高强度聚焦超声波对细粒棘球绦虫原头节酶活性的影响

目的探索高强度聚焦超声波(HIFU)对体外分离的细粒棘球绦虫原头节的酶活性的影响作用。方法用不致原头节即刻杀伤的高强度聚焦超声剂量照射原头节,行酶组织化学染色观察酸性磷酸酶(ACP)、葡萄糖6-磷酸酶(G-6-P)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性,了解高强度聚焦超声对体外培养的原头节3种代谢酶活性的影响作用。结果细粒棘球绦虫原头节具有酸性磷酸酶、葡萄糖6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶活性。不致原头节即刻杀伤的高强度聚焦超声波作用后,辐照组原头节葡萄糖6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶活性较对照组明显减弱,而酸性磷酸酶反应产物与对照组相比无明显变化。阴性对照组无酶反应产物产生。结论高强度聚焦超声波辐照对原头节酸性磷酸酶活性无影响,而对葡萄糖6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性有明显的抑制,这可能是影响原头节的代谢功能,最终抑制其增殖的原因之一。     

高吸水性树脂协同高强度聚焦超声对细粒棘球绦蚴原头节细胞酶活性的影响

目的为探索高吸水性树脂(Super Absorbent Resin,SAR)协同高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)对离体细粒棘球绦蚴原头节酶活性的影响。方法将离体原头节悬液(每mL含有2 000个原头节),分为4组:I组(仅原头节悬液)、Ⅱ组:仅SAR组( 0.01 gSAR)、III组(单纯HIFU照射)、IV组(HIFU照射+ 0.01gSAR)、Ⅴ组(HIFU照射+ 0.1 gSAR)。以声功率为100 w的高强度聚焦超声波辐照30 s,辐照后悬液涂片进行台盼兰及经冰冻切片酶组织化学染色,观察原头节形态学改变,并用半定量方法检测原头节内细胞的葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性。结果显示当超声剂量一定时,原头节的形态改变与SAR剂量有正效应关系,SAR量越大,其破坏程度越高。正常原头节透亮、外形完整,各实验组原头节深染或结构崩解。单纯HIFU照射组在作用60 s时,原头节死亡率为80.1%;HIFU结合不同量SAR两组原头节在HIFU作用10 s时,其死亡率分别为87.82%和89.1%。加入SAR后再经过HIFU照射各组原头节内细胞葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶活性降低,明显低于单纯超声组(P<0.05),阴性对照组无酶反应物产。结论SAR能增加HIFU辐照对原头节的急性杀伤作用,使原头节内细胞的葡萄糖-6-磷酸酶活性和琥珀酸脱氢酶活性均显著低降低,从而影响其活力。     

高吸水性树脂协同高强度聚焦超声对细粒棘球绦蚴原头节细胞酶活性的影响北大核心CSCD

目的为探索高吸水性树脂(Super Absorbent Resin,SAR)协同高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)对离体细粒棘球绦蚴原头节酶活性的影响。方法将离体原头节悬液(每mL含有2 000个原头节),分为4组:I组(仅原头节悬液)、Ⅱ组:仅SAR组(0.01gSAR)、III组(单纯HIFU照射)、IV组(HIFU照射+0.01gSAR)、Ⅴ组(HIFU照射+0.1gSAR)。以声功率为100w的高强度聚焦超声波辐照30s,辐照后悬液涂片进行台盼兰及经冰冻切片酶组织化学染色,观察原头节形态学改变,并用半定量方法检测原头节内细胞的葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性。结果显示当超声剂量一定时,原头节的形态改变与SAR剂量有正效应关系,SAR量越大,其破坏程度越高。正常原头节透亮、外形完整,各实验组原头节深染或结构崩解。单纯HIFU照射组在作用60s时,原头节死亡率为80.1%;HIFU结合不同量SAR两组原头节在HIFU作用10s时,其死亡率分别为87.82%和89.1%。加入SAR后再经过HIFU照射各组原头节内细胞葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶活性降低,明显低于单纯超声组(P<0.05),阴性对照组无酶反应物产。结论 SAR能增加HIFU辐照对原头节的急性杀伤作用,使原头节内细胞的葡萄糖-6-磷酸酶活性和琥珀酸脱氢酶活性均显著低降低,从而影响其活力。     

