葛根素治疗去卵巢小鼠骨量丢失的疗效及对RANKL/RANK/OPG信号通路的影响

目的探讨葛根素治疗去卵巢小鼠骨量丢失的疗效及对核因子κB受体活化因子（RANKL）/核因子κB受体活化因子配体（RANK）/骨保护素（OPG）信号通路的影响。方法采用随机数字表法将30只雌性12周龄C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组和葛根素治疗组,每组10只。模型组和葛根素治疗组小鼠切除双侧卵巢并结扎输卵管,假手术组小鼠去除卵巢周围等量的脂肪组织。术后第3天,葛根素治疗组小鼠给予100mg/kg剂量的葛根素（溶于0.4ml0.9%氯化钠溶液）灌胃干预,隔天1次,持续8周。模型组小鼠给予0.4ml0.9%氯化钠溶液灌胃,隔天1次,持续8周。假手术组小鼠不作处理。治疗8周后,摘取小鼠双侧股骨,采用微型计算机断层扫描仪扫描检测骨密度（BMD）和骨微结构变化,ELISA法检测血清β-I型胶原交联羧基末端肽（β-CTX）和抗酒石酸酸性磷酸酶5b（Trap5b）水平,抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap）染色观察破骨细胞数量,qRT-PCR检测骨组织RANKL和OPGmRNA表达情况。结果与假手术组比较,模型组小鼠BMD、骨体积分数（BV/TV）、骨小梁数目（Tb.N）均减少,骨小梁间距（Tb.Sp）增宽,血清β-CTX、Trap5b水平均升高,破骨细胞数量增加,RANKLmRNA表达水平升高,OPGmRNA表达水平、OPG/RANKL比值均降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与模型组比较,葛根素治疗组BMD、BV/TV、Tb.N均增加,Tb.Sp变窄,血清β-CTX、Trap5b水平均降低,破骨细胞数量减少,RANKLmRNA表达水平降低,OPGmRNA表达水平、OPG/RANKL比值均升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论葛根素能够延缓去卵巢小鼠骨量丢失,其机制可能是通过调控RANKL/RANK/OPG信号通路,抑制破骨细胞介导的骨吸收过程。     

绝经后骨关节炎内源性雌激素水平对软骨下骨影响的实验研究

目的 探讨雌激素水平对绝经后骨关节炎软骨下骨的影响。方法 以清洁级健康雌性SD大鼠为动物模型,分为去势模型组和对照组,术后2月处死大鼠,用放免法测量血清雌二醇水平,对右膝胫骨内髁软骨下骨进行骨形态计量学分析。结果 E2水平模型组较对照组显著下降(P<0.01);模型组与对照组骨小梁面积百分数（%Tb.Ar）、骨小梁宽度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁分离度（Tb.Sp）、每毫米破骨细胞数（Oc.N/mm）差异有显著性(P<0.01);模型组荧光周长百分率（%L.Pm）、矿化沉积率（MAR）、骨形成率（BFR/BV）、骨形成率（BFR/BS）低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论 绝经后骨关节炎大鼠雌激素水平明显下降,软骨下骨骨转化率增高,软骨下骨质硬度增加,改变局部的生物力学状态,导致软骨的损伤,加速骨关节病的发生与发展。     

