牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，吖啶噔活体染色观察细胞凋亡形态，免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测cjn,cfos表达。结果 在5－50mmol/L浓度范围内牛磺酸能剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，并能明显抑制c-jun,c-fos的表达（P＜0．01），而牛磺酸并不诱导系膜细胞的凋亡。结论 牛磺酸可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0－G1期；牛磺酸对系膜细胞增殖的抑制作用与其抑制c-jun,c-fos的表达有关。牛磺酸对系膜细胞凋亡无诱导作用。     

保肾片对人系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 :探讨对慢性肾衰竭治疗有效的中药复方保肾片对人系膜细胞生物学行为的影响。方法 :以健康志愿者服用保肾片 ,取不同浓度含药人血清加入系膜细胞培养体系中。应用MTT法和流式细胞仪检测系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期。结果 :含中药保肾片的血清组 ,与正常人血清对照组相比 ,显著抑制人系膜细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ,并且使大量系膜细胞阻滞在G0 /G1期 ,能诱导人系膜细胞发生凋亡。结论 :保肾片延缓慢性肾衰竭进展的作用机理之一是抑制系膜细胞增殖和促其凋亡。     

灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及细胞周期的影响。方法：用不同浓度的灵芝作用于高糖培养的MCs,采用MTT法观察其增殖情况,并通过流式细胞仪检测其细胞周期变化,MODIFIT LT软件分析。结果：（1）高糖组与正常组比较有统计学差异（P〈0.05）;其余各组与正常组比较无统计学差异（P〉0.05）,与高糖组比较有统计学差异（P〈0.05）,48h与24h比较有统计学差异（P〈0.05）,72h与48h、24h比较有统计学差异（P〈0.05）。苯那普利组与灵芝组比较无统计学差异（P〉0.05）。（2）培养48h时,高糖组相对于正常对照组G0-G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,细胞凋亡受到抑制（P〈0.05）;而不同浓度的灵芝、苯那普利均减低了高糖对系膜细胞的这种作用,使G0-G1期细胞比例增高,S期细胞数减少,促进过度增殖的系膜细胞凋亡（P〈0.05）。结论：灵芝通过抑制高糖诱导的MCs增殖并促使其凋亡,发挥对糖尿病肾病的保护作用。     

褪黑素对高糖条件下培养的大鼠系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

糖尿病肾病（DN）晚期肾脏细胞凋亡与肾功能恶化程度成正比，抑制凋亡则可延缓肾小球硬化。褪黑素（MT）是松果体分泌的神经内分泌激素，肾脏是其靶器官之一。研究显示MT对DN肾脏有明显的保护作用，但MT对DN晚期肾小球系膜细胞（MC）凋亡的影响尚未检索到有关报道。本试验选用大鼠MC为研究对象，来观察MT对高糖诱导的MC凋亡的影响。     

益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的：观察益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达的影响。方法：以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法、荧光倒置显微镜及RT-PCR技术检测系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达情况。结果：与正常对照组比较,其他各组MC均有不同程度的增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达上调（P〈0.05或P〈0.01）;与脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）组比较,益肾胶囊可明显抑制MC增殖及TGF-β1 mRNA表达,并诱导MC凋亡（P〈0.01）。结论：益肾胶囊抑制MC增殖并诱导其凋亡可能与下调TGF-β1 mRNA表达有关。     

甲状旁腺素对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的观察甲状旁腺素(PTH)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及凋亡的影响,并探讨其作用的可能机制。方法体外培养的大鼠系膜细胞经不同浓度的PTH作用后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡,吖啶橙荧光活体染色观察细胞凋亡形态,免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测c-jun、c-fos表达。结果PTH持续刺激GMC6h、12h时,10-11～10-9mol/L浓度范围内,促进细胞增殖(P<0.05);10-9mol/L在12h达高峰,并可使G0～G1期细胞减少,S G2M期细胞增多,并能明显促进c-jun、c-fos的表达(P<0.01),而10-8mol/L无明显作用;刺激24h时各浓度均无作用;刺激48h各浓度明显抑制大鼠系膜细胞增殖(P<0.01),且使细胞阻滞在G0～G1期,不能进入S期,并能明显抑制c-jun、c-fos的表达(P<0.01)。PTH不诱导GMC凋亡。结论PTH体外刺激GMC增殖与作用时间及剂量相关,低浓度短时间作用刺激GMC增殖,持续作用抑制GMC增殖,其作用与c-jun、c-fos的表达有关,并影响细胞周期。PTH对体外培养的大鼠GMC凋亡无诱导作用。甲状旁腺机能亢进可能参与了慢性肾病残余肾功能进一步恶化的病理过程。     

雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 使用不同浓度雷帕霉素（1 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、8 μg/L、16 μg/L）处理大鼠肾小球系膜细胞,并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24 h、48 h、72 h后对细胞增殖的影响,并描记生长曲线。干预72 h后,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化;用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。 结果 小剂量雷帕霉素（1 μg/L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用,停滞于G1期的细胞数明显增加,但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素(8~16 μg/L)能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53 mRNA和蛋白表达,且呈剂量依赖性。 结论 雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。     

白藜芦醇对大鼠系膜细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）体外对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法：采用四甲基氨唑蓝法（MTT）检测Res处理后系膜细胞的增殖情况,用流式细胞仪分析经25,75,150,300μmol/LRes分别作用48h后大鼠系膜细胞周期分布的改变。结果：Res体外能显著抑制大鼠肾小球系膜细胞的生长增殖,且在一定范围内呈浓度-时间依赖性。Res作用后细胞G0/G1期比例下降,S期比例上调,G2/M期未见规律性改变。结论：Res在体外能显著抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖,引起细胞周期重新分布可能是Res抑制大鼠系膜细胞增殖的机制之一。     

游离脂肪酸对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探讨游离脂肪酸（FFAs）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和生长周期的影响。方法：用不同浓度的游离脂肪酸处理大鼠HBZY-1细胞株（即大鼠肾小球系膜细胞）24h～72h。采用噻唑蓝比色（MTT）法检测内皮细胞增殖情况,流式细胞术（FCM）分析法测定细胞周期变化。结果：游离脂肪酸可抑制HBZY-1细胞的生长增殖（与对照组比较,P〈0.01）,且这种抑制作用具有剂量和时间依赖性;游离脂肪酸作用于HBZY-1细胞24h、48h、72h,细胞周期发生明显改变,G1期细胞数增多,S期细胞数减少（与对照组比较,P〈0.01）。结论：游离脂肪酸可通过停滞细胞生长于G1期,抑制大鼠肾小球系膜细胞的生长增殖。     

FTY720诱导大鼠系膜细胞的凋亡

目的 观察新型免疫抑制剂FTY720对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的促凋亡作用及其对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,以探讨其作用机制。 方法 体外培养大鼠GMC,加入20 μmol/L FTY720,分别作用6 h、12 h、24 h、48 h后,以MTT法检测GMC增殖情况;流式细胞术检测GMC凋亡;Hoechst33258和PI染色观察凋亡细胞形态变化;琼脂糖DNA凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体DNA的断裂现象。并通过SuperArray 实时定量PCR细胞周期基因芯片测定FTY720对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响。 结果加入FTY720培养6 h 后,流式细胞术检测发现,GMC出现典型细胞凋亡的亚二倍体峰;12 h后Hoechst33258和PI荧光染色观察发现亮蓝色的凋亡小体,且开始出现典型细胞凋亡形态改变;24 h后DNA琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯度的出现。随FTY720作用时间延长,细胞凋亡明显增加,不同时间组间细胞凋亡率差异有统计学意义（P < 0.01）。SuperArray 实时定量PCR细胞周期基因芯片发现FTY720分别显著上调系膜细胞Dnajc2、LOC688900、RGD1562436_predicted基因表达,分别达41.6、38和16倍。 结论 FTY720 在体外可呈时间依赖诱导正常大鼠GMC凋亡,其机制与影响细胞周期调节蛋白及凋亡相关基因的表达有关。     

