DNA错配修复系统和微卫星不稳定性与结直肠癌

结直肠癌(CRC)是消化系统常见的恶性肿瘤之一。其发生发展涉及到一系列遗传学改变。已有大量的研究证实，微卫星不稳定性(MSI)存在于遗传性非息肉性结直肠癌(HNPCC)，部分散发性结直肠癌(SCRC)胃癌等当中，MSI是错配修复基因的异常造成的。DNA错配修复基因的突变可以解释90％以上的HNPCC，少部分的HNPCC肿瘤和散发性MSl 的肿瘤可由其他途径所致，比如基因的甲基化。     

错配修复、微卫星不稳定性与散发性结直肠癌

目的：探讨DNA错配修复基因、微卫星不稳定性与散发性结直肠癌发生发展的关系。方法：采用放射性同位素为基础的聚合酶链式反应（PCR）技术，对48例散发性结直肠癌中错配修复基因和四个位点微卫星不稳定性进行了检测。结果：48例散发性结直肠癌中hmsh3、hmsh6基因突变率分别为10．4％和25％，四个位点微卫星不稳定性阳性率分别为D2S123（12．5％）、BAT－26（18．8％）、D17S261（10．4％）、D17S799（8．3％），hmsh3、hmsh6 基因突变和微卫星不稳定性多为分化不良的吕，多位于右半结肠，而与患者的性别、淋巴结转移、Ducks分期无关。结论：错配修复基因突变与微卫星不稳定性是散发性结直肠癌发生的早期分子事件，是除LOH致癌途径以外的又一新的致癌途径。     

甲基转移酶1表达质粒对结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其表达的影响

目的 分析DNA甲基转移酶1(Dnmt1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其转录水平和微卫星不稳定性(MSI)的影响。方法 分别构建含有人的正义Dnmt1(HMT)和反义Dnmt1(THM)的真核表达质粒,将其转染入结肠癌SW1116细胞,以Western印迹实验分析各组细胞Dnmt1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2基因的表达。甲基化特异性PCR分析hMLH1、hMSH2启动子区甲基化情况,银染法研究其对微卫星不稳定性的影响。结果 转染正义Dnmt1质粒的细胞hMLH1、hMSH2的启动子甲基化水平升高,基因mRNA表达降低。转染反义Dnmt1质粒可使细胞中hMSH2启动子呈非甲基化状态,基因表达增强。未发现转染正义和反义Dnmt1基因的SW1116细胞存在MSI的变化。结论 重组Dnmt1表达质粒可通过调控人结肠癌细胞中错配修复基因的甲基化影响基因的表达。     

错配修复基因hMLH3与肿瘤的关系

恶性肿瘤的发生是由基因突变引起的，而环境中的有害物理和化学因子及体内代谢的一些物质会对DNA造成损伤，同时在细胞的生命周期中也会有发生碱基配对错误的危险，生物体主要依靠DNA修复系统来保持遗传信息的完整和稳定。目前己阐明的DNA损伤修复方式至少有4种：碱基切除修复、核苷酸切除修复、双链断裂修复及错配修复（mismatch repair, MMR）.     

胃癌错配修复基因hMLH1突变与微卫星DNA不稳的关系

目的 探讨胃癌错配修复基因hMLH1突变与微卫星不稳（MSI）的关系。方法 采用PCR为基础的方法检测MSI;采用二维DNA电泳和DNA测序技术检测hMLH1突变。结果 68例胃癌中检出hMLH1基因突变3例, 突变率为4．4％。hMLH1突变与肿瘤大小、分化程度、组织学类型、浸润深度和临床病理分期无显著相关。至少有1个位点发现MSI者17例（25．0％）。将MSI分为高频率MSI（MSI－H,≥2个位点）8例、低频率MSI（MSI－L,仅为1个位点）9例和MSI阴性（MSS）51例3组,4例hMLH1基因突变均发生于MSI－H组,而MSI－L和MSS组未见有突变者。结论 hMLH1基因突变仅是部分MSI发生的原因,MSI的发生可能还涉及到hMLH1以外错配修复基因改变。     

错配修复基因相连锁的微卫星与慢性粒细胞白血病急性变的关系

探讨错配修复基因连锁的微卫生ＤＮＡ的遗传改变与慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）加速急变之间的关系。方法采用ＰＣＲ－银染方法对１８例ＣＭＬ患者加速中急变期的骨髓细胞与其慢性期进行比较。结果５例ＣＭＬ患者中出现Ｄ２ｓ１２３和Ｄ３ｓ１２９８微卫星的改变,占２７．８％,其中１例出现在加速期,４例出现在急变期。３例患者Ｄ２ｓ１２３微卫星发生改变。１例出现在加速 等位基因微卫星序列的杂合性缺失;２例出现在急变期,杂     

