哮喘大鼠模型肺组织中嗜酸粒细胞趋化因子及肺组织和骨髓组织中嗜酸粒细胞趋化因子受体的表达

目的:探讨嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)及其受体(CCR3)在支气管哮喘发病机制中的作用.方法:健康雄性SD大鼠24只,随机分为哮喘组和对照组,每组12只.哮喘组采用卵蛋白(OVA)激发哮喘,对照组用生理盐水代替OVA.于末次激发后4～6 h断尾取血,涂片.麻醉动物,制备肺组织标本与骨髓细胞涂片.计数外周血、骨髓细胞涂片及肺组织嗜酸粒细胞(Eos)百分率;免疫组化技术观察肺组织中Eotaxin蛋白表达及肺组织和骨髓组织中CCR3蛋白表达;原位杂交方法观察肺组织中Eotaxin mRNA的表达.结果:与对照组相比,哮喘组大鼠外周血、骨髓、肺组织Eos百分率明显升高(P＜0.01);肺组织中Eotaxin蛋白和mRNA表达明显升高(P＜0.01),且和肺组织中Eos百分率呈正相关(P＜0.05);肺组织及骨髓中CCR3蛋白表达均明显增加(P＜0.01).结论:Eotaxin及其受体CCR3参与了哮喘的发病机制;在Eos从骨髓迁徙到外周血再募集到肺组织这一过程中,Eotaxin与CCR3起重要作用.     

沙丁胺醇对大鼠气道平滑肌细胞内eotaxin表达的影响及其机制探讨

目的 观察气道平滑肌细胞(ASMC)经致敏血清刺激后嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)的表达变化及沙丁胺醇对其表达的影响,探讨其可能的作用机制及β2受体激动剂在哮喘治疗中的作用.方法 无菌条件下分离SD大鼠气管段,组织块贴壁法体外培养ASMC.建立SD大鼠哮喘模型,采血收集血清.以致敏动物血清刺激体外培养的ASMC并收集培养上清及细胞.采用酶联免疫吸附法测定培养液上清中的eotaxin水平；放射免疫法测定培养细胞胞内环磷酸腺苷(cAMP)的表达；逆转录-聚合酶链反应半定量检测培养细胞中的eotaxin mRNA的表达.结果 哮喘大鼠被动致敏后,气道平滑肌细胞可表达eotaxin(n =4,P＜0.05),其表达水平与胞内的cAMP水平呈负相关(P＜0.01,r =0.788)；沙丁胺醇干预后,ASMC中eotaxin的表达明显下降(n=4,P＜0.05).结论 气道平滑肌细胞在致敏状态下eotaxin的表达显著增强,作为炎性分泌细胞参与哮喘发生过程,是哮喘发病机制的重要组成部分.沙丁胺醇可以在哮喘发病中有效抑制炎性细胞因子的表达.     

嗜酸粒细胞趋化因子与支气管哮喘

嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)在哮喘的发病过程中具有重要作用，其对嗜酸粒细胞(EOS)具有特异性的激活作用，而对于其他白细胞的作用则较弱。它在哮喘的发病机制中得到越来越广泛的研究，现对Eotaxin的基本概况及其在哮喘研究中的现状作一综述。     

