减味寿胎丸及其君药菟丝子提取物对人早孕滋养层细胞影响的实验研究

目的探讨减味寿胎丸提取物、菟丝子总提物的含药血清对正常人早孕细胞滋养层细胞(CTB)增殖及凋亡的调节作用。方法制备减味寿胎丸提取物、菟丝子总提物的含药血清,研究其对CTB细胞增殖、分化潜能及凋亡的影响。结果除5%菟丝子总提物高剂量组外,不同组别不同浓度的含药血清与空白对照组血清相比,吸光度值均有显著统计学差异(P0.05或P0.01)。菟丝子总提物高、低剂量组5%与20%含药血清吸光度值有显著统计学差异(P0.05)。各提取物10%含药血清分别培养细胞24 h后,S期细胞百分比均较空白对照组显著增加,G2/M期细胞百分比显著减少(P0.05或P0.01);干预48 h后,变化更加明显。结论菟丝子总提物高、低浓度的含药血清均可增加细胞的增殖活性,且呈明显的剂量依赖性。10%含药血清培养细胞24、48 h后,处于S期的细胞明显增多,阻滞在G2-M期细胞减少,表明含药血清可诱导细胞处于DNA合成期及有丝分裂期,促进细胞增殖,降低细胞凋亡的发生率。     

寿胎丸含药血清对自然流产患者滋养层细胞生物学特性的影响

目的探讨寿胎丸含药血清对自然流产(spontaneous abortion,SA)患者滋养层细胞增殖、侵袭、分泌等生物学特性的影响。方法体外分离培养正常妊娠人工流产及SA患者滋养层细胞,采用不同浓度(5%、10%、20%)的寿胎丸含药血清进行干预,以空白血清(正常对照)及地屈孕酮含药血清(阳性对照)作为对照,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、Transwell侵袭移动实验及ELISA法分别测定滋养层细胞增殖活力、周期分布、侵袭迁移能力及人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平。结果与正常对照组比较,干预24 h后,SA组细胞增殖活性明显降低(P0.05),凋亡细胞(亚G_0/G_1期)及G_2/M期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(均P0.05);Transwell实验示细胞侵袭及迁移能力明显降低;干预72 h分泌β-HCG水平亦明显降低(均P0.05);与SA组比较,地屈孕酮组及寿胎丸各浓度组细胞增殖活性均明显升高,凋亡细胞及G2/M期细胞比例明显降低,S期细胞比例明显升高,细胞侵袭及迁移能力均明显增强;干预72 h分泌β-HCG量均明显升高(均P0.05);滋养层细胞增殖活性、S期细胞比例、细胞侵袭及迁移能力及分泌β-HCG水平随着寿胎丸含药血清浓度增加而增强,且20%寿胎丸组对滋养层细胞的作用均优于地屈孕酮组(P0.05)。结论寿胎丸含药血清呈剂量依赖性地增强SA患者滋养层细胞的增殖活性、侵袭迁移力及分泌β-HCG能力,减少细胞凋亡,可能为寿胎丸防治SA的作用机制之一。     

