鼠疫耶尔森氏菌快速检测研究进展

目的论述一套对鼠疫耶尔森氏菌特异性强、快速、灵敏度高的快速检测方法,对鼠疫做到早发现、早预防、早诊断、早治疗,预防和控制鼠疫的发生和流行。方法查阅和收集国内外相关鼠疫耶尔森氏菌快速检测的文献和资料。结果鼠疫耶尔森氏菌检测技术向着快速、敏感、特异的标准化和国际化方向发展,其检测技术更加先进、齐全、完备。结论鼠疫耶尔森氏菌的检测技术从细菌学、血清学及分子生物学等正向更快速、更先进的方向发展,这对鼠疫防治将发挥重要作用。     

用UDPE技术检测和鉴定鼠疫耶尔森氏菌

我们建立了用ＵＤＧ（尿嘧啶糖基化酶）防ＰＣＲ产物污染,以两个不同基因为靶序列扩增检测同一病原菌和用微孔板杂交－酶联显色检测ＰＣＲ产物的ＵＤＰＥ（ＵＤＥ－ＤｕｐｌｅｘＰＣＲ－ＥＩＡ）技术并用于鼠疫耶尔森氏菌的检测与鉴定。结果表明,该系统可以特异地检测和鉴定鼠疫耶尔森菌,检测灵敏度可以达到１ＣＦＵ／ｍｌ。     

用PCR-EIA法快速检测鼠疫耶尔森氏菌

目前在全国鼠疫监测工作中,对鼠疫菌的检测都采用显微镜观察、培养、鼠疫噬菌体裂解实验和动物试验（称为四步检验）。这些传统的检测方法在鼠疫防治监测工作中发挥了重要的作用,但是,一旦遇到标本量大时,这些方法就显得烦琐、费时,而且也增加了检验者的工作量。近几年发展起来的ＰＣＲ－ＥＩＡ（Ｐｏｌｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ－Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）技术,敏感度高,特异性强,同时也保证了ＰＣＲ扩增技术的可靠性,可直接从动物脏器中检测出鼠疫苗ＤＮＡ,尤其是对大量标本的检测其优点更为突出…     

云南鼠疫耶尔森氏菌脂肪酸成分分析

目的利用脂肪酸成分分析方法获得云南鼠疫耶尔森氏菌菌株脂肪酸组成的本底资料,并建立云南鼠疫耶尔森氏菌菌株的数据库。方法选择历年来从云南不同疫源地分离到的146株鼠疫耶尔森氏菌进行了菌体脂肪酸成分分析。结果云南鼠疫耶尔森氏菌菌株的主要脂肪酸成分为16∶0酸,环式17∶0酸,3羟基14∶0酸和ω7 c16∶1酸以及十八碳单烯酸,与宋亚军等的分析结果一致,与M ID I公司Sherlock系统的菌库中的数据存在一些差异。结论建立云南鼠疫耶尔森氏菌菌株的脂肪酸组成数据库。     

鼠疫耶尔森氏菌质粒提取方法的改进

大多数鼠疫耶尔林菌均含有三种质粒，分子量分别为６５，４５和６Ｍｄａｌ。其中两种属大质粒，分离提取较困难。本实验在参照Ｃａｓｓｅ法基础上对质粒提取中诸多影响因素逐一进行测试比较，选择出质粒提以的最适条件：细菌培养于２８℃，１８－２２小时，菌液浓度为２００ｍｇ／ｍｌ，溶菌液ＳＤＳ终浓度２％，每１０ｍｌ溶菌液加０．１ＮＮａＯＨ１．３５ｍｌ，４５℃温育３０－４０分钟。建立了一种简便，快速且重复性较高的提取     

多重PCR快速鉴定鼠疫耶尔森氏菌

目的　建立鼠疫耶尔森氏菌多重PCR鉴定系统 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。方法　针对分别存在于pFra、pRst质粒上毒力基因caf1和pla ,以及一段 2 76bp染色体序列 3a分别设计引物。采用多重PCR技术 ,同时检测caf1、pla、3a三个靶序列。结果　应用该多重PCR反应体系 ,对我国鼠疫耶尔森氏菌 17个生态型及新发现的青海田鼠鼠疫疫源地菌株的多重PCR扩增结果表明 ,实验菌株中除 2株分别缺失pFra、pPst质粒而扩增出 2条产物带外 ,其余 5 2株均扩增出预期的 3条产物带 ,相关菌株均阴性 ,其检测灵敏度为 1× 10 -4ngDNA。 结论　该方法用于鼠疫耶尔森氏菌的鉴定简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 ,为鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定提供了有力手段     