重楼含药血清对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨重楼治疗肾小球疾病的作用机制。 方法 以脂多糖诱导MC增殖。提取大鼠的含药血清作用于体外培养的大鼠系膜细胞(MC)，观察重楼对MC增殖、凋亡的影响。用活细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖。以Hoechst染色及流式细胞仪检测细胞凋亡。用RT-PCR检测bcl-2 mRNA水平。 结果 重楼含药血清可抑制MC异常增殖、诱导MC凋亡，呈剂量依赖性。重楼各剂量组MC凋亡率[低、中、高剂量组分别为（11.72±0.32）％、（19.76±0.35）％、（18.71±0.41）％]较脂多糖组[（4.68±0.25）%]均显著增高(P均< 0.01)，重楼中剂量组与低剂量组间差异有统计学意义(P < 0.01)。重楼各剂量组MC bcl-2 mRNA表达[低、中、高剂量组分别为（51.06±0.77）％、（44.06±0.66）%、（35.68±0.67）％]较脂多糖组[（59.62±1.12）％]显著减少(P < 0.01)。重楼呈剂量依赖性降低MC bcl-2 mRNA表达水平(P < 0.01)。 结论 重楼含药血清可抑制MC增生和诱导MC凋亡，其机制可能与抑制抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达有关。     

三七总皂苷对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：研究三七总皂苷（PNS）对大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖以及细胞周期的影响。方法：用不含或含有高、中、低浓度PNS的RPMI-1640细胞培养液刺激体外培养的正常大鼠MC。于实验终点,运用MTT比色法测定细胞增殖情况以及PNS的细胞毒性作用;运用流式细胞术测定细胞周期。结果：PNS能够显著抑制血清诱导的大鼠MC的增殖;通过减少MC进入S＋G2/M期,从而抑制MC的有丝分裂;且在本实验浓度内（100-400μg/ml）不具有明显的诱导凋亡作用和细胞毒性。结论：PNS能通过抑制MC的有丝分裂而抑制其活化、增殖,在慢性肾脏疾病的治疗中具有一定得应用价值。     

白细胞介素-13对肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨白细胞介素—13(IL—13)对肾小球系膜细胞(MC)增殖及其细胞周期的影响。方法：用甲基偶氮唑法(MTT)测定MC增殖，流式细胞术分析细胞周期。结果：IL—13在1ng／ml、5ng／ml、10ng／ml、100ng／ml浓度范围呈剂量依赖性抑制5％FCS培养的和脂多糖(LPS)诱导的MC增殖，抑制率分别为19．8％和29．23％、24．35％和37．05％、30．03％和46．6％、46．93％和55．23％。IL—13作用MC48h，使MC较多滞留于G1期，而S期细胞减少。结论：IL—13通过参与细胞周期的调控而抑制MC增殖。     

TRIM55对大鼠系膜细胞增殖的调控作用

目的系膜增殖性肾炎是世界范围内高发的肾小球疾病,其发病与系膜细胞异常增殖有关,但调控系膜细胞增殖的内在分子机制尚不明确。本研究旨在探索TRIM55对大鼠系膜细胞(RMCs)增殖的调控作用及机制。 方法向8周龄雄性SD大鼠尾静脉注射2.5 mg/kg抗Thy-1抗体建立抗Thy-1肾炎模型。PAS染色观察肾脏病理表现,qPCR检测大鼠肾小球TRIM55 mRNA表达量;利用质粒及siRNA转染分别得到TRIM55过表达及低表达的RMCs,利用流式细胞仪检测其细胞周期;Western印迹检测p27及Cyclin D1的蛋白表达量。 结果TRIM55在抗Thy-1肾炎模型系膜增殖期高表达(P<0.01,T＝3.625)。体外RMCs中,TRIM55过表达可促进RMCs细胞周期由G1期向G2/S期转化,诱导系膜细胞增殖(P<0.01,T＝13.1);TRIM55低表达可引起RMCs的G1期阻滞,抑制RMCs增殖(P<0.01,T＝5.31)。此外,TRIM55过表达可下调p27表达、上调Cyclin D1;反之,TRIM55低表达可上调p27表达、下调Cyclin D1。 结论TRIM55可通过调节p27及Cyclin D1表达水平影响细胞由G1期到G2/S期的转化,进而调控RMCs的增殖。     

