淫羊藿苷促进羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化

背景:寻找一种简单有效、安全价廉且可替代生长因子的生物活性物质,是骨组织工程的客观要求,中药来源的植物黄酮淫羊藿苷可通过提高成骨细胞功能促进成骨,但是对骨髓间充质干细胞的作用尚未明确.目的:探讨淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-09/2009-02在南方医院创伤骨科实验室完成.材料:清洁级成年雄性中国青山羊3只,由南方医院实验动物中心提供.淫羊藿苷标准品由中国药品生物制品检定所提供,批号110737-200312,纯度98.3%.方法:体外分离培养羊骨髓间充质干细胞,传至第3代后,按2×103/孔接种至96孔板,分别加入100,10,1,0.1μmol/L淫羊藿苷培养基150μL进行培养;设立对照组,仅加入等量普通DMSO培养基.主要观察指标:采用MTT法检测细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,通过碱性磷酸酶试剂盒测定细胞碱性磷酸酶活性,放免法检测细胞骨钙素表达,茜素红染色观察钙化结节形成能力.结果:0.1 μ mol/L淫羊藿苷可明显促进羊骨髓间充质干细胞增殖,增加S期和G2/M期细胞数量:随着淫羊藿苷浓度的增加,促细胞增殖活性降低,100 μmol/L淫羊藿苷表现为明显的抑制细胞增殖作用.淫羊藿苷呈剂量依赖性促进羊骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达.10,100 μ mol/L淫羊藿苷诱导钙化结节形成能力优于0.1和1μmol/L淫羊藿苷,对照组羊骨髓间充质干细胞未形成钙化结节.结论:淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化具有促进作用,可被视为一种良好的骨诱导活性因子.     

淫羊藿对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响简

背景：中药淫羊藿一直以来被用于骨质疏松的治疗和骨缺损的修复。目的：探讨淫羊藿对骨髓间充质干细胞成骨性分化的影响。 方法：应用数据库文献检索的方法获取淫羊藿对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响研究的文献,对符合研究标准的文献进行深入的分析。通过检测淫羊藿诱导骨髓间充质干细胞成骨性分化过程中碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥蛋白、转化生长因子β、骨形态发生蛋白、骨钙素、骨涎蛋白等,了解淫羊藿对骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化的机制。结果与结论：淫羊藿对骨髓间充质干细胞的影响呈剂量依赖性,在诱导培养的早期淫羊藿苷可以提高细胞的磷酸酶活性,在诱导培养的晚期增加细胞钙化结节数,促进骨钙素分泌量,显著提高转化生长因子β1、骨形成蛋白2、胰岛样生长因子1、骨桥蛋白和骨涎蛋白等的表达水平。淫羊藿对骨髓间充质干细胞的增殖和成骨性分化有促进作用,可作为一种良好的骨诱导活性因子。     

不同浓度淫羊藿含药血清干预骨髓基质干细胞的成脂分化

背景:如何抑制骨髓基质干细胞成脂分化,促进其成骨分化将是防治骨质疏松的新途径之一。目的:观察不同浓度淫羊藿含药血清对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞成脂分化的干预作用。方法:全骨髓培养法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,12只SPF级SD雌性大鼠按体表面积的方法给予淫羊藿水提液,药物以蒸馏水定容至所需浓度,相当于临床剂量的20倍、10倍、5倍灌胃,连续灌胃7d后眼眶取血,观察各组干预后7d成脂分化情况。结果与结论:中药低、中剂量含药血清组的成脂率低于空白组(P<0.01、0.05),说明中药淫羊藿含药血清发挥了抑制骨质疏松骨髓基质干细胞向脂肪细胞分化的作用。中药各剂量组的组间比较差异无显著性意义(P>0.05),但3组成脂率数值方面以中剂量组最佳。     

