失血性休克肠上皮细胞线粒体DNA ATPase 6,8亚基基因的改变

目的 观察失血性休克大鼠肠上皮细胞mtDNA ATPase6，8亚基基因的改变。方法 将6只Wistar大鼠分成单纯手术组、休克组。分别提取mtDNA，采用PCR技术扩增后测序，检测突变点。结果 Wistar大鼠mtDNA ATPase6，8亚基基因存在多态性，休克组存在A 7797缺失和一定数量点突变：A7863G，G7950T，C8294G，T8505G。结论 失血性休克5h，肠上皮细胞mtDNA ATPase 6，8亚基基因会发生突变，由此可导致所编码的氨基酸的改变，有可能是酶活性改变的原因。     

慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠mtDNA ATPase 6亚基基因的变化

目的观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）稳定期大鼠mtDNA ATPase 6亚基基因的改变。方法将20只SD大鼠按照宋一平等介绍的方法（香烟雾熏加脂多糖气管滴入法）复制大鼠COPD模型后提取mtDNA,采用PCR技术扩增后测序,检测突变点。结果 SD大鼠mtDNAATPase 6亚基基因存在多态性,COPD稳定期模型大鼠存在一定数量点突变,mtDNA ATPase 6：A8000T、G8074A、A8439G、C8009T、C8062。结论 COPD稳定期大鼠mtDNAATPase 6亚基基因会发生突变,由此可导致所编码的氨基酸的改变,有可能是酶活性改变的原因。     

失血性休克大鼠小肠上皮细胞线粒体ATPase8亚基表达的变化

目的探讨正常与休克大鼠小肠上皮细胞线粒体DNA（mitochondria DNA,mtDNA）ATPase8亚基及其表达的变化,为休克的防治提供理论基础。方法用透射电镜观察大鼠小肠上皮细胞线粒体形态学变化,用基因重组、测序,通过gene Bank与mtDNA已知序列进行比较,研究大鼠小肠上皮细胞mtDNA ATPase8基因的改变。用RT-PCR观察大鼠小肠上皮细胞线粒体ATPase8 mRNA的表达。结果休克组大鼠小肠上皮细胞线粒体数密度和面密度与对照组相比有显著差异（P〈0.05或P〈0.01）。正常组小肠上皮细胞mtDNA ATPase8亚基9个DNA测序有2处突变（A7868G,空7767-7768G）。休克组有3处突变,即A7797空,T7772C、T7863C。失血性休克组大鼠上皮细胞线粒体ATPase8 mRNA表达比正常组显著性下降（P〈0.05）,为对照组的27.3%。结论休克大鼠小肠上皮细胞mtDNA ATPase8基因突变以及表达水平下降是导致ATPase8亚基改变的重要原因。     

葛根素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中细胞超微结构的影响

目的 探讨葛根素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤超微结构的影响.方法 建立大鼠视网膜缺血再灌注模型,并分缺血再灌注组和缺血再灌注+葛根素治疗组.每组按再灌注时间的不同分为缺血再灌注1、6、12、24、48和72 h组.每组均行细胞超微结构和EKG检测.结果 在缺血再灌注组,各组视网膜细胞在再灌注1 h后开始改变,24 h后损害最严重,以后逐渐有所恢复.在缺血再灌注+葛根素组,视网膜细胞结构也在6h后开始明显改变,24h后受损最重,但明显好于缺血再灌注未处理组.同时,缺血再灌注+葛根素组各时期ER.G a、b波波幅相对恢复率高于另两组.结论 葛根素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的细胞超微结构有保护作用.     

97例线粒体肌病/脑肌病患者的线粒体DNA突变分析

目的 探讨我国不同临床类型的线粒体脑肌病的线粒体DNA(mtDNA)突变特点以及基因型和表型之间的相关性.方法 对经临床和病理诊断为线粒体肌病/线粒体脑肌病的97例患者,提取其肌肉和/(或)白细胞mtDNA,用Southern杂交检测mtDNA的大片段缺失、以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测常见类型的点突变(包括A3243G、A8344G、T8993G、　T8993C、T3271C突变)、并对部分患者进行mtDNA伞长测序寻找有无其他的突变位点.结果 97例患者中有81例患者存在mtDNA突变,突变类型包括单一的大片段缺失21例,多发的大片段缺失4例,A3243G突变43例,A8344G突变6例,T8993G、T8993C、T3271C突变各1例.KSS/CPEO与单发的mtDNA大片段缺失相关、MELAS与A3243G点突变、MERRF与A8344G点突变、母系遗传的Leigh　病与8993位点的突变相关.另外在4例线粒体肌病患者中发现细胞色素b编码基因A15316G　(T194A)、G15221A(D159N),ATPase6编码基因G9196A(D224N)和16SrRNA C2835T突变各1例.结论 国人不同类型线粒体肭肌病的mtDNA突变类型与国外外的报道道基本一致.虽然线粒体脑肌病的临床表刑和基因型之间有一定的相关件,但不同的基因型和临床表型之间也存在一定的交叉,反映了线粒体病的异质性特点.     

