不同浓度脂多糖对支气管哮喘大鼠模型建立的影响及调节机制

目的 观察不同浓度大肠埃希菌脂多糖（E．coli LPS）对年幼期哮喘大鼠模型建立的影响及其调控机制。方法 清洁级SD大鼠45只，随机分为对照组（A组）、哮喘组（B组）、LPS组（C组），FC组又分为C1组（LPS0．1μg／m1）、C2组（LPS10μg／m1）、C3组（LPS100μg／m1）]，每组9只。用卵白蛋白（OVA）致敏与激发建立大鼠哮喘模型。光镜、电镜观察肺组织病理及超微结构的变化；支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸粒细胞（EOS）及其它炎症细胞计数；酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清OVA-sIgE与BALF中TGF-β1含量；TUNEL法检测肺组织EOS凋亡。结果①光镜电镜观察：光镜下B组见支气管及血管周围、肺间质及肺泡腔内炎性细胞浸润，支气管黏膜下水肿，黏液腺增生，黏膜皱折增多，部分黏膜上皮细胞脱落，可见气道黏液栓；C1组、C3组上述改变无明显减轻；C2组上述现象明显减轻。电镜下B组见EOS数量增多，周围有大量浆细胞聚集；C1组无明显改变；C2组凋亡的EOS增多；C3组中性粒细胞和凋亡的EOS均增多。②BALF中炎症细胞计数：B组BALF中细胞总数、EOS绝对计数和EOS占细胞总数的百分比（EOS％）均高于A组（均P〈0．01）；C2组均低于B组（均P〈0．01）。③血清OVA-sIgE和BALF中TGF-β1含量：血清OVA-sIgE检测，B组高于A组（P〈0．01）；C2组、C3组明显低于B组（均P〈O．01）；但C1组与B组比较无统计学意义（P〉0．05）。BALF中TGF-β1。含量测定，B组与A组比较，两组有显著性差异（P〈0．05）；C2组、C3组明显高于B组（均P〈0．01）。④肺组织EOS凋亡率检测结果，B组与A组比较，两组有显著性差异（P〈0．05）；C2组、C3组与B组比较EOS凋亡率均明显增高（均P〈0．01）；但C1组与B组比较无统计学意义（P〉0．05）。相关分析结果，BALF中TGF-β1。水平与EOS数呈显著性负相关（r=-0．483，P〈0．01）；EOS绝对计数与血清OVA-sIgE水平呈显著性正相关（r=0．634，P〈0．01）。结论E．coliLPS（〉10μg／m1）通过降低OVA—sIgE水平，增加TGF-β1分泌，诱导EOS凋亡，从而可能减轻变态反应症状，但过高浓度E．coliLPS（100μg／m1）可能会促使中性粒细胞增高。     

地塞米松对哮喘小鼠气道平滑肌细胞中胸腺活化调节趋化因子表达的影响

目的探讨胸腺活化调节趋化因子(TARC)在哮喘小鼠气道平滑肌细胞中的表达及地塞米松对TARC的影响。方法 36只小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松治疗组(C组),每组12只。以卵白蛋白OVA和氢氧化铝混悬液致敏及OVA激发建立哮喘小鼠模型。行支气管肺泡灌洗液(BALF)沉渣白细胞及嗜酸性粒细胞(EOS)计数,HE染色观察肺组织病理改变,应用酶联免疫吸附实验测定血清及BALF中TARC、IL-4的浓度,并用免疫组织化学的方法测定气道平滑肌细胞中TARC蛋白的表达量。结果 B组白细胞及EOS计数明显高于A、C组(P<0.01),C组EOS计数高于A组(P<0.05)。B组血清及BALF中TARC及IL-4的浓度显著高于A、C组(P<0.01);C组血清、BALF中TARC的浓度低于B组(P<0.01)。B组气道平滑肌细胞中TARC蛋白表达量较A、C组显著增高(P<0.01)。小鼠血清、BALF中TARC浓度与IL-4浓度呈正相关(r=0.669、0.845,P均<0.01)。结论 TARC在哮喘组小鼠肺组织气道平滑肌细胞中的蛋白表达量较正常组明显增多,地塞米松可能通过减少IL-4的分泌从而抑制TARC的表达。     