高吸水性树脂对高强度聚焦超声杀伤肝包虫囊的增强效应

目的 探索高吸水性树脂(superabsorbent resin, SAR)增强高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)热效应的可行性及杀伤棘球蚴内原头节效率。方法 将囊径大小为4.5～5 cm的新鲜肝包虫囊分为6个组。空白(采取普通超声照射,无SAR)对照组(Ⅰ组),空白(采取普通超声照射)对照组(囊内注入半饱和量SAR)(Ⅱ组),空白(采取普通超声照射)对照(囊内注入饱和量SAR)(Ⅲ组);单纯HIFU辐照对照组(Ⅳ组),以单纯HIFU辐照,HIFU照射+ SAR半饱和量辐照(Ⅴ组),HIFU照射+SAR饱和量(Ⅵ)。各照射试验组均采用200 w声功率、点扫的方式照射整个包囊。照射后立即测定距包囊5 mm部位肝组织、囊液、囊壁的温度,并抽取囊液涂片,经台盼兰染色后计数原头节的死亡率。结果 HIFU照射后,棘球蚴囊壁、囊液、包囊周围肝组织的温度均有升高,HIFU+SAR作用组的各测量点温度分别为:囊壁(49±0.87)℃和(55±0.81)℃,囊液(38.9℃±1.02)℃和(44.6±1.82)℃,肝(34.5±0.88)℃和(37.88±0.67)℃,均显著高于单纯HIFU照射组和超声假照组(P<0.05)。HIFU照射各组原头节杀伤率明显高于对照组,各组(从Ⅰ到Ⅵ组)原头节死亡率分别为22.94%、23.11%、24.43%、55.28%、63.4%、74.2%,Ⅳ、Ⅴ组(即SAR协同HIFU照射)原头节杀伤效率高于单纯HIFU照射组,且达囊液饱和状态时,其内原头节杀伤效率高于半饱和状态,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SAR协同HIFU照射能使棘球蚴包囊的囊壁、囊液产生明显的升温效应,协同HIFU杀伤囊液内的游离原头节,SAR的剂量越大,HIFU照射杀伤原头节的效应越强。     

伽马射线体外照射对细粒棘球蚴原头节的杀灭作用

目的 探讨细粒棘球蚴原头节体外照射γ-射线后导致的死亡、细胞内caspase-3的表达和显微结构的变化。方法 在体外培养的基础上,用不同剂量的γ-射线对细粒棘球蚴原头节进行照射。对照射后各组原头节细胞内的caspase-3蛋白酶活性进行测定,观察期原头节死亡率,并在倒置显微镜下动态观察原头节形态结构的变化。结果 原头节经过γ-射线体外照射后会出现死亡率升高,caspase-3表达增强现象,同时原头节形态结构出现肿胀、塌陷、碎裂的阶段性变化。结论 γ-射线体外照射可以直接杀灭原头节,且诱导原头节细胞发生凋亡。     

高强度聚焦超声结合微泡造影剂杀伤原头蚴的效果

目的:探讨高强度聚焦超声结合不同比例微泡造影剂对离体原头蚴的杀伤效应.方法:在原头蚴悬液中加入不同比例的微泡造影剂（含氟脂质体微泡）,以相同超声功率及辐照时间作用（治疗声功率为50W,辐照时间为30s）.台盼蓝排斥试验计数原头蚴杀伤率,光镜检测原头蚴形态结构变化.结果:超声剂量一定时,加入适宜比例的微泡造影剂组原头蚴杀...     

X线照射泡球蚴原头节的体外实验研究

目的探讨X线对体外培养的泡球蚴原头节的杀伤作用。方法无菌采集子午沙鼠体内的泡球蚴中含原头节的囊液,将其加入RPMI 1640培养液中培养。原头节体外培养3 d后分装至培养瓶中,每组10瓶,每瓶约含10 000个原头节,设空白对照组、低剂量组(15 Gy和30 Gy)、中剂量组(45 Gy和60 Gy)、高剂量组(75 Gy和90 Gy)、阿苯达唑组(2 500 ng/ml)、45 Gy X线+2 500 ng/ml阿苯达唑组和75 Gy X线+2 500 ng/ml阿苯达唑组。X线照射剂量率为200 cGy/min,源皮距为100 cm。体外培养第4天开始照射,每组共照射3次,每次间隔1 d。首次照射后第1天开始每天取原头节培养液,0.1%伊红染色,光镜下计数每100个原头节中着色原头节数目,每组计算300个原头节的平均死亡率,直至实验组原头节全部死亡为止。同时光镜下观察经X线照射后原头节的变化。结果不同放射剂量组的原头节死亡率与空白对照组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。阿苯达唑组原头节死亡率与放射线联合阿苯达唑组间的差异均有统计学意义(P<0.05),且显著高于空白对照组(P<0.05)。其中,X线...     

