中药饮片污染耐胆盐革兰阴性菌的考察

目的：考察中药饮片耐胆盐革兰阴性菌的污染状况。方法：依据2015年版《中国药典》微生物限度检查法草案中耐胆盐革兰阴性菌检查方法对中药饮片耐胆盐革兰阴性菌进行定性检查,对阳性样品进行定量检查,比较预培养2h和不预培养两种方法对耐胆盐革兰阴性菌定量检出的差异。结果：通过对17个品种174批中药饮片的考察,结果显示中药饮片耐胆盐革兰阴性菌污染比较严重,达81.0％。按2015年版《中国药典》中药饮片耐胆盐革兰阴性菌标准来判断,16.1％不合格,且预培养2 h和不预培养两种方法检验结果没有显著差异（ P＞0.05）。结论：本研究可为2015年版《中国药典》中药饮片耐胆盐革兰阴性菌限度标准的制定提供参考依据。     

中药饮片蒲黄、柴胡和青箱子中微生物污染情况考察

目的：考察3种中药饮片蒲黄、柴胡和青箱子中微生物污染状况。方法：每种饮片选取10个批次,进行需氧菌数、霉菌和酵母菌总数、耐热菌数、耐胆盐革兰阴性菌数、大肠埃希菌、沙门菌等检测。结果：饮片中需氧菌、霉菌和酵母菌、耐热菌的负载量很高,77%的饮片检出耐胆盐革兰阴性菌,43%检出大肠埃希菌,未检出沙门菌。经鉴定,3种饮片耐热菌主要为芽孢杆菌,耐胆盐革兰阴性菌主要为γ-变形菌纲细菌。结论：中药饮片微生物污染状况严重,饮片的微生物限度标准亟待完善,饮片生产加工过程控制亟待加强。     

消炎灵胶囊微生物限度检查适用性方法探索研究

目的 建立消炎灵胶囊的微生物限度检查适用性方法,并对不同省份3个企业48批样品进行微生物限度检查及结果分析。方法 按《中国药典》2020年版四部通则非无菌产品微生物限度检查方法(1105、1106和1107)进行方法探索研究。结果 本品对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌有一定的抑菌活性,需氧菌总数采用供试液稀释法(1∶50,每皿1 mL)、霉菌和酵母菌总数采用常规法计数回收率均能达到0.5～2要求;大肠埃希菌、耐胆盐革兰氏阴性菌和沙门菌采用常规法,阳性菌均能生长良好。结论 统一了消炎灵胶囊的微生物限度检查适用性方法,且方法可行;48批样品的微生物限度检查结果均符合规定。     

激光散射法和电阻抗法在全血血小板计数中的比较

目的探讨激光散射法和电阻抗法在全血血小板（PⅡ）计数的准确性。方法运用SYSTEMXT-2000i全自动血细胞分析仪同时检测电阻抗法血小板和激光散射法血小板,按电阻抗法将检测结果分为PLT〈50×10。·L～、（50—100）×10^9·L^-1、（100—300）×10^9·L^-1、〉300×10^9·L^-1共4组,将两种检测方法结果按误差分为：误差在10％以内标本212例,误差在10％以上标本150例,采用10g.L^-1草酸铵溶液稀释人工显微镜计数血小板,评价激光散射法和电阻抗法的准确性,以手工计数为准。结果电阻抗法和激光散射法计数血小板,在误差10％以内,两种方法在四组标本中差异均无显著性（P〉0．05）;在误差10％以上时,当PLT〈100×10^9·L^-1和〉300×10^9-L^-1。时,电阻抗法与显微镜法比较,差异均有显著性（P〈0．05）,而激光法与显微镜法比较,差异没有显著性（P〉0．05）;所有组别电阻抗法与显微镜法比较,差异均有显著性（P〈0．05）,而激光法与显微镜法比较差异均无显著性（P〉0．05）。结论电阻抗法计数血小板仍然是目前最经济有效的方法。对于低值和高值血小板检测,激光散射法比电阻法准确性高,人工显微镜复检是最客观准确的方法之一。     