鳖甲煎丸对肾小球系膜细胞转化生长因子表达的影响

目的探讨鳖甲煎丸药物血清及脂多糖(LPS)对人肾小球系膜细胞(MCs)转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。方法应用细胞培养技术,进行人MCs培养,采取血清药理学方法,制备鳖甲煎丸药物血清,利用LPS为刺激因子,将培养的MCs分为空白组、鳖甲煎丸组、LPS组和LPS鳖甲煎丸组。应用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察TGF-β1mRNA在各组中的表达情况。结果鳖甲煎丸组TGF-β1mRNA的表达明显低于空白组(P<0.01);LPS刺激后TGF-β1mRNA表达增强,与空白组比较有明显差异(P<0.01);LPS鳖甲煎丸组明显低于LPS组(P<0.01);鳖甲煎组明显优于LPS鳖甲煎丸组(P<0.01)。结论鳖甲煎丸能够抑制正常条件下及LPS刺激条件下TGF-β1mRNA在MCs中的表达,从而延缓肾小球硬化的进展。     

中性粒细胞性支气管哮喘小鼠模型建立的探索

目的利用不同剂量脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）干预卵清蛋白（ovalbumin,OVA）致敏和激发的小鼠,探索中性粒细胞性哮喘（neutrophilic asthma,NA）小鼠模型的建立。方法 80只BALB/c小鼠随机分为正常对照组（A组）、肺损伤对照组（B组：B1～B4）、嗜酸细胞性哮喘模型对照组（C组）、NA模型探索组（D组：D1～D4）。分致敏和激发两阶段建模,致敏阶段：A组PBS腹腔注射及PBS滴鼻,B组PBS腹腔注射及LPS滴鼻,C组OVA腹腔注射,D组OVA腹腔注射及LPS滴鼻;激发阶段：A、B组生理盐水雾化,C、D组5%OVA雾化。通过观察小鼠雾化时的症状、肺组织病理改变,检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）细胞总数及分类计数和血清OVA-sIgE等评价NA小鼠模型建立。结果①D3组小鼠出现类似C组小鼠呼吸急促、大小便失禁等表现。②D3组BALF炎症细胞总数较A组显著升高（P〈0.01）;D3组中性粒细胞（neutrophil,NEU）百分比（NEU%）较A、C、D1、D2组显著升高（P值均〈0.01）,嗜酸粒细胞（eosinophil,EOS）百分比（EOS%）较A组显著升高而较C组显著低下（P值均〈0.01）。③D3组支气管管壁及肺泡间隔增厚变形,部分断裂,气道黏膜下除了EOS浸润外还存在明显NEU浸润。④D3组血清OVA-sIgE水平显著高于A组而低于C组（P值均〈0.05）。⑤D3组IL-4水平显著高于A组（P〈0.05）,与C组无显著差异（P〉0.05）;D3组IFN-γ水平显著低于A组（P〈0.05）,与C组无显著差异（P〉0.05）。结论 10μg LPS滴鼻吸入＋50μg OVA腹腔注射三次与5%OVA连续激发两周即D3组可成功建立NA小鼠模型。     

