叠氮胸苷对胶质母细胞瘤细胞系TJ905细胞p33ING1b表达和细胞衰老及凋亡的影响

目的 观察叠氮胸苷对恶性胶质瘤细胞系TJ905细胞p33ING1b表达的影响及该影响与细胞凋亡和衰老的关系.方法 将体外培养的TJ905细胞系分为对照组,50、100及200 μmol/L叠氮胸苷组,在后三组的培养液中分别给予相应终浓度的叠氮胸苷并继续传代培养;各组取第1、3、6代细胞以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测p33ING1bmRNA表达水平及衰老细胞;取第3、6代细胞以TUNEL法和单细胞凝胶电泳法检测凋亡细胞.结果 从用药后第1代起叠氮胸苷即呈时间和剂量依赖性地诱导TJ905细胞p33ING1b mRNA表达和细胞衰老;200 μmol/L叠氮胸苷组第6代TJ905细胞的p33ING1b RT-PCR扩增条带相对灰度(1.44±0.23)显著高于同组第1代(0.95±0.13)、第3代(1.35±0.23)及同代50μmol/L组(0.85±0.24)和100 μmol/L组(1.23±0.34),其衰老相关β-半乳糖苷酶标记指数(45.62±6.74)亦显著高于同组第1代(7.82±2.40)、第3代(26.27±7.17)及同代50 μmol/L组(27.37±6.41)和100 μmol/L组(35.49±5.12),上述差异均有统计学意义(P＜0.01);而叠氮胸苷促凋亡作用出现在稍晚的第6代.结论 叠氮胸苷可上调TJ905细胞p33ING1b的表达水平,这可能是叠氮胸苷诱导TJ905细胞衰老和凋亡的重要分子机制.     

脑源性神经营养因子在体外诱导SH-SY5Y细胞分化过程中的作用

目的 探讨不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时,对G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的影响.方法 采用全反式维甲酸(RA)和低(1μg/L)、中(10μg/L)、高(100μg/L)3种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱导SH-SY5Y细胞分化,形成均一的具有神经元形态的细胞.以一步法实时定量RT-PCR检测其G2期细胞周期相关蛋白mRNA的表达,荧光激活细胞分类术(FACS)检测各组细胞时相.结果 在各浓度BDNF组中周期蛋白B1(cyclin B1)的mRNA含量与对照组及RA组比较均明显降低(P<0.05);仅高浓度组cyclin B2和周期蛋白依赖性激酶1(Cdk1)的mRNA含量显著降低(P<0.05),;低浓度和中浓度BDNF组Cdk5 mRNA含量均高于RA组(P<0.05).BDNF各浓度组处于G1期的细胞百分率均显著高于RA和对照组(P<0.01),而处于S期的细胞百分率均显著低于对照组(P<0.01),且低浓度及高浓度组同时低于对照组(P<0.01).结论 提示BDNF在有效促进SH-SY5Y细胞进一步分化的同时,没有引起G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的异常升高,BDNF无诱导细胞凋亡的危险,可能有减缓AD进程的作用,并且呈剂量依赖性.     

红景天苷对小鼠MSCs的增殖及其细胞周期的影响

目的本研究探讨了不同浓度红景天苷通过ERK信号通路对小鼠骨髓间充质干细胞增殖和细胞周期变化的影响及机制。方法实验分为对照组(D-MEM/F-12完全培养液)、不同浓度红景天苷(5~100μg/m L)诱导组和阻断组(5~100μg/m L+30μg/L PD98059),利用CCK8法、流式细胞术及Western blot分别检测ERK信号通路阻断前后细胞抑制率、细胞周期及其相关蛋白的表达。结果 10μg/m L诱导组和阻断组均能抑制细胞增殖,且5μg/m L(P0.01)、25μg/m L(P0.05)和100μg/m L(P0.05)诱导组对细胞抑制显著高于阻断组。25μg/m L诱导组和阻断组G_0/G_1期细胞比例均增加,细胞周期阻滞于G0/G1期。诱导组和阻断组cyclin A和cyclin D1蛋白的表达与对照组比较均下调,P21蛋白的表达上调。阻断组cyclin A蛋白的表达与诱导组比较明显下调(P0.01);50和100μg/m L诱导组与阻断组相比cyclin D1蛋白表达显著下调,P21蛋白的表达显著上调(P0.01)。结论红景天苷能通过调节细胞周期相关蛋白的表达抑制小鼠MSCs细胞的增殖和细胞周期的改变。     

