纯化小鼠腹水中抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体方法的比较

用羟基磷灰石柱怪析法，辛酸－硫酸铵沉淀法以及辛酸－硫酸铵沉淀法加羟基磷灰石桩层析法从小鼠腹水中提取纯化抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体。结果表明，羟基磷灰石柱层析法简便、快速、其单克隆体产量和纯度均高，适合大多数实验室采用。     

纯化小鼠腹水中抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体方法的比较

用羟基磷灰石柱层析法，辛醚－硫酸铵沉淀法以及辛酸－硫酸按沉淀法加羟基磷灰石柱层析法从小鼠腹水中提取纯化抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体。结果表明，羟基磷灰石柱层析法简便，快速，其单克隆抗体产量和纯度均高，适合大多数实验室采用。     

体外培养骨髓基质细胞在珊瑚羟磷灰石上生长的表面形态观察

目的 观察体外培养的骨髓基质细胞与珊瑚羟基磷灰石复合后的生长特性,论证珊瑚羟磷灰石作为骨组织工程学载体材料的可行性.方法 分离纯化的狗骨髓基质细胞与珊瑚羟基磷灰石复合体体外培养,分别在相差显微镜下、扫描电镜下观察细胞的表面形态结构.结果 骨髓基质细胞在珊瑚羟基磷灰石上贴附生长良好,功能正常.结论 骨髓基质细胞在珊瑚羟基磷灰石上生长增殖良好,珊瑚羟磷灰石是骨组织工程载体材料的可靠选择.     

硫酸钙/纳米羟基磷灰石免疫人工骨对兔结核性骨缺损治疗的研究

目的：通过制备硫酸钙/纳米羟基磷灰石免疫抗结核人工骨,治疗兔免疫骨结核,探讨纳米羟基磷灰石免疫抗结核骨实际应用的效果。方法：采用明胶和聚己内酯复合包裹法制备硫酸钙/纳米羟基磷灰石抗结核人工骨;通过注射结核因子建立兔右侧股骨免疫骨结核模型,对骨结核模型进行病灶清除术,在缺损部位植入硫酸钙/纳米羟基磷灰石抗结核免疫人工骨,并在术后7、14、28 d检测抗结核药血药浓度;术后第4、12周,光镜下观察骨修复情况。结果：成功制备硫酸钙/纳米羟基磷灰石抗结核骨,电子显微镜下免疫人工骨空隙基本均匀,抗结核药物分散在空隙之间。成功建立兔股骨结核模型,并形成骨结核空洞;术后28 d治疗组还维持一定的抗结核药血药浓度;术后4周结核骨治疗组患处软骨细胞增殖活跃,并出现骨性愈合;术后12周,治疗组缺损愈合完全,缺损已被抗结核人工骨诱导的骨组织修复;对照组骨损也出现愈合,但骨质愈合弱。抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色显示,术后12周,形成的破骨细胞的体积和数量减少,对照组的破骨数量多于治疗组。ELISA结果显示,治疗后血清C?反应蛋白（C?reactive protein,CRP）、白细胞介素（interleukin,IL）?8、IL?6、肿瘤坏死因子?α（tumor necrosis factor?α,TNF?α）水平均降低。结论：硫酸钙/纳米羟基磷灰石免疫抗结核骨能够有效地治疗兔免疫骨结核,并保持一段时间的血药浓度,成骨效果好。     

TGF-β1在羟基磷灰石多孔层修饰镍钛合金修复骨缺损中的表达及意义

目的：研究TGF-β1在羟基磷灰石多孔层修饰镍钛合金修复骨缺损过程中的表达和意义,为羟基磷灰石多孔层修饰镍钛合金作为生物医学材料在临床上广泛应用提供理论依据。方法：选取健康成年兔24只,随机分为实验组和对照组,选取左侧股骨下1／3处为种植区,其中实验组植入羟基磷灰石多孔层修饰镍钛合金,对照组植入镍钛合金,通过大体观察、HE染色观察术后1,2,4,8wk骨组织局部组织反应、骨缺损的修复情况以及免疫组织化学染色测定TGF-β1的表达。结果：大体观察、常规HE染色显示实验组1,2,4,8wk骨痂生长、骨缺损修复情况明显优于对照组;免疫组织化学染色显示实验组于1,2,4,8wk TGF-β1表达明显高于对照组,且具有统计学差异（P〈0.05）。结论：羟基磷灰石多孔层修饰镍钛合金能够刺激TGF-β1的表达,促进骨缺损修复;羟基磷灰石多孔层修饰镍钛合金与骨组织具有很好的相容性。     