鹿角壮骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨细微结构及骨代谢影响的实验研究

目的 观察鹿角壮骨胶囊对去卵巢大鼠骨细微结构及骨代谢的影响并探讨其机制.方法 120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆组,鹿角壮骨胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组,除假手术组外,其余均切除双侧卵巢,干预12周后检测各组血清雌二醇(E2)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)、骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型原胶原N-端前肽(PINP)和Ⅰ型胶原交联C-末端肽(S-CTX)水平,采用双能X线骨密度测量仪测定左侧股骨骨密度;显微镜下观察右股骨小梁的结构变化,并检测右股骨组织形态计量学参数平均骨小梁面积(％Tb.Ar)、骨小梁宽度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)以及骨小梁数目(Tb.N),采用免疫组织化学染色法检测大鼠股骨骨保护蛋白(OPG)及核因子-κ β受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达.结果 ①鹿角壮骨胶囊各组血清E2、TRACP-5b及BALP高于模型组(P＜0.01),血清PINP和S-CTX水平低于模型组(P＜0.01);②鹿角壮骨胶囊各组股骨骨密度高于模型组(P＜0.01);③鹿角壮骨胶囊各组Tb.Ar、Tb.Th和Tb.N显著高于模型组(P＜0.01),Tb.Sp显著低于模型组(P＜0.01);④鹿角壮骨胶囊各组股骨OPG蛋白表达高于模型组(P＜0.01),股骨RANKL蛋白表达低于模型组(P＜0.01).结论 鹿角壮骨胶囊不仅能有效地改善去卵巢大鼠激素水平和骨细微结构,而且可提高大鼠骨密度,降低骨转化.     

壮骨止痛方对去势大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察壮骨止痛方对去势大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其治疗骨质疏松的机制。方法:60只3月龄SD雌性大鼠,按体重随机分为假手术组、空白组、模型组、壮骨止痛方组,15只/组。模型组、壮骨止痛方组采用双侧去卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型,假手术组切除卵巢周围相应质量脂肪。术后5 d开始药物干预,连续13 w。取股骨,观察病理形态及Wnt7b、TCF3、GSK3β蛋白的表达。结果:与模型组相比,壮骨止痛方组骨小梁密度及梁髓比均提高。与模型组相比,壮骨止痛方组骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达增高,GSK3β蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论:壮骨止痛方可通过上调去势大鼠骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达,下调GSK3β蛋白表达来调控Wnt/β-catenin信号通路。     

神经生长因子联合牙髓干细胞可促进大鼠种植体周围骨结合

目的 研究神经生长因子（NGF）联合牙髓干细胞（DPSCs）调节种植体周围骨结合的作用及机制。方法 培养SD大鼠的DPSCs并随机分3组,每组实验重复4次。对照组：不含药物的培养基处理;NFG组：含有NGF的培养基处理;NFG+K252a组：含有NGF及TrkA拮抗剂+K252a的培养基处理。成骨诱导后检测钙结节,Western blot检测RUNT相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）的表达量。SD大鼠建立股骨种植模型并分为对照组、DPSCs组、DPSCs+NGF组、DPSCs+K252a组、DPSCs+NGF+K252a组,8只/组。干预4周后进行种植体周围骨组织的micro-CT检查及HE染色并采用Western blot检测RUNX2、OCN表达量。结果 NGF组DPSCs的钙结节数目及RUNX2、OCN的表达水平均高于对照组（P<0.05）;NGF+K252a组DPSCs的钙结节数目及RUNX2、OCN的表达水平均低于NGF组（P<0.05）。DPSCs组及DPSCs+NGF组大鼠种植体周围骨组织的骨矿密度（BMD）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）及RUNX2、OCN的表达水平均明显高于对照组（P<0.05）且DPSCs+NGF组种植体周围骨组织的BMD、Tb.Th、Tb.N及RUNX2、OCN的表达水平高于DPSCs组（P<0.05）;DPSCs+K252a组种植体周围骨组织的BMD、Tb.Th、Tb.N及RUNX2、OCN的表达水平与DPSCs组无显著差异（P>0.05）;DPSCs+NGF+K252a组种植体周围骨组织的BMD、Tb.Th、Tb.N及RUNX2、OCN的表达水平均明显低于DPSCs+NGF组（P<0.05）。结论 NGF联合DPSCs能够促进大鼠种植体周围骨结合,NGF通过TrkA促进DPSCs成骨分化是可能的分子机制。     