外源hTERT基因转染对老年大鼠供肝缺血再灌注损伤的防护作用

目的 研究老年大鼠与成年大鼠肝脏缺血再灌注损伤的程度;在肝移植前将外源端粒酶逆转录酶(TERT)基因导入老年大鼠供肝内,移植成功后观察该基因对老年大鼠供肝缺血再灌注损伤的影响。方法 Wistar大鼠共分为2组：Ⅰ组为成年大鼠(5个月),Ⅱ组为老年大鼠(16~18个月)。移植成功后,检测ALT、维生素C和维生素E含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)含量,比较两组缺血再灌注损伤程度;另取老年大鼠分3组：A组(基因干预组),将腺病毒介导的外源hTERT基因(rAd TERT)导入老年供肝;B组(空载体病毒组);C组(生理盐水组)。干预后不同时间检测各项指标来分析外源hTERT基因对减轻老年大鼠肝移植模型供肝缺血再灌注损伤的作用。结果 老年组大鼠的维生素C、维生素E、SOD、CAT的含量低于成年组大鼠(P＜0.05);老年组大鼠MDA和ALT含量高于成年组大鼠(P＜0.05)。与空载体病毒组和生理盐水组相比,hTERT基因干预组的凋亡指数明显降低,ALT明显降低(P<0.05),端粒酶活性明显提高,且基因干预组肝组织仅存在轻度的细胞损伤。结论 老年大鼠肝脏的缺血再灌注损伤较成年大鼠重;导入外源hTERT基因能减轻老年大鼠供肝缺血再灌注损伤。     

高血压患者及大鼠线粒体ATPase 6基因的克隆、表达与突变研究

目的：研究正常血压与高血压鼠以及正常血压与高血压患者的差异基因。方法：用差别杂交法（Differentialhybridization）筛选正常人心脏cDNA文库的部分克隆,得到多个在自发性高血压鼠（SHR）心肌和高血压患者外周白细胞中高表达的线粒体基因。重组质粒,PCR－SSCP和测序,进行基因突变分析。结果：SHR鼠心肌线粒体ATPase6基因构象改变,8701位碱基由G→A（G8701A）,编码的第59位氨基酸密码子由丙氨酸变成苏氨酸;A8708G,编码的第61位氨基酸由组氨酸变成精氨酸。高血压病患者外周血白细胞线粒体ATPase6基因8584位碱基突变（G8584A）,编码的第20位氨基酸由丙氨酸变成苏氨酸,这一变化与SHR线粒体ATPase6基因改变相一致。结论：高血压病患者外用血白细胞线粒体ATPase6基因G8584A突变很可能在高血压病心肌肥厚的发生、发展中具有意义,并可能是高血压病的特异性改变。     

大鼠脑缺血—再灌注损伤的实验研究及川芎嗪的保护作用

目的 观察大鼠海马CA1区缺血－再灌注损伤后MDA值和ATPase活性的动态变化及川芎嗪的保护作用。方法 Wistar大鼠双侧颈总动脉夹闭20min；造成不完全性脑缺血，松夹即为再灌注。大鼠随机分为假手术对照组（SOC）、缺血－再灌注组（IR）和川芎嗪治疗组（TMP）。结果 ①IR组MDA值再灌注6h后恢复至对照水平，川芎嗪能显著降低异常增高的MDA值（P＜0．01）。②IR组ATPase活性再灌注24h后恢复至对照水平，川芎嗪能明显升高酶活性（P＜0．01），且能缩短酶活性恢复时程。结论 川芎嗪能减少大鼠脂质过氧化，使ATPase活性回升，减轻海马结构缺血－再灌注损伤。     

帕金森病患者线粒体DNA突变位点G1719A、G4580A、C7028T分析

目的研究有关线粒体DNA（mtDNA）点突变与我国人群散发性帕金森病（Parkinson disease,PD）的关系。方法采用经典的酚／氯仿抽提法对88例PD患者（研究组）和60例健康体检者（对照组）的全血基因组DNA进行抽提,针对与PD发病有关的mtDNA突变位点G1719A、G4580A、C7028T设计特异的引物,经过PCR鉴定和基因测序,在NCBI基因库上进行BLAST比对分析,发现突变位点。结果PD患者有10例在C7028T位点发现突变,8例在G1719A位点发现突变,3例在G4580A位点发现突变,对照组未发现突变位点。结论散发性PD患者存在线粒体基因的点突变,线粒体基因的点突变可能参与PD的发病过程。     

中药水蛭对肺缺血再灌注后细胞的抗凋亡作用

目的 :观察中药水蛭水煎醇提取液对大鼠肺缺血再灌注后细胞凋亡的保护作用。方法 :采用原位大鼠肺缺血再灌注模型 ,将 5 0只 Wistar系大鼠随机分为单纯缺血再灌注组 (A组 )和缺血再灌注加水蛭治疗组 (B组 ) ,用流式细胞仪检测两组的细胞凋亡率。结果 :B组细胞凋亡率明显低于 A组 (P<0 .0 5 ) ,且再灌注后细胞凋亡率推迟。结论 :中药水蛭水煎醇提取液可降低缺血再灌注后细胞凋亡率 ,是肺缺血再灌注损伤的有效保护剂     