甲基泼尼松龙对人肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探讨甲基泼尼松龙（methylprednisolone,MP）对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测不同浓度的甲基泼尼松龙处理后系膜细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测不同浓度的甲基泼尼松龙分别作用24 h后系膜细胞的细胞周期的改变。结果：（1）作用24 h、48 h和72 h后,浓度为1～100 mg/L的甲基泼尼松龙能抑制系膜细胞的增殖,且随着甲基泼尼松龙浓度的增大,抑制作用更显著,呈一定的剂量效应关系。（2）浓度为1～100 mg/L甲基泼尼松龙作用24 h后,G0/G1期的系膜细胞百分比增高,S期的系膜细胞百分比降低,细胞周期阻滞于G0/G1期。结论：甲基泼尼松龙显著抑制体外培养的人肾小球系膜细胞增殖,并能使体外培养的人肾小球系膜细胞的细胞周期阻滞于G/G期。     

益肾泻浊方对慢性肾衰竭大鼠肾细胞凋亡的影响

目的 :研究益肾泻浊方对 5 /6肾切除慢性肾衰竭 (CRF)大鼠肾细胞凋亡的影响。方法 :改良肾大部分切除术建立大鼠 (Wistar)大鼠CRF模型 ,随机分为模型组、西药依那普利组、中药益肾泻浊方组和假手术正常组。运用ClinicalSystem 70 0自动生化分析仪检测大鼠血清尿素氮 (BUN)、肌酐 (Cr) ;末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物化的dNTP切口末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡。结果 :CRF大鼠血清BUN、Cr升高 (P <0 .0 1) ,中药组和西药组血清BUN、Cr均可降低 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;结果提示模型组大鼠肾小球和肾小管 -间质区细胞凋亡增加 (P <0 .0 1) ,西药和中药可减少肾小球和肾小管 -间质细胞凋亡 (P <0 .0 1) ,中药组肾小球细胞凋亡少于西药组 (P <0 .0 5 )。结论 :益肾泻浊方延缓CRF进展的作用机理部分与抑制肾细胞凋亡有关。     

金水清对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的:通过观察中药复方金水清对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MC)增殖及凋亡的影响,探讨其治疗小儿血尿的作用机制.方法:以噻唑蓝法检测MC的增殖,荧光显微镜下观察MC的凋亡形态,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果:在1 000～62.5 μg/L浓度范围内,金水清能抑制MC增殖,可使G0～G1期细胞增高,S、G2-M期细胞减少,且呈浓度依赖关系,并能明显诱导MC凋亡.结论:MC是金水清发挥作用的重要靶细胞,金水清可能通过:(1)减少细胞有丝分裂,干扰细胞周期,抑制系膜细胞的增殖及代谢活性;(2)诱导系膜细胞的凋亡等环节发挥抑制MC增殖的作用,从而减少炎性因子的合成与释放,减少细胞外基质的聚积,达到治疗小儿血尿,延缓慢性肾脏病理进程的目的.     

辛伐他汀对大鼠系膜细胞增殖、凋亡及细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响

目的 观察辛伐他汀(simvastatin)诱导大鼠系膜细胞增殖、凋亡及可能参与其中的凋亡信号通路，探讨他汀类药物非降脂依赖性肾保护作用的相关机制。方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定系膜细胞的增殖状况。透射电子显微镜、碘化丙啶染色(PI)流式细胞仪(FCM)分析检测系膜细胞的凋亡。活化半胱氨酸检测试剂盒定性及定量检测细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达。结果 (1)MTT检测显示辛伐他汀可显著抑制大鼠系膜细胞的增殖(P < 0.05)。(2)辛伐他汀处理细胞24 h后，电镜下可见细胞体积缩小、染色质浓染、致密、边移和凋亡小体形成；FCM检测均可见亚二倍体凋亡峰。定量分析发现，系膜细胞数量与辛伐他汀浓度呈剂量依赖性(P < 0.05)。(3)活化半胱氨酸检测到辛伐他汀组细胞内caspase-3的表达，并且随药物浓度和作用时间的增加而增加。结论 辛伐他汀非降脂依赖的肾保护作用的作用机制之一是诱导系膜细胞凋亡，从而抑制其增殖，其机制可能与激活caspase-3有关。     

