扩张性心肌病患者心房Cx43蛋白的表达及其意义

目的:观察扩张性心肌病（dilated cardiomyopathy,DCM）患者心房连接蛋白43（Cx43）的表达、磷酸化的Cx43（pCx43）及其分布特征。探讨Cx43与房颤（atrial fibrillation,AF）之间的关系。方法: 18例接受心脏移植术的DCM患者中,8例无AF史且手术时为窦性心律（SR,SR组）,6例有AF史但手术时为SR（AF+SR组）,4例有AF史且手术时有AF（AF+AF组）。用超声心动图(ECG)测定左心房大小与左心室收缩功能;用免疫印迹法及免疫荧光染色法检测Cx43、pCx43及其分布。结果: DCM患者的左心房直径(LAD)、左室射血分数(LVEF)在SR、AF+SR、AF+AF组间均没有显著差异。与SR组相比,AF+SR组心房组织中Cx43和pCx43无显著差异;AF+AF组总Cx43的表达量及pCx43显著升高(P<0.01及P<0.05)。病理观察提示,AF+AF组Cx43和pCx43升高,Cx43向细胞两侧分布,且pCx43升高。结论: DCM患者的房颤节律伴随Cx43的表达、磷酸化及其分布异常。     

连接蛋白43表达的变化与心律失常的关系

近年研究表明,多种途径都可以改变连接蛋白43（connexin43,Cx43）的表达和分布,进而影响到心律失常的发生与进展。本文主要综述在房颤和骨骼肌成肌细胞心脏移植中,Cx43表达的变化,以及体外定向重离子流放射、缺血预处理、缝隙连接阻滞剂和阿片类物质对Cx43的影响,说明Cx43表达的变化与心律失常的关系。     

大鼠心肌急性缺氧时缝隙连接蛋白43磷酸化水平的改变及心律失常肽10对其影响

目的:研究急性缺氧时缝隙连接蛋白Cx43磷酸化水平的改变及抗心律失常肽(AAP)10对其影响。方法:大鼠体外心脏灌流模型,随机分为对照组、缺氧30min组、AAP10干预组,每组各9只。用Western-Blot技术检测Cx43磷酸化水平的改变,用免疫荧光双标结合激光扫描共聚焦成像技术显示Cx43分布的改变。结果:Western-Blot结果显示:缺氧30min组总Cx43蛋白表达下降(P<0.05),而去磷酸化的Cx43(NP-Cx43)蛋白表达不变。AAP10干预组能提高总Cx43蛋白表达(P<0.05),但对NP-Cx43蛋白表达无影响。而免疫荧光结果显示:缺氧30min组总Cx43和NP-Cx43蛋白分布均明显减少,且AAP10干预组仅能提高总Cx43蛋白表达,但对NP-Cx43蛋白无影响。结论:急性缺氧时细胞间通讯功能下降主要由于磷酸化的Cx43蛋白水平下降,而其中NP-Cx43蛋白的内化也可能参与该影响因素。而AAP10改善传导主要通过促进Cx43磷酸化而发挥作用。     