不同浓度淫羊藿含药血清干预骨髓基质干细胞的成脂分化

背景：如何抑制骨髓基质干细胞成脂分化,促进其成骨分化将是防治骨质疏松的新途径之一。目的：观察不同浓度淫羊藿含药血清对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞成脂分化的干预作用。方法：全骨髓培养法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,12只SPF级SD雌性大鼠按体表面积的方法给予淫羊藿水提液,药物以蒸馏水定容至所需浓度,相当于临床剂量的20倍、10倍、5倍灌胃,连续灌胃7d后眼眶取血,观察各组干预后7d成脂分化情况。结果与结论：中药低、中剂量含药血清组的成脂率低于空白组（P〈0.01、0.05）,说明中药淫羊藿含药血清发挥了抑制骨质疏松骨髓基质干细胞向脂肪细胞分化的作用。中药各剂量组的组间比较差异无显著性意义（P〉0.05）,但3组成脂率数值方面以中剂量组最佳。     

淫羊藿与骨代谢研究现状

淫羊藿（Hera Epimdii）为小蘖科植物，李时珍在《本草纲目》中记载具有“益精气，坚筋骨，补腰膝，强心力”的功效。现代药理研究发现淫羊藿的主要成分是淫羊藿黄酮类、淫羊藿多糖、淫羊藿甙、淫羊藿苷和淫羊藿次苷等，临床应用广泛，本文就其与骨代谢研究现状综述如下：     

人脂肪来源干细胞的分离、培养及成骨分化的研究

目的体外分离、培养、扩增及鉴定人脂肪来源干细胞（human adipose-derived stem cells,hASCs）,并向成骨诱导分化,为临床骨组织重建提供种子细胞。方法应用胶原酶消化法和贴壁筛选法相结合从人手术切除的脂肪组织中提取hASCs。MTS法绘制hASCs生长曲线;利用流式细胞术检测hASCs表面标志;以低糖DMEM含10%FBS及1%青/链霉素为基础培养基,含1nM地塞米松,10mM磷酸甘油,0.05mM维生素C的条件培养基连续培养4w进行体外成骨诱导,并利用硫酸茜红素S（Alizarin Red S）染色检测钙沉积情况。结果成功从人脂肪组织中分离、提取了hASCs并在体外扩增。hASCs呈成纤维细胞样生长。生长曲线显示hASCs增生分裂能力活跃。hASCs表面标志表达CD29,CD44,CD73,CD105和CD166,不表达CD31,CD34,CD45和HLA-DR。成骨诱导4w后,经硫酸茜红素S染色可见：细胞呈复层生长,细胞外富集细胞外基质,基质经染色呈现橘红色,数量多,成结节状或成片状存在,并出现钙盐结节,证明有钙盐沉积。结论成功建立了一种简单有效的体外分离和培养hASCs的方法。获得的hASCs生长增殖旺盛、保存方便,具有多向分化能力。hASCs可以作为细胞移植治疗和组织工程理想的种子细胞。     

淫羊藿苷对骨髓间质干细胞增殖及分泌血管内皮生长因子、碱性成纤维生长因子的影响

目的:研究淫羊藿苷对骨髓间质干细胞(MSCs)增殖及分泌血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)的影响.方法:不同浓度梯度的淫羊藿苷诱导MSCs,采用MTr法检测MSCs在490 nm处光吸收值,并用EIISA测定VEGF和bFGF的含量.结果:10-7和10-8mol/L两个诱导组在诱导48和72 h时与空白对照组比较,能明显促进MSCs增殖和分泌VEGF和bFGF(P<0.01).结论:10-7和10-8 mol/L的淫羊藿苷作用48和72 h能促进MSCs增殖和分泌VEGF和bFGF     