熊果酸衍生物对糖尿病骨质疏松骨重塑的影响

目的 探讨熊果酸衍生物(ursolic acid derivatives,UAD)对糖尿病骨质疏松骨重塑的影响。方法 将小鼠随机分为对照组、STZ组与US组三组,取胫骨进行基因和蛋白表达测定以及组织形态学分析,测定骨体积/总体积(BV/TV)、骨小梁数(Tb.N)、小梁厚度(Tb.Th)和骨密度/总体积(BMD／TV)等各项骨形态参数,分别检测骨保护素/核因子-κΒ受体活化剂(OPG/RANKL)比值与骨代谢关键调控因子mRNA的表达。结果 STZ组与对照组相比,OPG/RANKL比值和OPG显著降低且RANKL升高;US组显著增加OPG/RANKL比值。STZ组MMP9和CAII mRNA表达显著高于对照组,而STZ组Runx2和TGF-β的mRNA表达显著低于对照组。US组同时逆转糖尿病小鼠MMP9、CAII、RUNX2和TGF-β mRNA的表达。结论 UAD通过促进成骨细胞分化、新生骨形成及抑制破骨细胞骨吸收功能来逆转STZ诱导的骨小梁损伤作用进行骨重塑。     

骨保护素在雌性去势大鼠不同时期骨组织的表达

目的观察骨保护素（OPG）在雌性大鼠去势前后骨组织的变化及与相关指标的关系,探讨其在骨质疏松发病机制中的作用.方法SD雌性大鼠随机分为生长期组、成年组、去卵巢（OVX）后1,2,3月组和对照组.测定血清碱性磷酸酶（AKP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）;双能x线吸收法测定骨密度（BMD）.取胫骨进行骨组织计量学测定及免疫组织化学方法结合图像分析进行OPG半定量分析.结果去势大鼠术后1月骨质疏松模型成功.对照组OPG随月龄逐渐增加,去卵巢后表达下降.单位骨小梁面积中OPG与TRAP存在正相关;骨组织总OPG与BMD正相关,与AKP负相关.结论去势引起OPG骨组织表达下降.OPG在骨质疏松发病机制中发挥重要作用.     

二至丸干预去卵巢骨质疏松大鼠骨重建的效应及机制

目的?明确二至丸对去卵巢骨质疏松大鼠骨重建的干预作用,并探究其作用机制。方法?采用卵巢切除术制备绝经后骨质疏松症动物模型,确认造模成功后,将60只模型大鼠随机分为模型组、阿仑磷酸钠组、氟化钠组、二至丸组、女贞子组、墨旱莲组等6组,另设假手术组10只。各组分别予:生理盐水（5?mL/kg）、阿仑磷酸钠（1?mg/kg）、氟化钠（5?mg/kg）、二至丸（2?g/kg）、女贞子（1?g/kg）、墨旱莲（1?g/kg）灌胃,1次/日,连续8周,假手术组给药与模型组相同。采用Micro-CT扫描大鼠股骨;双能Ｘ线吸收法测定模型股骨颈部位的骨密度（BMD）;椎体压缩法检测骨最大载荷量;ELISA法检测血清骨碱性磷酸酶（BALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）、核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）、β链蛋白（β-catenin）及趋化素（chemerin）;qPCR检测骨组织RANKL、OPG、β-catenin及chemerin基因表达。结果?二至丸、女贞子和墨旱莲可显著增加骨量,提升骨最大载荷量,并修复骨微结构。血清中,二至丸、女贞子和墨旱莲可明显降低TRACP-5b、RANKL、chemerin表达水平,并提升BALP、OPG、β-catenin表达水平。骨组织中,二至丸、女贞子和墨旱莲组明显抑制RANKL、chemerin mRNA表达,并促进OPG、β-catenin mRNA表达增加。结论?二至丸可有效改善去卵巢骨质疏松大鼠的骨代谢异常,其作用机制与调控chemerin密切相关。      