缝隙连接蛋白43及其S368位点磷酸化水平与甲基苯丙胺诱导的心肌毒性的关系

目的通过构建SD大鼠的甲基苯丙胺(METH)中毒模型与心肌细胞中毒模型,检测缝隙连接蛋白43(Cx43)及其S368位点磷酸化(p-Cx43)表达水平;检测吸食METH的人心肌组织内Cx43及其S368位点p-Cx43的表达情况,分析其与METH诱导的心肌毒性的关系,探讨Cx43及S368位点p-Cx43水平在METH诱导的心肌毒性中的作用。方法建立SD大鼠METH慢性中毒动物模型和新生SD大鼠心肌原代METH中毒细胞模型;提取蛋白,采用Western blot检测Cx43、p-Cx43蛋白的表达情况;分析Cx43及其S368位点p-Cx43水平与METH诱导的心肌毒性的关系。收集贵州医科大学法医司法鉴定中心中经毒化检验确认吸食METH的人心肌组织为实验组,无吸食任何毒品者为对照组;常规石蜡切片,HE染色观察2组心肌的结构改变;免疫组织化学染色法、Western blot检测Cx43及其S368位点p-Cx43的表达水平。结果 (1)在METH慢性中毒动物模型中Cx43及S368位点p-Cx43表达较对照组明显下降(P0.05);(2)在METH中毒细胞浓度、时间梯度模型中,Cx43及其S368位点p-Cx43表达量较对照组显著下降(P0.05);(3)与对照组比较,实验组人心肌细胞呈现萎缩、坏死及局灶性出血等病理改变;(4)与对照组相比,实验组人心肌组织中Cx43及S368位点p-Cx43表达水平降低,主要表现为心肌细胞之间闰盘处的棕黄色着色减少,部分呈现侧膜化改变;(5)实验组人心肌组织Cx43及S368位点p-Cx43蛋白表达较对照组下降(P0.05)。结论 METH能通过减少心肌中Cx43及其S368位点p-Cx43的表达,从而破坏心肌的组织结构,影响心脏的正常功能。     

大鼠Cx43基因慢病毒表达载体的构建及转染骨髓间充质干细胞表达的观察

目的:构建大鼠缝隙连接蛋白43(Cx43)基因的重组慢病毒表达载体,并转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),观察Cx43的表达。方法:采用RT-PCR技术获得大鼠Cx43基因,并将其连接到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pGC-FU中,重组获得慢病毒质粒pGC-FU-Cx43,将其与辅助包装质粒(pHelper1.0、pHelper2.0)一起共转染293T细胞,包装生产病毒并测定滴度。所获慢病毒感染大鼠BMSC后,采用荧光显微镜和Western blot方法检测Cx43的表达。结果:酶切证实Cx43基因已定向连入目的载体,测序结果显示,所构建的pGC-FU-Cx43重组慢病毒质粒序列与目标序列完全一致。获得的病毒滴度为2×109TU/ml。经分离、纯化得到BMSC;pGC-FU-Cx43转染BMSC后,可见大量EGFP表达,Cx43的表达量明显增加。结论:成功构建并包装获得较高滴度的重组慢病毒pGC-FU-Cx43。pGC-FU-Cx43可高效转染BMSC,Cx43表达增加,且实现稳定转染。     

力竭运动和运动预适应对大鼠心脏跨室壁复极离散度和缝隙连接蛋白43影响的研究

目的探讨力竭运动(EE)和运动预适应(EP)对大鼠心脏跨室壁复极离散度(TDR)、缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)的影响。方法雄性SD大鼠80只随机分为4组:安静对照(CC)组、运动预适应(EP)组、力竭运动(EE)组、运动预适应+力竭运动(EP+EE)组。记录各组大鼠室性心律失常发生率、T波峰末间期(Tp-e)值、QT间期(QTC)值。光镜和电镜下观察组织病理学改变。运用免疫荧光染色法、免疫印迹法检测各组大鼠心肌总Cx43(Total-Cx43)及磷酸化Cx43(P-Cx43)分布及量的改变。结果 EE组大鼠心律失常发生率为35%,EP+EE组则降为10%,有显著差异(P0.05)。EE组大鼠Tp-e、QTC分别为(42.4±1.9)ms、(31.9±1.3)ms,EP+EE组降为(36.5±1.8)ms、(26.7±1.0)ms,也均有明显差异(P0.05)。EP组、EE组、EP+EE组大鼠心肌TotalCx43、P-Cx43表达量均减少,但EP+EE组较EE组的Total-Cx43含量却明显升高(P均0.05)。Pearson相关分析,Total-Cx43、P-Cx43均与Tp-e、QTC呈负相关,有显著差异(P0.05)。结论力竭运动易引发室性心律失常,可能与心肌重构,心肌TDR增加,Total-Cx43、P-Cx43表达量降低有关,而EP则对其有显著保护作用。     