微泡造影剂对高强度聚焦超声杀伤离体棘球蚴的增强作用

目的比较超声造影剂(ultrasound contrast agent,UCA)协同高强度聚焦超声(high intensity focused ultra-sound,HIFU)与单纯HIFU辐照对离体细粒棘球蚴包囊的杀伤效果的不同,探索UCA增强HIFU杀伤棘球蚴的方法。方法采集新鲜包囊按直径大小随机分为6个区组,每组25个,每5个包囊为1试验组随机接受以下试验:普通B超照射的空白对照,0.1mL UCA处理,单纯HIFU辐照,0.1mL UCA+HIFU辐照,0.2mL UCA+HIFU辐照。HIFU辐照后观察分析包囊灰度变化,光镜观察原头蚴形态变化并计数其死亡率。结果 HIFU辐照功率一定时,加入UCA能增加HIFU辐照包囊灰度变化和原头蚴的死亡率,并且该效果随UCA剂量的增加而加强。结论 UCA能增强HIFU对离体细粒棘球蚴杀伤效率,提高对原头蚴的杀伤效果。     

达克罗宁对细粒棘球蚴原头节体外作用及其ROS水平的影响

目的初步探究达克罗宁对细粒棘球蚴原头节体外生长的影响以及原头节内ROS的表达情况。方法用达克罗宁与细粒棘球蚴原头节体外共培养,采用0.1%曙红排斥试验观察原头节的形态,统计存活率并绘制原头节的生存曲线;将DCFH-DA探针加入孵育原头节的培养基以检测其ROS活性;用SOD和Caspase-3试剂盒测定SOD和Caspase-3的活性。结果 40μg/ml达克罗宁可使体外培养的原头节在第4d全部死亡;达克罗宁以剂量依赖的方式使原头节的ROS和Caspase-3表达量增加,同时降低SOD的活性。结论达克罗宁具有体外抗细粒棘球蚴原头节作用,通过激活ROS诱导氧化应激导致Caspase-3被激活从而引起细粒棘球蚴原头节的凋亡。     

胆汁对体外细粒棘球蚴原头节的作用观察

目的探讨不同浓度的胆汁对细粒棘球蚴原头节的生长作用及形态学影响。方法将体外培养的细粒棘球蚴原头节分别加入40％、60％、80％、100％的胆汁中体外孵育。0．1％伊红染色在倒置显微镜下检测原头节的活力及形态改变,实验重复三次;透射电子显微镜下（TEM）下观察胆汁作用后原头节表面超微结构改变。结果不同浓度的胆汁对原头节均有杀伤作用,其中浓度为100％和80％的胆汁对细粒棘球蚴原头节杀伤作用最明显。倒置显微镜下观察发现,不同浓度的胆汁作用细粒棘球蚴原头节后,原头节多呈外翻型,原头节顶突上的小钩排列紊乱,部分脱落,吸盘突起,变形,活动性减弱。随着浓度的增加,变化越明显。超微结构显示40％的胆汁作用3d后,原头节纤毛出现少量缺损,合胞体带排列较紊乱,合胞体带内出现散在少量的空泡和脂滴。60％胆汁作用3d后,合胞体带内微毛出现融合,腔内出现空泡和脂滴,数量多且大。结论胆汁作用后,可导致体外细粒棘球蚴原头节的形态发生不同程度的改变并有有抑制作用,然而关于胆汁在体内的疗效有待于进一步研究。     

高强度聚焦超声波辐照细粒棘球蚴包囊的热效应

目的通过检测高强度聚焦超声波(HIFU)照射棘球蚴包囊后囊液、囊壁、包囊周围肝组织温度和原头蚴死亡率,了解HIFU处理后不同部位的升温效应,探索HIFU杀伤棘球蚴的方法和效果。方法采集感染细粒棘球绦虫的新鲜羊肝,选取囊壁较薄,触摸弹性较好,直径介于10mm到45mm之间的包囊42个。采用随机区组设计的方法分组,对照组用普通超声照射,实验组用200W声功率HIFU直线扫描的方法照射,照射时间分别为2min,4min,6min,8min,10min。照射后立即测定囊液、囊壁、距包囊5mm部位肝组织的温度。抽取囊液、涂片,经台盼兰染色后计数原头蚴的死亡率。结果HIFU照射后,棘球蚴囊壁、囊液、包囊周围肝组织的温度均有升高,其中囊壁的温度升高最为明显,且与囊液、包囊周围肝组织之间有显著差异;囊液中的原头蚴死亡率增加。结论HIFU照射使棘球蚴包囊的囊壁产生明显的升温效应,HIFU照射对原头蚴有杀伤作用。     