强骨合剂通过Wnt3a/β-catenin/VEGF信号通路促进血管生成改善围绝经期大鼠骨质疏松的研究

  目的  探讨强骨合剂对围绝经期骨质疏松SD大鼠的疗效及其可能的作用机制。  方法  采用HPLC建立强骨合剂标准指纹图谱。将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、强骨合剂高剂量(12 g · kg-1)组、低剂量(6 g · kg-1)组, 每组10只。双侧卵巢切除法制备围绝经期大鼠骨质疏松模型, 分别灌胃给予生理盐水,雌二醇,高、低剂量强骨合剂, 连续给药30 d。记录大鼠体质量和子宫质量, 检测大鼠骨力学相关指标, 股骨HE染色观察成骨细胞量及骨小梁面积。qPCR检测Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG mRNA表达水平; 免疫荧光检测VEGFR-2、CD31, 评价血管生成情况; Western blot检测股骨组织Wnt3a、p-GSK3β、VEGF、β-catenin、Lamin蛋白表达情况。  结果  10批次提取的强骨合剂指纹图谱相似度均大于0.9, 表明10批样品质量稳定。与模型组比较, 雌二醇组,强骨合剂高、低剂量组可显著改善大鼠子宫指数、骨密度、骨力学性能指标(P < 0.05, P < 0.01), 明显改善骨微结构, 提高股骨组织中Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG mRNA水平(P < 0.05, P < 0.01), 以及VEGF、CD31、Wnt3a、p-GSK3β、β-catenin、Lamin蛋白表达水平(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  强骨合剂可能通过Wnt3a/β-catenin信号通路调节VEGF表达, 促进血管生成, 从而提高大鼠骨密度, 改善骨组织形态, 进而发挥抗骨质疏松的作用。      

大黄蒽醌对大鼠糖皮质激素性股骨头坏死的保护作用

目的 观察大黄蒽醌对大鼠糖皮质激素性股骨头坏死的保护作用。方法 162只SD雌性大鼠随机分为正常组、模型组、实验组,分别给予生理盐水、醋酸泼尼松（3.5 mg/kg）、大黄蒽醌（70 mg/kg）+醋酸泼尼松（3.5 mg/kg）灌胃13周。每组在3、5、7、9、11、13周处死9只大鼠,进行股骨头Micro CT扫描及重建、骨形态计量学分析。结果 MicroCT重建显示在3周时3组骨小梁结构近乎相似;13周时,模型组骨小梁结构遭到严重破坏,全骨结构特性破坏,实验组接近于正常组。与正常组比较,模型组与实验组在3、5、7、9、11周骨小梁骨密度（Tb.BMD）、骨体积分数（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）水平下降,结构模型指数（SMI）、骨小梁分离度（Tb.Sp）升高,且模型组更为显著(P<0.01或0.05);13周时,实验组Tb.BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N水平高于模型组,SMI、Tb.Sp水平低于模型组（P<0.01）。结论 大黄蒽醌对大鼠糖皮质激素性股骨头坏死有预防作用。     

熟地配伍黄芪对去卵巢大鼠骨代谢的影响

目的观察熟地配伍黄芪对去势大鼠骨代谢及调控途径的影响。方法去卵巢造模后的60只大鼠随机分为六组,黄芪组,熟地组,熟地配伍黄芪组,雌激素组,模型对照组,空白对照组。分别给予相应的药物灌胃,连续给药16w,处死动物取血清和骨组织,进行骨代谢及wnt通路表达相关指标检测。结果与模型组比较,熟地-黄芪组大鼠血清TRACP水平明显降低(P0.05),IGF-1水平明显升高(P0.05);大鼠骨组织Wnt2、LRP5及β-catenin mRNA表达水平均出现明显升高(P0.01)。结论熟地配伍黄芪可能通过Wnt/LRP/β-catenin信号通路的激活,降低破骨细胞活性,促进成骨细胞生成,从而达到调节骨代谢的目的。     