鼻息肉中嗜酸粒细胞趋化因子的表达与嗜酸粒细胞活化相关研究

目的探讨鼻息肉中嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)的表达与嗜酸粒细胞(Eos)活化的关系;糖皮质激素对其抑制作用。方法设置三组分别为鼻息肉组、鼻息肉地塞米松治疗组及正常鼻黏膜对照组;其中鼻息肉地塞米松治疗组入院后,术前接受地塞米松20mg,静脉滴注,qd×5。Pharma-ciaCAP系统测定样本血清中ECP的水平;HE染色、免疫组织化学技术观察Eos和Eotaxin在标本黏膜中的表达;分别行统计学分析。结果与地塞米松治疗组、正常对照组比较,鼻息肉组血清中ECP水平(16.47±5.38μg/L)及组织中Eotaxin(50.85±32.22)表达明显增强(P<0.05),Eos活化增多;ECP水平与Eotaxin表达相互间呈正相关性(r=0.647);糖皮质激素对鼻息肉血清中ECP水平(6.26±3.13μg/L)及组织中Eotaxin(15.21±11.32)表达有显著的抑制作用(P<0.05);正常对照组血清中ECP水平(3.57±1.49μg/L)及组织中Eotaxin(13.08±10.62)表达水平低;鼻息肉地塞米松治疗组及正常黏膜对照组之间差异无显著性(P>0.05)。结论鼻息肉血清中ECP水平升高,组织中Eotaxin表达增强,且相互之间呈正相关。糖皮质激素能抑制外周血中Eos、组织中Eotaxin表达和Eos活化。     

LTD4诱导大鼠气道平滑肌细胞收缩的机制

目的探讨LTD4对气道平滑肌细胞（ASMC）收缩的机制。方法 以Fluo-3/AM作为细胞内游离Ca2+示踪剂,通过激光共聚焦显微镜观察LTD4对原代大鼠ASMC细胞内钙离子浓度（[Ca2+]i）及细胞收缩的影响;观察胞外Ca2+、G蛋白。蛋白激酶C（PKC）、丝裂素活化蛋白（MAPK）在LTD4生理效应中的作用。结果　LTD4刺激后,[Ca2+]i上升前有一个潜伏期,随后缓慢增加。随着LTD4浓度上升,潜伏期逐渐缩短（P<0.05）。在无钙溶液中,LTDA诱导的[Ca2+]i上升明显抑制（P<0.01）。随LTD4浓度上升,ASMC收缩程度也有增强趋势（P>0.05）。LTD4诱导的[Ca2+]i上升与细胞收缩程度显著相关（P<0.01）。PTX对LTD4诱导ASMC[Ca2+]i上升和收缩均有明显抑制作用。Staurosporine对[Ca2+]i上升无明显影响,但对收缩有明显抑制作用。PD098059对[Ca2+]i上升元明显影响,对收缩有部分抑制。结论 在大鼠ASMC中,LTD4诱导[Ca2+]i缓慢上升,并有潜伏期。[Ca2+]i在LTD4诱导ASMC收缩中起关键作用。G蛋白、PKC、MAPK在LTD4生理效应中起重要作用。     

嗜酸粒细胞和嗜酸粒细胞阳离子蛋白在气道高反应性患者诊断中的价值

目的:探讨嗜酸粒细胞和嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)在气道高反应性患者诊断中的价值.方法:378名慢性咳嗽和/或胸闷病人作激发试验,激发试验阳性者作进一步的检查,包括血清嗜酸粒细胞、痰液嗜酸粒细胞和ECP.排除其它疾病后,这些病人被拟诊为支气管哮喘,根据GINA方案进行规范治疗,并追踪24个月.结果:83名患者诊断为哮...     

嗜酸性粒细胞趋化因子的表达及影响因素

支气管哮喘是一种以气道嗜酸性粒细胞(Eosinophil,Eos)聚集和气道高反应性为特征的慢性气道炎症,气道Eos性炎症是气道高反应性的基础,Eos是哮喘支气管粘膜的慢性非特异性炎症的关键效应细胞。嗜酸性粒细胞趋化因子(Eo-taxin,Eot)在选择性地诱导Eos在气道粘膜的粘附、募集和脱颗     

