异氟醚对肺泡Ⅱ型上皮细胞Na^＋—K^＋—ATP酶活性的影响

目的 通过原代培养的正常及受（H2O2）损伤的肺泡Ⅱ型上皮细胞,探讨异氟醚（Iso)对肺泡Ⅱ型上皮细胞Na^ -K^ -ATP酶活性的影响。方法 肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化、培养24h后,分为六组：对照组（不加任何药物）,0．28mmol/L Iso组,2．8mmol/L Iso组,75μmol/L H2O2组,75μmol/L H2O2 0.28mmol/L Iso组和75μmol/L h2o2 2.8mmol/L Iso组,继续培养3h。分别测定肺泡Ⅱ型上皮细胞Na^ -K^ -ATP酶活性以及培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）含量。结果 Iso降低正常肺泡Ⅱ型上皮细胞Na^ -K^ -ATP酶活性并加重H2O2引起的肺泡Ⅱ型上皮细胞Na^ -K^ ATP酶活性的降低;Iso对正常培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞培养液中LDH活性和MDA含量无明显影响,但2．8mmol/L Iso可使受H2O2损伤的肺泡Ⅱ型上皮细胞培养液中LDH活性和MDA含量增加。结论 Iso可以降低肺泡Ⅱ型上皮细胞Na^ -K^ -ATP酶活性,尤其是在过氧化环境中可加重肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤。     

异氟醚对肺泡Ⅱ型细胞表面活性物质相关蛋白A的影响

目的 通过原代培养的正常及受H2O2损伤的肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡcell）,探讨异氟醚（Iso）对肺泡Ⅱ型上皮细胞表面性物质相关蛋白A（SP-A）的影响。方法 肺泡Ⅱ型上皮细胞培养32小时后,被分为六组;对照组（不加任何药物）、0.28mmol/L Iso组、2.8mmol/L Iso组、75μmol/L H2O2组、75μmol/L H2O2 0.28mmol/L Iso组和75μmol/L H2O2 2.8mmol/L Iso组,继续培养3小时。通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测Ⅱ型上皮细胞内和培养液中SP-A含量。结果 Iso降低正常肺泡Ⅱ型上皮细胞内和培养液中SP-A含量;经H2O2作用后,SP-A含量亦显著减少,异氟醚增强H2O2的作用。结论 Iso可降低肺泡Ⅱ型上皮细胞合成SP-A的功能,尤其是在过氧化环境中。     

血红素加氧酶-1预处理对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞氧化损伤的影响

目的 评价血红素加氧酶-1(HO-1)预处理对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞氧化损伤的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠,体重180～220 g,原代培养肺泡Ⅱ型上皮细胞,经鉴定后随机分为6组(n=8):对照组(C组),不给予任何药物,继续培养5 h;H2 O2组,加入0-5 mmol/L H2 O2,孵育3 h;不同浓度HO-1预处理组(H1-4组),分别加入0.01、0.10、1.00、10.00μmol/L HO-1孵育2 h,然后加入0.5 mmol/L H2 O2,孵育3 h.孵育结束后,于倒置相差显微镜下观察细胞形态,并进行肺泡Ⅱ型上皮细胞计数,测定细胞活力.结果 C组、H2～4组肺泡Ⅱ型上皮细胞大部分贴壁,呈圆形,胞质均匀,胞浆内含颗粒状物质;而H2 O2组和H1组肺泡Ⅱ型上皮细胞内可见反光增强的空泡,上清液中有较多的细胞碎片.与C组比较,H2O2组和H1组细胞计数和细胞活力降低(P＜0.05),H2～4组细胞计数和细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05);与H2O2组和H1组比较,H2～4组细胞计数和细胞活力升高(P＜0.05);H2O2组和H1组间,H2～4组间细胞计数和细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05).结论 0.10～10.00μmol/L HO-1预处理可减轻大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞氧化损伤.     