中药饮片绞股蓝的微生物污染调查及风险评估

目的：考察湖南省17批中药饮片绞股蓝的微生物污染情况，分析其污染现状，并评估其潜在风险，为绞股蓝微生物限度检查项和标准的制定提供参考。方法：参考《中国药典》2020年版方法，对17批绞股蓝进行微生物计数、耐热菌计数和7种致病菌的检查，初步了解绞股蓝的生物负载水平。结果：17批样品需氧菌总数大于103CFU·g-1，霉菌和酵母菌总数大于102CFU·g-1，12批样品检出耐热菌，预培养2h处理有利于耐胆盐革兰氏阴性菌的检出。金黄色葡萄球菌、白色念球菌及梭菌的检出率为100%；大肠埃希氏菌检出率为65%；铜绿假单胞菌检出率为24%；沙门菌检出率0%。结论：绞股蓝饮片的微生物污染情况比较严重，应建立合理的微生物质量控制标准，完善中药饮片检查方法和评价标准，降低患者用药风险。     

细菌革兰氏染色改良两步法与经典四步法染色结果的临床评价

目的探讨革兰氏两步法的染色效果和实用性。方法用标准菌株及常规培养出的细菌作革兰氏两步法与四步法的染色比较。结果革兰氏两步法控制革兰氏阳性菌菌龄16～24h,革兰氏阴性菌菌龄20-28h,细菌涂片要分散均匀,A液6秒、B液3秒染色效果最好。革兰氏两步法与四步法染色结果经统计学分析差异无统计学意义（P〉0．05）。结论革兰氏两步法染色操作简单,步骤少,染色快,效果较好,临床工作中可取代革兰氏染色四步法。     

早期血清降钙素原对成人细菌性血流感染病原菌种属的鉴别价值

目的 探讨早期降钙素原水平对成人革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的诊断意义以及对病原菌种属的鉴别价值。方法 抽取医院2014年5月-2017年11月血培养结果阳性病例,筛选出符合要求病历374份(革兰氏阴性菌286例,革兰氏阳性菌88例);分组记录患者抽取血培养前后<12小时血清降钙素原(PCT)。采用受试者工作曲线(ROC曲线)分析早期PCT水平对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的诊断意义;并针对早期PCT水平对血流感染临床常见的革兰氏阴性菌四个种属病原菌(大肠埃希菌、肺炎克雷病菌、鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌)和革兰氏阳性菌四个种属病原菌(凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌属及链球菌属)的鉴别价值,使用Kruskal-wallis检验进行多组间比较,以P<0.05为有显著性差异。结果 革兰氏阴性菌组PCT水平[6.15(1.04-32.04)]显著高于革兰氏阳性菌组PCT水平[0.59(0.23-3.11)]。ROC曲线下面积0.749,P<0.001;当以1.805ng/ml为界点时,对革兰氏阴性菌诊断的敏感性为70%,特异性为71.6%。在鉴别菌属价值方面：革兰氏阴性菌中,铜绿假单胞菌组PCT浓度水平显著高于鲍曼不动杆菌组(P=0.011);革兰氏阳性菌中,链球菌属组PCT浓度水平显著高于凝固酶阴性葡萄球菌组(P=0.045),其它各组之间无统计学差异。结论 血流感染患者早期PCT水平对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的诊断效果显著,对病原菌种属的鉴别具有辅助作用。     

脑脊液细胞计数Diasys尿沉渣工作站检测法与血细胞计数盘法的比较

目的 比较用Diasys尿沉渣工作站对脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)进行红细胞(red blood cell,RBC)和白细胞(white blood cell,WBC)计数与血细胞计数盘法计数,探讨两者之间是否有差异.方法 用两种方法对同一支标本同时进行RBC和WBC计数,记录数据.结果 将所记录的数据检验分析,P＞0.05,即两种方法计数得到的结果无显著性差异.结论 Diasys尿沉渣工作站操作简便、直观,可以用于计数CSF中的RBC和WBC.     