高脂饮食诱导肥胖小鼠模型中氧化应激、炎症递质对骨代谢的影响及其可能机制

目的：探讨高脂饮食诱导肥胖小鼠模型中氧化应激和炎症递质对骨代谢的影响及其可能机制。方法：选用5周龄C57BL/6雄性小鼠16只,随机平均分为正常饮食组、高脂饮食组,分别用正常饮食和高脂饮食喂养。于实验16周末,测各组动物体质量,处死后取内脏脂肪并测量内脏脂肪/体质量比值;用ELISA法测量血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）、血清骨钙素（OC）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）;分别用硫代巴比妥酸（TBA）法和羟胺法检测胫骨骨组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性;用骨密度仪检测右侧股骨骨密度（BMD）;分别用免疫组织化学技术和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测骨组织骨保护素（OPG）和核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）蛋白及mRNA的表达;HE染色光镜观察左侧股骨组织形态学改变。结果：与正常饮食组相比,高脂饮食组体质量、内脏脂肪/体质量比值、骨组织RANKL mRNA/OPG mRNA比值、血清TRACP-5b、IL-6和TNF-α水平、骨组织RANKL表达及骨组织MDA均明显升高,差异均具统计学意义（P＜0.05）;而血清OC水平、骨组织OPG表达、骨组织SOD及BMD均明显下降,差异均具统计学意义（P＜0.05）。在组织形态学上,发现高脂饮食组股骨干骺端骨小梁分布稀疏,骨小梁变细及断裂,伴骨髓腔中有大量脂肪浸润。各指标的相关分析结果显示：BMD与骨组织SOD呈正相关（r=0.627, P＜0.01）,与内脏脂肪/体质量比值（r=-0.858,P＜0.01）、骨组织MDA均呈负相关（r=-0.538,P＜0.01）;SOD与OPG mRNA呈显著正相关（r=0.637,P＜0.01）,与TNF-α（r=-0.673,P＜0.01）、IL-6（r=-0.874,P＜0.01）、RANKL mRNA（r=-0.760,P＜0.01）及RANKL/OPG比值（r=-0.768,P＜0.01）呈显著负相关;而MDA与TNF-α、IL-6、OPG mRNA、RANKL mRNA以及RANKL/OPG无显著相关性（P＞0.05）。结     

重组人骨保护素对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL 、OPG蛋白表达的影响

目的：探讨重组人骨保护素（rhOPG）对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG蛋白表达的影响,为rhOPG应用于牙周炎的治疗提供实验依据。方法选择22只Wistar大鼠,采用随机数字表法选择2只健康大鼠作为健康组;其余20只作为实验组,建立牙周炎大鼠模型,再将其分为实验对照组（n＝10）和rhOPG组（n＝10）,rhOPG组大鼠于上颌第2磨牙牙周袋间隙局部注入10 mg／kg rhOPG治疗。实验对照组大鼠于相同部位注射等体积灭菌注射用水。采用链霉素抗生物素蛋白‐过氧化物酶（SP）检测牙槽骨RANKL、OPG蛋白的表达。结果与健康组比较,实验组大鼠牙槽骨OPG表达水平较低,差异有统计学意义（P＜0．05）,而RANKL表达水平两组差异无统计学意义（P＞0．05）。与实验对照组比较,rhOPG组大鼠牙槽骨组织OPG蛋白的表达水平明显上调,而RANKL蛋白的表达明显下调（P＜0．05）。治疗后rhOPG组大鼠牙槽骨中OPG表达水平明显高于治疗前,而RANKL表达水平明显低于治疗前,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 rhOPG能调节牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG的表达。     