川芎嗪通过抑制circ_0026462调控先兆子痫发展中滋养层细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨川芎嗪对先兆子痫发展中滋养层细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法 用左旋硝基精氨酸甲酯建立先兆子痫动物模型,并随机分为对照组、模型组和川芎嗪组,采用苏木素-伊红染色观察胎盘组织病理学变化。人绒毛膜滋养层HTR8/SVneo细胞和人绒毛膜癌JEG3细胞给予川芎嗪干预后,采用CCK-8实验、EdU实验、Transwell实验以及划痕实验检测细胞增殖、侵袭及迁移能力;利用NCBI在线数据库（GSE165324）分析先兆子痫患者来源的人脐静脉血管内皮细胞和正常人脐静脉血管内皮细胞中前8个上调的circRNAs;qRT-PCR法检测川芎嗪对HTR8/SVneo和JEG3细胞circRNA表达的影响,以及先兆子痫患者和对照组胎盘组织中的circ_0026462表达量;利用RNase R分析circRNA稳定性。circRNA过表达后,检测川芎嗪对HTR8/SVneo和JEG3细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。结果 川芎嗪可以改善左旋硝基精氨酸甲酯诱导的大鼠胎盘组织细胞肿胀、空泡化增加以及炎症细胞浸润现象,并促进滋养层细胞增殖、侵袭和迁移（P＜0.05）。与对照组比较,circ_0026462在先兆子痫患者胎盘组织中高表达（P＜0.05）。川芎嗪抑制滋养层细胞中circ_0026462的表达（P＜0.05）。circ_0026462过表达抑制滋养层细胞增殖、侵袭和迁移（P＜0.05）。此外,circ_0026462过表达能够逆转川芎嗪对滋养层细胞增殖、侵袭和迁移的促进作用（P＜0.05）。结论 川芎嗪通过抑制circ_0026462的表达促进滋养层细胞增殖、侵袭和迁移。     

寿胎丸治疗滑胎的研究现状

滑胎指堕胎、小产连续发生3次或以上者,亦称“数堕胎”。滑胎临床上以自然性和连续性即“屡孕屡堕”为特点,且每次发生堕胎、小产的时间多在同一妊娠月份。本病相当于西医妇产科学的习惯性流产,近年常用复发性流产取代习惯性流产,改为连续2次及2次以上的自然流产。中医学认为,肾藏精、主生殖,胞络系于肾,妇女孕育是否正常与肾气盛衰有直接的关系。因此,滑胎的病因病机多为身体虚弱,肾气不足,或房事不节,损伤肾精,以致冲任失调,胎元不固,治疗当以补肾安胎,调补冲任为大法。另外胎儿的生长与发育,既需要肾的固摄,也离不开血的滋养,故中医治疗流产多以补肾为本、养血为要。     

寿胎丸加减治疗胎漏、胎动不安探析

胎漏、胎动不安是因肾虚冲任不固,不能摄血养胎所致。临床多以寿胎丸加减治疗。药理实验研究表明,补肾药都有调节内分泌作用,有些有免疫调节作用,而健脾药能激发和促进细胞免疫。从中医理论、临床和药理、毒理实验研究等方面对寿胎丸治疗胎漏、胎动不安的研究作一探析。     

寿胎丸的药效学和毒理学研究

寿胎丸对ＲＵ４８６和己烯雌酚所致的两种动物流产模型均有显著的保胎作用，能促进小鼠幼鼠的子宫和卵巢发育，并对正常和妊娠大鼠离体子宫平滑肌的收缩频率和活动力有明显抑制作用，能显著对抗催产素引起的大鼠离体子宫平滑肌的强直性收缩。寿胎丸对小鼠着床无明显影响，急性毒性、长期毒性和生殖毒性试验表明动物口服寿胎丸无明显的毒副作用。     

寿胎丸对肾虚不孕大鼠卵泡发育及排卵的影响研究

本研究通过建立肾虚不孕动物模型,通过检测受试大鼠卵巢的卵泡数目、IGF-1mRNA、LHR-mRNA表达的强弱等相关指标,来阐明寿胎丸促进卵泡发育和卵巢排卵的干预环节,从分子生物学角度探讨其作用机制,旨在阐明寿胎丸治疗不孕症的作用及其可能靶细胞,进一步深化中药促排卵机制,深化祖国医学“肾主生殖”的理论,现将实验方法介绍如下。1实验材料1.1实验动物选用择期配种相同时期出生的雌性SD大鼠幼鼠70只,出生后母鼠乳至22日龄断奶,由专人饲养。随机分成正常组和实验组,正常组为15只,实验组55只。动物和饲料由湖南中医药大学实验动物中心提供。1.2实验药物克罗米芬:50mg/粒,批号:020502;丙酸睾丸酮注射液:25mg/ml,均购自湖南中医药大学第一附属医院。1.3实验器材lml注射器,消毒棉签,普通玻片,医用显微镜,95%、75%酒精,Harris苏木精染液,“DG6”染液,EA36染液,IGF-1mRNA原位杂交试剂盒(产品编号:MK1135-r),4%多聚甲醛固定液,LEICABIOMED双目显微镜,WS电热恒温培养箱,OPtimas彩色显微图像分析系统,原位杂交专用湿盒,冰冻切片机,动物天平。1.4实验条...     