错配修复缺陷预示结肠癌5FU为基础的辅助治疗疗效欠佳

Sargent等对457例Ⅱ／Ⅲ期结肠癌患者通过微卫星不稳定（microsatellite instability,MSI）或免疫组化（immuno．histochemistry,IHC）进行错配修复蛋白（mismatchrepair,MMR）检测,这些患者先前曾被随机分人5FU为基础的辅助治疗组（228例）和单纯手术组（229例）,     

胃癌错配修复基因的研究进展

错配修复基因(Mismatch Repair genes,MMRgenes)是细胞内负责对碱基错配进行修复的基因,它们的缺陷导致癌相关基因突变不能及时有效纠正,从而使人体易感肿瘤。对MMR基因的研究最深入的是遗传性非息肉型结肠癌(HNPCC),近年来的研究也表明错配修复基因的失活与许多恶性肿瘤如子宫     

胰腺癌错配修复基因的表达

目的探讨胰腺癌错配修复基因hMLH1的表达与临床病理特征的关系。方法分别取60例胰腺癌组织及60例正常胰腺组织标本,采用免疫组化SP法检测hMLH1在胰腺癌与正常胰腺组织的表达并比较其差异。结果胰腺癌hMLH1的强表达为0％,弱表达为31．7％（19／60）,缺失表达为68．3％（41／60）;正常胰腺组织hMLH1强表达为83．33％（50／60）,弱表达为16．67％（10／60）,缺失表达为0％,2组比较差异有统计学意义（P〈0．001）。胰腺癌hMLH1蛋白表达在患者年龄、胰腺癌的位置、病理类型等方面差异无统计学意义（P〉0．05）,在淋巴结转移（x2=8．579,P=0．004）、临床分期（X2=9．586,P=0．002）、病理分化程度（x2=20．372,P=0．001）方面差异有统计学意义。结论hMLHl基因缺失表达与胰腺癌发生、分化程度、病情进展有关。     

结直肠癌错配修复基因与肿瘤免疫微环境的研究进展

<正>作为世界第五大常见的恶性肿瘤,结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发病率仅次于乳腺癌、肺癌、前列腺癌和非黑色素皮肤癌^[1]。世界卫生组织与国际癌症研究机构关于2020年世界最新肿瘤负担的调查结果表明,在全球范围内,CRC的每年新发病例数高达193万,在肿瘤总发病人数中排第3位;每年死亡人数为94万,在死亡总人数中排第2位^[2]。作为人口大国,我国CRC的发病率和死亡率一直居高不下。随着医学技术的发展,CRC的治疗逐渐形成以手术治疗为主,放化疗、靶向治疗、免疫治疗等为辅的综合治疗方法,特别是免疫治疗的兴起,     

DNA错配修复基因hMSH2蛋白表达与胃癌发生关系的探讨

[目的]探讨DNA错配修复基因hMSH2蛋白表达与胃癌发生以及不同病理类型之间的关系.[方法]应用免疫组化技术检测hMSH2基因在38例胃癌患者的癌组织及其癌旁组织的蛋白表达.[结果]癌细胞阳性表达率(52.63%)明显高于癌旁上皮细胞(23.68%)(P＜0.05);同例中癌细胞和癌旁上皮细胞均表达的为15.79%,同例癌细胞表达而癌旁上皮细胞不表达的例数(14/38)明显多于癌旁上皮细胞表达而癌细胞不表达的例数(3/38)(P＜0.05);高中分化腺癌、低分化腺癌和粘液癌表达阳性率分别为33.33%、52.63%、和70%.[结论]DNA错配修复基因hMSH2蛋白表达与胃癌发生密切相关.     

应用GINI检出微卫星不稳定型大肠癌中新的突变基因

目的 应用GINI筛选微卫星不稳定型大肠癌中新的突变基因.方法 采用NMD抑制药物emetine(依米丁)联合actmomycin D(放线菌素D),分别处理高度微卫星不稳定型(MSI-H)大肠癌细胞株HCT116和微卫星稳定(MSS)的大肠癌细胞株HT29,以及对照的MSS乳腺癌细胞株,以全基因组cDNA芯片检测经药物处理和不经药物处理的细胞株的mRNA表达变化.经过芯片数据分析筛选在HCT116细胞中mRNA表达量特异性升高的基因,以DNA直接测序法检测突变,并在22个大肠癌细胞株及30例原发癌组织中验证.结果 在MSI-H大肠癌细胞株HCT116中筛选出新的突变基因ARV1和ZNF294,并在8个MSI-H细胞株中验证其突变率分别为37.5%和87.5%,在20例MSI-H原发大肠癌组织中突变率均为35%.结论 基于NMD抑制的新的基因筛选方法GINI,能够相对快速、有效的检出发生突变的基因.     