羟基磷灰石代用骨移植材料的实验研究

用羟基磷灰石颗粒植入山羊骨缺损内和皮下组织,实验表明,羟基磷灰石是一种较理想的骨移植代用材料,具有强度大,不变性,能与骨组织形成化学结合的特性。并且有良好的生物相容性,不引起炎症和免疫排斥反应。植入骨缺损内有骨再生现象,但缺乏骨诱导作用。     

人骨形态形成蛋白的纯化及其诱导成骨的研究

本实验采用差示沉积、超滤及羟基磷灰石柱层析法,提取和纯化了人骨基质内骨形态形成蛋白,得到纯化的人骨形态形成蛋白,分子量为17000U(约17000道尔顿).以C_3H小鼠147只为实验动物,纯化的骨形态形成蛋白的诱导成骨率为100％。     

DL-四氢巴马汀对大鼠单胺的排空作用

本文报道四季豆抗生育成分的提取和抗生育作用。提取采用丙酮沉淀法每100g 四季豆可提取10g。亦研究了硫酸铵分级盐析法,二乙氨乙基纤维素,二乙氨乙基葡聚糖凝胶柱层析和羟基磷灰石柱层析等方法。四季豆提取物经羟基磷灰石柱层析分离和纯化,可得4个洗脱峰,其中0.1M 磷酸缓冲液洗脱峰经醋酸纤维素薄膜电泳,可得一条主要区带和一条痕迹     

Ⅰ型胶原在丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料修复兔股骨缺损中的表达

目的 通过检测Ⅰ型胶原蛋白的表达,评价丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料的体内成骨性能. 方法 将丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料(实验组)和羟基磷灰石(对照组)分别植入新西兰大白兔股骨髓腔内,分别在4周、8周、12周时取出标本,采用免疫组织化学染色方法进行Ⅰ型胶原染色,应用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统进行Ⅰ型胶原蛋白积分光密度测量,评价其成骨特性. 结果 显微镜观察及Ⅰ型胶原蛋白积分光密度测量结果显示,在同一时间点,丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料成骨性能均高于对照组(P＜0.05). 结论 丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料可以增强成骨细胞基质分泌,有效促进新骨形成,具有良好的体内成骨性能.     

大鼠脂肪间充质干细胞复合羟基磷灰石成骨分化的实验研究

目的 脂肪间充质干细胞可与羟基磷灰石复合向成骨细胞分化,检测两种羟基磷灰石复合细胞成骨能力的差别.方法 通过扫描电镜观察脂肪间充质干细胞与普通羟基磷灰石和纳米级羟基磷灰石复合情况.检测细胞与载体复合后,表达碱性磷酸酶和骨钙素的情况.结果 在将AMSCs细胞种植于两种羟基磷灰石载体表面,向成骨方向诱导4周后,通过扫描电镜观察,羟基磷灰石载体表面有细胞存在.在两种不同的羟基磷灰石(HA)ALP的表达差异有显著性.骨钙素的检测发现,在纳米级羟基磷灰石上的表达要高于普通级羟基磷灰石.结论 ①脂肪间充质干细胞(AMSCs)可在裁体上复合生长.②AMSCs与HA载体复合后,可表达成骨细胞的特征.③诱导成骨后,在纳米级羟基磷灰石上复合表达碱性磷酸酶的量高于普通级羟基磷灰石.     

