1,25-二羟维生素D3对支气管哮喘大鼠气道炎症和肺内诱导型一氧化氮合酶的影响

目的本文探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxy vitmin D3,1,25-(OH)2D3]对于支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道炎症和肺内诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)的影响。方法50只Wistar大鼠随机分为四组:正常对照组,哮喘组,预防处理组和治疗组。用卵蛋白作为致敏原制备哮喘大鼠模型,第一组预防处理组在致敏前三天给予口服1,25-(OH)2D3,共给药3周,第二组预防组则于致敏第1天和第7天给予肌注维生素D3。治疗组则于支气管激发开始前给药处理。应用动物肺功能仪测定大鼠对于乙酰甲胆碱刺激的气道反应性,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数及嗜酸粒细胞计数和肺组织病理变化。检测肺组织中一氧化氮(NO)含量,iNOS活性和iNOS mRNA表达水平,用免疫组织化学染色方法检测肺组织iNOS的表达并观察iNOS在气道组织分布的改变。结果1,25-(OH)2D3预防及治疗组可减轻BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数,同时降低肺组织中NO含量、iNOS活性及大鼠肺组织中iNOS mRNA的表达水平。免疫组织化学结果显示,干预组可降低哮喘大鼠气道组织中上皮细胞和巨嗜细胞中iNOS阳性。结论1,25-(OH)2D3可降低哮喘大鼠气道炎症及iNOS表达水平,提示1,25-(OH)2D3对于哮喘可能有潜在的治疗作用。     

氨茶碱对支气管哮喘气道重塑大鼠肺组织MMP-9及其基因表达的调节

目的 观察氨茶碱对支气管哮喘气道重塑大鼠气道形态学和转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其基因表达的调节作用.方法 24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组(35 mg/kg),每组8只,除正常组外以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠哮喘模型,治疗组、模型组从第1次哮喘激发开始(第15天)分别给予氨茶碱、生理盐水1次/d灌胃给药,用药4 w后处死大鼠,取肺组织HE染色,彩色图像分析仪测量支气管壁面积、支气管平滑肌面积,采用免疫组化法测定TGF-β1含量,ELISA法测定肺组织MMP-9含量,RT-PCR法测定MMP-9 mRNA含量.结果 与正常组比较,模型组大鼠支气管壁面积、平滑肌面积、肺组织MMP-9含量及MMP-9 mRNA含量明显增加(P＜0.01);与模型组相比,治疗组大鼠支气管壁面积、平滑肌面积、肺组织TGF-β1、MMP-9、MMP-9 mRNA含量均显著降低(P＜0.01).结论 氨茶碱可通过下调哮喘气道重塑大鼠肺组织MMP-9 mRNA表达、抑制MMP-9合成、抑制TGF-β1产生从而抑制支气管哮喘大鼠气道重塑.     

孟鲁司特钠、布地奈德对哮喘小鼠气道重塑及肺组织MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的观察孟鲁司特钠、布地奈德对哮喘小鼠气道重塑及肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)表达的影响。方法将40只雌性小鼠随机分为4组各10只,模型组、孟鲁司特钠组、布地奈德组采用卵蛋白(OVA)致敏及OVA连续滴鼻激发建立哮喘模型,对照组予同等剂量生理盐水;在每次激发前30 min,孟鲁司特钠组予孟鲁司特钠0.25 mL/只(0.1 mg/mL)灌服,布地奈德组用1 mg布地奈德+8 mL生理盐水雾化吸入20 min,对照组以生理盐水进行腹腔注射及雾化吸入。HE染色观察小鼠肺组织病理变化,Image-Pro Plus6.0彩色图像分析系统测定支气管壁及平滑肌厚度,免疫组化法测定肺组织MMP-9和TIMP-1。结果对照组无支气管收缩表现,支气管组织结构正常;较对照组,模型组出现支气管收缩、黏膜充血水肿及炎症细胞浸润等情况较重,孟鲁司特钠组和布地奈德组较模型组明显减轻。与对照组比较,模型组、孟鲁司特钠组、布地奈德组支气管壁、平滑肌厚度增加,MMP-9、TIMP-1阳性率增高(P<0.05或0.01);与模型组比较,孟鲁司特钠组、布地奈德组支气管壁、平滑肌厚度减小,MMP-9、TIMP-1阳性率降低(P<0.05或0.01)。结论孟鲁司特钠和布地奈德可部分改善哮喘小鼠气道重塑并降低肺组织MMP-9和TIMP-1的表达。     