端粒酶在流感病毒诱导HeLa细胞凋亡中的作用

目的探讨端粒酶活性变化与流感病毒诱导HeLa细胞凋亡之间的关系。方法用A1亚型、B型及紫外线照射后的流感病毒分别感染HeLa细胞,在电镜下观察细胞形态,并用Annexin V-FITC染色流式细胞仪及PCR-ELISA法分别检测细胞凋亡诱导率与HeLa细胞端粒酶活性。结果B型、A1亚型流感病毒的凋亡诱导率最高达38.65%、23.94%(P<0.01),经紫外线照射后的流感病毒仍然具有一定的凋亡诱导能力;同时,HeLa细胞端粒酶活性均有所下降,其中B型流感病毒诱导后的HeLa细胞端粒酶活性下降比A1亚型更明显(P<0.01)。结论流感病毒降低肿瘤细胞的端粒酶活性,可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的又一重要机制。     

白藜芦醇对Hela细胞凋亡及Bcl-2和Fax基因表达的影响

目的观察白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞凋亡及Bcl-2、Fax基因表达的影响。方法实验设白藜芦醇用药组和空白对照组,应用流式细胞术检测药物作用24h后细胞凋亡和细胞周期进程情况;应用免疫组化法检测Heal细胞Bcl-2、Fax基因的表达情况。结果经不同浓度的白藜芦醇处理Heal细胞后,镜下可见到凋亡细胞,各组的凋亡率明显高于对照组(P0.01)。PCM分析发现各实验组S期细胞比例增高,G2/M期细胞比例减少,并呈剂量依赖性(P0.01);各实验组Heal细胞Bcl-2的表达均低于对照组。而Fax的表达均高于对照组(P0.01)。结论白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,凋亡途径可能与Fas表达上调、Bel-2表达下调有关。     

白藜芦醇对小鼠胚胎成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨白藜芦醇(Res)对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)增殖和细胞周期的影响及变化规律.方法:通过不同浓度(1～150 μmol/L)Res作用于增殖期的MEF,用MTT法检测72 h后各组细胞增殖变化,用流式细胞术检测并分析其细胞周期.结果:Res 1 μmo/L组A值明显高于对照组(P<0.05),Res 50 μmol/L和150 μmol/L组A值分别为0.196±0.055和0.185±0.034,均明显低于对照组(分别P<0.05,P<0.01),其细胞生长抑制率分别为14.0%和18.9%.细胞周期检测结果表明,Res 1 μmol/L组中G2/M期细胞占(14.82±0.49)%显著高于对照组(P<0.01).50 μmol/L和150 μmol/L组G0/G1期细胞所占比例分别为(59.61±6.03)%和(65.31±0.27)%均显著高于对照组(P<0.01).结论:Res对MEF增殖的影响,具有双向浓度依赖性,增殖和抑制增殖均与细胞周期调控有关,其中阻断G1期细胞进入S期是其抑制MEF增殖主要因素.     

二氟甲基鸟氨酸对HeLa细胞及其端粒酶活性的影响

探讨二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对人宫颈鳞癌细胞系HeLa细胞生长特性、凋亡和端粒酶活性的影响。采用细胞记数、形态观察、流式细胞术(FCM)分析、DNA电泳和端粒重复扩增技术(TRAP)，观察DFMO对HeLa细胞生长、凋亡和端粒酶活性的影响。DFMO能显著抑制HeLa细胞生长，诱导细胞凋亡，G1期细胞增多、S期细胞减少，细胞内端粒酶活性明显被抑制。外源性腐胺(Pu)的加入可阻止DFMO引起的上述变化。DFMO可抑制HeLa细胞的生长，诱导HeLa细胞凋亡；抑制HeLa细胞内端粒酶活性。DFMO引起的HeLa细胞生长抑制及凋亡诱导与端粒酶活性被抑制有关，这可能是抗肿瘤的分子机制之一。     

