大鼠实验性胃炎中PGP9．5、C—kit及胃泌素、生长抑素表达的观察研究

目的通过观察胃炎大鼠组织PGP9．5及c—kit与胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）表达变化，探讨胃cajal间质细胞（ICC）、肠神经及胃肠激素在胃炎发病中的作用。方法45只大鼠分胃炎A组、胃炎B组、对照组3组，分别灌喂幽门螺杆菌（Hp）SS1菌株、2％阿司匹林和0．6N盐酸1：1混合液、生理盐水，处死后取胃窦及胃体组织PGP9．5染色及检测胃体黏膜C-kit及胃窦黏膜GAS、SS表达，测量胃壁神经元胞体、c—kit阳性表达的ICC最长直径（Dmax，μm）、平均面积（μm^2）及光密度（nm）以及GAS、SS表达的积分光密度，并进行比较。结果（1）胃炎A组、B组胃壁神经元表达PGP9．5细胞平均面积、光密度均低于对照组（P〈0．01），胃炎A组与B组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）胃炎A组GAS表达明显高于对照组，而SS表达则低于对照组（P〈0．05）。胃炎B组与对照组比较两项表达结果差异均无统计学意义（P〉0．05）。直线相关分析显示SS与GAS呈负相关（r=-0．333，P〈0．01）；（3）胃炎A组、B组C-kit表达细胞分布面积和直径均明显小于对照组（P〈0．05），胃炎A组与B组比较差异无统计学意义（P〉0．05），三组c—kit表达细胞的积分光密度比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Hp感染和NSAID可能改变胃壁神经元及ICC的形态结构。Hp感染可明显抑制胃窦SS分泌，而增加GAS分泌；NSAID诱导的胃炎对GAS与SS的影响不显著。     

miRNAlet7、Ras在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨miRNAlet7（1et7）、Ras在非小细胞肺癌中的表达及临床病理学意义。方法利用原位杂交方法检测let7、免疫组化方法检测Ras在68例非小细胞肺癌（肺癌组）及20例癌旁正常肺组织（对照组）中的表达。结果let7在肺癌组中的阳性表达率（39．7％）低于对照组（75．0％）（P〈0．05）、Ras在肺癌组中的阳性表达率（66．2％）高于对照组（25．0％）（P〈0．01）;let7阳性率与患者年龄、性别及肿瘤组织类型、分化程度、分期无关（P〉0．05）,Ras阳性率与吸烟史、患者性别及肿瘤组织类型有关（P〈0．01）,与肿瘤分化程度、淋巴结转移及临床分期无关（P〉0．05）;let7与Ras在非小细胞肺癌组织中表达呈明显负相关（r=-0．627,P〈0．01）;let7阳性表达组2年生存率明显优于阴性表达组（X2=4．84,P〈0．05）;Ras阳性表达与阴性表达组2年生存率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论let7的低表达、Ras的高表达参与了肺癌的发生发展,let7阳性表达与预后密切相关;Ras可协同参与肺癌的发生发展。     

大鼠弥漫性轴索损伤后丘脑NGBmRNA的表达

目的研究弥漫性轴索损伤后大鼠丘脑组织中脑红蛋白（NGB）mRNA的表达变化,初步探讨NGB与颅脑损伤的关系。方法选择改进的Mamarou法制作弥漫性轴索损伤模型,采用RT-PCR检测颅脑损伤后不同时间丘脑组织中NGBmRNA的表达情况,并对所得数据进行分析。结果在伤后30min脑组织中NGBmRNA的表达明显升高,而24h时则有所下降,48h又上升达高峰。结论弥漫性颅脑损伤后,丘脑组织中NGBmRNA表达升高,提示其可能参与神经元损伤后应激及继发缺血、缺氧性脑损伤的应答机制。     

