宁夏枸杞总黄酮对H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的: 研究宁夏枸杞总黄酮对过氧化氢(H₂O₂)损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的保护作用及可能的机制. 方法: 采用H₂O₂诱导HUVEC氧化应激损伤模型.实验分为正常组、1 mmol·L^-1H₂O₂损伤模型组、枸杞总黄酮保护(100,200,400 mg·L^-1) 预孵育24 h组,以及阳性对照(维生素C 20 mg·L^-1)组,预孵育24 h.采用噻唑蓝(MTT)法检测枸杞总黄酮对1 mmol·L^-1 H₂O₂损伤 4 h细胞活性,测定细胞上清液中丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),一氧化氮(NO). 结果: 与正常组比较,H₂O₂损伤模型组MDA含量、LDH活性均增高,NO生成量、SOD活性明显下降,其差异均具有显著性(P<0.01).枸杞黄酮保护组MDA含量、LDH活性均下降,NO生成量、SOD活性较H₂O₂损伤模型组明显增高(P<0.01),MDA含量、LDH活性的下降程度,NO生成量、SOD活性的增高程度,与枸杞总黄酮呈剂量依赖性. 结论: 宁夏枸杞总黄酮对H₂O₂所致人血管内皮损伤有保护作用,其机制可能与宁夏枸杞总黄酮抑制损伤细胞的脂质过氧化,以及有效提高机体抗氧化酶的活性、清除自由基,促进一氧化氮(NO)的合成有关.     

鬼针草总黄酮对过敏性紫癜患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨鬼针草总黄酮(total flavones of Bidens pi/osa L.,TFB)对过敏性紫癜(HenochSch(o|¨)nlein purpura,HSP)患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法以人脐静脉内皮细胞(human umbilical venous endothelial cells,HUVECs)为研究对象,用正常IgA1和HSP患儿血清IgA1进行干预,同时加入不同浓度TFB,分为空白对照组、正常对照组、HSP IgA1组及TFB(1.0、0.5、0.25 mg/mL)组。ELISA法分别检测各组上清液IL-8和TNF-α水平,硝酸还原酶法检测各组上清液NO水平;荧光定量PCR和Western blot法检测HUVECs中NF-κB和ICAM-1 mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组和空白对照组比较,HSP组IL-8、TNF-α及NO水平均明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与HSP组比较,TFB(1.0、0.5 mg/mL)干预后IL-8、TNF-α及NO水平均明显降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。荧光定量PCR和Western blot检测结果均显示:与正常对照组和空白对照组比较,HSP患儿血清IgA1诱导内皮细胞NF-κB与ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与HSP组比较,TFB 1.0,0.5、0.25 mg/mL干预下,NF-κB与ICAM-1mRNA和蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 TFB可能通过抑制性HSP患儿体内NF-κB高表达、减少血管内皮细胞分泌IL-8、TNF-α、NO而缓解血管损伤发生。     

愈肾汤治疗慢性肾小球肾炎32例

2000-2004年期间,我院肾内科对使用自拟"愈肾汤"治疗慢性肾小球肾炎进行了临床研究,现总结报道如下.     

金樱子总黄酮对过氧化氢损伤内皮细胞的保护作用

目的 研究金樱子总黄酮对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVEC)的保护作用.方法 体外培养HUVEC,用不同浓度H2O2诱导HUVEC损伤构建内皮细胞氧化损伤模型,采用MTT法测定各组细胞活力;用酶标仪测定各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;Western Blot检测各组细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Bax的表达情况.结果 MTT观察结果表明600μmol/L H2O2为构建氧化损伤HUVEC模型的合适浓度.与H2O2损伤组比较,不同浓度总黄酮预处理组的细胞活力均显著升高(P＜0.01);不同浓度总黄酮预处理组细胞培养液中的SOD、CAT和GSH-Px活性均明显增加(P＜0.01),且随着总黄酮浓度的增大而升高.与H2O2损伤组比较,0.12 mg/ml处理组Bcl-2蛋白表达无显著升高,0.24 mg/ml和0.48 mg/ml处理组Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);而各浓度预处理组Bax蛋白表达水平显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 金樱子总黄酮能保护氧化损伤的HUVEC,其保护机制与提高SOD、CAT、GSH-Px三种抗氧化酶的活性,上调Bcl-2蛋白的表达、下调Bax蛋白的表达来抑制细胞凋亡有关.     