氯磷酸二钠表面改性羟基磷灰石对骨髓间充质干细胞多向分化的影响

目的 观察羟基磷灰石经氯磷酸二钠表面改性后对骨髓间充质下细胞多向分化的影响.方法 将块状羟基磷灰石与氯磷酸二钠复合制成氯磷酸二钠-羟基磷灰石,作为实验组;未复合氯磷酸二钠的羟基磷灰石作为对照组.分离,纯化大鼠的骨髓间充质干细胞,培养、传代,应用免疫细胞化学方法对培养至第3代骨髓间充质干细胞进行鉴定.将两组标本与骨髓间充质干细胞复合培养,利用MTT法对比骨髓间允质干细胞在两组材料表面生长有无差异,并且分别进行骨向、肌向、脂向诱导,观察氯磷酸二钠-羟基磷灰石对骨髓间充质干细胞多向分化有无影响.结果 表面标志物SH3的免疫细胞化学检测证明本实验获得的第3代骨髓间充质干细胞具有原始干细胞的特性.利用MTT法吸光度分析检测第3代骨髓间充质干细胞在两组标本的生长曲线,经统计学检验P>0.05,两组之间无统计学差异.骨髓间充质干细胞经骨向、肌向、脂向诱导后,仍保持成骨、成肌、成脂能力.结论 氯磷酸二钠复合在羟基磷灰石表面对骨髓间充质干细胞多向分化功能没有显著影响.     

粗糙钛表面纳米掺锶羟基磷灰石涂层对 BMSCs成骨分化的影响

目的研究粗糙钛表面纳米掺锶羟基磷灰石涂层对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM SCs)增殖、成骨分化的影响。方法采用电化学沉积技术在粗糙钛表面沉积薄层纳米掺锶羟基磷灰石、纳米羟基磷灰石,用场发射扫描电子显微镜观察其表征,分析锶元素修饰的纳米羟基磷灰石涂层对大鼠BM SCs增殖、碱性磷酸酶活性、矿化结节形成和成骨相关蛋白骨钙素分泌的影响。结果纳米掺锶羟基磷灰石涂层和纳米羟基磷灰石涂层不影响细胞增殖,与目前临床广泛应用的金属钛种植体粗糙表面一样具有良好的生物相容性。相较于纳米羟基磷灰石涂层和粗糙组,纳米掺锶羟基磷灰石涂层可增强BMSCs碱性磷酸酶活性,促进矿化结节形成,提高细胞骨钙素的分泌。纳米羟基磷灰石涂层亦表现了比粗糙组更好的生物活性。结论应用电化学沉积技术进行纳米掺锶羟基磷灰石涂层的制备,可以促进BMSCs成骨分化、种植体周围新骨早期形成,提高种植体骨组织结合率。     

人体正常膝关节钙化软骨层组成成分研究

目的 分析构成关节软骨钙化层有机成分中胶原蛋白类型与含量及无机成分中羟基磷灰石含量.方法 组织库获取20例自愿捐献的人体正常股骨髁新鲜标本,组织切片采用天狼猩红染色和免疫组织化学对胶原蛋白进行定性分析;用氨基酸分析和X-射线衍射法分别对胶原蛋白和羟基磷灰石进行定量分析.结果 天狼猩红染色见钙化软骨层与透明软骨层一样黄绿色淡染、弱双折光性;Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学分析,钙化软骨层呈强绿色荧光,潮线附近的胶原蛋白呈板层平行分布;氨基酸定量分析钙化软骨层Ⅱ型胶原蛋白含量占组织干质量的(20.16%±0.96%);X-射线衍射定量分析钙化软骨层中的羟基磷灰石含量占无机成分的(65.09%±2.31%).结论 在关节骨软骨复合组织中,钙化软骨层是位于透明软骨层与软骨下骨之间的界面连接结构,其细胞外基质主要由Ⅱ型胶原蛋白和羟基磷灰石组成.     

纳米羟基磷灰石的研究进展

随着纳米技术的发展.人们对纳米羟基磷灰石的研究也增多.本文对纳米羟基磷灰石的合成及表面改性方面的研究进行综述,增加对纳米羟基磷灰石的认识.     