细胞凋亡相关斑点样蛋白与半胱氨酸蛋白酶-1在肝癌中的表达及临床意义

目的分析细胞凋亡相关的斑点样蛋白（ASC）与半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）在肝癌与癌旁组织中的表达及临床意义。方法对30例术前未使用放疗与化疗的肝癌与癌旁组织标本采用免疫组化LSAB法进行ASC、Caspase-1测定，并对各指标进行分析。结果ASC阳性率在肝癌与癌旁组织中分别为10．00％（3／30）和73．33％（22／30），组间阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．01）；Caspase．1阳性率分别为23．33％（7／30）和66．67％（20／30），组间阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．01）。ASC与Caspase-1两指标在癌组织中的表达均降低，两者不相关（P〉0．05），在癌旁组织中表达均显著增高，两者呈正相关（r=0．722，P〈0．01）。结论ASC、Caspase-1在肝癌中表达低，且显著低于癌旁组织，提示ASC、Caspase-1与肝癌的凋亡、发生及发展过程密切相关，可作为肝癌的诊断及治疗有希望的靶点。     

凋亡抑制蛋白Livin在胃癌中的表达研究

目的探讨胃癌组织中凋亡抑制蛋白Livin表达情况及其与临床病理因素的关系。方法采用逆转录多聚酶链式反应（RT—PCR）和免疫组化法检测胃癌组织中Livinα、Livinβ的mRNA的表达。结果45例胃癌组织中RT-PCR检测Livin表达阳性率为48．8％，免疫组化检测80例胃癌组织Livin表达阳性率为55％，两种方法在正常和癌旁组都未捡出阳性结果；Livin的表达与组织分化和淋巴结转移有关，组织分化差，淋巴结转移者Livin表达率高（P〈0．05）。结论Livin在胃癌组织中表达增高，可作为胃癌的分子标志物，可能成为胃癌诊断和治疗的新分子靶点。     

真核表达载体pcDNA3．1-RASSF1的构建及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的构建pcDNA3．1－RASSFl真核表达载体,并检测其对肝癌细胞系HepG2凋亡的影响。方法应用聚合酶链反应技术从人RASSFlcDNA中扩增出RASSF1基因后,以内切酶XhoI和EcoRI进行双酶切,将其克隆人用相同酶处理的载体pcDNA3．1;将重组质粒pcDNA3．1－RASSF1转染肝癌HepG2细胞,应用Westernblot法检测RASSF1的表达水平;用AnnexinV／PI法检测细胞的凋亡情况。结果酶切和测序结果表明,重组质粒pcDNA3．1．RASSF1构建成功;Westernblot法结果表明转染pcDNA3．1-RASSF1后HepG2细胞中RASSFl表达升高;AnnexinV／PI法用流式细胞术检测凋亡,空白组、pcDNA3．1组和pcDNA3．1-RASSFl组HepG2细胞的凋亡率分别为（5．8±0．42）％、（7．48±0．68）％和（35．1±3．15）％。结论真核表达载体pcDNA3．1-RASSF1构建成功;RASSF1蛋白在HepG2细胞中高表达,并促进细胞凋亡。     

Survivin在冬凌草甲素介导下对人前列腺癌细胞PC-3凋亡的作用

目的观察冬凌草甲素对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株-PC-3细胞的诱导凋亡作用,探讨Survivin在此过程中的作用。方法用不同浓度的冬凌草甲素干预PC-3细胞,MIT试验分析观察其对PC-3细胞活力的影响;通过用流式细胞仪分析PC．3早期凋亡细胞的百分率;用Western印迹检法、实时荧光定量PCR方法检测PC-3细胞Survivin的蛋白和mRNA表达的变化。结果（1）细胞生长抑制力呈一定的时间、剂量依赖性,冬凌草甲素浓度为2．5、5、10、20、40μmol／L时,干预48h后相对应的平均细胞生长抑制率依次为9．2％、25．3％、39．3％、77．2％、92．5％,药物抑制PC-3细胞活力的IC50约为10．29μmol／L;流式细胞仪检测经不同浓度的冬凌草甲素（0,10,20,40μmol／L）干预48h后,PC-3细胞的早期凋亡率分别为4．8％,15．4％,19．5％和27．4％（P〈0．05）。（2）冬凌草甲素以浓度依赖性方式抑制PC-3细胞的Survivin的蛋白和mRNA表达。结论冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导PC-3细胞凋亡。冬凌草甲素通过影响Survivin的表达来诱导PC-3细胞凋亡。     