自拟愈肾汤治疗慢性肾炎54例

采用自拟愈肾汤为主，将慢性肾炎按中医辨证分为脾肾气虚脾肾阳虚，肝肾阴显热壅滞瘀血内阻５型，随证加减结合辨病加减治疗该病５４例，半年评定疗效。结果完全缓２解３５例，基本缓解１１例，部分缓解６例。有效率９６．３％，显效率８５．２％》     

蓬子菜总黄酮经调控TGF-β/Smad3信号通路对内皮细胞增殖、凋亡的影响研究

目的 研究蓬子菜总黄酮经调控TGF-β/Smad3信号通路对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响.方法 实验分为5组,对照组HUVECs正常培养,其余组HUVECs培养后建立H2 O2氧化损伤模型,其中蓬子菜总黄酮低、中、高浓度组分别加入12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的蓬子菜总黄酮培养....     

愈肾汤治疗糖尿病肾病的疗效观察

目的观察愈肾汤治疗糖尿病肾病的临床疗效。方法将75例糖尿病肾病患者随机分为2组。对照组26例口服糖适平或皮下注射胰岛素为主控制血糖,同时给予洛丁新或络活喜或科索亚、肠溶阿司匹林等药控制血压等;治疗组49例在对照组治疗基础上加用愈肾汤,每日1剂,分2次口服。2组均30日为1个疗程。观察2组给药前后临床症状及24h尿蛋白定量、空腹血糖(FBG)、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的变化。结果治疗组总有效率87.76%,对照组总有效率65.38%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗前后24h尿蛋白定量、FBG、Cr、BUN、TC和TG比较差异有统计学意义(P<0.01),而24h尿蛋白定量、Cr和TG的改善优于对照组(P<0.01)。结论愈肾汤在改善糖、脂代谢,减少尿蛋白,保护肾功能方面具有较好作用,从而延缓或阻止糖尿病肾病的进程。     

肾愈汤治疗慢性肾盂肾炎60例

慢性肾盂肾炎（CPN）是由细菌感染引起的慢性肾盂和肾实质炎症，好发于女性，尤其是老年妇女患病率较高，具有反复发作、迁延不愈的特点。迄今临床治疗效果欠佳。笔者在常规西医治疗基础上加用肾愈汤治疗CPN取得较好的疗效，现报道如下。     

大孔吸附树脂纯化愈肾颗粒中总黄酮工艺

目的:研究大孔吸附树脂法纯化愈肾颗粒总黄酮最佳工艺。方法:以总黄酮的比吸附量、解析率、洗脱率等为指标,选用7种大孔吸附树脂对愈肾颗粒总黄酮进行纯化。结果:HPD100型大孔吸附树脂对愈肾颗粒的总黄酮具有较好的分离纯化能力。最佳工艺条件为2 BV的愈肾颗粒供试品溶液为上样量(含生药量为1 g.mL-1),吸附速率为1 BV.h-1,分别用水2BV、30%乙醇3 BV、50%乙醇4 BV洗脱,洗脱流速4 BV.h-1,合并30%乙醇和50%乙醇洗脱液,浓缩,即为纯化的总黄酮。结论:纯化后总黄酮含量提高到76%以上,HPD100型大孔吸附树脂可较好的纯化愈肾颗粒总黄酮。     

