外周T淋巴细胞的凋亡情况。结果　与PBS对照组比较 ,咯利普兰干预组发病率降低 (P <0 0 1) ;外周T淋巴细胞凋亡率增加 (P <0 0 5 )。结论　咯利普兰能够通过增加T淋巴细胞的凋亡减少免疫效应性细胞的积聚 ,从而阻止NOD小鼠发生 1型糖尿病     

脂质体与完全费氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎探讨

OBJECTIVE: To explore the effects of complete Freund's adjuvant (CFA), incomplete Freund's adjuvant(IFA), large multilamellar liposome (LML) and small cationic liposome (DOTAP) on insulitis and diabetes. METHODS: 1. 3-week-old non-obese diabetic(NOD) female mice were randomly divided into 3 groups: CFA group (injected subcutaneously in the hind footpad, n = 16), IFA group (injected intraperitoneally, n = 16) and PBS group (injected subcutaneously in the hind footpad, n = 16). Three mice from each group (9 in total) were killed at the age of 12 weeks for the analysis of pancreatic pathology, and the others were not killed until they were 30 weeks old for diabetes incidence. 2. 3-week-old NOD female mice were randomly divided into 3 groups and injected intraperitoneally with LML (n = 13), DOTAP (n = 13) and PBS (n = 13), respectively. The insulitis score and diabetes incidence were estimated in the same way. RESULTS: 1. CFA injected subcutaneously in the hind footpad could significantly reduce the insulitis score and decrease diabetes incidence in NOD mice. At the age of 30 weeks, the incidence of diabetes in the CFA group was lower than that in the PBS group (injected subcutaneously in the hind footpad) (9.2% vs 81.8%, P = 0.001). At the age of 12 weeks, the insulitis score in the CFA group was lower than that in the control group [(0.05 +/- 0.02) vs (0.54 +/- 0.11), P < 0.001]. 2. LML injected intraperitoneally could significantly reduce the insulitis score in NOD mice. At the age of 12 weeks, the insulitis score in the LML group was lower than that in the PBS control group (injected intraperitoneally) [(0.16 +/- 0.02) vs (0.58 +/- 0.06), P < 0.001]. At the age of 30 weeks, there were no significant differences in the diabetes incidence between the LML group and the PBS group (60% vs 90%). 3. The protective effect of CFA was better than that of LML in NOD mice. CONCLUSION: CFA injected subcutaneously in the hind footpad may prevent NOD mice from developing diabetes and reduce the insulitis severity. Although the protective effect of CFA is better than that of LML, LML can lessen the insulitis severity and may become a new preventive strategy in NOD mice.     

促肾上腺皮质激素对改进的炎性痛大鼠脑、脊髓内CGRP的影响

目的 观察腹腔注射促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）对改进的完全佐剂性关节炎慢痛大鼠脊髓腰膨大,海马和纹状体内降钙素基因相关肽（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）的影响。方法 （１）肾上腺摘除术。（２）ＣＧＲＰ放射免疫法。结果 （１）大鼠踝关节周围皮下注射自制的油包水型完全福氏佐剂成功地制备成一种全身反应较轻的慢性疼痛模型。（２）脊髓腰膨大中的ＣＧＲＰ在关节炎大鼠     

链脲佐菌素诱导的小鼠糖尿病视网膜病变模型的构建

长期以来,链脲佐菌素（STZ）被广泛用于诱导多种动物的糖尿病视网膜病变（DR）模型。STZ诱导的动物DR模型的临床特征和病理变化与人1型糖尿病的DR相似,经常被用来研究DR的发病机制及进行新型抗DR药物的临床前评估。小鼠体型小、动物成本低、容易操作及诱导成功率高,是研究DR的最佳模型动物之一。建立小鼠DR模型时仍存在许多问题,例如模型的再现性以及STZ的动物致死性等。通过查阅文献发现,在使用STZ构建动物DR模型时,应当注意几个关键因素,如STZ的制备、给药剂量、给药途径、饲养方式,各类动物的年龄、体质量和性别等。本综述分析了STZ致DR的机制,指出了STZ诱导小鼠DR模型的关键环节,介绍了降低STZ致死率的方法。     