痰嗜酸粒细胞在支气管哮喘气道炎症中作用的研究进展

痰嗜酸粒细胞(EOS)作为支气管哮喘的炎症效应细胞,与哮喘患者气道炎症、气道重构密切相关,在哮喘发病机制中起重要作用。痰EOS作为评价哮喘治疗效果的重要指标,具有评价治疗反应性、预测哮喘再次发作风险以及提示预后等作用。连续动态监测痰EOS计数,有助于评估哮喘治疗的反应性和充分性,将其作为气道炎症标志物的哮喘管理模式在哮喘临床管理中具有一定的参考价值。由于不同哮喘患者存在气道炎症表型差异,明确表型并分别给予精准治疗方案,可优化哮喘治疗的管理方法。目前,抗白细胞介素-5治疗支气管哮喘已显示出一定的功效,针对哮喘气道EOS炎症靶向药物的治疗已得到肯定,靶向药物为未来哮喘的治疗提供了更多可能性。     

LTD4诱导大鼠气道平滑肌细胞收缩的机制

目的探讨LTD4对气道平滑肌细胞(ASMC)收缩的机制.方法以Fluo-3/AM作为细胞内游离Ca2+示踪剂,通过激光共聚焦显微镜观察LTD4对原代大鼠ASMC细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及细胞收缩的影响;观察胞外Ca2+、G蛋白、蛋白激酶C(PKC)、丝裂素活化蛋白(MAPK)在LTD4生理效应中的作用. 结果LTD4刺激后,[Ca2+]i上升前有一个潜伏期,随后缓慢增加.随着LTD4浓度上升,潜伏期逐渐缩短(P＜0.05).在无钙溶液中,LTD4诱导的[Ca2+]i上升明显抑制(P＜0.01).随LTD4浓度上升,ASMC收缩程度也有增强趋势(P＞0.05).LTD4诱导的[Ca2+]i上升与细胞收缩程度显著相关(P＜0.01).PTX对LTD4诱导ASMC[Ca2+]i上升和收缩均有明显抑制作用.Staurosporine对[Ca2+]i上升无明显影响,但对收缩有明显抑制作用.PD098059对[Ca2+]i上升无明显影响,对收缩有部分抑制.结论在大鼠ASMC中,LTD4诱导[Ca2+]i缓慢上升,并有潜伏期.[Ca2+]i在LTD4诱导ASMC收缩中起关键作用.G蛋白、PKC、MAPK在LTD4生理效应中起重要作用.     

呼吸道平滑肌细胞的分泌功能

支气管哮喘的重要特征是呼吸道慢性炎症和呼吸道重构,而两者与支气管平滑肌的功能密切相关。呼吸道平滑肌细胞(ASMCs)除了收缩、增殖和迁移特性外,还具有重要的分泌调节功能。ASMCs能发生表型转化,转变成合成型,合成型ASMCs能以自分泌、旁分泌的方式产生多种细胞因子、趋化因子、生长因子、细胞黏附分子及大量细胞外基质,在启动和维持哮喘呼吸道炎症和呼吸道重构方面起着重要作用。     

细胞外基质对哮喘大鼠气道平滑肌细胞PI3Kp85表达的影响

目的:研究细胞外基质(ECM)对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)磷脂酰肌醇-3-激酶p85(PI3Kp85)表达的影响。方法:卵白蛋白(OVA)致敏法复制大鼠哮喘模型,将培养后的大鼠叶支气管ASMCs分别种植在涂覆有纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原及层粘蛋白的培养瓶中培养,Western blot检测各组ASMCs中PI3Kp85蛋白表达,Real-time PCR检测其mRNA。另取12只正常大鼠做对照。结果:哮喘纤维连接蛋白组、层粘蛋白组、Ⅰ型胶原蛋白组ASMCs中PI3Kp85 mRNA的表达分别是(7.63±0.61)、(9.73±0.68)、(16.22±0.88),均明显高于对照组(5.93±0.75)(P<0.01);蛋白表达情况与mRNA趋势一致。结论:纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原及层粘蛋白可以上调哮喘大鼠气道平滑肌细胞中PI3Kp85表达。     