1,25-二羟基维生素D3协同转染反义端粒酶RNA诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的观察在抑制肝癌细胞端粒酶活性表达情况下,1,25-二羟基维生素D3(1,25-VD3)对肝癌细胞凋亡的影响。方法经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTR导入维生素D3受体(VDR)阳性的肝癌细胞株SMMC7721细胞中培养。细胞克隆转移扩大培养,将其分为对照组、药物组、转染组和转染药物组。添加1,25-VD3,分别作用于转染药物组、药物组,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和电子显微镜检测肝癌细胞凋亡。结果转染组和对照组细胞的端粒酶活性分别为0.686和1.685,说明反义端粒酶RNA可显著降低肝癌细胞端粒酶活性。对照组、药物组、转染组和转染药物组细胞凋亡率分别为3.4%、12.2%、8.8%、23.6%;差异有显著统计学意义(P<0.01)。超微结构检查也证实存在凋亡发生。1,25-VD3或转染反义端粒酶RNA对肝癌细胞有促细胞凋亡作用,两者协同对肝癌细胞凋亡作用显著增强。结论转染反义端粒酶RNA,可降低肝癌细胞端粒酶活性,可显著增强1,25-VD3对肝癌细胞的促凋亡作用,并且对细胞的增殖也存在明显的抑制作用。     

cyclin G2在乳腺病变组织中表达及其对MCF-7细胞的作用

目的 研究细胞周期蛋白G2(cyclin G2)在乳腺病变中的表达及意义,探讨cyclin G2对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法 用免疫组化SP法检测cyclin G2在人乳腺不同病变中的蛋白表达,并进行显微图像分析;利用阳离子介导的脂质体法转染pDsRed2-cyclin G2融合基因至人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中,流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 (1)cyclin G2在乳腺增生症中的阳性表达率及表达强度与正常乳腺组织相当,而在导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)以及浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中表达逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05).(2)转染了重组质粒pDsRed2-cyclin G2的MCF-7细胞凋亡率明显增高(P<0.01).结论 cyclin G2蛋白表达随着乳腺疾病恶性程度增加而降低,外源性转染cyclin G2至MCF-7细胞中可促进其凋亡,抑制细胞增殖.     

siRNA干扰14-3-3ζ基因可体外促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨siRNA干扰14-3-3ζ基因对人胃腺癌细胞系SGC-7901增殖凋亡的影响及其作用机制。方法利用siRNA干扰技术降低14-3-3ζ基因的正常表达的SGC-7901细胞为实验组,siRNA-control的对照组和未加处理的空白组。用实时荧光定量PCR和Western blot检测14-3-3ζ基因mRNA的表达水平和蛋白表达水平;CCK8实验检测各组SGC-7901细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测周期和凋亡相关蛋白P53、cyclin D1、PUMA、Bax和Bcl-2。结果 siRNA干扰组14-3-3ζ基因的mRNA和蛋白表达水平低于空白组和对照组(P0.05);CCK8检测细胞增殖较对照组显著降低(P0.05);siRNA干扰组细胞周期G0/G1的比率较对照组高,而G2/M和S期则显著降低(P0.05);siRNA干扰组的细胞凋亡率也显著升高(P0.05);相关通路蛋白在siRNA干扰组中cyclin D1和Bcl-2表达降低,P53、PUMA、Bax蛋白表达增高(P0.05)。结论 siRNA干扰14-3-3ζ可以通过P53通路,下调cyclin D1抑制SGC-7901细胞增殖并阻滞周期,上调PUMA、Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白促进细胞凋亡。     