寿胎丸对提高体外受精-胚胎移植临床妊娠率的影响

目的观察寿胎丸加味对提高体外受精-胚胎移植（IVF—ET）临床妊娠率的影响。方法将2001—2003年中山医科大学深圳泌尿外科医院试管婴儿生殖中心采用IVF-ET助孕术后的有随访条件者80例随机分为2组,治疗组40例,对照组40例,治疗组自胚胎移植后除常规肌注黄体酮外运用中医辨证辅助治疗,对照组仅常规肌注黄体酮,不予其他干预,对2组疗效进行观察和比较。结果治疗组40例,妊娠23例,临床妊娠率57．5％,平均孕激素水平（22．45±1．31）μg／L,妊娠流产率13．0％。对照组40例,妊娠12例,临床妊娠率30．0％,平均孕激素水平（10．18±0．89）μg／L,妊娠流产率25．0％,2组临床妊娠率、平均孕激素水平、妊娠流产率差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01,P〈0．05）。结论运用寿胎丸为基础方辨证治疗对提高IVF-ET临床妊娠率、降低妊娠流产率疗效显著优于单纯用黄体酮治疗。     

加味寿胎丸对乙肝免疫耐受患者肝功能的影响

目的:观察加味寿胎丸对乙肝免疫耐受患者肝功能的影响。方法:60例乙肝免疫耐受患者随机分为补肾透邪组、补肾组、透邪组,每组20例,分别采用加味寿胎丸、寿胎丸、柴胡青蒿颗粒内服,疗程3个月,治疗前后行血常规、尿常规、肝功、肾功、HBVM、腹部B型超声检查,疗程结束后,采用前后自身对照,组间对照研究方法。结果:补肾透邪组突破乙肝免疫耐受13例,有效率65%;补肾组8例,有效率40%;透邪组3例,有效率15%。结论:补肾透邪治法可以较好的突破乙肝免疫耐受,为抗病毒治疗创造条件。     

异甘草素对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的研究异甘草素对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 10、20、40、60、80、100、120μmol/L异甘草素处理HCT116、HT29细胞后,MTT法检测细胞毒性,流式细胞术检测HCT116细胞凋亡,Western blot法检测HCT116细胞中cleaved caspase-3、pJNK、JNK、pERK1/2、ERK1/2、pP38、P38蛋白表达,Transwell实验检测HCT116细胞侵袭和迁移。结果异甘草素对HCT116、HT29细胞的IC_(50)值分别为22.45、23.69μmol/L。与对照组比较,异甘草素组呈浓度依赖性地显著诱导HCT116细胞凋亡(P0.05),显著上调cleaved caspase-3蛋白表达(P0.05),显著抑制HCT116细胞侵袭和迁移(P0.05),显著下调pJNK/JNK、pERK1/2/ERK1/2、pP38/P38(P0.05)。结论异甘草素能抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关。     

小檗碱对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究小檗碱对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响。方法培养THP-1细胞并加入小檗碱后,MTT法检测细胞增殖。100 ng/mL PMA和20 ng/mL IL-4将THP-1细胞诱导成M2型肿瘤相关巨噬细胞,小檗碱预给药后,随机分为对照组、模型组、小檗碱组,细胞培养上清与A549细胞共培养。RT-PCR、Western blot、ELISA检测CD206、IL-10、TGF-β表达,Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果小檗碱最佳刺激浓度为20μmol/L。与模型组比较,小檗碱组可显著抑制CD206、IL-10、TGF-β表达(P0.05)。小檗碱可抑制THP-1细胞转化为M2型肿瘤相关巨噬细胞。结论小檗碱可调节A549细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2型巨噬细胞的转化有关。     