淫羊藿苷对大鼠间充质干细胞骨向分化过程中转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2表达的影响

背景:淫羊藿苷作为补肾中药淫羊藿的主要有效成分,能够有效促进间充质干细胞向成骨细胞分化.目的:观察淫羊藿苷在诱导间充质干细胞骨向分化过程中对转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2表达的影响,阐释其可能的诱导机制.方法:运用全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞:以20 mg/L淫羊藿苷作为间充质干细胞药物干预浓度,根据干预条件的不同将实验分为;空白组、经典组(加经典成骨诱导剂)、淫羊藿苷组、淫羊藿苷+经组:ELISA法检测各组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达.结果与结论:经典组、淫羊蓍苷组、淫羊藿苷+经组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2值均高于空白组(P<0.05):各组第7天的转化生长因子β1,值高于14,21 d(P<0.01),各组不同诱导时间骨形态发生蛋白2值之间相比差异无显著性意义(P>0.05).提示上调转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达量可能是淫羊藿苷诱导各组促进间充质于细胞骨向分化的作用机制之一.     

淫羊藿苷对脓毒症小鼠急性肺损伤的作用

目的 探讨淫羊藿苷对脓毒症小鼠急性肺损伤的作用及机制.方法 按照随机数字表将8周龄雄性Balb/c小鼠随机分为3组:假手术组、模型组和实验组,每组16只.用盲肠结扎穿刺法建立脓毒症模型.实验组在造模后用淫羊藿苷(30mg/kg,灌胃)干预,假手术组及模型组给予等量0.5％DMSO灌胃.以称重法检测肺湿干重比值;伊文思蓝...     

淫羊藿苷在牙周炎治疗及骨缺损修复中的研究进展

淫羊藿苷(icariin,ICA)是小檗科淫羊藿属植物中的一种主要活性成分,具有多种生物活性如促进成骨、抑菌消炎及调节免疫等.牙周炎是牙周支持软硬组织的慢性炎症性疾病,其治疗的最终目的 是牙周组织的重建和骨缺损修复.目前牙周炎的常规治疗未能达到理想的牙周组织再生.近年来,组织工程技术迅猛发展,为牙周病治疗及骨缺损修复带...     

中药淫羊藿苷干预人工关节磨损微粒诱导的骨溶解

背景：人工关节周围产生骨溶解是关节松动失败的重要原因,各国学者都在寻求一种能有效抑制骨溶解反应的药物,以减少假体松动的发生。 目的：观察不同剂量淫羊藿苷干预人工关节磨损微粒诱导骨溶解的效果。 方法：将钛合金及骨水泥磨损微粒制成的混悬液分别置入清洁小鼠颅盖骨进行骨溶解建模后,空白组滴入生理盐水到颅盖骨中,药物干预组给予不同浓度的淫羊藿苷（剂量分别为30,60,120 mg/kg）灌胃,每日1次。建模2周后处死小鼠,在显微镜下观察小鼠颅盖骨的结构。经苏木精-伊红染色和免疫组化分析计算破骨细胞数量和小鼠颅盖骨溶解面积的变化。 结果与结论：与空白组比较,钛合金微粒和骨水泥微粒建模后的小鼠颅盖骨切片上的骨溶解陷窝数量及破骨细胞数明显增加,图像分析骨溶解陷窝面积也增大（P 〈0.05）。淫羊藿苷干预后骨溶解面积减小及破骨细胞数量减少（P〈0.05）,以120 mg/kg灌胃组最为显著,其次是60 mg/kg,30 mg/kg。结果可见钛磨损微粒和骨水泥磨损微粒能促进破骨细胞的增殖,诱导骨溶解;淫羊藿苷能抑制磨损微粒诱导的破骨细胞形成,从而抑制骨溶解。     