乳腺癌中组蛋白乙酰化与p21^WAF1的表达研究

目的探讨乳腺癌中乙酰化的组蛋白H3、H4及p21^WAF1的表达变化及其意义。方法采用HE染色鉴定乳腺癌的病理形态变化;应用免疫组织化学法检测p21^WAF1在80例乳腺癌组织与80例正常乳腺组织中的表达;免疫印迹法检测乙酰化的组蛋白H3、H4及p21^WAF1蛋自在80例乳腺癌组织及80例正常乳腺组织中的表达。结果·HE染色可见,与正常的乳腺组织相比,乳腺癌组织结构及细胞形态有明显的异型性。免疫组化结果显示：p21^WAF1。在80例乳腺癌组织中有49例阳性表达（61．25％）;而80例正常乳腺组织中只有3例弱阳性表达（3．75％）,两种组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫印迹法结果表明,p21^WAF1蛋白在乳腺癌中的表达高于正常组织,乳腺癌组为0．78±0．095、正常乳腺组为0．65±0．055;乙酰化的组蛋白H3、H4在正常乳腺组织中的表达比乳腺癌组织高,其中乙酰化的组蛋白H3正常乳腺组为2．35±0．340、乳腺癌组为1．07±0．067,乙酰化的组蛋白H4正常乳腺组为3．44±0．202、乳腺癌组为1．11±0．086,两者表达差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论组蛋白乙酰化与p21^WAF1蛋白的表达变化与乳腺癌的发生发展有关。     

高迁移率族蛋白1mRNA表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系

目的通过检测高迁移率族蛋白1（High mobility group protein1,HMGB1）mRNA在子宫内膜癌中的表达,探讨HMGBI基因与子宫内膜癌临床病理特征的关系。方法应用半定量RT—PCR技术检测56例子宫内膜癌和20例正常子宫内膜中HMGB1 mRNA的表达情况。结果子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织HMGB1 mRNA的表达水平分别为0．3512±0．0985和0．2208±0．0170,内膜癌组高于正常内膜组,差异有统计学意义（P〈0．05）;子宫内膜癌按不同的临床病理特征分组,HMGB1 mRNA表达的相对含量随手术病理分期的增加、淋巴结的转移和肌层浸润的加深出现上调的趋势,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论HMGB1 mRNA的表达与子宫内膜癌的临床病理特征有关,HMGB1可能参与子宫内膜癌的发生、发展、浸润和转移过程。     

氨溴索对吸烟诱导的慢性支气管炎大鼠IκBα和TGF-β1表达的影响

目的探讨核转录因子-κB抑制蛋白-α（IκBα）和转化生长因子-β1（TGF-β1）在吸烟诱导的大鼠慢性支气管炎中的作用及氨溴索预先给药对慢性支气管炎大鼠IκBα和TGF-β1表达的影响。方法按随机数字表法将60只雄性Wistar大鼠分为正常组、模型组、低剂量氨溴索组（低剂量组）、高剂量氨溴索组（高剂量组）各15只。采用单纯吸烟的方法建立慢性支气管炎大鼠模型。低剂量组[30mg／（kg·次）]和高剂量组[75mg／（kg·次）]经腹腔注射氨溴索,每天吸烟前注射一次至实验结束。模型组于每天吸烟前腹腔内注射与低剂量组等体积生理盐水一次。76d后将各组大鼠处死,计算各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BAFL）中自细胞计数及细胞分类计数;HE染色观察肺组织病理形态学变化;免疫组化法检测IκBα和TGF-β1在大鼠肺组织中的表达。结果模型组病理形态改变符合慢性支气管炎的特点,高、低剂量组与模型组比较,光镜下慢性支气管炎的改变明显减轻。与正常组比较,模型组BAFL中白细胞总数、中性粒细胞数增高,巨噬细胞数降低,肺组织中IκBα表达明显减弱（t=3．24,3．31,3．29,3．48,P〈0．05）,TGF—β1表达明显增强（P〈0．05）。高、低剂量组与模型组比较BAFL中自细胞总数、中性粒细胞数降低,巨噬细胞数增高,肺组织中IκBα表达明显增强（t=2．86,2．97,2．92,3．52,2．42,2．88,2．58,3．48,p〈0．05）,TGF-β1表达明显减弱（P〈0．05）。高剂量组较低剂量组IκBα表达强,TGF-β1表达减弱（t=2．82,3．64,P〈0．05）。结论吸烟诱导的慢性支气管炎大鼠气道炎症可能与IκBα表达下降和TGF-β1表达上升有关;氨溴索可能通过上调IκBα和下调TGF-β1在肺内的表达,发挥抗气道炎症的作用,并且呈现剂量依赖效应。     