中药饮片菊花、浙贝母的微生物污染状况及其微生物限度标准的研究

目的分析市售中药饮片菊花、浙贝母微生物污染的状况,并对其微生物限度检查法提出合理的建议。方法测定中药饮片菊花和浙贝母中的好氧微生物总数(TAMC)、霉菌总数(TYMC)、耐热菌数,并进行耐胆盐革兰阴性菌检查和其他相关的控制菌检查。结果菊花和浙贝母饮片的总体微生物污染程度很高;耐胆盐革兰阴性菌的污染比较严重,而且出现了较为异常的实验现象;而其他控制菌的污染程度较低。结论以中药制剂微生物限度标准的要求来制定中药饮片总体微生物限度标准是不现实的;对于控制菌,宜加快耐胆盐革兰阴性菌检查方法的研究,并优先制定该项目的微生物限度标准,而其他控制菌则可以参照中药制剂的要求制定标准。     

我院2008-2012年ICU常用抗菌药物用量与革兰阴性菌耐药性的相关性分析

目的探讨重症监护室(ICU)的常用抗菌药物用量变化与革兰阴性病原菌耐药率是否存在显著相关性。方法回顾性统计ICU常用8种抗革兰阴性菌的抗菌药物的DDDs/(100床·d),及同期4种革兰阴性菌的耐药率变化。结果头孢哌酮舒巴坦、亚胺培南、哌拉西林他唑巴坦用量与耐头孢哌酮舒巴坦、耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌和耐头孢哌酮舒巴坦、耐哌拉西林他唑巴坦、耐头孢吡肟的肺炎克雷伯菌的正相关性有统计学意义;左氧氟沙星的用量与耐哌拉西林他唑巴坦、耐头孢吡肟的鲍曼不动杆菌、耐头孢吡肟的铜绿假单胞菌和耐哌拉西林他唑巴坦的大肠埃希菌都呈显著性负相关。结论抗菌药物用量与一些革兰阴性菌耐药率存在显著的相关性,可为临床抗菌药物选择提供理论依据。     

中国药典2015年版八珍胶囊和八珍片微生物限度检查与探讨

目的 对八珍胶囊和八珍片微生物限度检查进行方法学验证并对检验结果和污染菌进行分析。方法 八珍胶囊和八珍片采用中国药典2015年版微生物限度检查法进行方法验证,对6家31批次的八珍胶囊和八珍片进行微生物限度检查,细菌和酵母菌鉴定采用VITEK2全自动微生物鉴定系统。结果 需氧菌总数、真菌和酵母菌总数验证中各菌的回收率均>0.5,大肠埃希菌检查、耐胆盐革兰阴性菌检查沙门菌检查各验证组均可检出阳性菌。污染的微生物主要是芽孢杆菌等药材原料和环境中常见的细菌和酵母菌。结论 建立满足中国药典2015年版要求的八珍胶囊和八珍片的微生物限度检查方法,需氧菌总数采用培养基稀释法、真菌和酵母菌总数采用常规法,大肠埃希菌检查、耐胆盐革兰阴性菌检查和沙门菌检查(针对八珍胶囊)都采用直接接种法。31批样品的微生物限度检查结果均符合规定,污染的微生物主要为药材原料和环境中常见的芽孢杆菌等。     

蒲地蓝消炎片微生物限度检查方法的建立及检验结果分析

目的:建立蒲地蓝消炎片微生物限度检查法,并对14个生产企业59批次产品的微生物限度检查结果进行分析。方法:按照《中国药典》2015年版对14家生产企业59批次的蒲地蓝消炎片进行微生物限度检查,细菌鉴定采用MALDI-TOF MS及VITEK 2全自动细菌鉴定试验系统。结果:需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验中各试验菌的回收率均为0.5~2.0;在控制菌检查方法适用性试验中,大肠埃希菌检查阳性对照组和供试品对照组检出大肠埃希菌;耐胆盐革兰阴性菌检查阳性对照组和供试品对照组检出大肠埃希菌和铜绿假单胞菌;沙门菌检查阳性对照组和供试品对照组检出沙门菌。样品主要污染的微生物是阴沟肠杆菌和其他环境常见污染菌。结论:建立蒲地蓝消炎片的微生物限度检查方法,14个生产企业59批次的微生物限度检查结果均符合规定。     

High-throughput screening for the assessment of time-dependent inhibitions of new drug candidates on recombinant CYP2D6 and CYP3A4 using a single concentration method