顺铂和阿霉素联合抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖

目的 观察顺铂和阿霉素联合作用对人舌鳞癌Tca8113细胞生长的抑制作用,以及对细胞周期和凋亡的影响.方法 不同浓度顺铂、阿霉素及两者联合作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,用MTT法观察细胞增殖情况以及药物对细胞生长的抑制效应.用流式细胞仪观察细胞凋亡和细胞周期.结果 顺铂(r=0.538,P<0.01)和阿霉素(r=0.642,P<0.01)呈剂量和时间依赖性抑制Tca8113细胞生长.单独用1.25 μmol/L阿霉素作用24 h,对Tca8113细胞的生长无显著影响.不同浓度顺铂(2～10mg/L)单独作用24 h,仅10 mg/L浓度可显著抑制Tca8113细胞的生长(P<0.01).1.25 μmol/L阿霉素与顺铂联合应用24h后,4、6、8、10mg/L顺铂均可显著抑制Tca8113细胞生长,且与相应浓度的单独用药组比,差异均有统计学意义(均为P<0.001).1.25 μmol/L阿霉素、6 mg/L顺铂以及阿霉素1.25 μmol/L+顺铂6 mg/L均显著改变G_0～G_1期(50.00±0.32%,43.53±2.026%.50.77±3.83%)和s期(36.5±1.05%.40.8±2.52%,30.87±2.65%)细胞百分比(均为P<0.01),联合用药的作用较单一用药组更显著(P<0.05).上述药物对细胞凋亡的作用均不明显,联合用药后坏死细胞比例明显增加.结论 顺铂和阿霉素联合作用,可显著地抑制人舌鳞癌细胞分化增殖,并增强药物的细胞毒性作用.     

去氢表雄酮及G6PD基因反义寡核苷酸对Raji细胞的某些影响

目的:观察去氢表雄酮（DHEA）及G6PD基因的全硫代修饰反义寡核苷酸对体外培养Raji细胞的抑制作用。 方法:分别用不同浓度DHEA及G6PD反义寡核苷酸作用于体外培养Raji细胞，观察细胞存活、生长情况，同时采用逆转录-聚合酶链反应检测Raji细胞G6PD基因mRNA表达水平，测定G6PD活性。 结果:DHEA及G6PD反义寡核苷酸不影响Raji细胞存活，50 μmol/L、500μmol/L浓度的DHEA作用72 h小时及10.0 μmol/L反义寡核苷酸作用48 h后均明显抑制Raji细胞生长（P＜0.01）；当DHEA≥5.0 μmol/L时，作用Raji细胞72 h，则G6PD活性明显低于未用DHEA作用的对照组（P＜0.01），但不影响G6PD基因mRNA表达；10.0 μmol/L反义寡核苷酸作用Raji细胞48 h后，G6PD基因mRNA表达水平低于未用反义寡核苷酸作用的对照组，G6PD活性亦明显低于对照组（P＜0.01）。 结论:一定浓度的DHEA及G6PD反义寡核苷酸均能抑制Raji细胞G6PD活性并不同程度影响细胞生长，但其抑制机制不同。     

PAR-2激动剂对肝癌细胞增殖及Ca2+水平的影响

目的： 研究PAR-2激动剂对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞内Ca2+浓度（［Ca2+］c）的影响。方法: 培养人肝癌细胞HepG2, 分别利用PAR-2激动剂SLIGKV-NH2及反PAR-2激动肽VKGILS-NH2干预肝癌细胞生长,用Fura-2荧光法测定肝癌细胞内［Ca2+］c,用MTT法检测对肝癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞周期改变情况,RT-PCR法检测cyclinD1 mRNA表达变化。结果: 50 μmol/L SLIGKV-NH2刺激HepG2细胞后,［Ca2+］c迅速短暂升高（P<0.01）;G0/G1期比例明显降低,S期和G2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)明显提高（P<0.01）;cyclinD1 mRNA的表达显著增加（P<0.01）。SLIGKV-NH2在1-50 μmol/L时可以促进HepG2细胞增殖,呈剂量依赖性（P<0.01或P<0.05）。而VKGILS-NH2组与对照组相比差异无显著（P>0.05）。结论: PAR-2激动剂在体外能通过激活PAR-2,诱导HepG2细胞内［Ca2+］c升高,上调cyclinD1 mRNA的表达,加速HepG2细胞周期进程,促进DNA合成,促进肝癌细胞增殖。     