灯盏花注射液对ET-1诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的:探讨灯盏花注射液对内皮素1(ET-1)诱导的大鼠系膜细胞(MC)增殖的影响.方法:在大鼠系膜细胞原代培养成功的基础上,应用MTT法和流式细胞仪观察灯盏花注射液对ET-1诱导的MC增殖和细胞周期的影响.结果:(1)ET-1(10-10～10-6mol/L)能以一定的剂量方式刺激MC的增殖,以10-8mol/L时作用最强;而灯盏花注射液(45、90、180、360mg/L)能以一定的量效关系抑制ET-1诱导的MC增殖.(2)ET-1(10-9～10-7 mol/L),能增加S期细胞百分数,减少G0/G1期细胞百分数;而上述不同浓度的灯盏花注射液则能增加G0/G1期细胞百分数,减少S期细胞百分数,均呈一定的量效关系.结论:灯盏花注射液能抑制ET-1诱导的系膜细胞DNA合成,延迟细胞周期进程,抑制MC增殖,从而减轻或延缓肾小球硬化进程,可能是其防治肾脏疾病的机制之一.     

3-甲基腺嘌呤对大鼠内皮祖细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 观察3-甲基腺嘌呤(3-methlyadenine,3-MA)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 密度梯度法取大鼠骨髓EPCs,体外诱导分化并鉴定.实验分对照及不同浓度(1.25、2.5、5、10 mmol/L)3-MA组.四氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测细胞增殖,流式细胞仪测凋亡率及细胞周期.结果 (1)5 mmol/L组促EPCs增殖;10 mmol/L组抑制EPCs增殖,差异有统计学意义(P＜0.05).其余两组对EPCs增殖无明显影响,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)10 mmol/L组促EPCs凋亡,差异有统计学意义(P＜0.05).其余各组对EPCs凋亡率无明显影响,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).(3)5、10 mmol/L组影响细胞周期,5 mmoL/L组G0/G1期细胞减少、S和G2/M期增加;10 mmol/L组发生S期阻滞,G2/M细胞减少;差异有统计学意义(P＜0.05).结论 3-MA对EPCs增殖及凋亡的影响与其浓度有关,当浓度为10 mmol/L时抑制增殖并促进凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the effect of proliferation,apoptosis and cell cycle of 3-MA on rat endothelial progenitor cells. Methods Bone marrow-derived mononuclear cells were isolated from rat bone marrow by ficoll. There were five groups. The control group and four 3-MA concentration groups: 1. 25 mmol/L,2. 5 mmol/L,5 mmol/L, 10 mmol/L. MTT was used to measure the proliferation of endothelial progenitor cells. Flow cytometry ( FCM) was used to detect cell apoptosis and cell cycle. Results (1)5 mmol/L 3-MA promotes proliferation of endothelial progenitor cells, while 10 mmol/L 3-MA inhibits the proliferation of endothelial progenitor cells (P ＜ 0. 05). (2) 10 mmol/L 3-MA promotes apoptosis of endothelial progenitor cells, compared with the control, the difference was significant ( P ＜ 0. 05 ). (3) 3-MA at the concentration of 5 mmol/L reduces cells at G0/G1 phase and increases S and G2/M phase cells; 10 mmol/L 3-MA induces endothelial progenitor cells blockade at S phase, G2/M phase cells decreased, compared with the control, the difference was significant (P ＜ 0. 05). Conclusions 5 mmol/L 3-MA promotes the proliferation of endothelial progenitor cells. 10 mmol/L 3-MA inhibits the proliferation and promotes apoptosis of endothelial progenitor cells.