长白白眉蝮蛇类凝血酶的研究Ⅰ：纯化方法的研究

采用四种纯化方法,对长白白眉蝮蛇类凝血酶的纯化途径进行研究。结果,阴阳离子交换柱、分子筛柱层析法周期较长,收率较低。羟基磷灰石柱法。对类凝血酶有较好的分离效果,但要求样品量小且纯度较高。亲和层析法分离类凝血酶,具有操作简便、纯化周期短、回收率高、处理样品量大等特点。     

羟基磷灰石复合体在眶内壁骨折复位术中的应用

目的观察羟基磷灰石复合体在眶内壁骨折复位术中的效果及安全性。方法应用羟基磷灰石复合体行眶内壁骨折复位术39例,对其效果进行总结。结果临床观察39例效果满意,羟基磷灰石复合体组织相容性好,易于塑型及修复。结论羟基磷灰石复合体是目前治疗眶壁骨折最为理想的充填材料。     

放电等离子烧结制备纳米羟基磷灰石-氧化锆复合陶瓷

目的制备保持羟基磷灰石生物活性的新型纳米羟基磷灰石-氧化锆复合陶瓷。方法湿球磨法制备羟基磷灰石与氧化锆复合粉体,复合陶瓷素坯制作后,放电等离子烧结制备新型纳米羟基磷灰石-氧化锆复合陶瓷,X射线衍射分析及扫描电子显微镜观察复合陶瓷的晶相与超微结构。结果复合陶瓷经X射线衍射分析显示其中有羟基磷灰石相和四方相氧化锆,未发现其他物质以及其他相的氧化锆。扫描电镜下氧化锆相呈白色,羟基磷灰石相呈黑色;黑白区域间隔存在,呈现均匀散在分布,白色区域略多于黑色区域,未见明显孔隙存在。结论用放电等离子法制备得到的复合陶瓷均匀、致密,无明显气孔存在,无羟基磷灰石或氧化锆单一组分的团聚,提示两组分在烧结过程中未发生反应。     

放电等离子烧结制备纳米羟基磷灰石-氧化锆复合陶瓷

目的 制备保持羟基磷灰石生物活性的新型纳米羟基磷灰石-氧化锆复合陶瓷.方法 湿球磨法制备羟基磷灰石与氧化锆复合粉体,复合陶瓷素坯制作后,放电等离子烧结制备新型纳米羟基磷灰石-氧化锆复合陶瓷,X射线衍射分析及扫描电子显微镜观察复合陶瓷的晶相与超微结构.结果 复合陶瓷经X射线衍射分析显示其中有羟基磷灰石相和四方相氧化锆,未发现其他物质以及其他相的氧化锆.扫描电镜下氧化锆相呈白色,羟基磷灰石相呈黑色;黑白区域间隔存在,呈现均匀散在分布,白色区域略多于黑色区域,未见明显孔隙存在. 结论 用放电等离子法制备得到的复合陶瓷均匀、致密,无明显气孔存在,无羟基磷灰石或氧化锆单一组分的团聚,提示两组分在烧结过程中未发生反应.     

改良巩膜后肌锥内羟基磷灰石义眼台植入术临床观察

羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)以其良好的组织相容性、无毒副作用、无免疫排斥反应、可被机体完全接纳的优点成为眼眶填充的理想植入物,主要用于矫治眼球摘除或眼内容物剜除术后眼窝塌陷、上睑凹陷,改善面部外观。我院自2008年3月～2011年4月对25例(25眼)患者行改良巩膜后羟基磷灰石义眼台植入术,取得良好效果,现报告如下。     

DHCC受体的纯化

本文报告了正常雄性家兔小肠粘膜细胞核提取液,经 38％饱和废硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素层析、DNA-纤维素层析、羟基磷灰石层析、Sephadex G—200凝胶过滤,最终得到纯化5200倍的DHCC受体40μg,产率为9％。