姜黄素对哮喘大鼠气道重塑及MMP-9表达的影响

目的探讨哮喘大鼠气道重塑与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的关系以及姜黄素的干预作用。方法采用随机分组的方法,将Wistar大鼠随机分成对照组、哮喘组和姜黄素干预组,6周后处死大鼠,收集肺组织标本观察病理改变,采用免疫组化技术结合计算机病理图像分析系统,测定3组大鼠气道形态学参数及支气管上皮细胞MMP-9、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)的相对含量。结果哮喘组支气管总管壁厚度和平滑肌厚度明显高于其他两组;MMP-9、TIMP-1广泛分布于气道黏膜上皮。哮喘组MMP-9、TIMP-1的平均灰度值明显低于对照组和姜黄素组;哮喘组MMP-9/TIMP-1比例失衡。结论姜黄素可减少气道壁和平滑肌增生而抑制哮喘气道重塑,其机制可能与下调MMP-9的表达,调节MMP-9/TIMP-1之间的平衡有关。     

1,25-二羟维生素D3对被动致敏人气道平滑肌细胞的抑制作用

目的 检测1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对被动致敏的人气道平滑肌细胞(HASMC)的增殖及其表达基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和解整合素-金属蛋白酶33(ADAM33)的影响,探讨其调节支气管哮喘(简称哮喘)患者气道重塑的可能机制.方法用10%哮喘患者血清被动致敏HASMC,以10%非哮喘患者血清为对照.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度1,25-(OH)2D3对HASMC细胞增殖活力的变化并确定其有效作用浓度.然后以有效作用浓度的1,25-(OH)2D3预处理HASMC,MTT法测定细胞增殖活力,流式细胞仪测定细胞周期,实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法分别检测细胞中MMP-9及ADAM33的表达情况.结果 (1)1,25-(OH)2D3在(10-9～10-7)mol/L浓度下能浓度依赖性地抑制被动致敏的HASMC增殖(P<0.05);(2)10-7 mol/L的1,25-(OH)2D3能时间依赖性地抑制被动致敏的HASMC增殖并特异性抑制细胞周期中G1/S的转化;(3)VD组MMP-9及ADAM33蛋白表达较哮喘组分别下降了(63.4±3.6)%和(50.9±2.9)%,但仍显著高于对照组(P<0.01);(4)VD组MMP-9及ADAM33 mRNA表达较哮喘组分别下降了(52.2±2.5)%和(67.8±3.2)%,但仍显著高于对照组(P<0.01).结论 1,25-(OH)2D3能从多个层面抑制被动致敏的HASMC的功能,这可能是其调节哮喘气道重塑的作用机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effects of 1,25-(OH)2D3 on the proliferation of passively sensitized human airway smooth muscle cells(HASMCs) and their expressions of MMP-9 and a disintegrin and metalloprotease 33(ADAM33). Methods HASMCs were passively sensitized with 10% serum from asthmatic patients. MTT colorimetri assay was used to examine the effect of 1,25-(OH)2D3 on cell proliferation at different concentrations(10-10 mol/L, 10-9 mol/L, 10-8 mol/L, 10-7 mol/L).By this way, its optimal inhibitory concentration was determined. And then the effects of 1,25-(OH)2D3 at the optimal concentration on cell proliferation was examined by the same MTT assay and cell cycle analysis by flow cytometry. The expressions of MMP-9 and ADAM33 in HASMCs were studied by real-time quantitative RT-PCR and Western blotting analysis. Results (1)Inhibition of cell proliferation by 1,25-(OH)2D3 was barely detectable at 10-10 mol/L. But with the increasing concentration ranging from 10-9 mol/L to 10-7 mol/L, 1,25-(OH)2D3 markedly inhibited the cell proliferation concentration-dependently and reached the maximum effect at the concentration of 10-7 mol/L.Accordingly,10-7 mol/L was chosen as the optimal concentration of 1,25-(OH)2D3 for the following study. (2)At the concentration of 10-7 mol/L,1,25-(OH)2D3 inhibited the cell proliferation of passively sensitized HASMCs in a time-dependent manner and hampered the G1/S transition. (3)1,25-(OH)2D3 pretreatment attenuated the MMP-9 and ADAM33 protein levels in passively sensitized HASMCs by (63.4±3.6)% and (50.9±2.9)%,respectively (P<0.01). (4)1,25-(OH)2D3 significantly inhibited the MMP-9 and ADAM33 mRNA levels in passively sensitized HASMCs by (52.2±2.5)% and (67.8±3.2) %, respectively (P<0.01). Conclusion 1,25-(OH)2D3 has a direct inhibitory effect on passively sensitized HASMCs in vitro,including the inhibition of cell proliferation and the expressions of MMP-9 and ADAM33,which maybe associated with the beneficial role of 1,25-(OH)2D3 in the prevention and therapy of asthmatic airway remodeling.     