体外联合培养条件下小鼠睾丸足细胞诱导成熟T淋巴细胞凋亡

目的 :探讨体外联合培养条件下睾丸足细胞能否诱导 T淋巴细胞凋亡。方法 :用 TU NEL 标记、核酸电泳、电镜、流式细胞术检测对照组 (T淋巴细胞 )、A组 (T淋巴细胞 +培养睾丸足细胞 2 4h培养基上清 )、B组 (T淋巴细胞 +睾丸足细胞 )等 3组中小鼠成熟 T淋巴细胞的凋亡及其数量的变化。结果 :3组 T淋巴细胞在电镜下均可见细胞染色质浓集 ,核固缩裂解 ,凋亡小体形成 ;TUNEL 标记见部分细胞核染色呈深蓝色 ;核酸电泳出现典型 DNA梯状带 ;流式细胞术检测 A,B两组 T淋巴细胞凋亡量均明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,B组 T淋巴细胞凋亡数量显著高于 A组 (P<0 .0 1)。 结论 :体外培养条件下小鼠睾丸足细胞能够诱导成熟 T淋巴细胞凋亡。     

糖尿病认知功能障碍大鼠模型的建立及其认知功能障碍观察

目的：探讨糖尿病伴认知功能障碍大鼠模型的建立方法,并观察随着病程发展,糖尿病大鼠认知功能的变化。方法通过对SD大鼠腹腔注射高剂量链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型,成模后在正常条件下饲养,采用Morris水迷宫观察第6、9、12周糖尿病大鼠的认知功能,光学显微镜和透射电子显微镜观察糖尿病大鼠海马神经元的形态学变化,了解糖尿病大鼠认知功能障碍形成的时间,确定认知功能障碍大鼠模型的建立方法。结果大鼠从发病后第6～12周,其认知功能障碍的程度随着糖尿病病程的延长呈进行性加重,海马神经元超微结构发生了明显改变,细胞器数量减少、细胞核深染,细胞开始凋亡;发病后第12周,海马组织切片 H E染色后光镜观察,可见其海马神经元数量明显减少,形态异常。结论随着糖尿病病程的延长,糖尿病大鼠可出现明显的认知功能障碍,至发病第12周,其大脑海马神经元在形态学上发生了明显变化,并出现了相应的行为学改变,因此可以将该时间段作为糖尿病并发认知功能障碍大鼠模型建立成功的时间。     

1,25-(OH)2D3对NOD小鼠T淋巴细胞凋亡率的影响

目的　通过对NOD小鼠T淋巴细胞凋亡率的分析 ,揭示 1,2 5 - (OH) 2 D3 的免疫调节机制。方法　将经环磷酰氨(CYP)加速过的 4 0只体重相近的 4周龄NOD小鼠脾细胞制成单细胞悬液 ,一方面抽提DNA ,经凝胶电泳DNA梯度图谱定性分析T淋巴细胞凋亡率 ;另一方面经流式细胞仪对其凋亡率进行定量测定。结果　处理组发病率降低 (P <0 0 1) ;外周T淋巴细胞凋亡率增加 (P <0 0 5 )。结论　 1,2 5 - (OH) 2 D3 能够通过增加T淋巴细胞的凋亡减少免疫效应性细胞的积聚而阻止NOD小鼠发生 1型糖尿病     

肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞的凋亡

目的：研究肝癌细胞表面Fas/FasL系统的变化及对其逃避机体免疫监控的影响。方法：采用流式细胞术和RT-PCR检测肝癌细胞株HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5Fas和FasL的表达;观察化疗药物争光霉素诱导肝癌细胞FasL表达及FasL表达上调后的肝癌细胞触发淋巴细胞株Jurkat细胞凋亡的作用。结果：HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5肝癌细胞株Fas表达均阴性;HepG2 FasL mRNA的表达为阴性,而Hep3B 和PLC/PRF/5FasL mRNA的表达均阳性。经争光霉素（0.6mg/ml）诱导后,上述肝癌细胞Fas的表达无明显变化,而其FasL的表达却增加,与Jurkat细胞混合孵育则触发后发生显性调亡。结论：肝癌细胞可能一方面降低或不表达Fas而对Fas介导的凋亡耐受,另一方面又增强自身FasL的表达以诱发与之接触的T淋巴细胞凋亡,在完成免疫逃避的同时,可对周围的T细胞实施反攻击。