儿童急性白血病Livin基因表达及意义

目的探讨Livin基因的表达与儿童急性白血病发生以及临床治疗效果的关系及意义。方法采用逆转录聚合酶链式扩增反应对53例急性白血病患儿骨髓液细胞中的LivinmRNA的表达进行检测。结果53例急性白血病患儿中Livin基因的表达率高于对照组（P〈0.05）；初治组中Livin阳性率低于复发组（P〈0.05）；Livin表达阳性组的耐药率高于阴性组（P〈0.05）。结论Livin基因的过表达可能与儿童急性白血病的发生有关，并可能是影响其治疗效果和预后的重要因素。     

PCNAmRNA和Survivin mRNA在不同大肠肿瘤性病变腺管开口组织中表达关系的研究

目的探讨腺瘤癌变过程中其表面腺管开口变化与PCNA、survivin mRNA在各型腺管开口中表达关系的研究。方法标本分别以腺管开口类型及病理组织学分为6组。采用RT—PCR法检测组织中PCNA mRNA及survivin mRNA的表达。结果PCNAmRNA在大肠黏膜腺管开口Ⅰ型、Ⅱ型、ⅢL型、Ⅳ型、Ⅴ1型、ⅤN型6组中阳性表达率分别为0％（0／13）、12．5％（1／8）、38．9％（7／18）、66．7％（12／18）、75．0％（3／4）、100．0％（9／9）,survivin mRNA为0％（0／13）、12．5％（1／8）、22．2％（4／18）、44．4％（8／18）、50．0％（2／4）、77．8％（7／9）。PCNA mRNA阳性表达率在正常大肠黏膜、炎性息肉、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、腺瘤伴不典型增生及癌6组中分别为0％（0／10）、16．7％（2／12）、35．3％（6／17）、63．6％（7／11）、75．0％（6／8）、91．7％（11／12）,survivin mRNA为0％（0／10）、8．3％（1／12）、23．5％（4／17）、45．5％（5／11）、50．0％（4／8）、和66．7％（8／12）,均呈逐渐升高趋势。结论PCNA mRNA及survivin mRNA在腺管开口类型分组其表达强度变化,能较客观反映肿瘤细胞的增殖活性及凋亡状态,并且与病理类型分组得出相同的结果,能即刻将形态学与分子生物学联系起来。     

Survivin、Smad4/dpc4、APC基因在大肠腺瘤和腺癌中的表达及意义

目的 探讨Survivin、Smad4/dpo4、APC基因在大肠腺瘤、腺癌中的表达及意义.方法 采用免疫组化SP法检测40例正常大肠组织、80例腺瘤、80例腺癌中三种基因表达情况.结果 Survivin基因在正常大肠组织、腺瘤、腺癌中阳性表达率分别为0、35.0%、75.0%;Smad4基因为100%、95.0%、78.8%;APC为100%、80.0%、45.0%.结论 Survivin基因检测可以作为大肠癌早期诊断、观察疗效和监测肿瘤术后复发、转移等生物学行为的一个新指标.Smad4基因突变或缺失不仅诱导大肠癌的发生还促进其发展.检测APC基因突变,有助于对肿瘤病因学、发病机制及早期诊断的研究.     

三氟乙醚致大鼠反复惊厥后海马caspase-3、FasL的动态表达

目的研究幼年大鼠反复惊厥后海马组织caspase-3、FasL表达的变化。方法72只20日龄健康Sprague—Dawley（SD）大鼠随机分为2组：正常对照组、惊厥组。通过三氟乙醚反复吸入（1次／d，连续6d），制作幼年大鼠惊厥动物模型。用免疫组化（SP）法检测各组动物反复惊厥结束后1、3、7d海马组织中caspase-3和FasL蛋白的表达，RT—PCR方法检测各时相点海马组织中caspase-3 mRNA的表达。结果反复惊厥结束后1、3、7d海马组织caspase-3、FasL的表达和对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论caspase-3、FasL参与了幼年期惊厥性脑损伤的病理过程。     