缺血再灌注对心肌细胞CX43表达的影响

目的检测缝隙连接通道蛋白43（Conexin43，CX43）在缺血再灌注中的心肌细胞基因表达和CX43通道蛋白变化情况，分析CX43变化的原因，判断CX43在心肌缺血再灌注中所起得作用。方法原代培养心肌细胞，建立缺血再灌注模型，分别于正常、缺氧30min、再灌注1h、2h、3h、6h搜集细胞。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测CX43mRNA表达、蛋白免役印迹法（Westernblot）检测CX43蛋白的含量。结果未用药干预的心肌细胞缺氧30min时CX43mRNA表达与蛋白含量和正常相比无显著差异（P〉0．05），再供氧1h、2h、3h．6h则分别减少了39．16％、45．00％、46．67％、51．67％。和正常相比差异显著（P〈0．01）。其中再供氧1h下降幅度最大。结论CX43在心肌细胞缺氧再灌注过程中mRNA表达与蛋白含量均是减低的，其中再供氧1h下降幅度最大。     

异型缝隙连接通道和磷酸化对心脏缝隙连接的调变

目的 检测由缝隙连接蛋白(connexin，Cx)43和Cx45组成的多种异型缝隙连接通道(her—eromultimeric gap junction channels，HGJC)和磷酸化对缝隙连接(gap junction，GJ)的调变作用。方法 将转染了编码为Cx43或Cx45的DNA后的Hela细胞放置在一起共同培养组成双侧和单侧异型GJ通道。显微注射若丹明123(rhodamine123，Rh)检测经200nmol／L十四(烷)酰佛波醇乙酸酯(12-0-tetrade—canoylphorbol-13-acetae，TPA)处理前后，在紫外光显示下由Cx43和Cx45所组成的不同GJ通道对荧光染料的偶联率(coupling ratio)。结果 在不同的GJ中，同型GJ通道Cx43(homotypie Cx43，HoCx43)偶联率最高。从Cx45侧注入荧光染料的单侧异型GJ通道45(mono-heteromeric Cx45-Cx43／45，MH45)偶联率较之从Cx43／45侧注入荧光染料的MH45、双侧异型GJ通道Cx43／45(bi-heteromeric Cx43／45，BH43／45)及同型GJ通道Cx45(homotypic Cx45，HoCx45)等的偶联率是最低的。根据HoCx43或HoCx45通道的偶联率对各型通道偶联率进行标准化处理。BH43／45和MH43通道的偶联率均较HoCx43降低。对MH45通道来说，从Cx43／45侧注射的通道偶联率大于从Cx45侧注射的偶联率。TPA处理后HoCx43的偶联率降低，而当Cx43和Cx45组合成BH43／45和MH43通道后其偶联率下降更显著。结论 Cx43和Cx45共同表达可构成BH43／45、MH43和MH45等异型通道，而这些通道可降低细胞间的通讯并对磷酸化的作用不敏感。单侧异型GJ通道的偶联率取决于染料注射的方向。     