山核桃叶总黄酮对人脐静脉内皮细胞衰老的干预作用

目的观察山核桃叶总黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的保护作用,以探讨其抗衰老作用。方法体外培养HUVECs细胞株以AngⅡ诱导48 h复制衰老细胞模型。细胞分为空白对照组、模型组、山核桃叶总黄酮不同剂量(1、2.5、5μg/m L)组;采用MTS法检测细胞存活率,β-半乳糖苷酶检测内皮细胞衰老程度,流式细胞术分析细胞周期,硝酸还原酶法检测NO含有量。结果与空白对照组比较,模型组细胞存活率明显下降,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率明显增加,细胞周期多停滞在G0/G1期,S期细胞比例减小,表明成功诱导了衰老模型;而给与山核桃叶总黄酮预处理后明显改善了细胞衰老状态,β-半乳糖苷酶阳性细胞率明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例增加,NO浓度增加。结论山核桃叶总黄酮对AngⅡ诱导的HUVECs细胞衰老有明显的保护作用,具有抑制内皮细胞衰老,保护内皮功能的作用。     

雷公藤单体化合物TW3抗血管生成作用的实验研究

目的探讨雷公藤(tripterygium wilfordii,TW)单体化合物(TW3)抗新生血管形成的作用。方法用胰酶消化法及HE染色、Ⅷ因子免疫组化法分离、鉴定原代培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC);用MTT法研究TW3对HUVEC细胞增殖的影响;用HUVEC迁移实验、小管形成实验研究TW3对HUVEC血管生成的影响;用酶联免疫法检测TW3对人肺腺癌细胞株SPC-A-1血管内皮细胞生长因子(VEGF)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。结果TW3对HUVEC细胞的增殖有显著的抑制作用,IC50为1.46μg/ml;对HUVEC细胞迁移、小管形成有显著的抑制作用,当浓度为0.08μg/ml时,迁移细胞数及小管形成条索面积与阴性对照组比较均有显著性差异(P<0.01),且随着浓度的增加抑制作用增强;TW3能明显降低SPC-A-1细胞VEGF、bFGF的表达,当浓度为0.4μg/ml时,OD值与阴性对照组相比均有显著性差异(P<0.01),且随着浓度的增加抑制作用增强。结论TW3具有显著的抑制血管生成作用,并呈明显量效依赖关系。     

三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞的促血管新生作用

目的:研究三七总皂苷(PNS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖作用。方法:采用体外培养HUVEC的方法,通过XTT法以及细胞计数法观察对细胞的增殖作用;细胞侵入实验观察细胞迁移的能力。结果:PNS对HUVEC有促增殖作用,XTT实验中100μg/ml浓度增殖率为(33.58±2.41)%;在细胞计数实验100μg/ml浓度增殖率为(94.15±10.96)%;在细胞侵入实验中100μg/ml浓度侵入率为(42.64±9.50)%。结论:PNS能够促进HUVEC的增殖与侵入。     

风湿祛痛胶囊对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力的影响,以及对VEGF受体2(VEGFR2)的干预作用。方法:VEGF体外诱导HUVEC,加入风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度(0. 02,0. 1,0. 5μg·L-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、转移小室(transwell)法、黏附实验、细胞侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的增殖活性、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中VEGFR2磷酸化水平和蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测VEGFR2 mRNA表达水平。结果:与正常组比较,VEGF诱导24,48 h后均能显著升高HUVEC的增殖活性(P 0. 01),诱导24 h能明显升高HUVEC的迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力(P 0. 01),显著升高HUVEC中VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 01);与VEGF组比较,风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度组作用48 h均能明显抑制HUVEC增殖活性(P 0. 05,P 0. 01),作用24 h对VEGF诱导的HUVEC迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力有明显抑制作用(P 0. 05),也能下调VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05)。结论:风湿祛痛胶囊能降低VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,这一作用可能与其抑制VEGFR2的磷酸化、蛋白和mRNA表达水平有关。     