苦参碱联合阿苯达唑治疗小鼠继发性棘球蚴病效果观察

目的 评价中药苦参碱单独及联合阿苯达唑使用治疗小鼠继发性棘球蚴病的效果.方法 将感染棘球蚴的昆明小鼠分为4组:苦参碱组、阿苯达唑组、联合用药组、对照组,每组10只.在对小鼠进行药物治疗90 d后,检测各组小鼠棘球蚴湿重、抑囊率,并利用光镜、电镜对棘球蚴组织进行形态结构和超微结构观察.结果 苦参碱组、阿苯达唑组、联合用药组、对照组棘球蚴湿重分别为(0.32±0.12)、(0.31±0.10)、(0.05±0.03)、(1.16±0.43)g,苦参碱组及联合用药组对小鼠棘球蚴的抑囊率分别达到72.4%和95.7%,显示联合用药组明显优于苦参碱组(P<0.05).上述4组包囊组织Ⅲ级病理损伤率分别为40.9%(9/22)、43.5%(10/23)、91.3%(21/23)、9.5%(2/21).与对照组比较,其他3组包囊组织Ⅲ级病理损伤率明显增高(P均<0.01),且联合用药组最为明显.结论 苦参碱对小鼠棘球蚴的增长有明显的抑制作用,尤其联合阿苯达唑使用治疗效果较好,说明两种药物具有协同治疗作用.     

Growth inhibition of high-intensity focused ultrasound on hepatic cancer in vivo

AIM: To investigate the damaging effect of high-intensity focused ultrasound (HIFU) on cancer cells and the inhibitory effect on tumor growth. METHODS: Murine H22 hepatic cancer cells were treated with HIFU at the same intensity for different lengths of time and at different intensities for the same length of time in vitro, the dead cancer cells were determined by trypan blue staining. Two groups of cancer cells treated with HIFU at the lowest and highest intensity were inoculated into mice. Tumor masses were removed and weighed after 2 wk, tumor growth in each group was confirmed pathologically. RESULTS: The death rate of cancer cells treated with HIFU at 1 000 W/cm2 for 0.5, 1, 2, 4, 8, and 12 s was 3.11±1.21%, 13.37±2.56%, 38.84±3.68%, 47.22±5.76%, 87.55±7.32%, and 94.33±8.11%, respectively. A positive relationship between the death rates of cancer cells and the length of HIFU treatment time was found (r=0.96, P<0.01). The death rate of cancer cells treated with HIFU at the intensity of 100,200,400,600,800, and 1 000 W/cm2 for 8 s was 26.31±3.26%, 31.00±3.87%, 41.97±5.86%, 72.23±8.12%, 94.90±8.67%, and 99.30±9.18%, respectively. A positive relationship between the death rates of cancer cells and the intensities of HIFU treatment was confirmed (r= 0.98, P<0.01). The cancer cells treated with HIFU at 1 000 W/cm2 for 8 s were inoculated into mice ex vivo. The tumor inhibitory rate was 90.35% compared to the control (P<0.01). In the experimental group inoculated with the cancer cells treated with HIFU at 1 000 W/cm2 for 0.5 s, the tumor inhibitory rate was 22.9% (P<0.01). By pathological examination, tumor growth was confirmed in 8 out of 14 mice (57.14%, 8/14) inoculated with the cancer cells treated with HIFU at 1 000 W/cm2 for 8 s, which was significantly lower than that in the control (100%, 15/15, P<0.05). CONCLUSION: HIFU is effective on killing or damage of H22 hepatic cancer cells in vitro and on inhibiting tumor growth in mice ex vivo.     

甘氨鹅脱氧胆酸对体外细粒棘球蚴原头节活力及ROS影响

目的 研究甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid, GCDCA)对体外细粒棘球蚴原头节活力及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法 将细粒棘球蚴原头节分为对照组及GCDCA处理组(500、1 500、2 500 μ mol/ L),应用体外培养技术,通过伊红染色法每天定时在光学显微镜下观察原头节的活力并记录存活和死亡数目。使用试剂盒检测不同浓度GCDCA处理 24 h后各组原头节体内caspase-3酶活性变化;DCFH- DA染色法荧光显微镜观察 GCDCA作用24 h后原头节内 ROS水平变化。结果 500、1 500、2 500 μ mol/ L GCDCA处理后均可导致原头节活力减弱,且最高浓度组在第7 d时原头节全部死亡。500、1 500、2 500 μ mol/ L GCDCA组作用原头节24 h后 caspase-3酶活性与对照组相比明显升高(F=555.162, P<0.05)。500、1 500、2 500 μ mol/ L GCDCA作用原头节24 h后原头节内 ROS水平与对照组相比明显升高(F=216.901, P<0.05)。结论 GCDCA 能抑制体外原头节生长,促使原头节死亡,可能与活化caspase-3及提高原头节内ROS 水平相关,具体机制有待进一步研究。     