长期应用糖皮质激素对大鼠骨组织中HMGB1、RAGE、OPG和RANKL表达的影响

目的:观察长期应用糖皮质激素(GC)对大鼠骨组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖化终产物受体(RAGE)、骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响,探讨其导致激素性骨质疏松症的相关机制。方法:将48只健康成年SD大鼠随机分为低、中、高剂量GC组和对照组,每组12只。低、中、高剂量GC组大鼠分别给予肌肉注射醋酸泼尼松龙7.0、12.5、25.0 mg·kg^-1,对照组大鼠同时给予相同部位注射等量生理盐水。所有大鼠每周注射2 次,干预4周后取材。ELISA法检测大鼠血清中HMGB1、OPG和RANKL水平,HE染色检测大鼠骨组织病理形态学,免疫组织化学和Western blotting法检测大鼠骨组织中HMGB1、RAGE、OPG和RANKL蛋白的表达水平。结果:ELISA检测,各剂量GC组大鼠血清中HMGB1水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);OPG水平均较对照组降低,且随GC剂量增加OPG水平呈下降趋势,其中高剂量GC组与对照组和低、中剂量GC组OPG水平比较差异有统计学意义(P<0.05);各剂量GC组大鼠血清中RANKL水平均较对照组升高,且随GC剂量增加呈上升趋势,其中高剂量GC组与对照组和低、中剂量GC组RANKL水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色, 低剂量GC组大鼠股骨组织接近正常骨组织,中剂量GC组大鼠股骨组织镜下见软骨下区出现骨小梁变细,骨小梁间隙内出现肉芽纤维组织,可见坏死骨细胞及空骨陷窝;高剂量GC组大鼠股骨组织骨小梁紊乱并存在骨折,脂肪细胞空泡变性,骨髓腔水肿,造血细胞稀少,骨小梁周边成骨细胞数量减少,多核破骨细胞增多。免疫组织化学和Western blotting法检测,各剂量GC组大鼠骨组织中HMGB1蛋白表达水平均较对照组明显升高(P<0.05),各剂量GC组大鼠HMGB1蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);各组大鼠骨组织中RAGE蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);各剂量GC组大鼠骨组织中OPG蛋白表达水平均较对照组明显降低(P<0.05),各剂量GC组大鼠OPG蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);中和高剂量GC组大鼠骨组织中RANKL蛋白表达水平均较对照组明显升高(P<0.05),中剂量GC组大鼠骨组织中RANKL表达低于高剂量组(P<0.05)。结论:大鼠使用过量GC后,骨组织中HMGB1水平升高,OPG/RANKL比例降低,这可能是激素性骨质疏松症的发病机制之一。     

去甲斑蝥素对去势骨质疏松症小鼠骨微结构影响的研究

目的观察去甲斑螯素对去势骨质疏松症小鼠骨微结构的影响,探讨其防治骨质疏松症的可行性。方法40只雌性C57BL-6J2月龄小鼠随机分为低剂量组、高剂量组、假手术组和去卵巢组,每组10只。除假手术组外,其它3组均通过摘除双侧卵巢建立小鼠骨质疏松模型。建模8周后,各组每日对应给予腹腔注射相应浓度的去甲斑螯素溶液或0.9%氯化钠注射液,连续注射4周。处死各组小鼠后用显微CT检查分析小鼠股骨远端骨小梁骨密度、骨体积分数（BV/TV）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）和骨小梁间隔（Tb.Sp）。结果去卵巢组骨小梁骨密度、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均低于假手术组,Tb.Sp高于假手术组（均P＜0.05）;低剂量组与高剂量组骨小梁骨密度、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均高于去卵巢组,Tb.Sp均低于去卵巢组（均P＜0.05）。结论去甲斑螯素能有效减少卵巢摘除引起的骨量丢失,具有剂量依赖性,是一种治疗骨质疏松症的一种潜在选择。     