健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响

目的:观察健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响。方法:以TGF-β1诱导人肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(EMT)模型,制备健脾益气方大鼠含药血清,分别以0%、5%、10%、15%、20%、30%含药血清浓度干预人肝癌细胞SMMC-7721 12 h、24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,采用Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力。结果:健脾益气方对SMMC-7721 EMT细胞的增殖有抑制作用,且随含药血清浓度增高而递增,呈时间依赖性;12 h 10%含药血清,24 h 15%、20%、30%含药血清,48 h 15%含药血清与相对应浓度空白血清比较,均具有显著性差异(P0.01),其中以48 h 15%含药血清浓度对细胞增殖的抑制效果最明显。健脾益气方含药血清各个浓度组与对照组相比,细胞侵袭能力均有不同程度的下降,其中10%、15%、20%、30%浓度的含药血清都具有显著性差异(P0.01);而与空白血清组相比,15%、20%、30%浓度的含药血清均具有显著性差异(P0.01),其中以15%浓度的含药血清对细胞侵袭的抑制作用最明显。结论:15%健脾益气方含药血清作用48 h,对人肝癌细胞SMMC-7721EMT模型增殖与侵袭的抑制效果最好。     

半夏泻心汤含药血清对胃癌细胞来源外泌体诱导BMSCs增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨半夏泻心汤对胃癌细胞来源外泌体诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、迁移、侵袭的影响.方法 荧光染料1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐(Dil)标记胃癌细胞来源外泌体,制备半夏泻心汤含药血清.实验分为空白组,模型组,半夏泻心汤低、中、高剂量组及Shh阻断剂组,各组上室加入BM...     

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的探讨联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(NPs)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC-NPs)。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖,刘氏染色法检测细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,Western blotting检测与细胞周期、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白分子的变化。结果 HC-NPs可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞形态变圆,诱导细胞发生G2/M期阻滞,使细胞凋亡率明显增加(P<0.01),抑制细胞的侵袭和迁移。HC-NPs可下调磷酸化-信号转导和转录激活因子(p-STAT3)以及下游分子Cyclin D1、Survivin、Bcl-2及MMP-9的表达,上调Bax的表达。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

葫芦素B通过调控HERG1对膀胱癌细胞增殖、迁移侵袭和放射敏感性的影响

目的探讨葫芦素B通过调控HERG1对膀胱癌细胞增殖、迁移侵袭和放射敏感性的影响。方法葫芦素B(0.1、1、10μmol/L)处理膀胱癌细胞48 h;将si-NC、si-HERG1、pcDNA、pcDNA-HERG1转染至T24细胞;经pcDNA、pcDNA-HERG1转染后,分别加入10μg/mL葫芦素B培养48 h。MMT法检测各组细胞增殖情况;Transwell评估细胞的迁移和侵袭变化;细胞克隆形成实验测定细胞放射敏感性;RT-PCR检测T24细胞HERG1 mRNA表达;Western blot法检测蛋白表达。结果葫芦素B抑制T24细胞增殖、迁移、侵袭,HERG1mRNA及蛋白表达,呈浓度依赖型(P<0.05);增强T24细胞的放射敏感性。抑制HERG1表达可抑制T24细胞的增殖、迁移和侵袭,增强其放射敏感性(P<0.05)。过表达HERG1逆转了葫芦素B抑制T24细胞增殖、迁移和侵袭和放疗增敏的作用。结论葫芦素B能抑制膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭能力,并且增强细胞的放射敏感性,机制可能与调控HERG1基因有关。     