不同浓度β-淀粉样蛋白对大鼠小胶质细胞特异性蛋白CD11b表达的影响

目的探讨免疫细胞膜表面整合素(CD11b)在β-淀粉样蛋白(Aβ)所引起阿尔茨海默病(AD)中的作用、机制及与Aβ剂量的关系。方法雄性Wistar大鼠50只,随机分为A、B、C、D、E 5组,每组10只;A组大鼠双侧海马CA1区注射5μl生理盐水,B~E组双侧海马注射5μl Aβ(分别含Aβ_(25~35)0.5、1、5、10μg);HE染色观察五组大鼠海马CA1区细胞形态及数量变化;免疫组化(IHC)检测海马CA1区Aβ、CD11b表达;实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测CD11b mRNA表达。结果 HE染色,光镜下观察D组、E组大鼠海马CA1区神经细胞数明显少于A组、B组、C组(P<0.01);IHC检测D组、E组两组Aβ阳性表达率均高于A组、B组、C组(P<0.01);D组、E组CD11b阳性表达率明显高于A组、B组、C组(P<0.01);qRT-PCR检测大鼠海马组织内CD11b mRNA表达D组、E组组明显高于A组、B组、C组(P<0.01)。结论 Aβ可激活小胶质细胞,募集MG到Aβ沉积部位,Aβ沉积量和CD11b表达量呈正相关。     

布地奈德对支气管哮喘大鼠血中性粒细胞中转化生长因子β1及Smad2/3表达的影响

目的 观察转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)及Smad2/3在支气管哮喘(简称哮喘)大鼠血中性粒细胞(polymorphonuclear leucocyte,PMN)中的表达及布地奈德对其的影响,探讨PMN通过TGF-β1/Smad信号通路参与哮喘气道炎症的可能作用机制.方法 采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组(A组)、正常对照组(C组)和布地奈德治疗组(B组),对血PMN进行分离纯化,免疫细胞化学法检测血PMN中TGF-B1和Smad2/3的表达水平.结果 与C组(0.131±0.015 OD值)相比,PMN TGF-β1的表达水平在A组(0.228±0.016 OD值)和B组(0.164±0.017 OD值)差异均具有统计学意义(P值均＜0.01);B组与A组相比,TGF-β1的表达水平差异也具有统计学意义(P＜0.01).与C组(0.081±0.011 OD值)相比,PMN Smad2的表达水平在A组(0.142±0.021 OD值)和B组(0.110±0.010OD值)差异均具有统计学意义(P值均＜0.01);B组与A组相比,PMN Smad2/3的表达水平也具有显著统计学意义(P＜0.01).两者的表达呈显著正相关(r=0.776,P＜0.01).结论 PMN能合成TGF-β1和Smad2/3,且哮喘时其合成水平增加,其合成功能可以被布地奈德所抑制.PMN可能通过TGF-β/Smad信号转导途径参与哮喘的气道炎症过程.     