大肠腺瘤及其癌变错配修复基因hMLH1和hMSH2表达与细胞增殖的关系

目的探讨错配修复基因hMLH1和hMSH2表达在大肠癌发生中的作用及其与细胞增殖间的关系.方法采用免疫组织化学染色法对63例大肠腺瘤、20例腺瘤癌变和20例大肠癌的hMLH1和hMSH2、PCNA和Ki-67表达进行检测.结果大肠腺瘤、癌变和大肠癌中hMLH1、hMSH2阳性表达率逐渐降低,与正常大肠粘膜相比相差显著(P＜0.01),腺瘤不典型增生分级增加其阳性率亦逐渐降低.腺瘤不典型增生Ⅱ、Ⅲ级、腺瘤癌变和大肠癌中hMSH2-者,其PCNA LI显著低于hMSH2 者(P＜0.05);hMSH2表达缺失的大肠癌,其Ki-67 LI较阳性者显著降低(P＜0.05).3组大肠病变hMLH1阳性与阴性表达组间,其PCNA LI和Ki-67 LI无差异显著性.结论提示错配修复基因突变或功能缺失与大肠癌的发生有关,可能系大肠癌发生过程中的早期事件,并对大肠肿瘤细胞增殖活性有所影响.     

中国人散发性大肠癌中微卫星DNA不稳定的研究

目的：探讨中国人散发性大肠癌中微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定及复制差错与大肠癌生物学行为的关系。方法：选择１０ 个微卫星位点, 应用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对３９ 例散发性大肠癌组织进行检测。结果：在多个位点上发现了较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定（ Ｍ Ｉ） ,其中 Ｄ３ Ｓ１３１７ 位点上 Ｍ Ｉ为４４ ％ , Ｄ３ Ｓ９６６ 上 Ｍ Ｉ为２６ ．６ ％ , Ｄ２ Ｓ１２３ 和 Ｄ２ Ｓ１１９ 上 Ｍ Ｉ分别为３６ ％ 和２５ ．７ ％ 。结论： Ｍ Ｉ阳性率和肿瘤组织学分类无明显相关性,而与肿瘤组织的分化程度、浸润程度等有显著的相关关系,因而微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 可以为肿瘤的早期诊断及患者预后判断提供帮助。同时,在散发性结肠癌中也存在较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定,这可能与某种 Ｄ Ｎ Ａ 错配修复基因发生突变有关。     

Increased sensitivity of colorectal cancer cell lines with microsatellite instability to 5-fluorouracil in vitro

Objective To study the relationship between sensitivity to 5-FU and the status of a panel of microsatellite loci in three human colon cancer cell lines.Methods Cell viability in several concentrations of 5-FU was assessed by the MTT test. Expression of hMSH2 and hMLH1 in LoVo, SW480 and SW1116 cells were analyzed by immunocytochemical staining. Ten mononucleotide and dinucleotide microsatellite loci were analyzed by the PCR-SSLP-silver staining method. Results By MTT assay, it showed that LoVo cells were more sensitive than SW480 and SW1116 cells (0.8 μmol/L, 2.2 μmol/L and 1.9 μmol/L, respectively,P&lt;0.05). By immunocytochemical staining, hMSH2 was expressed in SW480 and SW1116 cells but not in LoVo cells, while hMLH1 was positive in all three cell lines. The PCR-SSLP-silver staining of 10 microsatellite loci revealed that LoVo cells had a different pattern of electrophoretic bands compared with SW480 and SW1116 cells, manifesting both additions and band-shifts. Conclusion Together with hMSH2 and hMLH1, the status of a panel of microsatellite loci may be used as convenient predictors for drug-optimization or prognosis-assessment in colorectal cancer patients before chemotherapy.     