伴浅表淋巴结肿大的HIV/AIDS病人的临床与病理特征

目的探讨淋巴结穿刺及病理组织检查,对伴浅表淋巴结肿大的艾滋病病毒(HIV)感染者/艾滋病(AIDS)病人的早期诊断的指导意义。方法对43例伴浅表淋巴结肿大的HIV/AIDS病人的临床表现、实验室检查、影像学及内镜检查、淋巴结活检病理学检查、治疗和转归情况进行分析。结果①男女比例9.8∶1,平均年龄33.6岁。②76.7%(33/43)病人淋巴结肿大发生在高效抗反转录病毒治疗(HAART)之前,20.9%(9/43)发生在HAART开始后5个月内。③临床表现:发热占88.4%(38/43),消瘦占48.8%(21/43),伴咳嗽咳痰和盗汗各占39.5%(17/43);90.7%(39/43)的病人肿大的淋巴结位于头颈部,86.0%(37/43)为多发,86.0%(37/43)淋巴结直径1～5cm,65.1%(28/43)伴深部淋巴结肿大。④实验室检查:81.4%(35/43)的病人伴有贫血,48.8%(21/43)CD4+T淋巴细胞计数<50个/μL,7.0%(3/43)CD4+T淋巴细胞计数50～100个/μL;86.0%(37/43)病人血沉增快。⑤影像学及内镜检查:65.1%(28/43)的病人伴深部淋巴结肿大,37.2%(16/43)为肺部炎症,32.6%(14/43)伴有肝大和/或脾大,30.2%(13/43)为肺结核。⑥淋巴结病理学检查:分枝杆菌感染占58.1%(25/43),马尔尼菲青霉病(PSM)和AIDS相关淋巴瘤(ARL)各11.6%(5/43)。⑦预后:多数病人预后良好,ARL预后较差。结论伴有浅表淋巴结肿大的HIV/AIDS病人,其临床表现复杂多样,以分枝杆菌感染、真菌感染和肿瘤多见。及时行淋巴结穿刺或活检进行病理检查,对早期诊断和治疗意义重大。     

缺血后处理对大鼠缺血再灌注心肌缝隙连接蛋白43的影响

目的观察缺血后处理对缺血再灌注心肌缝隙连接蛋白43（Cx43）的影响，进一步探讨其减少再灌注心律失常的可能机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血预处理组、缺血后处理组，每组8只。建立在体心肌缺血再灌注模型，观察心律失常的发生情况，应用免疫组织化学SP法检测cx43在各组缺血再灌注心肌中的表达，应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法半定量检测各组：Cx43的mRNA的表达水平。结果与假手术组比较，缺血再灌注组心律失常评分显著增高，心室肌Cx43含量显著降低、分布紊乱，Cx43的mRNA水平显著降低（P〈0．01），与缺血再灌注组比较，缺血后处理组的心律失常评分显著降低，心室肌Cx43含量增高、分布规律，Cx43的mRNA水平显著增高（P〈0．01）。结论缺血后处理能通过抑制Cx43蛋白降解和再分布、上调其mRNA水平起到保护Cx43蛋白的作用，进而减少再灌注心律失常的发生。     

地西他滨对白血病细胞系中连接蛋白43的作用和机制

目的:探讨地西他滨对白血病细胞中连接蛋白43(Cx43)的作用和机制。方法 :蛋白印迹法(Westernblot)检测去甲基化药物地西他滨对NB4-MR2、U937细胞中Cx43水平表达的影响以及加入蛋白酶体抑制剂MG132对Cx43表达的影响。实时定量PCR检测地西他滨对NB4-MR2、U937细胞中Cx43 RNA水平的影响。结果:地西他滨明显下调MR2细胞中Cx43表达,对其RNA水平没有明显影响;地西他滨明显缩短Cx43蛋白的半衰期。加入蛋白酶体抑制剂MG132可明显抑制地西他滨引起的Cx43蛋白的减少。结论:地西他滨通过蛋白酶体途径减少Cx43的水平,可能会影响其治疗效果。     

缝隙连接蛋白43与心律失常的研究进展

正缝隙连接是介导相邻细胞间离子和小分子信号物质直接交换的跨膜通道,心室肌细胞中主要表达为连接蛋白43(connexin43,Cx43),缝隙连接蛋白在维持心肌细胞的连接通讯功能,电信号传导和正常的节律性的收缩中起重要作用;Cx43的空间分布、数量、结构的异常均能影响缝隙连接电荷耦联和代谢耦联的功能,导致心律失常的发生,提示Cx43可能成为心律失常治疗的新靶点~([1])。本文就缝隙连接蛋白43与心律失常的关系做一综述。     