同型半胱氨酸影响内皮祖细胞机制的探讨

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）影响内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的可能机制。 方法：采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养4 d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度Hcy（10 μmol/L、30 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L）干预,或先予以1 μmol/L 阿托伐他汀预处理1 h,然后再用200 μmol/L Hcy干预。采用SA-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老细胞,细胞增殖ELISA试剂盒和集落生成能力测定实验检测EPCs的增殖能力和集落形成能力,端粒重复序列扩增法(TRAP)-ELISA定量检测端粒酶活性,Western blotting检测EPCs Akt Ser473磷酸化水平。结果：Hcy呈浓度依赖性增加SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞数量,200 μmol/L最为显著,较对照增加了2倍（15.2±9.8 vs 51.9±13.5,P<0.01）,而阿托伐他汀能显著减少Hcy诱导的衰老细胞的数量。此外,Hcy干预后伴随EPCs增殖和集落形成能力的显著损害。Hcy随着浓度的增加而显著降低EPCs端粒酶活性。进一步研究发现Hcy显著减少Akt磷酸化。结论：Hcy加速EPCs衰老,伴随EPCs增殖和集落形成能力的损害,提示细胞衰老也许是Hcy损害EPCs的机制之一。Hcy加速EPCs衰老可能跟EPCs端粒酶活性下降以及Akt磷酸化水平的下降有关。阿托伐他汀可以预防Hcy对EPCs的损害效应。     

白藜芦醇对体外培养的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响。方法:通过不同浓度0.5～150μmol/L Res作用于体外培养的SH-SY5Y,72 h后用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Hochest染色观察细胞凋亡情况。结果:0.5～5μmol/L各组,进入G2/M期细胞所占活细胞比率逐渐升高;5～150μmol/L各组,随浓度升高,凋亡率呈现逐渐上升的趋势,而且显著高于对照组(P<0.01),其中150μmol/L组凋亡率为51.80±1.72%,进入G0/G1期间细胞为78.54±0.60%,显著高于对照组(P<0.01),而进入G2/M期细胞为0.48±0.50%,即大多细胞停留于DNA复制前期。结论:Res在0.5～150μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y具有双向浓度依赖性,即在0.5～5μmol/L浓度范围内,Res促进SH-SY5Y细胞增殖,而在15～150μmol/L浓度范围内Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡;其中Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进凋亡主要表现为阻止G1期细胞进入S期。     

11,12-EET对缺氧血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨11,12-环-二十碳三烯酸(11,12-EET)对缺氧大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法:采用贴块法体外培养大鼠主动脉VSMC,将细胞分为常氧对照组(Con组),缺氧模型组(H组),EET组(EET组)和EET-缺氧组(EET-H组),以MTT法测定VSMC的增殖率,以流式细胞术观察VSMC细胞周期及凋亡率,Western blot方法检测Bax的表达。结果:与Con组比较,H组VSMC增殖率升高(P<0.01),EET组VSMC存活率降低(P<0.01);EET-H组细胞增殖率低于H组(P<0.01)。与Con组相比,H组G0/G1期VSMC细胞比例减少(P<0.05),S期细胞比例增加(P<0.05);EET组较Con组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05);与H组相比,EET-H组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞比例减少(P<0.05)。EET-H组VSMC凋亡率高于H组(P<0.05)、Con组(P<0.05)及EET组(P<0.05)。EET组Bax的表达高于Con组(P<0.05);与H组比较,EET组及EET-H组Bax的表达均升高(P<0.01)。结论:外源性给予11,12-EET有抑制缺氧VSMC增殖和促进缺氧VSMC凋亡双重作用。11,12-EET可能通过对VSMC增殖和凋亡的调控,影响血管损伤后血管重构。     