IL-19对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨IL-19对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用。方法通过对大鼠进行雾化卵清蛋白,制备哮喘模型大鼠。提取哮喘大鼠ASMCs进行培养,分别以1μg/L、10μg/L、100μg/L IL-19干预ASMCs生长。采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度IL-19对ASMCs增殖的影响。结果与正常鼠相比,慢性哮喘大鼠ASMCs增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高。经10μg/L、100μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例减少,增殖亦减弱。且两组间比较有明显差异。而经1μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例及增殖均无明显变化。结论一定浓度的IL-19可能抑制慢性哮喘大鼠ASMCs的增殖。     

气道平滑肌细胞在哮喘气道重构中的作用机制

慢性哮喘患者的气道随着病程的发展会出现平滑肌细胞增生、胶原沉积、基膜增厚等重构现象,其中气道平滑肌细胞在长期慢性炎症刺激下其收缩功能及生长迁移能力均明显增强,同时还可以发生表型转化,胞内具有合成功能的细胞器(如高尔基体等)含量增加,进而分泌各种生物因子参与气道重构。该文就气道平滑肌细胞在哮喘气道重构中的作用机制的研究进展予以综述。     

细胞外基质对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞免疫调节作用

目的 研究在哮喘状态下,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)对气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的免疫调节作用.方法 健康雄性Wistar大鼠随机分为哮喘组(8只)及正常对照组(8只).大鼠哮喘模型使用卵清蛋白(OVA)致敏及激发的方法建立.分离培养得到的大鼠ASMCs分别置于包被有LA及COL-1的细胞瓶中进行培养.结果 Western blot法检测结果显示,eotaxin 、TGF-β1的表达,哮喘空白组高于正常对照空白组(P＜0.05),哮喘组内ECM的干预促进表达的增加(P＜0.05),正常对照组表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ECM影响哮喘ASMCs的免疫功能.     

氨茶碱对TNF-α诱导下大鼠气道平滑肌细胞中RANTES的影响

目的:观察临床治疗范围内不同浓度的氨茶碱对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导下大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中活化正常T细胞表达和分泌的调节物(RANTES)的影响及相应浓度的氨茶碱作用下细胞内环磷酸腺苷(cAMP)的变化,了解趋化因子在哮喘发病机制中的作用,进一步阐明茶碱类药物在治疗哮喘中的抗炎机制。方法:将分离的大鼠ASMC进行传代培养,培养液中加入TNF-α(终浓度为10μg/L)诱导后,再加入不同浓度的氨茶碱,用ELISA方法检测上清液中RANTES的浓度,用放射免疫法检测培养液中cAMP的浓度。结果:经TNF-α诱导后,不加氨茶碱组中大鼠ASMC上清液中RANTES的浓度最高,为(13.799±0.250)×10-9g/L,不同浓度氨茶碱作用后,RANTES的浓度均有所减少,其中5(即氨茶碱终浓度为5 mg/L,下同),7.5,10,12.5,15和17.5 mg/L组RANTES的浓度分别为(13.088±0.252),(12.555±0.100),(10.425±0.502),(7.943±0.500),(5.465±0.500),(4.581±0.25)ng/L。除5 mg/L组和对照组相比无显著性差异(P>0.05)外,其余氨茶碱组与对照组组差异均具有统计学意义(P<0.05)。各氨茶碱组之间相比较,除5 mg/L组和7.5 mg/L组相比无显著性意义(P>0.05)外,其余氨茶碱组两两相比均有统计学意义(P<0.05)。TNF-α诱导下,细胞内cAMP的浓度随着氨茶碱浓度的增加而增高。结论:茶碱类药物可抑制大鼠ASMC中RANTES的产生,并可能呈浓度依赖性,而且这种抑制作用与细胞内cAMP的变化有一定的关系。     