PEP-1-血红素加氧酶-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨PEP-1-血红素加氧酶(HO)-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 构建含人HO-1基因的原核表达质粒pETl5b-PEP1-hHO-1,质粒转化后诱导目的 蛋白PEP-1-HO-1表达.用含15%胎牛血清高糖DMEM培养基培养H9c2心肌细胞,随机分为4组(n=4):正常对照组(C组)常规培养;缺氧复氧组(H/R组)细胞缺氧22 h,复氧8 h;低浓度融合蛋白组(L-HO组)缺氧前用终浓度为1.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞;高浓度融合蛋白组(H-HO组)缺氧前即刻用终浓度为2.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞.复氧结束后收集细胞及培养液上清,采用2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸比色法检测细胞MDA含量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞SOD活性.结果 与C组比较,H/R组、L-HO组、H-HO组心肌细胞SOD活性降低,MDA含量升高,培养液LDH活性升高(P＜0.05);与H/R组比较,L-HO组和H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低(P＜0.05);与L-HO组比较,H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低(P＜0.05).结论 PEP-1-HO-1融合蛋白转导入大鼠H9c2心肌细胞可减轻细胞缺氧复氧损伤.     

H2O2氧化应激诱导兔椎间盘髓核细胞衰老的研究

目的:研究H2O2不同浓度对兔椎间盘髓核细胞形态、活力、增值、周期等的影响.方法:新西兰大白兔(2～3 kg,雌)10只,无菌条件下酶消化法分离髓核细胞.含15％FBS的DMEM/F12(1:1)培养液培养,细胞90％融合后传第1代.按照H2O2不同浓度(0μmol/L、130 μmol/L、216 μmol/L、360 μmol/L、600 μmol/L、1 000 μmol/L)分组,0 μmol/L H2O2为空白对照组.在细胞对数生长期,不同浓度H2O2处理1h后原培养液继续培养48 h,通过检测,分析比较各组髓核细胞与空白对照组间形态、活力、增值、周期的差异性.结果:与空白对照组比较,当H2O2浓度为130 μmol/L、216 μmol/L时,髓核细胞生物学特性未见显著性改变(P＞0.05);当H2O2浓度为360 μmol/L、600 μmol/L、1 000 μmol/L时,髓核细胞出现衰老改变:细胞质减少并出现空泡、增值减慢、衰老相关-β-半乳糖苷酶蓝染率增加、细胞周期阻滞于G1期而进入S期减少(P＜0.05).随着H2O2浓度的增高,衰老程度不断升高.结论:一定浓度的H2O2能够导致髓核细胞提前衰老,引起髓核细胞生物学特性的改变.     

含左西孟旦的STH-2心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 评价含左西孟旦的STH-2心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性Wistar大鼠32只,制备离体Langendorff灌注模型,随机分为4组(n=8),采用K-H液平衡灌注30 min时,C组采用STH-2心脏停搏液进行灌注,L1组、L2组和L2+G分别用含0.03μmol/L左西孟旦、0.3 μmol/L左西孟旦和0.3 μmol/L左西孟旦+10μmol/L格列苯脲(ATP敏感性钾通道阻断剂)的STH-2心脏停搏液进行灌注,灌注2 h时采用K-H液再灌注30 min.分别于灌注心脏停搏液前即刻(基础状态)、再灌注10 min、20 min、30 min时收集冠脉流出液,测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性.再灌注30 min时,取心肌组织,测定ATP、MDA、SOD水平及含水量.结果 与C组比较,L1组CK、LDH的活性和MDA含量降低,SOD活性升高,L2组CK、LDH的活性和MDA含量降低,ATP含量和SOD活性升高(P＜0.05或0.01);与L1组比较,L2组CK和IDH的活性和MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05或0.01);与L2组比较,L2+G组MDA含量、CK和LDH的活性升高,ATP含量和SOD活性降低(P＜0.05或0.01).结论 含左西孟旦的STH-2心脏停搏液可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,且与浓度有关,其机制与开放ATP敏感性K+通道有关.     