Sunitinib对支气管哮喘气道重塑小鼠模型Erk通路和cyclin D1表达的影响

目的探讨sunitinib对支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑的干预作用及可能的作用机制。方法 18只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组以及sunitinib组,每组6只;以卵清蛋白(OVA)致敏、激发,建立慢性哮喘气道重塑模型。Sunitinib组每次雾化吸入前半小时给予sunitinib(40mg/kg)灌胃给药。OVA末次激发结束后24h处死小鼠,HE染色观察气道炎症及形态学改变,采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13和血清总IgE的表达,免疫组织化学法观察肺组织增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达水平。蛋白印记法(Westernblot)测定细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk)蛋白磷酸化水平及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达。结果 HE染色示哮喘组小鼠黏膜下层和平滑肌层增厚,管腔狭窄,大量炎性细胞浸润,sunitinib组上述改变较哮喘组为轻;sunitinib干预后哮喘小鼠BALF中Th2细胞因子IL-4、IL-13和血清总IgE以及肺组织羟脯氨酸含量显著降低(P0.01)。哮喘组小鼠气道PCNA阳性细胞百分比、α-SMA表达及肺组织Erk磷酸化水平、cyclin D1蛋白表达较对照组明显升高(P0.01),sunitinib干预后其表达均降低(P0.01)。结论 Sunitinib可能通过抑制Erk途径影响cyclin D1的表达,抑制了慢性哮喘模型中气道平滑肌的增殖,发挥抗气道重塑作用。     