TS表达与MMR状态联合检测在结直肠癌预后中的研究进展

胸苷酸合成酶(thymidylate synthetase, TS)是5-Fu(5-fluorouraci)发挥抗代谢作用治疗胃肠道恶性肿瘤的重要作用靶点,TS mRNA及蛋白表达与5-FU类药物的敏感性和抗药性密切相关。DNA错配修复MMR蛋白缺乏可以引起微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)。MSI亚型与5-FU类药物的疗效及结直肠癌患者预后相关。目前,将TS表达或MMR状态单独作为结直肠癌预后因子仍存在争议,因此联合检测TS表达与MMR状态 来判断结直肠癌患者预后的研究受到越来越多的关注。     

新疆维吾尔族 MT1XT20基因与微卫星不稳定结直肠癌相关性研究

检测临床手术切除43例新疆维吾尔族结直肠癌患者癌组织及相应癌旁正常组织中微卫星不稳定（MSI）状态,探讨 MT1XT20基因与新疆维吾尔族 MSI 结直肠癌发生的关系。通过聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术对新疆维吾尔族 MT1XT20基因与 MSI 结直肠癌检测及分析。在43例新疆维吾尔族患者中24例癌组织发生微卫星改变,总检出率为55.81%;8例发生一个微卫星位点改变,两个以上位点改变的有16例,癌旁正常组织中未检测到微卫星改变。在 MT1XT20位点上存在较高频率的微卫星改变,提示可能存在 MT1XT20基因与新疆维吾尔族 MSI 结直肠癌发病密切相关,为 MSI 结直肠癌的早期诊断提供了有意义的检测指标。     

黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤错配修复蛋白和微卫星表型检测的临床意义

目的 探讨黏膜相关淋巴组织结外边缘区（extranodal marginal zone of mucosa-associated lymphoid tissue, MALT）淋巴瘤中错配修复（mismatch repair, MMR）蛋白和微卫星表型检测的意义。方法 应用免疫组化法检测40例MALT淋巴瘤（实验组）和20例良性淋巴组织增生（对照组）中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2的表达情况。应用多重荧光PCR-毛细管电泳法检测实验组的微卫星表型,分析其与MMR蛋白的关系。结果 （1） MMR蛋白表达分为3种: 缺失（-）,强弱不等阳性（+++）,强阳性（+++）。MMR蛋白在实验组表达构成比差异有统计学意义（P<0.05）,与MLH1[0%(-),45%(+++),55%(+++)],MSH2[0%(-),60%(+++),40%(+++)],PMS2[2.5%(-),45%(+++),52.5%(+++)]相比,MSH6[7.5%(-),80%(+++),12.5%(+++)]在实验组缺失率和强弱不等表达率最高。MMR蛋白在实验组有3例（7.5%）部分缺失,2例为MSH6缺失,1例为MSH6和PMS2共同缺失;在对照组有1例PMS2缺失5%（1/20）,两组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。MSH6在87.5%（35/40）实验组淋巴滤泡内存在斑驳阳性现象,在对照组淋巴滤泡内未见斑驳阳性（0%）,两组免疫形态比较差异有统计学意义（P<0.05）。（2） 在实验组中,35例（87.5%）为微卫星稳定（microsatellite stability, MSS）,1例（2.5%）为低频率微卫星不稳定（microsatellite instability-low, MSI-L）,4例（10%）为高频率微卫星不稳定（microsatellite instability-high, MSI-H）。5例MSI中有2例MSI-H为MSH6缺失,其余3例MSI未出现MMR蛋白缺失。35例MSS中有1例为MSH6和PMS2共同缺失。（3） PCR-毛细管电泳法检测的MSI-H率（10%,4/40）高于免疫组化检测MMR蛋白缺失的检出率（7.5%,3/40）,但两组比较差异无统计学意义（P>0.05）,检出率一致性达92.5%（37/40）。结论 MALT淋巴瘤可检测到低频率的MSI-H表型和MMR蛋白缺失,可能具有潜在的临床意义;MSH6在MALT淋巴瘤的淋巴滤泡内存在高频斑驳阳性的免疫形态,可辅助鉴别肿瘤性淋巴滤泡。     

肺癌组织中hMSH2及PCNA的表达及意义

目的探讨人类错配修复基因hMSH2及增殖细胞核抗原PCNA在肺癌组织中的表达及意义。方法运用免疫组织化学S-P法对56例肺癌组织中的Hmsh2及PCNA的表达进行检测。结果56例肺癌组织中Hmsh2阳性表达率为28.6%,分化程度高者阳性率显著高于分化程度低者(P<0.01),有淋巴结转移者Hmsh2阳性率低于无淋巴结转移者(P<0.05),不同病理组织学类型之间Hmsh2表达无显著差别(P>0.05);56例肺癌组织中分化程度高者PCNA标记指数高于分化程度低者(P<0.01),有淋巴结转移者PCNA标记指数高于无淋巴结转移者(P<0.05),hMSH2阴性表达者的PCNA标记指数明显高于hMSH2阳性表达者(P<0.01),不同病理组织学类型之间PCNA标记指数无显著差别(P>0.05)。结论hMSH2基因的缺陷及PCNA的表达与肺癌的发生发展过程并与分化程度及有否淋巴结转移有关。