脂多糖对大鼠离体肺泡Ⅱ型上皮细胞存活率及钠-钾-ATPase的影响

目的观察脂多糖对大鼠离体肺泡Ⅱ型上皮(AT-Ⅱ)细胞存活率及钠-钾-ATPase(Na-K-ATPase)活性的影响。方法AT-Ⅱ细胞分离、纯化、培养24 h后平均分为三组。Ⅰ组在培养液中加入10μg/ml脂多糖(LPS);Ⅱ组在培养液中加入100μg/ml LPS。Ⅲ组(正常对照组)加入等容积生理盐水。分别测定给予处置48、h后AT-Ⅱ细胞Na-K-ATPase的活性、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及培养24 h后的细胞存活率。结果体外培养的AT-Ⅱ细胞经LPS(10、100μg/ml)作用4 h后Na-K-ATPase活性与Ⅲ组相比显著增强,8 h后差别依然存在。培养液中的LDH浓度在经LPS作用4 h及8 h后与Ⅲ组相比差异无显著意义。Ⅰ组24 h细胞存活率明显高于Ⅲ组。而Ⅱ组24 h细胞存活率较Ⅲ组相比差异无显著意义。结论两种浓度LPS对离体AT-Ⅱ细胞Na-K-AT-Pase活性有激活作用,且无细胞毒性作用,而10μg/ml的LPS可以提高AT-Ⅱ细胞的存活率。     

血红素加氧酶-1对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 新生SD大鼠8只,日龄1～3 d,原代培养心肌细胞,随机分为4组:正常对照组(C组)常规培养8 h;缺氧复氧组(HR组)采用缺氧2 h,复氧6 h的方法制备心肌细胞缺氧复氧模型;血晶素组(Hemin组)缺氧前24 h及缺氧即刻,培养基中加入Hemin,终浓度为20 μmol/L;血晶素+锌原卟啉组(Hemin+ZnPP组)缺氧前24 h及缺氧即刻培养基中同时加入Hemin及ZnPP,终浓度均为20 μmol/L.各组细胞均接种于35 mm培养皿(2 ml/皿)或50 ml培养瓶(3 ml/瓶),每组45皿和3瓶.于复氧结束后采用蛋白印迹法测定心肌细胞HO-1表达,台盼蓝染色法测定心肌细胞存活率,应用全自动生化分析仪测定细胞培养液乳酸脱氧酶(LDH)活性,超声破碎细胞离心后取上清,采用硫代巴比妥酸法测定细胞MDA水平,黄嘌呤氧化酶法测定细胞SOD活性.结果 与C组比较,其余3组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平及HO-1表达升高,心肌细胞存活率及SOD活性降低(P＜0.05).与HR组比较,Hemin组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平降低,HO-1表达、心肌细胞存活率及SOD活性升高(P＜0.05),Hemin+ZnPP组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).HR组和Hemin+ZnPP组细胞缺氧复氧损伤明显,Hemin组细胞缺氧复氧损伤减轻.结论 HO-1可减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

纳洛酮对大鼠急性缺血性肾衰的保护作用

为探讨纳洛酮（NAL）对肾脏缺血再灌注损伤中的保护作用，利用大鼠肾脏缺血再灌注致急性缺血性肾功能衰竭（肾衰）模型，观察NAL对肾缺血再灌注后血中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及肾组织中Na+、K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶的影响，并观察组织病理学变化。结果缺血60min再灌注后，血MDA含量明显升高，SOD活力明显降低，肾组织Na+、K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力均显著降低。用NAL（Ⅰ组为2mg／kg，Ⅱ组为4mg／kg）后，MDA显著下降，SOD和Na+、K+－ATP酶及Ca2+－ATP酶均明显升高，且有量效关系。组织病理学检查显示应用NAL后肾小管上皮细胞的损伤明显减轻，NAL－Ⅱ组明显好于NAL－Ⅰ组。认为NAL对急性缺血性肾衰有一定的保护作用。     