桃红四物汤含药血清对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:研究桃红四物汤含药血清对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用.方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·mL-1),每天2次,按10 mL·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清.MTT法考察桃红四物汤含药血清(终浓度为5％,10％,15％)预处理对H2O2诱导细胞活力减少的作用;显微镜观察细胞形态学变化;以丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及AO/EB染色考察桃红四物汤含药血清对HUVECs凋亡及抗氧化能力的影响;Western blot法检测细胞Caspase-3的表达.结果:与空白血清对照组比较,经400 μmol·L-1H2O2刺激后细胞活性显著降低,含药血清组可显著提高SOD活力、降低MDA和LDH含量,并抑制Caspase-3表达.AO/EB染色及相差倒置显微镜也观察到桃红四物汤含药血清能降低H2O2诱导的细胞凋亡.结论:桃红四物汤含药血清对H2O2诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用.     

黄连解毒汤含药血清对LPSTNF-α诱导的人中性粒细胞与血管内皮细胞间粘附的影响

以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型,应用蛋白染料染色法,观察HLJDT含药血清及其与LPS／TNF－α共同处理HUVEC4h、12h、24h后,对中性粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响。结果显示,HLJDT含药血清不仅能抑制非致炎状态下中性粒细胞与血管内皮细胞的粘附,而且能抑制致炎因子所诱导的中性粒细胞与血管内皮细胞粘附作用增强,这可能是黄连解毒汤抗炎作用的机制之一。     

海带多糖L01对人脐静脉内皮细胞表达和分泌PAI-1的影响

目的探讨海带多糖L01对肾上腺素刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达和分泌I型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞系ECV-304,于培养基中加入肾上腺素和不同浓度的L01,分别培养24,48,72h,酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定HUVEC培养上清液中的PAI-1水平;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HUVEC内PAI-1mRNA的表达,其扩增产物电泳后进行密度扫描及半定量分析。结果10μg/mL的肾上腺素可致48h和72h的HUVEC培养液中PAI-1水平显著升高(P<0.01,P<0.05),HUVEC内PAI-1mRNA表达上调。与肾上腺素组相比,不同浓度的L01于给药后48h和72h,均能显著降低培养液中PAI-1水平(P<0.01),减少HUVEC内PAI-1mRNA表达。结论L01可拮抗肾上腺素刺激HUVEC所致PAI-1分泌增加及其mRNA表达增加,提示其对血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

山豆根中黄酮化学成分研究

目的:对豆科槐属植物山豆根Sophora tonkinensis的黄酮类化学成分进行研究.方法:采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法等进行分离纯化,并通过波谱分析鉴定了其化学结构.结果:分离得到8个黄酮类化合物,即山豆根色满二氢黄酮Ⅰ(tonkinochromane I,1),光甘草酚(glabrol,2),lupinifolin(3),tonkinensisol(4),8-C-prenylkaempferol (5),7,2'-dihydroxy-4'-methoxy-isoflavanol(6),芒柄花素(formononetin,7),金雀异黄素(genistein,8).结论:化合物1为新化合物,化合物6为首次从该属植物中分离得到,化合物2,3,5为首次从该植物中分离得到.     

新藤黄酸体外抗肺癌血管生成的作用机制研究

为了观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对肺癌血管生成的影响及初步的作用机制。该实验以新藤黄酸处理肺腺癌A549细胞的条件培养基培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立非直接接触型细胞共培养体系;应用Matrigel胶建立HUVEC的二维培养模型,观察新藤黄酸对血管生成的影响;DAPI染色倒置荧光显微镜下观察新藤黄酸对HUVEC细胞凋亡的影响;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术分析新藤黄酸对HUVEC凋亡率的影响;Western blot法检测新藤黄酸对HUVEC中PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt,VEGF蛋白表达的影响;采用PTEN-siRNA转染细胞后,RT-PCR法检测PI3K,Akt基因的表达水平。结果表明,新藤黄酸能明显抑制血管生成,其抑制效果与剂量相关;DAPI染色荧光显微镜下可见HUVEC可出现凋亡形态特征;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测结果显示新藤黄酸诱导HUVEC细胞凋亡;Western blot法检测结果表明新藤黄酸下调了p-PI3K,p-Akt蛋白的表达水平,而对PI3K,Akt蛋白表达影响不明显。RT-PCR法检测表明PTEN-siRNA转染入细胞后,能上调PI3K,Akt mRNA基因的表达。体外研究表明新藤黄酸能抑制肺癌血管生成,抑制血管生成的机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