核因子κB在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B)在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用。方法采用卵清蛋白(OVA)致敏OVA激发的方法制备大鼠哮喘模型。将18只Wistar大鼠分为:①哮喘组;②吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组:OVA激发前腹腔注射NFκ-B的特异性抑制剂PDTC(100 mg/kg);③对照组:注射及吸入等量生理盐水。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光技术等方法观察ASMCs增殖;免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NFκ-B活性;Western blot检测NFκ-B的抑制蛋白I-κBα表达。结果①PDTC组ASMCs S期比例、A值、PCNA阳性表达率分别为(11.77±3.37)%、(0.283±0.034)、(27.9±6.7)%,与哮喘组[(22.17±3.64)%、(0.469±0.050)、(77.3±8.4)%]比较均显著降低(均P<0.05),与对照组[(12.08±2.86)%、(0.302±0.059)、(25.3±3.8)%]比较差异均无显著性意义(均P>0.05)。②PDTC组ASMCs NFκ-B活性与哮喘组比较显著降低(P<0.05),与对照组比较差异无显著性意义。结论NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖,抑制NF-κB活性能降低哮喘大鼠ASMCs增殖。     

细胞外信号调节蛋白激酶对哮喘大鼠气道平滑肌细胞周期的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通道调控支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖中的细胞周期机制。方法30只Wistar大鼠随机分为正常组和哮喘组,哮喘组采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型。取两组大鼠叶支气管ASMC进行原代培养,采用ERK激动剂表皮生长因子(EGF)和抑制剂PD98059干预哮喘组ASMC。用免疫组织化学法检测ASMC细胞周期蛋白CyclinD1和CDK2的表达;Western免疫印迹检测ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白的表达,计算ERK活化率。结果哮喘组大鼠ASMC中CyclinD1、CDK2的表达和ERK活化率[76.15±4.88、92.30±7.95和(82.37±5.78)%]均较正常组[54.17±6.11、61.04±4.09和(49.91±3.26)%]显著升高(P均0.05)。经EGF处理后上述指标进一步升高[119.28±8.14、134.77±9.26和(91.57±5.32)%,P均0.05],经PD98059处理后显著降低[58.78±4.60、69.15±5.83和(54.01±4.12)%,P均0.05]。结论哮喘大鼠ASMC增殖活性增强。ERK1/2可通过诱导ASMC中CyclinD1和CDK2蛋白高表达,使细胞从G1期向S期发展,促进细胞增殖。     

小剂量茶碱对大鼠气道平滑肌细胞表达NF-κB与ICAM-1的影响

目的：观察小剂量茶碱对培养的大鼠气道平滑肌细胞表达核因子kB（NF-kB）与细胞间黏附分子1（ICAM-1）的影响，探讨小剂量茶碱在气道发挥抗炎作用的可能机制。方法：体外培养正常大鼠鼠婴的气道平滑肌细胞，将培养出的细胞随机分为3组：空白对照组、肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激组、茶碱干预组。采用免疫组织化学SP法检测经TNF—α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入不同浓度的茶碱共同培养4h，以及加入同一浓度茶碱共同培养不同时间，NF-kB活性和ICAM-1表达的变化。结果：TNF-α刺激组与空白对照组的NF—kB活性和ICAM-1表达相比较，差异均有显著性（P〈0．05）。经TNF-α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入5，10，15mg／L的茶碱共同培养4h，NF-kB活性和ICAM-1表达均有所下降。与TNF-α刺激组相比，5mg／L组无统计学差异（P〉0．05），余两组差异均有显著性（P〈0．05）。且茶碱干预组内两两比较，差异均有显著性（P〈0．05）。经TNF-α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入10mg／L茶碱共同培养2，4，24h。与TNF—α刺激组相比，茶碱处理组的差异均有显著性（P〈0．05）。但茶碱处理组内不同处理时间两两比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论：茶碱可能通过抑制气道平滑肌细胞NF—kB活性和ICAM-1的表达，进而减少炎症细胞在气道的浸润。