阿苯达唑脂质体生发层单抗复合物治疗小鼠细粒棘球蚴病效果观察

目的　评价阿苯达唑免疫脂质体 (IL - Alb)治疗小鼠细粒棘球蚴病的效果。　方法　每只小鼠感染约 10 0 0个细粒棘球绦虫原头蚴 ,80天后随机分为 5组 ,4个治疗组分别给予阿苯达唑 (Alb)、阿苯达唑脂质体 (L-Alb)、阿苯达唑亚砜脂质体 (L - Albso)及 IL - Alb,按原药 10 0 m g/ (kg.d)× 5 d ip,连续 3个疗程 ,另 1组为对照组。治疗效果按囊重抑制率、常规病理切片、超微结构及高效液相色谱法测定囊药含量 4个指标综合评价。　结果　L - Alb治疗组 ,囊重抑制率为 80 .3% ,囊药含量为 2 .18μg/ g,优于 Alb组囊重抑制率为 6 1.2 % ,囊药含量为 0 .76μg/ g;而 IL- Alb组的囊重抑制率为 91.45 % ,囊药含量为 5 .15 μg/ g。组织病理损伤以 IL- Alb组较重。　结论　免疫脂质体作为 Alb载体 ,可增加药物的靶特异性 ,提高 Alb治疗细粒棘球蚴的疗效。     

3种药物体外抗细粒棘球蚴原头节作用的比较

目的　通过比较氧苯达唑、阿苯达唑和阿苯达唑脂质体体外抗细粒棘球蚴原头节作用 ,探讨氧苯达唑抗包虫病的作用。　方法　将氧苯达唑、阿苯达唑和阿苯达唑脂质体分别配成高、中、低浓度加入 RPMI16 4 0培养基中 ,体外培养细粒棘球蚴原头节 ,观察其每天的死亡率 ,直到对照组的头节全部死亡为止。　结果　将相同条件下 3种药物作用原头节的死亡率分别与对照组相比 ,阿苯达唑、氧苯达唑高、中、低浓度组与对照组相比 ,差异均有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;而阿苯达唑脂质体仅在高浓度时与对照组的差别有统计学意义 (P<0 .0 5 )。　结论　氧苯达唑、阿苯达唑和阿苯达唑脂质体均有显著的体外抗细粒棘球蚴原头节作用 ;氧苯达唑体外抗细粒棘球蚴原头节作用与阿苯达唑相当 ,可认为是一种新型抗包虫药 ;阿苯达唑脂质体剂型并未显示出特殊的体外抗原头节作用。     

噻虫啉治疗继发性泡型包虫病的实验研究

目的通过观察不同浓度噻虫啉(Thia)对棘球蚴的杀伤作用,评价噻虫啉应用于治疗多房棘球蚴病的效果,旨在探索噻虫啉开发为抗包虫病先导化合物的潜能。方法体外实验中以不同浓度噻虫啉作用于多房棘球蚴原头节,以0.1%伊红染色评价原头节存活情况,并通过扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察原头节超微结构改变。体内实验将继发性感染多房棘球蚴小鼠分为3组:模型组、阿苯达唑组(ABZ, 100 mg/kg)、Thia组(20 mg/kg),以未感染小鼠作为空白对照组。经药物灌胃治疗4 w后,分离小鼠脾脏和包虫囊肿称取重量,计算脾脏指数和抑囊率,HE染色后观察囊肿形态学改变。此外,从体外(LO2和HepG2细胞)和体内(Balb/c小鼠)评价噻虫啉毒性。结果 40μg/mL噻虫啉在体外即表现出对原头节的杀伤作用,并导致原头节体表及内部结构破坏。体内药物治疗4 w后,小鼠脾脏指数较模型组增高(P<0.05),包虫囊肿重量较模型组减轻(P<0.05)。包虫囊肿病理显示Thia组未见生发层结构。噻虫啉浓度低于80μg/mL无明显细胞毒性,20 mg/kg噻虫啉无明显的体内肝肾毒性。结论噻虫啉在...