胃肠ICC网络中连接蛋白Cx43的研究进展

胃肠道各种细胞之间,如平滑肌之间、平滑肌和深部胃肠Cajal间质细胞(ICC-DMP)之间以及ICC-DMP和ICC-DMP之间存在缝隙连接,它主要由连接蛋白43(connexin43,Cx43)构成,其表达的异常与胃肠道疾病的发生密切相关。此文就胃肠道Cx43的研究进展作一综述。     

调心安神针法对室性心律失常模型兔心肌细胞Cx43磷酸化表达的影响

目的观察调心安神针法对室性心律失常模型兔心肌细胞缝隙连接蛋白43磷酸化(connexin-43phosphate,p-Cx43)的影响。方法采用兔耳缘静脉注射氯化钡的方法制作室性心律失常模型。40只新西兰兔随机分为对照组、模型组、针刺组、药物组,针刺组施以调心安神针刺法(取穴:灵台、神道、双侧内关、百会),药物组给予心律平灌胃。实验完毕后取兔左心室,Western印迹技术及激光共聚焦显微镜对p-Cx43的表达进行分析。结果模型组p-Cx43表达最低,药物组、针刺组略高于对照组。结论上调p-Cx43的表达可能是该针法治疗心律失常的机制之一。     

连接子蛋白43、上皮型黏附素和基质金属蛋白酶9在老年眼睑基底细胞癌患者癌组织中表达的关系

目的检测老年眼睑基底细胞癌患者癌组织中连接子蛋白(CX)43、上皮型黏附素(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达特征,关注三者的关系及临床意义。方法 98例老年眼睑基底细胞癌患者术后蜡块组织及临床资料作为观察组,以70例老年基底细胞乳头状瘤患者作为对照组,应用免疫组化检测CX43、E-cadherin和MMP-9的表达,关注CX43、E-cadherin和MMP-9的关系及在不同临床特征中的表达差别。结果观察组CX43和E-cadherin表达阳性率明显低于对照组,观察组MMP-9表达阳性率明显高于对照组,观察组CX43、E-cadherin和MMP-9表达与肿瘤最大径、临床分期及Ki67表达密切相关。观察组CX43和E-cadherin、CX43和MMP-9表达具有正相关性。结论老年眼睑基底细胞癌患者癌组织中CX43和E-cadherin低表达、MMP-9高表达可以有效促进肿瘤发生和进展。CX43在抑制肿瘤进展中可能通过调节细胞间的连接、黏附和细胞外基质的作用发挥其功能。     

急性心肌缺血时连接蛋白43迅速降解的非均一性研究

目的：探讨急性心肌缺血时心肌细胞连接蛋白43（Cx43）含量和分布的改变。方法：20只犬随机分为4组，通过结扎冠状动脉造成分别为0、1、3、6h的急性心肌缺血，应用激光共聚焦显微镜技术和荧光免疫组织化学方法对缺血心肌Cx43含量和分布的改变进行定量研究。结果：急性心肌缺血1h，Cx43像素密度较对照组减少22．2％（P＜0．01），3h减少40．0％（P＜0．01），6h减少53．8％（P＜0．01）。对照组心肌细胞端对端连接处Cx43含量约为侧对侧连接处的1．36倍，缺血6h后，侧对侧连接处Cx43含量反而为端对端连接处的1．6倍。对照组各层心肌细胞Cx43含量无显差异，缺血后，中间层心肌Cx43含量较其他层心肌Cx43含量下降更明显，差异有显性（P＜0．05或P＜0．01）。结论：急性心肌缺血时Cx43迅速降解，分布模式也发生明显的改变，各层心肌Cx43的降解程度明显不均一。     