1. The inhibitory effects of various test compounds on recombinant human CYP3A4 activity assayed by fluorescent metabolite formation from 7-benzyloxyquinoline (7-BQ) and the effect of pre-incubation on inhibition were evaluated using the microtitre plate assay with multiple concentrations of test compounds (multiple concentration method). 2. Among the test compounds studied, ketoconazole inhibited CYP3A4 activity most extensively, followed by miconazole, troleandomycin, terfenazine and midazolam. The IC(50) values of other compounds exceeded 10 microM, but those of many compounds decreased after pre-incubation. The inhibitory effects of verapamil, amiodarone and diltiazem after pre-incubation were 205, 154 and 833 times greater than those in the case of co-incubation, respectively. 3. To assess the inhibitory effects more readily, the validity of the microtitre plate assay with a single concentration of the test compound (single concentration method) was studied. The accuracy of the automated dispensation and the coefficient of variation on enzyme activity were approximately 3%. 4. The IC(50) values estimated using the per cent of residual activity from the single concentration method matched closely those from the multiple concentration method. When the IC(50) value as inhibitor concentration was used for a single concentration method, the method enabled easy estimation of inhibitory patterns (such as competitive or time-dependent inhibition) on cytochromes P450. Therefore, from the ease of the technique, automation of the microtitre plate assay and application of the single concentration method might be useful for inhibitory assessment of cytochromes P450 more than that of current conventional methods.     

High-throughput screening for the assessment of time-dependent inhibitions of new drug candidates on recombinant CYP2D6 and CYP3A4 using a single concentration method

The inhibitory effects of various test compounds on recombinant human CYP3A4 activity assayed by fluorescent metabolite formation from 7-benzyloxyquinoline (7-BQ) and the effect of pre-incubation on inhibition were evaluated using the microtitre plate assay with multiple concentrations of test compounds (multiple concentration method).

Among the test compounds studied, ketoconazole inhibited CYP3A4 activity most extensively, followed by miconazole, troleandomycin, terfenazine and midazolam. The IC50 values of other compounds exceeded 10 (iM, but those of many compounds decreased after pre-incubation. The inhibitory effects of verapamil, amiodarone and diltiazem after pre-incubation were 205, 154 and 833 times greater than those in the case of co-incubation, respectively.

To assess the inhibitory effects more readily, the validity of the microtitre plate assay with a single concentration of the test compound (single concentration method) was studied. The accuracy of the automated dispensation and the coefficient of variation on enzyme activity were approximately 3%.

The IC50 values estimated using the per cent of residual activity from the single concentration method matched closely those from the multiple concentration method. When the IC_SO value as inhibitor concentration was used for a single concentration method, the method enabled easy estimation of inhibitory patterns (such as competitive or time-dependent inhibition) on cytochromes P450. Therefore, from the ease of the technique, automation of the microtitre plate assay and application of the single concentration method might be useful for inhibitory assessment of cytochromes P450 more than that of current conventional methods.     

巴洛沙星对泌尿道病原菌的体外抗菌活性

目的:评价巴洛沙星对泌尿道病原菌的体外抗菌活性。方法:收集泌尿道感染病人尿液中所分离到的249株病原菌,其中革兰阳性菌90株(金黄色葡萄球菌30株、表皮葡萄球菌27株、粪肠球菌18株、B溶血性链球菌15株)、革兰阴性菌159株(大肠埃希菌84株、肺炎克雷伯菌20株、肠杆菌属25株、奇异变形杆菌15株、铜绿假单胞菌15株),采用琼脂二倍稀释法,测定巴洛沙星与左氧氟沙星对该249株泌尿道病原菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:巴洛沙星对革兰阳性菌的MIC_(90)(2～8 mg·L~(-1))是左氧氟沙星MIC_(90)(2～16 mg·L~(-1))的1/4～1/2或相等,对革兰阴性菌的MIC_(90)(4～32 mg·L~(-1))是左氧氟沙星MIC_(90)(2～16 mg·L~(-1))的2～4倍或相等。结论:巴洛沙星对革兰阳性菌和革兰阴性菌均具有抗菌活性,其中对革兰阳性菌的作用稍强于或等于左氧氟沙星,对革兰阴性菌的作用等于或稍弱于左氧氟沙星。     