不同浓度淫羊藿苷修复骨损伤：争议与探索

背景：作为淫羊藿主要有效成分之一的淫羊藿苷,对于骨损伤后的修复具有重要作用。淫羊藿苷在体内的持续有效浓度对于骨损伤的修复至关重要。 目的：综述近年国内外淫羊藿苷对于骨修复的研究进展,探讨淫羊藿苷的药理活性浓度。 方法：第一作者应用计算机检索2000年1月至2013年10月PubMed数据（http：//www.ncbi.nlm. nih.gov/PubMed）及CNKI中国期刊全文数据库（http：//www.cnki.net/）有关淫羊藿苷对骨组织修复作用,或者与淫羊藿苷治疗骨损伤的相关基础研究文献。英文检索词＂icariin,concentration,bone＂;中文检索词＂淫羊藿苷,浓度,骨＂。排除重复性研究,共检索到76篇相关文献,44篇文献符合纳入标准。 结果与结论：利用淫羊藿苷的有效活性成分联合缓释支架材料,可以诱导骨髓间充质干细胞成骨分化,增强成骨细胞活性,抑制破骨细胞的吸收,从而起到修复骨组织的作用。淫羊藿苷促进细胞分化作用虽已得到肯定,但是否具有促进细胞增殖作用还存在一定的争议。研究发现,淫羊藿苷的药理活性浓度从10-8到10-5 mol/L不等,总体来看,10-8-10-5 mol/L应该是淫羊藿苷发挥其最佳药理活性可能出现的区间,但目前临床试验尚未开展,具体的持续给药浓度还不确定,这些都需要进一步研究探索。     

淫羊藿苷保护血管内皮细胞功能的研究进展

淫羊藿苷（ICA）是从淫羊藿总黄酮中提取的主要单体成分,是温阳补肾中药淫羊藿的主要活性成分之一,它不仅具有补肾壮阳,促进造血功能,抗血栓形成,增强机体免疫功能,预防骨质疏松,抗肿瘤,抗衰老等功效,而且对心脑血管,肾功能,生殖功能,免疫调节等都有作用。近年来,研究发现它对血管内皮细胞也具有抗氧化凋亡,增加血管内皮细胞的NO,进而增加冠状动脉（冠脉）血流等广泛的药理作用。现就将淫羊藿苷对血管内皮细胞药理作用的研究进展综述如下。     

高效液相色谱法测定肾宝合剂中淫羊藿苷的含量

目的建立高效液相色谱法（HPLC）测定肾宝合剂中淫羊霍苷的含量测定方法。方法色谱柱为DiamonsilC18,5μm,4.6 mm×250 mm,流动相为乙腈-水（27∶73）,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为270 nm,柱温30℃,进样量20μL。结果肾宝合剂中淫羊藿苷的含量测定标准曲线回归方程为：Y=2.188 217×104X-2 415.6,r=0.999 8;线性范围为：1.04～8.32μg.mL-1;回收率为97.8%,RSD为0.6%。结论 HPLC测定肾宝合剂中淫羊霍苷的含量重...     

脂肪源性干细胞成骨分化过程中成骨相关miRNA的表达模式

背景:miRNA在细胞分化等众多生理病理过程中起重要调控作用,可调节脂肪来源干细胞成骨分化。目的:筛选成骨分化相关miRNA,分析miRNA在脂肪来源干细胞成骨分化过程中的表达模式。方法:从皮下脂肪组织中分离、培养人脂肪来源干细胞。应用基因芯片技术筛选脂肪来源干细胞成骨诱导前后表达差异显著的miRNA,采用RT-PCR技术检测所筛选的miRNA在成骨诱导第7,14,21天上调/下调的相对表达强度,以ELISA试剂盒检测相应时间点成骨相关蛋白的表达情况。结果与结论:①倒置显微镜下观察,传3代后可获得均一性较高的脂肪来源干细胞,一定诱导条件下具有成骨、成脂、成软骨分化能力。②基因芯片技术筛选出成骨分化前后表达差异变化明显的9个miRNA,其中5个上调,4个下调。③成骨诱导第7天,miR-106a表达上调1.58倍(P<0.05)。第14天时,9个miRNA均表达上调。第21天时,5个miRNA表达上调,4个表达下调。④成骨相关蛋白骨钙素、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原及骨唾液酸蛋白的质量浓度在诱导成骨分化第7天即明显升高,第14天达到峰值,第21天略有下降。     