美托洛尔对陈旧性心肌梗死大鼠心脏Cx43与p-Cx43表达的影响

目的探讨美托洛尔对陈旧性心肌梗死大鼠心脏缝隙连接蛋白(Cx)43与其磷酸化状态(p-Cx43)表达的影响。方法清洁级Wistar大鼠80只,随机分为假手术组、心肌梗死组、实验1组和实验2组,每组20只。构建心肌梗死模型,实验1组和实验2组分别于建模成功24 h后以灌胃酒石酸美托洛尔10.0 mg/kg和15 mg/kg;假手术组和心肌梗死组灌胃等量蒸馏水,每天灌胃1次,连续30 d。实验结束后,检测心室颤动阈值;Western印迹检测心肌组织Cx43及p-Cx43蛋白表达水平。结果心肌梗死组、实验1组和实验2组大鼠心室颤动阈值均显著低于假手术组(P0.05);实验1组和实验2组大鼠心室颤动阈值均显著高于心肌梗死组(P0.05),且实验2组显著高于实验1组(P0.05)。心肌梗死组大鼠心肌组织p-Cx43和P-Cx43/Cx43显著低于假手术组(P0.05);实验1组和实验2组大鼠心肌组织p-Cx43和P-Cx43/Cx43显著高于假手术组(P0.05);实验1组和实验2组大鼠心肌组织p-Cx43和Cx43/p-Cx4均显著高于心肌梗死组(P0.05),且实验2组显著高于实验1组(P0.05)。各组大鼠心肌组织Cx43蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论心肌梗死后大鼠心肌组织Cx43去磷酸化,心室颤动阈值降低,应用美托洛尔可促进Cx43的磷酸化,从而逆转心电传导异常。     

基因重组质粒pBudCE4.1_Cx43转染骨髓间充质干细胞及其表达和功能的测定

目的用重组质粒pBudCE4.1_Cx43转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的mRNA和蛋白的表达及细胞间隙连接通讯功能的变化。方法用脂质体转染的方法将重组表达质粒pBudCE4.1_Cx43转染细胞;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Cx43mRNA表达,免疫细胞化学法检测Cx43蛋白的表达,划痕染料示踪法检测细胞间通讯功能。结果转染Cx43基因后的细胞在形态学、生长能力等方面的特征与未转染的细胞比较没有明显变化;Cx43mRNA与蛋白的相对表达量和对照组相比差异显著(P<0.01);转染组细胞传递的荧光强度与对照组相比亦差异显著(P<0.01)。结论转染Cx43基因的BMSCs能表达有生物学活性的基因产物,改善细胞间通讯功能,能为细胞性心肌成形术提供较理想的基因工程细胞。     

Cx43连接蛋白与心脏发育

缝隙连接蛋白43(Cx43)是哺乳动物心脏中最主要的连接蛋白,研究表明其对心脏的正常分化和发育发挥着重要作用。Cx43的表达异常可引起多种心血管疾病以及心脏先天性畸形的发生。本文就Cx43的结构、表达及其与心脏发育的最新研究进展予以综述。     

CD43在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的:探讨CD43在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达情况及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测76例初发DLBCL患者淋巴结和结外组织中CD43抗原的表达情况,分析CD43表达与患者重要临床特征以及预后的关系。结果:CD43表达与患者年龄、临床分期、ECOG评分、乳酸脱氢酶值、结外受累数目、B症状、巨大包块、国际预后指数(IPI)评分以及疗效等临床特征均无关(均P0.05),仅与细胞起源有关(P=0.002)。生存分析发现CD43阳性表达患者3年总生存期显著短于CD43阴性患者(48%∶78%,P=0.012),亚组分析结果显示non-GCB亚型患者中CD43阳性表达者3年总生存时间亦显著短于CD43阴性者(32%∶64%,P=0.008),这种差异在低中危组患者中也存在(54%∶81%,P=0.03),而中高危组患者中未见明显差异(36%∶42%,P=0.215)。结论:CD43表达是DLBCL免疫学亚型相关的预后标志物,而且CD43联合IPI评分更能准确地评估低中危患者的预后。