谷氨酰胺对人肺泡Ⅱ型上皮细胞热休克蛋白70表达的影响

目的评价谷氨酰胺对人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞热休克蛋白（HSP）70表达的影响。方法取人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞,在不含谷氨酰胺的DMEM培养液中孵育24h作为空白对照组（C组）,43℃孵育1h、37℃恢复4h作为阳性对照组（PC组）,不同浓度（2、4、8、12和16 mmol/L）谷氨酰胺的DMEM培养液中孵育24h作为不同浓度谷氨酰胺诱导组（Gln2组、Gln4组、Gln8组、Gln（12）组和Gln（16）组）,8mmol/L谷氨酰胺的DMEM培养液中孵育不同时间（1、2、6、12、24和48 h）作为不同时间谷氨酰胺诱导组（T1组、T2组、T3组、T4组、T5组和T6组）。分别采用RT-PCR和Western blot法检测HSP70 mRNA和蛋白的表达。结果与C组比较,PC组和不同浓度谷氨酰胺诱导组人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞HSPTO mRNA和蛋白的表达均升高,Gln8组HSP70 mRNA和蛋白表达水平高于Gln2组、Gln4组、Gln（12）组和Gln（16）组（P＜0．01）,而与PC组相比差异无统计学意义（P＞0．05）。与C组比较,PC组和不同时间谷氨酰胺诱导组HSP70 mRNA和蛋白的表达均升高,T5组HSP70 mRNA和蛋白表达水平高于T1组、T2组、T3组、T4组和T5组（P＜0．01）,而与PC组相比差异无统计学意义（P＞0．05）。结论谷氨酰胺可明显上调体外培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞HSP70 mRNA和蛋白的表达,并呈浓度和时间依赖性。     

二羟异黄酮和三羟异黄酮对CHO细胞抗氧化活性的比较研究

目的:研究二羟异黄酮(Daidzein)和三羟异黄酮(Genistein)对H2O2诱导的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)氧化损伤的保护作用及探讨其抗氧化活性的作用机制。方法:H2O2体外培养CHO细胞建立细胞氧化损伤模型,预先加入三羟异黄酮和二羟异黄酮(0.25～20μmol/L)作用24h作为保护后再加入100μmol/LH2O2作用3h,显微镜下观察CHO细胞形态改变,MTT法检测活细胞数,LDH法检测细胞的损伤情况,MDA生成量和SOD活性的测定检测细胞膜脂质过氧化反应程度。结果:H2O2处理细胞3h后,细胞形态发生明显改变,胞体变小、突起缩回;MTT吸光值减小,活细胞数减少;MDA生成量和LDH释放量明显增多,SOD活性下降,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)。Daidzein处理组和Genistein处理组细胞形态明显改善,MTT吸光值显著增加,MDA生成量和LDH释放量明显减少,与H2O2处理组相比有显著性差异(P<0.01)。结论:与三羟异黄酮相比,二羟异黄酮一样能显著抑制H2O2对CHO细胞的氧化损伤,且具有较强的保护作用。     

草酸钙晶体对大鼠肾小管上皮细胞损伤作用的实验研究

目的 通过研究一水草酸钙晶体粘附于体外培养的Wistar大鼠肾小管上皮细胞后引起的细胞功能变化，探讨尿路结石形成的机制。方法 分离、培养正常雄性Wistar大鼠的肾小管上皮细胞，在原代培养第5天时，将细胞分成3组（空白对照组，草酸组及一水草酸钙组），分别加入正常培养液，含有草酸钠（1、3、5mmol／L）的培养液及含有草酸钠（1、3、5mmol／L）和一水草酸钙晶体（5mmol／L）的培养液，实验8h后利用扫描电镜观察一水草酸钙晶体对肾小管上皮细胞的粘附情况，并分别用比色法测定细胞的钙镁ATP酶和钠钾ATP酶的活性，观察比较细胞功能的变化情况。结果 实验8h后，扫描电镜观察提示一水草酸钙组中有大量一水草酸钙晶体贴附于肾小管上皮细胞表面。①在三个草酸梯度浓度中，草酸组细胞钙镁ATP酶和钠钾ATP酶活性均未见明显下降，与对照组无显著性差异（P〉0．05）；②在三个草酸梯度浓度中，一水草酸钙组细胞钙镁ATP酶和钠钾ATP酶活性均明显下降。与对照组及草酸组有显著性差异（P〈0．05）；③在不同草酸浓度的一水草酸钙组间细胞钙镁ATP酶和钠钾ATP酶活性无显著性差异（P〉0．05）。结论 在高草酸环境下，对体外培养的Wistar大鼠的肾小管上皮细胞产生损伤作用的主要是一水草酸钙晶体而非游离草酸根离子。一水草酸钙晶体粘附于肾小管上皮细胞以后，可以造成细胞的损伤，这一机制可能有助于肾结石的发生。     