当归补血汤超滤物抗H2O2致人脐静脉内皮细胞（ECV-304）氧化损伤的影响

目的研究当归补血汤超滤物对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilieal vein endothelial cells,HUVECs)ECV-304氧化损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法通过酶消化法对离体的人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞进行消化传代,建立过氧化氢(peroxide hydrogen,H2O2)诱导的ECV-304细胞氧化损伤模型。采用超滤技术对当归红芪合剂进行分离与纯化,以不同分子量(2万以下、5万以下、10万以下)且浓度均为15.0 g/L的当归红芪超滤膜提取物作用于氧化损伤的ECV-304细胞,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞内丙二醛(malondialdeyde,MDA)活力,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞内AT1 mRNA的表达。结果经0.5mmol/L H2O2刺激后细胞活性明显降低,SOD活力明显降低,MDA活力明显提高,G0/G1期细胞的数目明显增加,S期细胞的数目明显减少,AT1 mRNA表达增加(P﹤0.05);与H2O2组相比,当归红芪超滤膜提取物可以增强H2O2诱导ECV-304细胞氧化损伤的细胞活性,增加细胞的存活率且以作用72 h为佳,提高氧化损伤的ECV-304细胞的SOD活力,降低氧化损伤的ECV-304细胞的MDA活力,促进氧化损伤的ECV-304细胞向S期转变,减少细胞内AT1 mRNA表达(P﹤0.01,P﹤0.05)。结论当归补血汤超滤物对氧化损伤ECV-304细胞的保护作用可能与其提高了抗氧化酶活性,降低了脂质过氧化物活性,促进了内皮细胞DNA合成复制及减少了细胞内AT1 mRNA的表达有关。     

桂郁金多糖对H2O2致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的:通过体外实验研究不同质量浓度桂郁金多糖对过氧化氢(H_2O_2)致人脐静脉内皮细胞损伤的的保护作用及机制。方法:对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行体外培养,用不同浓度H_2O_2损伤HUVECs,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8),确定H_2O_2最佳损伤浓度为500μmol·L~(-1)。然后给予不同浓度的桂郁金多糖对损伤的HUVECs进行保护,用CCK-8,确定62.5,125,250 mg·L~(-1)作为桂郁金多糖的低、中、高质量浓度组。采用CCK-8法检测桂郁金多糖对H_2O_2损伤HUVECs细胞活力的影响;采用试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA);通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量表达。采用Hoechst 33258荧光染色法对细胞凋亡情况进行观察;并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达情况。结果:CCK-8检测结果表明,给药时间24 h后,桂郁金多糖在15.625~500 mg·L~(-1),能够促进细胞增殖,而浓度增大后,桂郁金多糖则对细胞有一定的抑制作用。与模型组比较,桂郁金多糖能够使LDH,MDA,IL-6,TNF-α水平明显减少(P0.05,P0.01),使SOD和GSH-Px的含量明显增加(P0.05,P0.01)。Hoechst 33258荧光染色结果表明,与空白组比较,模型组HUVECs细胞核呈亮蓝色荧光,细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光,细胞密度降低;与模型组比较,桂郁金多糖给药组的蓝色荧光强度降低,细胞凋亡典型形态减少。Real-time PCR实验结果显示,与空白组比较,模型组减少Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax,Caspase-3 mRNA的表达(P0.05,P0.01);与模型组比较,桂郁金多糖给药组能够增加Bcl-2 mRNA的表达(P0.05,P0.01),减少Bax,Caspase-3 mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:桂郁金多糖通过抗氧化和抑制细胞凋亡等途径对H_2O_2损伤的人脐静脉内皮细胞进行保护。