尼古丁对血管内皮细胞释放t-PA及PAI-1的影响

目的: 研究尼古丁对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的影响。方法: HUVECs培养后接种于24孔培养板中,随机分为对照组及实验组,分别进行以下实验。(1)以0.1、1、10、100 μmol/L 尼古丁孵育HUVECs,12 h后收集各组上清液;(2)以100 μmol/L尼古丁与HUVECs孵育0、4、6、8、12 及24 h,收集各组上清液。采用ELISA法测定各组t-PA和PAI-1的浓度。结果: HUVECs与不同浓度尼古丁孵育12 h后,100 μmol/L尼古丁组PAI-1蛋白较对照组明显增加(P<0.01);0.1、1及10 μmol/L尼古丁组PAI-1蛋白与对照组比较,均无显著差异(均P>0.05);各浓度组t-PA蛋白与对照组比较,均无显著差异(均P>0.05)。HUVECs 与100 μmol/L的尼古丁分别孵育4 、6 、8 、12 及24 h,各组PAI-1蛋白均较对照组明显升高(P<0.05),且其升高呈时间依赖性;各组t-PA与对照组比较,均无显著差异(均P>0.05)。结论: 尼古丁可抑制HUVECs的纤溶活性,对内皮细胞具有损伤作用。     

烟碱抑制RAW264.7细胞表达和释放HMGB1的机制

目的:探讨烟碱抑制RAW264.7细胞HMGB1表达和释放的机制。方法:(1)RAW264.7细胞在6孔板分组培养:仅加培养液为对照组(C);加LPS250μg/L为LPS组(LPS);在LPS基础上加烟碱1μmol/L和10μmol/L分别为烟碱1组(N1)和烟碱2组(N2)。培养24h后,RT-PCR检测各组细胞HMGB1 mRNA表达水平;Western blotting检测上清液和胞浆、胞核HMGB1含量。(2)用鼠α7nAChR基因反义和正义链RNA转染培养细胞后,再加含LPS250μg/L和10μmol/L烟碱于培养液分别作为反义链组(antisense RNA)和正义链组(senseRNA);以上述C组和LPS组为对照,2h后Western blotting检测上清液HMGB1量。结果:(1)C组细胞HMGB1 mRNA呈低水平表达(1659.20±121.05);细胞HMGB1 mRNA表达水平在N1和N2组及LPS组间差异无显著(P0.05)。(2)LPS组上清液的HMGB1量较高(445.34±28.52);N1和N2组上清液的HMGB1量显著低于LPS组(P0.05)。(3)C组胞核HMGB1量较高(335.46±12.24);而LPS组胞核HMGB1量明显低于对照组(P0.05);N1组和N2组胞核HMGB1显著高于LPS组(P0.05)。(4)AntisenseRNA组与LPS组比,培养液中HMGB1量无显著差异(P0.05);senseRNA组与LPS组比,HMGB1含量明显减少(P0.05)。结论:烟碱对RAW264.7细胞释放HMGB1有明显抑制作用;其主要机制可能是通过与α7nAChR特异结合而影响HMGB1的核转位。     

NF-κB信号通路介导AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞表达MMP-9

目的： 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人单核/巨噬细胞（THP-1细胞）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的机制。方法: 用0.1 μmol/L佛波酯（PMA）作用48 h,诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞后,随机分为4组：（1）PMA组,即对照组;（2）PMA+AngⅡ组（10-7mol/L,1 h）;（3）PMA+AngⅡ+2-硫代氨基甲酸吡咯烷组［PDTC（10 μmol/L,30 min）］;（4）PDTC组。用Western blotting蛋白印记技术分别检测总蛋白MMP-9及磷酸化核转录因子-κB p65（NF-κB p65）的变化,用RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达的变化。结果: 与对照组相比,AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞磷酸化NF-κB p65增加（1.02±0.10,P<0.05）,MMP-9蛋白量也增加（1.06 ±0.11,P<0.05）,MMP-9 mRNA表达上调（1.22±0.08,P<0.05）,而使用NF-κB的抑制剂PDTC后磷酸化NF-κB p65（0.99±0.12,P<0.01）减少,MMP-9表达明显受到抑制（1.04±0.14, P<0.01）,MMP-9 mRNA表达下调（0.90±0.06, P<0.01）。结论: NF-κB信号转导途径是AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞表达MMP-9的重要途径之一。