二氮嗪预先给药对原代培养大鼠海马神经元缺氧/复氧损伤的保护机制

目的研究ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪预先给药对新生Wistar大鼠原代培养海马神经元缺氧/复氧损伤的保护机制。方法原代培养的新生大鼠海马神经元随机分为2组,二氮嗪组(Dia组),缺氧前给予50μmol/L二氮嗪;对照组(Con组),给予二氮嗪的赋形剂,即含2‰二甲基亚砜的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液;分别在缺氧3 h/复氧24 h和缺氧3 h/复氧48 h后,测定神经元存活能力及LDH漏出率;在缺氧3 h/复氧24 h后,测定丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;在缺氧3 h、缺氧3 h/复氧24 h和缺氧3 h/复氧48 h时,测定早期神经元凋亡率和死亡率。结果与Con组比较,Dia 组缺氧3 h复氧24 h时神经元存活能力升高,缺氧3 h/复氧48 h时LDH漏出率降低,缺氧3 h/复氧24 h培养液中MDA浓度降低,SOD活性升高(P<0.05或0.01);缺氧复氧各时点Dia组神经元坏死率降低,神经元凋亡率升高(P<0.05或0.01)。结论50 μmol/L二氮嗪预先给药减轻原代培养新生Wistar 大鼠海马神经元缺氧/复氧损伤的机制与增加SOD活性有关。     

乙酰左旋肉碱预处理对低氧低糖诱导PC12细胞凋亡的影响

目的 评价乙酰左旋肉碱预处理对低氧低糖诱导PC12细胞凋亡的影响.方法 PC12细胞接种于96孔板中,采用随机数字表法,将细胞随机分为5组(n=6):对照组(C组)、细胞损伤组(Ⅰ组)和不同浓度乙酰左旋肉碱预处理组(A1-3组).C组加入含葡萄糖4.5 g/L的DMEM溶液孵育3h;Ⅰ组加入含葡萄糖0.5 g/L和Na2SO4 3 mmol/L的DMEM溶液孵育3h;A1-3组分别加入0.2、0.4和0.6 mmol/L乙酰左旋肉碱孵育24h,然后加入含葡萄糖0.5 g/L和Na2S2O4 3mmol/L的DMEM溶液孵育3h.采用MTT法检测细胞活力,采用TUNEL法检测细胞凋亡率,测定细胞SOD和ATP酶的活性和MDA含量.结果 与C组比较,Ⅰ组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD和ATP酶的活性降低,MDA含量增加(P＜0.05),A1-3组细胞活力、细胞凋亡率、SOD和ATP酶的活性和MDA含量差异无统计学意义(P＞0.05);与Ⅰ组比较,A1-3组细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD和ATP酶的活性升高,MDA含量下降(P＜ 0.05);A1-3组间细胞活力、细胞凋亡率、SOD和ATP酶的活性和MDA含量比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乙酰左旋肉碱预处理可通过抑制细胞凋亡,减轻低氧低糖诱导PC12细胞损伤.     

异丙酚对乳鼠心肌细胞氧化损伤时线粒体功能的影响

目的 评价异丙酚对乳鼠心肌细胞氧化损伤时线粒体功能的影响.方法 SD乳鼠20只,分离乳鼠心肌细胞,接种于96孔培养板原代培养48 h,随机分为5组,每组32孔,对照组(C组):继续培养4 h;氧化损伤组(OI组):加入叔丁基过氧化氢,终浓度为100 μmol/L,孵育4 h;异丙酚1 μmol/L组、10 μmol/L组和30 μmol/L组(P1-3组):加入叔丁基过氧化氢,终浓度为100 μmol/L,同时加入异丙酚,终浓度分别为1、10、30,μmol/L,孵育4 h.于细胞培养或孵育4 h时,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性,细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性、心肌细胞线粒体活力、线粒体膜电位和心肌细胞凋亡率.结果 与C组比较,其余4组上清液LDH活性、心肌细胞MDA含量、凋亡率升高,心肌细胞线粒体活力、膜电位降低、心肌细胞GSH含量、SOD活性降低(P<0.05);与OI组比较,P2,3组上清液LDH活性、心肌细胞MDA含量、凋亡率降低,心肌细胞线粒体活力、膜电位升高,P3组心肌细胞GSH含量、SOD活性升高(P<0.05),P1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);P2组与P3组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚减轻心肌细胞氧化损伤的机制与改善线粒体功能、抑制细胞凋亡有关.     