准噶尔盆地鼠疫耶尔森氏菌营养需求的实验分析

目的探讨新疆准噶尔盆地鼠疫野外分离株的营养需求。方法应用定性和定量两种方法相结合分析准噶尔盆地28株鼠疫菌对11种氨基酸的营养需求。结果准噶尔盆地28株鼠疫菌株中,低营养型1株(No.25,Phe+)占检测菌株的3.57%;色氨酸依赖1株(No.24,Try-)占检测菌株的3.57%;苯丙氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸依赖,异亮氨酸半依赖1株(No.21,Phe-、Met-、Val-、Ile±)占检测菌株的3.57%;余下25株表现为对苯丙氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸依赖(Phe-、Met-、Val-)占检测菌株的89.3%。结论新疆准噶尔盆地鼠疫菌株的营养型主要表现为对苯丙氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸依赖(Phe-、Met-、Val-)。     

鼠疫耶尔森氏菌外膜蛋白研究进展

耶尔森氏菌属中致病性细菌有3种，即鼠疫耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌和假结核耶尔森氏菌。其中鼠疫耶尔森氏菌是致病性最强的一种。随着分子生物学的研究进展，人们对鼠疫菌有了深入的了解。鼠疫菌外膜蛋白（Yops）是近些年对鼠疫菌的基础研究内容焦点之一。国内在世界上首先发现鼠疫菌锡林郭勒高原型病原体缺少32Kd外膜蛋白和40Kd蛋白位于膜内，     

青海田鼠型鼠疫耶尔森氏菌生物学性状的研究

目的：通过试验菌株与对照菌株相比较，观察其生物学性状，确定试验菌株的生态型。方法：选择生物化学试验、毒力决定因子、营养型、毒力、质粒及外膜蛋白等项目。结果：试验菌株与对照菌株生物学性状有较大差异，生化性状为鼠李糖＋、甘油＋、脱氨－、麦芽糖＋、阿胶糖－、密二糖＋，毒力因子是鼠疫菌荚膜抗原（FraI^ )、毒力抗原（Vwa^ )、鼠疫菌素I（PstI^ )、色素沉着因子（Pgm^ ),营养型为精氨酸、亮氨酸依赖型（Arg^-、Leu^-),质粒为6、45、65Mdal质粒等。结论：确定了我国一个新的鼠疫菌生态型－青藏高原青海田鼠型鼠疫菌。     

鼠疫耶尔森氏菌脉冲场凝胶电泳分析

目的 对鼠疫菌的全DNA进行酶切，了解我国各别生态型的鼠疫耶尔森氏菌在核酸水平上的差异。方法 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行分析。结果 用PFGE可将20株鼠疫菌分成5个核型，I型为布氏田鼠型和青海田鼠型菌；Ⅱ型为滇闽居民区型菌和滇西丛谷型菌；Ⅲ型为祁连山型、青藏高原型和1株分离自四川患的鼠疫菌。西藏仲巴地区的2株菌各为一个型。结论 提示脉冲场凝胶电泳分析可用于鼠疫耶尔森氏菌遗传关系的研究。     

斑点金免疫渗滤法检测鼠疫菌的方法研究

目的　建立一种简便、快速的胶体金免疫渗滤法 (DIGFA)用于鼠疫菌的快速诊断。方法　用柠檬酸钠还原法制备 10nm的胶体金标记鼠疫多价抗体 ,制备成鼠疫抗体金探针。结果　鼠疫胶体金渗滤法对鼠疫FI抗原的最低检出限为 10ng/ml;对EV76的最低检出限为 2 .4× 10 5cfu ;除 4株鼠疫菌外 ,不与包括小肠结肠炎和假结核耶尔森菌等其他细菌发生交叉免疫反应 ;整个反应过程在 10min内完成。结论　该方法简便、快速、特异、敏感 ,不需任何特殊仪器设备 ,适合于现场鼠疫监测。     

青藏铁路沿线鼠疫菌营养需求的研究

目的检测青藏铁路沿线鼠疫菌的营养需求。方法选用 Lawton 最小培养基,采用 Lawton 最小培养基中加减各种氨基酸的方法进行。结果试验用青藏铁路沿线菌株对色氨酸(Trp)、苏氨酸(Thr)、亮氨酸(Leu)、精氨酸(Arg)不依赖,而对苯丙氨酸(Phe)、甲硫氨酸(Met)、半胱氨酸(Cys)依赖,对异亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)表现出低营养。结论鼠疫菌营养需求的特征可作为鼠疫菌分型的重要指征之一。     