1型糖尿病大鼠肾脏衔接蛋白p66Shc的表达

目的观察1型糖尿病大鼠肾脏衔接蛋白p66Shc的表达及活性氧的水平。方法以链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型,分为糖尿病组和正常对照组。采用双缩脲法检测24h尿蛋白;免疫组化、Westem blot方法检测肾脏p66Shc表达;二氢乙啶染色检测肾组织活性氧。结果与对照组相比,糖尿病大鼠24h尿蛋白明显增高（P〈0．01）,肾脏特别是肾小管p66Shc的表达显著增高（P〈0．05）,活性氧含量明显增高。结论糖尿病大鼠肾脏p66Shc表达增强,活性氧含量增加,p66Shc可能在糖尿病肾病肾组织氧化损伤的发生发展过程中扮演重要角色。     

病毒性脑炎患儿NSE、S100B蛋白和神经肽Y水平变化的研究

目的 探讨病毒性脑炎患儿血清及脑脊液神经元特异性烯醇化酶（NSE）、S100B蛋白和神经肽Y（NPY）的水平变化及临床意义.方法 检测50例病毒性脑炎患儿（重症20例,轻症30例）及选择同期住院20例凝诊病毒性脑炎儿行腰穿排除中枢神经系统感染者（对照组）的血清和脑脊液NSE、S100B蛋白和NPY水平,并进行对比分析.结果 病毒性脑炎组血清和脑脊液NSE、S100B蛋白和NPY的含量[血清：（18.90±5.50）μg/L,（0.57±0.26）μg/L,（267.3±54.7）μg/L;GSF：（10.45±4.40）μg/L,（0.93±0.53）μg/L,（347.2±60.6）μg/L]均高于对照组[血清：（10.35±2.49）μg/L,（10±0.06）μg/L,（67.8±22.5）μg/L;GSF：（3.96±1.57）μg/L,（0.29±0.18）μg/L,（102.6±38.9）μg/L]（P＜0.01）,重症组血清和脑脊液NSE、S100B蛋白和NPY的含量[血清：（21.93±5.39）μg/L,（0.71±0.31）μg/L,（32.5±62.8）μg/L;GSF：（13.05±4.41）μg/L,（1.23±0.66）μg/L,（407.3±68.1）μg/L]均高于轻症组[血清：（15.93±4.02）μg/L,（0.42±0.14）μg/L,（234.7±51.2）μg/L;GSF：（8.05±1.77）μg/L,（0.63±0.26）μg/L,（320.2±59.5）μg/L]（P〈0.01）.结论 NSE、S100B蛋白和NPY的检测有助于判断儿童病毒性脑炎的病情和脑损伤程度,可作为评估预后的重要生化指标.     

鞘内注射布托啡诺对福尔马林诱导大鼠脊髓背角NMDAR的影响

目的观察鞘内注射布托啡诺对福尔马林炎性痛大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体（NMDAR）表达的影响。方法健康雄性SD大鼠20只,体重220～280g。随机分为4组（n=5）：对照组（C组）,鞘内注射生理盐水组（N组）,鞘内注射12．5μg布托啡诺组（B1组）,鞘内注射25μg布托啡诺组（B2组）。在大鼠的左后足掌面皮下注射5％福尔马林50μl致痛前30min,N组、B1组和B2组分别注射生理盐水、12．5μg布托啡诺、25μg布托啡诺,C组在福尔马林注射前不注射任何试剂。记录福尔马林诱导出注射后爪的双相理毛行为时间（在福尔马林注射后第1时相,0—5min;第2时相,10—60min）。所有大鼠均在注射后2h处死,用免疫组化法测定大鼠L5节段脊髓背角NMDA受体的表达。结果与C组相比,N组和B1组对福尔马林诱导的第1和2时相．影响差异无统计学意义（P〉0．05）,3组脊髓背角NMDA受体表达均增加,相比较差异无统计学意义（P〉0．05）。与C组比较,B2组引起第1和2时相的后爪理毛行为的总计反应时间明显减少,并显著降低福尔马林致痛大鼠L5脊髓背角NMDA受体表达（P〈0．05）。结论鞘内注射布托啡诺能够对福尔马林诱导的疼痛行为产生明显的抑制作用,并具有剂量依赖性,其镇痛机制与通过抑制NMDA受体激活产生有关。