姜黄素对骨质疏松大鼠种植体骨结合的促进作用

目的：探讨姜黄素对骨质疏松大鼠种植体骨结合的影响,阐明其的作用机制。方法：45只大鼠随机分为对照组（植入螺纹钉）、模型组（骨质疏松模型+植入螺纹钉）和姜黄素组（骨质疏松模型+植入螺纹钉+姜黄素治疗）,每组15只。显微CT检查各组大鼠种植体周围骨组织的相对骨体积分数（BV/TV）、平均骨小梁粗度（Tb.Th）、骨小梁间隙（Tb.Sp）、平均骨小梁数量（Tb.N）和骨结合指数（OI）,亚甲基蓝-碱性品红染色检查骨组织形态表现,计算骨结合率和松质骨区骨量,扭矩测试仪测定种植体脱位扭矩。结果：与对照组比较,模型组和姜黄素组大鼠种植体周围骨界面BV/TV、Tb.Th、Tb.N、OI、骨结合率、松质骨区骨量和脱位扭矩均明显降低（P<0.01）,Tb.Sp明显升高（P<0.01）;与模型组比较,姜黄素组大鼠种植体周围骨界面BV/TV、Tb.Th、Tb.N、OI、骨结合率、松质骨区骨量和脱位扭矩明显升高（P<0.01）,Tb.Sp明显降低（P<0.01）。对照组大鼠种植体和骨结合紧密,种植体骨结合界面骨板较厚,骨小梁较密集;模型组大鼠种植体骨结合界面骨板比较薄,骨小梁稀疏;姜黄素组大鼠种植体骨结合界面骨板较厚,骨小梁较密集。结论：姜黄素可促进骨质疏松大鼠种植体愈合,改善种植体骨结合强度,增加种植体稳定性。     

PERK信号通路对实验性绝经后骨质疏松雌性大鼠成骨细胞分化的影响

目的：探讨实验性雌性大鼠绝经后骨质疏松（PMOP）治疗前后骨组织中PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG的变化,阐明PERK信号通路在PMOP发生中的作用。方法：复制雌性大鼠卵巢去势骨质疏松模型。45只大鼠分为正常对照组（大鼠不做处理,15只）、骨质疏松组（雌性大鼠卵巢摘除,15只）和骨质疏松治疗组（大鼠卵巢摘除后尾静脉注射雌激素,15只）。观察各组大鼠血清中Ⅰ型胶原（ColⅠ）、碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OCN）水平。饲养3个月后取各组大鼠股骨骨干做病理切片,RT-PCR法检测各组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG基因表达水平,Westernblotting法分析PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG蛋白表达水平。结果：与对照组比较,骨质疏松组大鼠血清中ColⅠ、ALP和OCN水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠血清中ColⅠ、ALP和OCN水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2和osterix基因表达水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,RANKL基因表达水平明显升高（P<0.01）;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2和osterix基因表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,RANKL基因表达水平明显降低（P<0.01）。与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,RANKL蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显上升（P<0.05或P<0.01）,RANKL蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。HE染色,与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中骨吸收陷窝变大,骨吸收增强,导致骨质流失;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨质吸收减弱,骨骼恢复正常结构。结论：雌性大鼠卵巢切除及注射雌激素治疗后,其骨组织中PERK表达趋势与成骨细胞转录因子Runx2和osterix变化一致,与破骨细胞转录因子RANKL表达相反,提示PMOP发病时成骨细胞功能减弱与PERK表达下降有关。     

17-β雌二醇对人牙周膜细胞骨向分化时核因子κB受体激动子配体和骨保护因子表达的影响

目的:探讨17-β雌二醇(E2)对人牙周膜细胞(hPDLCs)骨向分化时核因子κB受体激动子配体(RANKL)和骨保护因子(OPG)表达的影响.方法:采用剂量对照设计,评价四代hPDLCs分别在含有0.1%无水乙醇(对照组)、10^-10mol/L E2(生理剂量组)或10^-7mol/L E2(高剂量组)的矿化诱导培养基中培养至72 h,时间点的观察荧光定量RT-PCR检测RANKL和OPG mRNA的表达水平.结果:高剂量和生理剂量E2均下调hPDLCs的RANKLmRNA的表达水平.高剂量组随时间增加RANKL的表达水平逐渐降低,第24,48和72小时的表达水平分别为对照组的31.0%,23.6%和15.4%;生理剂量组各时间点分别为对照组的28.4%,87.3%和22.6%.不同剂量E2均上调hPDLCs的OPG mRNA的表达水平,尤以第72小时作用明显,生理剂量组表达水平为对照组的210.1%;高剂量组为对照组的171.3%.结论:17-β雌二醇可能通过下调hPDLCs骨向分化时RANKL的表达并上调OPG的表达抑制破骨细胞的分化和牙槽骨的吸收,从而发挥对牙周组织的保护作用.     