H2型松弛素对慢性支气管哮喘小鼠气道重塑与肺组织细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 研究H2型松弛素(H2Relaxin)对慢性支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠气道重塑及肺组织细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)表达的影响,探素松弛素在哮喘治疗中的可能作用.方法 将40只BALB/c小鼠按随机数字表法分为健康对照组、哮喘组、阴性对照组(vehicle)、松弛素组4组,每组10只;卵清白蛋白(OVA)致敏、激发建立慢性哮喘小鼠模型;vehicle组和松弛素组每日分别给予生理盐水和松弛素(0.25 mg·kg-1 ·d-1)皮下注射.HE和马森(Masson)染色观察各组小鼠气道炎症及胶原沉积情况;采用免疫组织化学半定量法测定气道壁α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)的表达;酶联免疫吸附测定( ELISA)法检测肺组织羟脯氨酸含量;用逆转录-PCR(RT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)分别测定各组小鼠肺组织中cyclin D1mRNA和蛋白表达水平.结果 哮喘组、vehicle 组与健康对照组相比,嗜酸粒细胞浸润增多,气道管腔狭窄,平滑肌层增厚,胶原纤维增生,而松弛素组上述改变较此2组轻.与健康对照组相比,哮喘组、vehicle组小鼠支气管α-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径显著增加(均P ＜0.05),松弛素组小鼠支气管α-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径低于哮喘组和vehicle组(均P＜0.05);哮喘组和vehicle组小鼠羟脯氨酸含量[每克肺组织中分别为(0.68±0.10)mg、(0.67±0.10) mg]高于健康对照组的(0.26±0.05)mg(q值分别为16.61和16.01,均P＜0.01),松弛素组小鼠羟脯氨酸含量为(0.40±0.06)mg,低于哮喘组和vehicle组(q值分别为10.88和10.26,均P＜0.05);Western blot检测结果显示,cyclin D1在哮喘组、vehicle组和松弛素组的表达(分别为1.38±0.18、1.50±0.10和0.72±0.13)高于健康对照组的0.38±0.10(q值分别为13.00、14.65和4.49,均P＜0.05),而松弛素组表达量低于哮喘组与vehicle组(q值分别为8.51和10.16,均P＜0.05).哮喘组与vehicle组各项检测指标间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 松弛素可以显著减轻慢性哮喘小鼠气道炎症反应和平滑肌层的增厚,延缓哮喘小鼠气道重塑进程,该作用可能部分与其下调cyclin D1表达有关.     

Sunitinib对支气管哮喘气道重塑小鼠模型Erk通路和cyclin D1表达的影响

目的 探讨sunitinib对支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑的干预作用及可能的作用机制.方法 18只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组以及sunitinib组,每组6只;以卵清蛋白(OVA)致敏、激发,建立慢性哮喘气道重塑模型.Sunitinib组每次雾化吸人前半小时给予sunitinib(40 mg/kg)灌胃给药.OVA末次激发结束后24 h处死小鼠,HE染色观察气道炎症及形态学改变,采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13和血清总IgE的表达,免疫组织化学法观察肺组织增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、α平滑肌肌动蛋白(a smooth muscle actin,α SMA)表达水平.蛋白印记法(Western blot)测定细胞外信号调节蛋白激酶(extraeellular signal-regulated kinase,Erk)蛋白磷酸化水平及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达.结果 HE染色示哮喘组小鼠黏膜下层和平滑肌层增厚,管腔狭窄,大量炎性细胞浸润,sunitinib组上述改变较哮喘组为轻;sunitinib干预后哮喘小鼠BALF中Th2细胞因子IL4、IL-13和血清总IgE以及肺组织羟脯氨酸含量显著降低(P＜0.01).哮喘组小鼠气道PCNA阳性细胞百分比、α-SMA表达及肺组织Erk磷酸化水平、cyclin D1蛋白表达较对照组明显升高(P＜0.01),sunitinib干预后其表达均降低(P＜0.01).结论 Sunitinib可能通过抑制Erk途径影响cyclin D1的表达,抑制了慢性哮喘模型中气道平滑肌的增殖,发挥抗气道重塑作用.     