脂肪源性干细胞成骨分化过程中成骨相关miRNA的表达模式

背景：miRNA在细胞分化等众多生理病理过程中起重要调控作用,可调节脂肪来源干细胞成骨分化。目的：筛选成骨分化相关miRNA,分析miRNA在脂肪来源干细胞成骨分化过程中的表达模式。方法：从皮下脂肪组织中分离、培养人脂肪来源干细胞。应用基因芯片技术筛选脂肪来源干细胞成骨诱导前后表达差异显著的miRNA,采用RT-PCR技术检测所筛选的miRNA在成骨诱导第7,14,21天上调/下调的相对表达强度,以ELISA试剂盒检测相应时间点成骨相关蛋白的表达情况。结果与结论：①倒置显微镜下观察,传3代后可获得均一性较高的脂肪来源干细胞,一定诱导条件下具有成骨、成脂、成软骨分化能力。②基因芯片技术筛选出成骨分化前后表达差异变化明显的9个miRNA,其中5个上调,4个下调。③成骨诱导第7天,miR-106a表达上调1.58倍（P〈0.05）。第14天时,9个miRNA均表达上调。第21天时,5个miRNA表达上调,4个表达下调。④成骨相关蛋白骨钙素、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原及骨唾液酸蛋白的质量浓度在诱导成骨分化第7天即明显升高,第14天达到峰值,第21天略有下降。     

淫羊藿苷对骨髓间质干细胞增殖及分泌VEGF、bFGF的影响

目的：研究淫羊藿苷对骨髓间质干细胞(MSCs)增殖及分泌血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成因子纤维生长因子(bFGF)的影响。方法：不同浓度梯度的淫羊藿苷诱导MSCs，采用MTT法检测MSCs在490nm处光吸收值，并用ELISA测定VEGF和bFGF的含量。结果：10-7M和10-8M两个诱导组在诱导48h和72h时与空白组比较,能明显促进MSCs增值分泌VEGE和bFGE,P<0.01。结论：10-7M和10-8M能促进MSCs增值和分泌VEGE和bFGE。     

淫羊藿苷对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型超氧化物歧化酶活力的影响

目的:采用烟熏联合气管内脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)滴入方法建立慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pumonary disease,COPD)大鼠模型,探讨淫羊藿苷对COPD模型大鼠超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力的影响.方法:将50只雄性SD大鼠随机分为5组,健康对照组(A组),不予处理;COPD模型组(B组)、淫羊藿苷组(C组)、泼尼松组(D组)、淫羊藿苷加泼尼松组(E组),建立大鼠COPD模型并分别给予蒸馏水(10 mL/kg)、淫羊藿苷(100 mg/kg)、泼尼松(5mg/kg)、淫羊藿苷(50 mg/kg)加泼尼松(2.5 mg/kg)灌胃治疗.在光镜下观察大鼠肺组织病理改变,测定外周血和肺组织匀浆中SOD活力.结果:光镜下A组肺泡结构完整,肺泡壁无炎性细胞浸润;B组肺泡壁及肺间隔炎性细胞浸润,肺间隔断裂、融合,肺实质破坏,形成广泛性肺气肿;C组肺泡壁及肺间隔内炎性细胞浸润明显,肺泡腔扩大,部分出现融合,但肺实质结构破坏程度轻;D组肺组织病理改变近似A组;E组改变介于C组与D组之间,肺泡腔扩大,肺间隔断裂、融合不明显,肺组织炎性浸润明显轻于C组.与A组比较,B组肺组织匀浆及外周血SOD活力显著下降(P＜0.01);C、D、E组肺组织匀浆SOD活力下降(P＜0.01),外周血中SOD活力呈下降趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).与B组比较,C、E组肺组织匀浆及外周血SOD活力下降较轻(P＜0.05);C、E组SOD活力下降趋势相似,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:淫羊藿苷能减轻肺组织局部及外周血中的SOD活力的下降,减轻氧化应激对肺组织的损伤.