慢性间歇低氧对小鼠骨密度和骨代谢的影响

目的：探讨慢性间歇低氧（CIH）对骨密度（BMD）和骨代谢的影响。方法将16只12周龄C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为慢性间歇低氧组（CIH组）和正常对照组（CON组）,每组8只。CON组小鼠在正常环境下饲养,CIH组小鼠在间歇低氧环境下饲养,低氧暴露时间为每日9：00-17：00,6d/周,共8周。于8周末取血,用ELISA法测定血清抗酒石酸酸性磷酸5b （TRACP-5b）、骨钙素（OC）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;取右侧股骨检测其BMD;取左侧股骨观察骨组织形态学改变,并分别采用免疫组化和real- time qPCR法检测骨保护蛋白（OPG）和核因子-κβ受体活化因子配体（RANKL）和其mRNA表达。结果与CON组相比,CIH组小鼠BMD、血清OC水平及OPG/RANKL mRNA比值均明显下降（P＜0.05或0.01）,而血清TRACP-5b、IL-6和TNF-α水平、骨组织内RANKL和mRNA表达均明显升高（P＜0.05或0.01）;但骨组织内OPG和mR-NA表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）;小鼠股骨干骺端骨小梁分布稀疏,变细及断裂。血清IL-6水平与BMD呈负相关（P＜0.05）,与骨组织RANKL mRNA呈正相关（P＜0.01）;血清TNF-α水平与BMD呈负相关（P＜0.01）,与骨组织RANKL mRNA呈正相关（P＜0.05）。结论 CIH能导致骨吸收增加、骨形成下降和BMD下降,与低氧以及CIH引起的IL-6、TNF-α水平升高导致RANKL升高有关。     

Implication of Receptor Activator of NF-κB Ligand in Wnt/β-Catenin Pathway Promoting Osteoblast-like Cell Differentiation

Recent studies showed that activation of Wnt/β-catenin pathway promoted the differentiation of osteoblast-like cells in the arterial calcification, but its mechanism remains unknown. In this study, the hypothesis that Wnt/β-catenin pathway promotes the differentiation of osteoblast-like cells by upregulating the expression of receptor activator of NF-κB ligand (RANKL) was examined. LiCl was used to activate the Wnt/β-catenin pathway. The differentiation of osteoblast-like cells was observed by Von Kossa staining, calcium content assay, alkaline phosphatase (ALP) activity assay, and detection of osteocalcin expression. Real-time PCR was performed to detect the expression of RANKL and osteoprotegerin (OPG, the decoy receptor of RANKL) during the osteoblast-like cell differentiation. Different concentrations of OPG were added to the culture media respectively to inhibit the function of RANKL, and the change in the differentiation of osteoblast-like cells was evaluated. The results showed that when the Wnt/β-catenin pathway was activated by LiCl, the expression of RANKL was significantly in-creased, which coincided with the differentiation of osteoblast-like cells (P<0.05), and the OPG treatment could partly attenuate the promoting effect of Wnt/β-catenin pathway on the differentiation of osteoblast-like cells (P<0.05), but it failed to completely abolish such effect. It was concluded that activation of Wnt/β-catenin pathway promotes the differentiation of osteoblast-like cells by both RANKL-dependent and RANKL-independent mechanisms.