高糖诱发施万细胞损伤时自噬与Nrf2信号通路的关系

目的探讨高糖诱发施万细胞损伤时自噬与核因子E2相关受体2(Nrf2)信号通路的关系。方法将原代细胞株RSC96体外培养制成单细胞原液,分别接种于96孔板(1×104个/ml,200 μl/孔)或6孔板(1×106个/ml,2 ml/孔),培养48 h。采用随机数字表法分为3组(n=25):对照组(C组)、高糖组(H组)和高糖+自噬激动剂雷帕霉素组(H+RAP组)。C组在正常培养基中培养;H组培养基中加入50 mmol/L葡萄糖;H+RAP组培养基中加入50 mmol/L葡萄糖和5 μmol/L雷帕霉素。孵育48 h时,倒置显微镜下观察细胞生长情况,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,Western blot法检测Nrf2、P62和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)的表达水平。结果与C组比较,H组和H+RAP组细胞活力和SOD活性降低,细胞凋亡率和MDA含量升高,Nrf2、P62和LC3Ⅱ表达上调(P<0.05);与H组比较,H+RAP组细胞活力和SOD活性升高,细胞凋亡率和MDA含量降低,Nrf2和LC3...     

氧化应激对胰腺上皮细胞骨架的影响及其机制

目的 应用过氧化氢模拟体内氧化应激反应,观察活性氧对三维培养过程中胰腺上皮细胞形态变化及相关信号分子的表达.方法 应用Matrigel构建胰腺上皮细胞的三维培养模型,用浓度分别为l或200 μmol/L的H2O2处理15 min,然后分别于15 min、1h和4h后观察细胞形态的变化;上述细胞经过免疫荧光染色后,用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述细胞核提取物中的核因子(NF)-κB含量变化.结果200 μmol/L H2O2可以在15 min后诱导细胞收缩,1h后细胞形态有所恢复,但4h后细胞收缩更加明显.免疫荧光染色发现,细胞内微丝和微管结构在H2 O2处理后快速消失,但1h后恢复正常结构.4h后,细胞骨架纤维变得模糊并最终解体.1 μmol/L H2O2对胰腺上皮细胞的形态和细胞骨架未造成任何影响.随着时间的延长,200 μmol/L过氧化氢处理组NF-κB的活性逐渐升高,而1μmol/L过氧化氢处理组NF-κB的活性变化不大.结论 氧化应激可以诱导胰腺上皮细胞早期发生可逆性的细胞收缩和细胞骨架去极化现象,并且与NF-κB的活性升高相关.     

异丙酚对内毒素诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Toll样受体4表达水平的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Toll样受体4(TLR4)表达水平的影响.方法 SPF级雄性Wistar大鼠,体重180～250 g,8～9周龄,原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,经鉴定后随机分为5组,每组18孔,对照组(C组):不给予任何药物,继续培养3 h;LPS组:加入LPS,终浓度1μg/ml,孵育3 h;异丙酚组(P1～3组):同时加入LPS(终浓度1μg/nd)和终浓度分别为25、50、100 μmol/L的异丙酚,孵育3 h.孵育结束后测定肺泡Ⅱ型上皮细胞TLR4 mRNA、TLR4蛋白表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的释放量.结果 与C组比较,LPS组和P1组TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P<0.05),P2组和P3组差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,P2组和P3组TLB4 mRNA和其蛋白表达下调,TNF-α释放量降低(P<0.05或0.01),P,组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);P2组与P3组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TLR4 mRNA及其蛋白表达上调,且呈浓度依赖性,这可能是其抑制肺局部炎性反应的机制.     