线粒体ATP酶6、8基因及编码蛋白表达改变对移植肝脏能量代谢的影响

目的 探讨肝细胞线粒体DNA ATP酶6、ATP酶8基因及编码蛋白F_0F_1-ATP酶表达改变对移植肝能量代谢的影响.方法 采用改良"二袖套法"制作大鼠肝移植模型,随机分为A组(冷保存30 min组),B组(冷保存6 h组),c组(冷保存12 h组)和D组(假手术对照组),分别于制模后于12 h、24 h、3 d、5 d、7 d采集标本,检测各组大鼠肝脏ATP含量、mtDNA ATP酶6、ATP酶8mRNA和F0F1-ATP酶蛋白表达.结果 冷保存再灌注早期(12 h),各组ATP酶6、ATP酶8 mRNA、F_0F_1-ATP酶蛋白表达(ng/mg蛋白)和ATP含量(U/L)均降低,C组(0.81±o.08,0.71±0.07,0.47±0.07,0.44 ±0.05)显著低于A组(1.11±0.04,1.07±0.07,0.86±0.15,0.70±0.11)、B组(1.02±0.07,0.90±0. 10,0.65 ±0.07,0.55±0.08)(P<0.05).再灌注24 h后各组ATP酶6、ATP酶8mRNA、F_0F_1-ATP酶蛋白表达和ATP含量增加,c组升高较A组、B组缓慢.结论 ATP酶6、ATP酶8基因表达改变后F_0F_1-ATPase蛋白表达异常.可能是导致能量合成障碍的主要原因.     

Gene Expression Profile of Pulmonary Tissues in Different Phases of Lung Ischemia-reperfusion Injury in Rats

In order to provide us new clues to induce some endogenous protective molecular mechanisms, the changes in gene expression profile induced by ischemia-reperfusion in pulmonary tissues of rats were investigated and the dynamic mechanism of pulmonary ischemia-reperfusion injury was elucidated. Thirty male Wistar rats were randomly divided into 6 groups： 5 ischemia-reperfusion （I/R） groups （I/R 0-h, I/R 1-h, I/R 3-h, I/R 6-h, I/R 24-h） and control group （n=5 in each）. An in situ ischemia-reperfusion lung injury rat model was established by occluded hilus of lung. The RatRef-12 Expression Beadchip （22 226 gene probes per array） was used to analyze the pattern of gene expression in all groups. The results showed that 648, 340, 711, 1279 and 641 genes were differentially expressed in I/R 0-, 1-, 3-, 6- and 24-h groups respectively. The differentially expressed genes were classified as following 7 functional categories： cytokine, adhesion molecule, growth factor and apoptosis-related factor, oxidation and antioxidation molecule, metabolic enzyme, ion channel and aquaporin, signal transduction molecule. It was suggested that gene chip technology was an effective and quick method for screening differentially expressed genes. Many differentially expressed genes with different functions interacted each other to result in pulmonary ischemia-reperfusion injury.     

缺血再灌注损伤的肾小管细胞ATP酶和自由基代谢的变化

目的：探讨肾缺血再灌注损伤时，小管上皮细胞ATP酶活性与自由基代谢的变化。方法：利用离体培养小管细胞的缺血再灌注模型，观察ATP酶与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde，MDA)的变化。结果：缺血再灌注损伤导致肾小管细胞ATPase、SOD活性明显降低，而MDA含量明显增高，中药参麦注射液(ShenMai injeclion，SMI)能明显提高ATPase、SOD活性，同时脂质过氧化MDA含量明显降低。结论：实验结果提示在缺血再灌注中，氧自由基损伤了细胞的ATP酶和脂质成分，SMI对缺血再灌注损伤的肾小管上皮细胞有一定的保护作用。     

CO2气腹对慢性肾衰大鼠肾功能及其线粒体功能的影响

目的：了解不同CO2气腹压力对慢性肾功能衰竭模型大鼠肾功能的影响。探讨CO2气腹造成肾功能变化在亚细胞水平上损伤的可能机制。方法：建立5/6肾切除大鼠慢性肾功能衰竭模型。分别施加0.67kPa(5mmHg),1.33kPa(10mmHg)CO2气腹压，检测解除气腹即时，1d,4d血肌酐（SCr)，尿素氮（BUN）水平及各时相点时肾脏组织线粒体Na^2 -K^ -ATP酶和Ca^2 -ATP酶活性。结果：解除气腹即时SCr开始升高，1d时升高显著，第4天时下降，接近对照组水平；BUN变化不明显，肾脏组织线粒体Na^2 -K^ -ATP酶和Ca^2 -ATP酶活性也分别在解除气腹即时及1d时下降，第4天时渐趋恢复，与0.67kPa各组相比，1.33kPa气腹压各组出现的变化更加明显。结论：CO2气腹可引起慢性肾功能衰竭肾脏功能改变；气腹压力的直接压迫使肾皮质缺血及解除气腹后血流再灌注损伤可能干扰细胞中线粒体的生物氧化功能，从而导致细胞功能障碍；高气腹压对肾脏的影响更明显。