鼠疫菌生物型及流行病学意义

根据458株鼠疫菌发酵鼠李糖、甘油、麦芽糖、阿胶糖、蜜二糖、木胶糖及脱氮作用的不同,对 Phe 需求和 Pgm 的产生不同,可将我国鼠疫菌划分17个生物型;各生物型占居特定的地理区域,与主要宿主及媒介有关,是地理环境生物群落综合作用的结果,具有重要的流行病学意义。云南家鼠鼠疫与野鼠鼠疫有联系。洛浦县和和田县鼠疫菌生化特性的稳定性不同。对蜜二糖、麦茅糖迟缓发酵或性状不稳定的鼠疫菌株,每株菌存在蜜二糖或麦芽糖阴性与阳性两种性状的菌群,可为寻求迟缓发酵糖醇及性状不定的原因提供依据。     

胶体金免疫渗滤法检测日本血吸虫病血清抗体的研究

应用建立的胶体金免疫渗滤法检测日本血吸虫病血清抗体，并以快速酶联免疫吸附试验（F-ELISA）方法检测作平行对照。现场和实验室试验表明，胶体金渗滤法与F?鄄ELISA方法在敏感度和特异度的差异无统计学意义（P>0.05），两法具有较高的一致性。但胶体金免疫渗滤法操作简便快速，无特殊要求，在临床和现场防治工作中具有比较广泛的应用前景。     

聚合酶链反应在口岸鼠疫监测中的特异性和敏感性试验

目的利用UDG防止聚合酶链反应(PCR)的产物污染，以2个不同基因为靶序列，设计了3对引物进行PCR扩增。方法用不同的模扳考察方法的特异性和灵敏性。结果该方法可以特异性的检出鼠疫菌，对于DNA摸扳检测灵敏度可以达到7CFU。结论PCR技术是一种快速、敏感、特异性很高的方法。     

鼠疫耶尔森氏菌inv基因中IS1541的研究及应用

目的　了解鼠疫耶尔森氏菌 inv基因中 IS15 41的插入情况 ,为鼠疫耶尔森氏菌的鉴别诊断提供依据。方法　 PCR反应及 Southern杂交分析。结果　对来自不同疫源地的 5 0株鼠疫耶尔森氏菌的 inv基因中部分序列进行扩增 ,均可扩出一条长为 10 0 0 bp的片段 ,用 IS15 41作探针 ,对其进行 Southern杂交分析 ,杂交结果无差别 ,而对照菌株除假结核耶尔森氏菌扩出一条长约 30 0 bp左右的片段外 ,其它均为阴性。结论　鼠疫耶尔森氏菌 inv基因高度同源 ,其间均有 IS15 41插入 ;该方法有助于鼠疫耶尔森氏菌与其它菌株的鉴别诊断     

鼠疫菌4Mdal质粒的发现及鉴定

用琼脂糖凝胶电泳检测分离自云南省澜沧和勐海两县的鼠疫菌质粒,发现除具有已知的6、45和65三种质粒外,尚存在一种分子量约4Mdal 的新质粒。此质粒的证实对研究该地区鼠疫特征及在传播方面将具有重要的流行病学意义。     

蚤与鼠疫菌之间的生物学关系

鼠疫是一种自然疫源性疾病。在它的3个要素中，人们往往更偏重于研究鼠疫菌和宿主之间的关系，而忽视了传播媒介的重要作用。然而，实际上蚤在动物鼠疫的流行和保存过程中起着非常重要的作用。作通过献积累，列举了蚤与鼠疫菌之间的4种生物学关系而得出结论：蚤与鼠疫菌之间的生物学关系绝非一般的生物学概念上的寄生关系。在动物鼠疫流行过程中，这种关系的动态平衡是起决定性作用的。     

植物在鼠疫菌保存和传播中的某些作用

在实验室条件下用鼠疫菌接种菊科、豆科和禾木科的某些植物,第5d－31d用PCR技术从紫苜蓿、胡枝子、茵陈蒿的根及大豆的根、茎、叶中扩增到鼠疫苗特异DNA片段。第10d和第20d从大豆根中分离到鼠疫苗,鼠疫菌的菌落形态发生了RS变异,毒力有所增强,同时营养需求也发生了变化。用染菌植物喂养豚鼠,第12d用放射免疫沉淀法检测血清,鼠疫菌特异抗体滴度达1：320。认为某些植物具有充当鼠疫菌自然宿主和传播媒介的可能。     

祁连山型鼠疫菌对43种抗菌素敏感性的试验研究

采用纸片法测定了43种抗菌药物对祁连山型鼠疫菌的敏感性。结果表明，同链霉素相比，部分头孢类和喹诺酮类药物对该型鼠疫苗的敏感性效果更好，本结果可为鼠疫临床治疗选择新药提供科学依据。