表皮生长因子受体对支气管哮喘大鼠气道炎症的影响

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)在支气管哮喘(简称哮喘)大鼠急慢性气道炎症的作用以及阻断EGFR的激活对气道炎症的影响.方法 将45只sD大鼠按随机数字表法分为对照组(A1、A2、A4组)、哮喘组(B1±、B2、B4组)和治疗组(C1、C2、C4组),每组5只,其中1、2和4分别表示激发1、2和4周.治疗组在每次卵清白蛋白激发前1 h给予酪氨酸激酶抑制剂(TKI)金雀异黄素(genistein)20 mg/kg腹腔注射.末次激发后收集BALF行细胞总数及分类计数.肺组织HE染色并行气道黏膜下炎症评分.免疫组织化学及免疫荧光染色观察气道上皮EGFR表达及其酪氨酸磷酸化(活化的ECFR)程度.两组数据间的比较采用单因索方差分析,多组间比较采用g检验.结果 (1)B组各时段BALF中细胞总数及各类细胞绝对计数均高于A组相应时段组(均P<0.05),嗜酸粒细胞在2周末达高峰;C组各时段BALF中细胞总数[分别为(48±6)、(51±9)和(57±12)×105]及嗜酸粒细胞计数[分别为(2.5±0.5)、(2.7±0.6)和(2.6±0.5)×105]均低于相应B时段组[细胞总数分别为(70±10)、(88±8)和(72±10)×105>,嗜酸粒细胞数分别为(5.6±0.8)×105、(6.6±0.6)×105和(4.3±0.4)×105],差异有统计学意义(均P<0.05);C组各时段BALF中中性粒细胞及淋巴细胞计数与相应时段B组比较差异无统计学意义;C1组BALF中上皮细胞数[(2.5±0.5)×105]低于B1组[(4.9±0.7)×103](q=4.671,P<0.05),C4组BALF中上皮细胞数[(5.7±1.2)×105]高于B4组[(4.3±0.4)×105](q=4.012,P<0.05).(2)C4组气道黏膜下炎症评分(3.6±0.6)低于B4组(5.1±0.6)(q=4.923,P<0.05).(3)B组各时段各级气道EGFR蛋白表达均高于相应时段A组(均P<0.01);气道上皮EGFR活化程度A组分别为(1.84±0.26)、(1.43±0.29)和(1.67±0.32),B组分别为(3.69±0.43)、(3.57±0.29)和(4.46±0.47),C组分别为(3.12±0.24)、(3.00±0.28)和(2.69±0.54),B组各时段气道上皮EGFR活化程度均高于相应时段A组(均P<0.05);C组各时段气道上皮EGFR活化程度均弱于相应时段B组(均P<0.05).(4)相关分析显示气道上皮EGFR表达及其活化程度均与BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞绝对计数,以及气道炎症评分呈明显正相关.结论 哮喘大鼠气道上皮EGFR参与气道炎症,TKI金雀异黄素有一定抑制哮喘大鼠急慢性气道炎症的作用.     

B型钠尿肽抑制心成纤维细胞增殖与转化生长因子-β1/Smad信号传导途径的关系

目的:探讨B型钠尿肽(BNP)抑制心成纤维细胞(CFs)增殖机制与转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1) /Smad信号传导途径的关系.方法:原代提取乳鼠的心CFs,以重组人心肌营养素刺激细胞增殖,分为: BNP组(A组)、SB431542组(B组)、BNP+SB431542组(C组)、对照组(D组).收集培养液检测细胞因子TGF-β1,收集细胞提取总RNA以荧光实时定量RT-PCR检测Smad4 mRNA变化.结果:A、B、C组TGF-β1 浓度较D组明显降低而Smad4 mRNA的△CT值较D组明显升高(P<0.05),但A、B、C组之间TGF-β1相比差异无统计学意义(P>0.05);C组Smad4 mRNA △CT值高于A组和B组.结论:BNP抑制CFs增殖机制除了TGF-β1/Smad2/3信号途径,还可能存在TGF-β1非Smad2/3信号传导途径.     