常春藤皂苷元对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨常春藤皂苷元对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,以及可能的机制。方法:培养人前列腺癌细胞株DU145,分别加入不同浓度常春藤皂苷元(25、50、100μg/ml)作用于DU145细胞,继续培养12、24、36、48h,采用MTT法检测不同浓度常春藤皂苷元对DU145细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;利用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;利用实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax、PI3K、Akt基因表达,利用Western blot检测Bcl-2、Bax、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达。结果:随着常春藤皂苷元浓度(25、50、100μg/ml)的增加,可显著抑制DU145细胞的增殖,这种抑制作用具有时间和剂量依赖性;随着常春藤皂苷元浓度(25、50、100μg/ml)的增加,DU145细胞细胞凋亡率升高;与对照组相比,常春藤皂苷元能显著抑制DU145细胞迁移和侵袭能力;常春藤皂苷元不同浓度组处理DU145细胞48h后,随着常春藤皂苷元浓度升高,Bcl-2、PI3K、Akt mRNA和蛋白相对表达量下降,而Bax mRNA和蛋白相对表达量升高。结论:常春藤皂苷元可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡发生,且表现出一定的剂量-反应关系,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

秦皮素通过下调p70S6K抑制人黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭研究

目的研究秦皮素对人黑色素瘤A375细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 A375细胞给予秦皮素和核糖体S6蛋白激酶(ribosome S6 protein kinase,P70S6K)抑制剂PF-4708671进行干预,采用细胞计数法考察秦皮素和PF-4708671对A375细胞增殖能力的影响;采用Western blotting法检测秦皮素和PF-4708671对m TORC1/p70S6K/S6通路关键蛋白及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达的影响;采用细胞划痕实验和Transwell实验考察秦皮素和PF-4708671对A375细胞迁移和侵袭的影响。结果秦皮素与PF-4708671均可显著抑制A375细胞的增殖、迁移和侵袭(P0.05、0.01)。秦皮素与PF-4708671均显著抑制p70S6K/S6通路活性,下调间质细胞标志蛋白和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)表达水平(P0.05、0.01)。结论秦皮素可能通过下调p70S6K抑制A375细胞的增殖、迁移与侵袭。     

乳移平含药血清对乳腺癌4T1细胞增殖和侵袭影响的实验研究

  目的：研究乳移平含药血清对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖与侵袭的影响,并探讨其作用机制。  方法：①制备不同浓度的乳移平含药血清(10%、20%、30%、40%),并以10%、20%、30%、40%空白血清作对照,采用噻唑蓝(MTT)方法测定含药血清对4T1细胞存活率的影响,筛选最佳作用浓度和最佳作用时间。②设空白对照组、TGF-β1对照组、TGF-β1 10%乳移平含药血清组、TGF-β1 20%乳移平含药血清组;除空白对照组外,其他组细胞都用2 mg/L的TGF-β1预处理3 h,再分别选择空白血清或含药血清作用48 h。采用Transwell侵袭实验检测含药血清对TGF-β1预处理的4T1细胞侵袭率的影响;Western blotting及Real-time PCR检测乳移平含药血清对经TGF-β1预处理的4T1细胞Smad4和Smad7表达的影响。  结果：①乳移平含药血清显著抑制4T1细胞的增殖活性;选择10%和20%作用浓度,48 h作用时间用于后续实验。②乳移平含药血清显著抑制TGF-β1诱导的4T1高侵袭能力,并且存在浓度依赖性;Western blotting和Real-time PCR结果显示,乳移平含药血清明显逆转了TGF-β1诱导的Smad4蛋白及mRNA的高表达,但对TGF-β1诱导的Smad7蛋白及mRNA表达量上调没有影响。  结论：乳移平含药血清能够抑制4T1的增殖和侵袭能力,其作用机制可能与调控TGF-β/Smads信号通路相关因子的表达有关。