2,3,5-三苯基氯化四氮对菌落计数的影响研究

目的 判定不同浓度2,3,5-三苯基氯化四氮（TTC）对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌菌落、金黄色葡萄球菌总数的影响.方法 采用平皿计数法对不同TTC浓度的菌液进行细菌菌落总数计数的回收率试验.以0.9%的氯化钠作空白对照,观察细菌在不同浓度TTC的琼脂培养基中（每1mL相应浓度TTC于每100mL营养琼脂中）生长的差异.结果 加TTC实验组的菌落均出现不同程度的红色.TTC对革兰阳性菌代表菌株金黄色葡萄球菌有抑制作用,浓度越高抑制作用越明显.对革兰氏阴性菌则不敏感,几乎不出现抑制作用.结论 应用TTC作为指示剂进行菌落计数时,会造成一定程度上检测结果的误差,微生物工作者在进行菌落总数测定时应引起注意.     

改良三维试验与PCR法检测川东北地区产“超-超广谱”β-内酰胺酶革兰阴性杆菌

目的:调查川东北地区临床分离革兰阴性杆菌的耐药情况,建立筛选产超-超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)细菌的实验室方法。方法:收集自2008年1月-2009年6月从川北医学院附属医院临床分离的革兰阴性杆菌237株,采用琼脂二倍稀释法测定14种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)值,筛选出对头孢西丁和头孢他啶耐药的革兰阴性杆菌,采用改良三维试验与质粒结合实验筛选产SSBLs菌株,运用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测SSBLs中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型与AmpC基因型。结果:237株革兰阴性菌对多种抗生素存在较高的耐药率。对头孢西丁与头孢他啶同时耐药的革兰阴性杆菌共105株,对这105株革兰阴性杆菌进行改良三维试验与质粒结合实验,筛选出产SSBLs菌株共2株,包括1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌,其质粒编码的ESBLs基因型为SHV、TEM、CTX-M,AmpC基因型为ACT。结论:川东北地区首次发现产SSBLs革兰阴性杆菌;改良三维试验与PCR法可以用于确证耐药菌是否产SSBLs。     

氧化锌滑石粉洗剂微生物限度检查的方法适用性研究

目的 建立符合《中国药典》2015年版要求的氧化锌滑石粉洗剂的微生物限度检查方法。方法 采用离心沉淀联合薄膜过滤法进行样品前处理,对10批次的氧化锌滑石粉洗剂进行微生物计数检查和控制菌检查。计数检查：需氧菌总数使用TSA培养基检查,菌种为：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉;霉菌和酵母菌总数使用SDA培养基检查,菌种为白色念珠菌和黑曲霉,每种菌株分别制备加菌试验组和菌液对照组,每种培养基分别制备供试品对照组和阴性对照组,进行菌落计数,计算回收率。控制菌检查：应用铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌,设置菌液验证组、供试品对照组和阴性对照组,取各组培养物于相应培养基平板上划线,Microflex LT质谱仪进行菌种鉴定。结果 10批次微生物计数检查的5种菌株的回收率均在0.75~1.16;控制菌检查的菌液验证组均可检出铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌,供试品对照组和阴性对照组均未见菌生长,适用性验证合格。结论 氧化锌滑石粉洗剂的微生物限度检查方法经验证符合《中国药典》2015年版要求。     

头孢呋辛酯干混悬剂微生物限度检查的方法验证

目的：建立头孢呋辛酯干混悬剂微生物限度的检查方法并进行验证。方法：细菌计数、控制菌检查采用离心沉淀联合薄膜过滤法,霉菌及酵母菌计数采用常规法。结果：细菌、霉菌和酵母菌计数验证中各验证菌的回收率均大于70%,控制菌检查验证中可检出验证菌。结论：头孢呋辛酯干混悬剂的微生物限度检查方法可行。     

Evaluation of the ChemScan system for rapid microbiological analysis of pharmaceutical water

The ChemScan system is a new method for the rapid detection and enumeration of viable microbial cells. It is based on the fluorescent labeling of viable microorganisms collected on a filter membrane and their subsequent automated detection and enumeration by a laser-scanning instrument. The new method was evaluated for the testing of pharmaceutical water by comparison with the standard plate count method. The ChemScan system appeared to be at least as sensitive as the standard method. In some cases the results were equivalent for both methods, but for most water samples the ChemScan results were higher than the standard plate count and sometimes exceeded the latter by an order of magnitude or more.