PKC在缺氧预处理和去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价蛋白激酶C(PKC)在缺氧预处理和去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为6组(n=25):对照组(Ⅰ组)常规培养;缺氧复氧组(Ⅱ组)细胞缺氧3 h,复氧1 h;缺氧预处理组(Ⅲ组)缺氧20 min,复氧20 min后制备缺氧复氧模型;去甲肾上腺素预处理组(Ⅳ组)细胞经终浓度为10-7 mol/L去甲肾上腺素孵育30 min后,去除去甲肾上腺素,再行缺氧复氧;H7+缺氧预处理组(Ⅴ组)细胞经终浓度为5×10-5 mol/L的H7孵育10 min后,去除H7,其余操作同Ⅲ组;H7+去甲肾上腺素预处理组(Ⅵ组)细胞经终浓度为5×10-5 mol/L的H7(PKC活性抑制剂)孵育10 min后,去除H7,其余操作同Ⅳ组.复氧结束后,测定心肌细胞存活率、培养液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性和心肌细胞MDA含量和SOD活性.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK的活性及MDA含量升高(P＜0.01).与Ⅱ组比较,Ⅲ组和Ⅳ组细胞存活率和SOD活性升高,LDH、CK活性及MDA含量降低(P＜0.01).与Ⅲ组比较,Ⅴ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK活性及MDA含量升高(P＜0.01).与Ⅳ组比较,Ⅵ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK活性及MDA含量升高(P＜0.05).结论 PKC激活参与了缺氧预处理与去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

含吡那地尔的心脏保存液对大鼠离体心脏线粒体呼吸功能的影响

目的 探讨含吡那地尔的心脏保存液(HTK液)对大鼠离体心脏线粒体呼吸功能的影响.方法 健康清洁级SD大鼠120只,建立离体心脏Langendorff灌注模型,随机分为5组,HTK组(Ⅰ组)、吡那地尔+HTK液组(Ⅱ组)、吡那地尔+HTK液+5-羟葵酸(5-HD)组(Ⅲ组)、吡那地尔+HTK液+HMR-1098组(Ⅳ组)、吡那地尔+HTK液+HMR-1098+5-HD组(Ⅴ组).K-H液平衡灌注10 min后灌注心脏停搏液:Ⅰ组灌注HTK液;Ⅱ组灌注含吡那地尔0.5 mmol/L的HTK液;Ⅲ组灌注含吡那地尔0.5 mmol/L和5-HD 100μmol/L的HTK液;Ⅳ组灌注含吡那地尔0.5 mmol/L和HMR-1098 100μmol/L的HTK液;Ⅴ组灌注含吡那地尔0.5 mmol/L、5-HD 100μmol/L和HMR-1098 100 μmol/L的HTK液.停搏后取心脏保存于4℃各组相应液体中8 h,然后用37 ℃含氧K-H液再灌注60 min.于平衡灌注10 min(T1)、保存8 h(T2)、复灌60 min(T3)时测定线粒体呼吸功能[3态呼吸(S3)和4态呼吸(S4)的耗氧速率、呼吸控制率(RCR)及磷氧比(P/O)].于T1和T3时收集冠脉流出液测定心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度、肌酸激酶同功酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)的活性.电镜下观察心肌细胞超微结构.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组～Ⅳ组RCR、P/O、S3耗氧速率升高,cTnI、CK-MB和LDH的水平降低(P＜0.05).与Ⅱ组比较,Ⅲ组～Ⅴ组RCR、P/O、S3耗氧速率降低,cTnI、CK-MB和LDH的水平升高(P＜0.05).与Ⅲ组比较,Ⅳ组RCR、P/O、S3耗氧速率升高,cTnI、CK-MB和LDH的水平降低,Ⅴ组RCR、P/O、S3耗氧速率降低,cTnI、CK-MB和LDH的水平升高(P＜0.05).与Ⅳ组比较,V组RCR、P/O、S3耗氧速率降低,cTnI、CK-MB和LDH水平升高(P＜0.05).各时点S4耗氧速率组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).Ⅱ组心肌细胞损伤较轻,Ⅲ组和Ⅳ组损伤程度相近但重于Ⅱ组,Ⅰ组和Ⅴ组损伤最重.结论 含吡那地尔的HTK液可改善心脏线粒体呼吸功能,减轻心肌损伤,提高心脏保存效果,线粒体ATP敏感性钾通道和细胞膜ATP敏感性钾通道均参与了吡那地尔的心肌保护效应,且线粒体ATP敏感性钾通道发挥主导作用.