血管紧张素Ⅱ对哮喘大鼠气道重塑影响的研究

目的 观察哮喘大鼠肺组织局部肾素-血管紧张素系统(renin -angiotensin system,RAS)的活化,探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)特异性血管紧张素1受体拮抗剂Irbesartan对哮喘气道重塑的影响.方法 将30只Wistar大鼠按随机数字表法分成正常对照组(C组)、哮喘模型组(A组)和Irbesartan干预组(I组),以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏并雾化吸入激发制备大鼠哮喘模型.观察各组大鼠肺功能变化情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)定量分析血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中AngⅡ水平;半定量分析气道壁厚度(Wat/Pbm,气道壁面积/基底膜周径)和气道平滑肌厚度(Wam/Pbm,平滑肌面积/基底膜周径);免疫组织化学方法观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在气道壁的表达,苦味酸天狼猩红染色-偏振光方法观察Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)在气道壁的表达,并对三者的表达水平进行半定量分析.结果 ①Ang水平:血清AngⅡ水平:I组大鼠较A组和C组显著升高(P<0.05),A组和C组间比较差异无显著性(P>0.05).BALF上清中AngⅡ水平:A组较C组显著升高(P<0.05),I组较A组显著升高(P<0.05).②肺功能:吸气阻力(Ri):A组大鼠显著高于C组(P<0.05),I组大鼠与A组、C组比较差异无显著性(P>0.05).呼气阻力(Re):A组大鼠显著高于C组和I组(P<0.05).肺顺应性(CL)A组大鼠较C组明显降低(P<0.05),I组较A组显著提高(P<0.05),但较C组仍有下降(P<0.05).③气道壁厚度:A组大鼠较C组显著增厚(P<0.05),I组较A组显著降低(P<0.05),但仍显著高于C组(P<0.05).气道平滑肌厚度:A组、I组与C组比较均有显著性差异(P<0.05),并且I组较A组显著降低(P<0.05).④TGF-β1表达:I组大鼠气道壁TGF-β1阳性表达:较A组显著降低(P<0.05),较C组仍有显著增加(P<0.05).⑤胶原表达:C组、A组和I组ColⅠ阳性表达:各组间比较差异无显著性(P>0.05).A组ColⅢ阳性表达显著高于I组和C组(P<0.05),I组气道壁ColⅢ表达较C组仍有显著增加(P<0.05).⑥相关性分析:哮喘组大鼠BALF上清中AngⅡ水平与气道壁表达的TGF-β1呈显著正相.结论 哮喘大鼠肺组织局部RAS活化,AngⅡ产生增多.局部增多的AngⅡ可能通过上调TGF-β1的表达,促进ASM增殖肥大和气道壁胶原沉积增加,从而在哮喘气道重塑中发挥重要作用.AngⅡ特异性血管紧张素1受体阻断剂Irbesartan可以减轻气道重塑的发生,并对肺功能有一定程度的改善.     

SARS冠状病毒N蛋白致大鼠肺部炎症及糖皮质激素对其的作用

目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒N蛋白所致大鼠肺部炎症反应及糖皮质激素(以下简称激素)对其的调节作用。方法24只SD大鼠随机分为4组,每组6只;A组大鼠气管内滴入无菌生理盐水0.2ml,B组(6h)、C组(24h)大鼠气管内滴入SARS病毒N蛋白溶液0.2ml,D组大鼠气管内滴入SARS病毒N蛋白溶液0.2ml的同时腹腔内注射10mg/kg地塞米松。测4组大鼠外周血、支气管肺泡灌洗液(BALF)中WBC总数及分类;测4组大鼠肺组织湿/干(W/D)比值;观察4组大鼠肺组织病理学变化;ELISA测4组大鼠血清及BALF中IL6、IL10、转化生长因子(TGF)β1水平。结果(1)外周血淋巴细胞比例C组较A组低(P<0.05),D组较A、C组均低(P值均小于0.01);D组WBC总数较A、C组均低(P<0.01)。BALF中WBC总数C组较A组高(P<0.05),D组较C组低(P<0.05);B、C组BALF中肺泡巨噬细胞占98%～99%。(2)肺脏W/D比值B、C组较A组高(P<0.05),D组较C组低(P<0.01)。(3)肺组织病理学变化:B、C组大鼠肺泡间隔明显增宽,有较多的炎性细胞渗出,包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、成纤维细胞等,血管充血、淤血,有的支气管腔内有炎性细胞渗出,C组变化较B组无明显加重;D组大鼠肺组织炎性反应较B、C组减轻,肺泡间隔变薄,炎性细胞渗出减少。(4)血清及BALF中IL6、IL10、TGFβ1水平B组较A组高(P<0.01),C组进一步升高(P<0.01),D组较C组低(P<0.01)。结论SARS冠状病毒N蛋白具有致病性,能够引起大鼠肺部炎症反应和(或)急性肺损伤,肺损伤与促炎性细胞因子、抗炎性细胞因子的升高及失衡有关;激素可有效地减轻SARS冠状病毒N蛋白所致的肺部炎症反应。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.