β2-肾上腺素受体表达水平与支气管哮喘气道重塑的关系

目的通过观察β2-肾上腺素受体(β2-adenergic receptor,β2-AR)在支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠气道壁组织表达水平的变化,探讨β2-AR表达水平与气道重塑的关系及观察应用β2-受体激动剂对小鼠气道重塑的影响。方法 30只雌性BALB/c小鼠分为3组,每组10只,分别为对照组(DZ)、哮喘模型组(MX)和特布他林组(TB)。采用0.2%卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)溶液腹腔注射致敏及2.5%OVA溶液雾化吸入激发的方法制作小鼠哮喘气道重塑模型,同时给予β2-受体激动剂(特布他林)干预,最后一次激发24h内处死小鼠,取其肺组织,对肺组织切片进行HE染色,以医学图像分析软件测量支气管基底膜周径(Pbm)、总气道壁面积(Wat)和平滑肌面积(Wam),同时采用免疫组织化学法,应用上述图像分析软件检测气道壁组织β2-AR的积分光密度值(IOD)。结果①各组小鼠总气道壁面积/支气管基底膜周径(Wat/Pbm):MX组(25.37±4.25)与DZ组(12.89±1.71)、TB组(15.98±2.58)相比较,气道壁显著增厚(P<0.01),TB组与DZ组相比较,气道壁厚度无明显差别(P>0.05);各组小鼠平滑肌面积/支气管基底膜周径(Wam/Pbm):MX组(7.58±2.16)与DZ组(2.55±0.72)、TB组(3.54±1.63)相比,气道平滑肌增厚(P<0.05),TB组与DZ组相比气道平滑肌厚度无明显差别(P>0.05)。②各组小鼠气道壁β2-AR表达的IOD值:与DZ组(24.90±2.42)相比较,MX组(19.88±1.94)小鼠气道壁组织β2-AR的表达水平显著降低(P<0.01),同时TB组(22.10±1.08)小鼠气道壁组织β2-AR的表达水平也显著低于对照组小鼠(P<0.01)。结论①应用β2-受体激动剂可通过抑制气道平滑肌增殖,减轻小鼠哮喘气道壁增厚,干预气道重塑;②哮喘发生气道重塑时,小鼠气道壁组织β2-AR表达明显下调,同时应用-受体激动剂(特布他林)可下调小鼠气道壁组织-AR的表达。     

转化生长因子β1Ⅰ型受体拮抗剂对支气管哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)Ⅰ型受体拮抗剂SB 431542对慢性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型气道炎症及气道重塑的影响,为哮喘的治疗提供新思路.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组及SB 431542组,每组10只;卵清蛋白(OVA)致敏、激发建立慢性哮喘小鼠模型;布地奈德组和SB 431542组分别给予布地奈德雾化吸入和SB 431542滴鼻,每周3次.HE和Masson染色观察各组小鼠气道炎症及胶原沉积情况;AB-PAS染色观察杯状细胞增生情况;免疫组织化学半定量法测定气道壁α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1水平及血清总IgE水平;免疫印迹法(Western blot)测定各组小鼠肺组织中Smad3、p-Smad3及Smad7蛋白表达.结果 哮喘组与正常组相比,嗜酸粒细胞浸润增多,气道管腔狭窄,平滑肌层增厚,胶原纤维增生;布地奈德组上述改变均较哮喘组轻;SB 431542组嗜酸粒细胞浸润较哮喘组减轻,但仍高于正常组及布地奈德组,平滑肌层增厚、胶原纤维增生较哮喘组明显减轻(P＜0.05),与布地奈德组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与正常组比较,哮喘组小鼠支气管AB-PAS及α-SMA 阳性染色面积/支气管基底膜周径显著增加(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组小鼠支气管AB-PAS及α-SMA 阳性染色面积/支气管基底膜周径低于哮喘组(P＜0.05).哮喘组气道炎症指标(血清总IgE、IL-4、IL-5及TGF-β1)显著高于正常组(P＜0.05),布地奈德组上述指标低于哮喘组(P＜0.05),SB 431542组与哮喘组比较差异无统计学意义(P＞0.05).MMP-9、TIMP-1在哮喘组的表达明显高于正常组(P＜0.05),在布地奈德组及SB 43542组的表达低于哮喘组(P＜0.05),两治疗组之间差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot检测显示,各组小鼠肺组织Smad3的表达差异无统计学意义(P＞0.05);哮喘组p-Smad3表达明显高于正常组(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组p-Smad3表达低于哮喘组(P＜0.05);与正常组比较,哮喘组Smad7表达降低(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组Smad7表达高于哮喘组(P＜0.05),且这两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SB 431542能显著减轻哮喘小鼠细胞外基质沉积及平滑肌增厚,延缓哮喘小鼠气道重塑进程,该作用可能部分与其调节MMP-9、TIMP-1的表达有关.SB 431542对哮喘小鼠气道炎症浸润无明显改善,说明哮喘气道炎症可能不依赖于TGF-β1/Smads通路.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.