日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗诱生免疫应答的？…

目的 初步研究日本血吸虫大陆副肌球蛋白核酸疫苗在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠诱生的免疫应答特征。方法 利用ＴＲｌｚｏｌ方法抽提日本血吸虫大陆株成虫总ＲＮＡ〈并通过逆转录聚合酶链反应；扩增编码日本血吸虫大陆株副肌球蛋白的全基因ｃＤＮＡ，将其克隆人质粒表达载体构建成日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗；将其通过后腿胫前肌免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，共免疫３次，每次间隔３周；利用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）分析     

全反式维甲酸对基因免疫应签的调节作用(摘要)

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对TR421-hCG8质粒基因免疫诱生的特异性细胞免疫与体液免疫应答的调节作用。方法 肌肉注射重组质粒TR421-hCGβ DNA(每只鼠50μ／100μl)初次免疫小鼠，以灌胃的方式给予ATRA，并以灌溶和TR421质粒免疫为对照；3周与6周后经同样的方式加强免疫各组小鼠，采用ELISA方法对基因免疫小鼠血清中IgG抗体水平进行动态观察，分析小鼠血清中IgG抗体亚类；3H-TdR掺入法测定特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结果 ELISA结果表明，TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生较高的抗hCGβ抗体水平，ATRA增强TR421-hCG8质粒基因免疫诱生的抗hCGβ特异性IgG抗体水平并且伴随IgG2a／IgG1显著性降低；TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生较强的淋巴细胞增殖活性和CTL活性，ATRA抑制TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结论 ATRA促进基因免疫诱生的TH2免疫应答，抑制TH1型免疫应答，为改变基因免疫诱生的特异性免疫应答类型提供了一条新的途径。     

修饰后日本血吸虫Sjc-97基因的真核表达及其免疫原性

目的:研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因第3区域片段(Sjc-97f3)毕氏酵母表达产物的免疫原性.方法:根据毕氏酵母密码子使用频率重新设计Sjc-97核苷酸序列,依据不对称PCR原理人工合成Sjc-97f3,并在毕氏酵母中表达.表达产物通过Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤层析方法纯化,再分别与ISA720和Al(OH)3佐剂乳化后,免疫C57BL/6和昆明小鼠,通过尾蚴膜反应和ELISA反应检测特异性抗体.结果:Sjc-97f3基因在毕氏酵母中获得了高水平分泌表达,其表达产物能与日本血吸虫免疫血清进行特异性免疫反应.经与佐剂乳化后,该蛋白具有良好的免疫原性.ELISA结果显示重组蛋白在小鼠体内可激发明显的抗体反应,但2种佐剂所诱导的抗体水平以ISA720佐剂为高; 该抗原在不同品系小鼠中的抗体水平存在显著差异(P<0.01),昆明鼠的抗血清滴度远高于C57BL/6小鼠.小鼠免疫血清能识别日本血吸虫表面抗原,产生特异的尾蚴膜反应. 结论:密码子优化的Sjc-97f3在毕氏酵母中获得高效表达,其产物具有良好的免疫原性.     

β葡聚糖对小鼠抗体产生的影响

目的观察β葡聚糖是否可以促进抗体产生并探讨其作用是否依赖补体.方法用β葡聚糖与抗原OVA联合免疫C57BL/6小鼠和补体C3基因缺陷小鼠,ELISA实验检测总IgG、IgG2a、IgG1抗体的产生.结果β葡聚糖与OVA联合免疫的C57BL/6小鼠,其OVA特异性IgG、IgG2a、IgG1抗体应答均显著高于单独用OVA免疫的小鼠,低于完全弗氏佐剂与OVA免疫的小鼠;补体C3基因缺陷小鼠IgG、IgG2a、IgG1抗体滴度均显著低于野生型C57BL/6小鼠.结论β葡聚糖可以促进抗体产生;补体C3缺损显著影响β葡聚糖介导的抗体应答.     

日本血吸虫理组BCG—Sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和CAg的动态观察

目的：检测日本血吸虫重组BCG－Sj26GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和CAg反应。方法：10^6CFU疫苗皮下和静脉注射免疫BALB／C鼠，分别于免疫后0、4、8、10、14、16周各剖杀4只，收集血清，常规ELISA法检测IgG及其亚类和CAg。结果：皮下注射组IgG在免疫后14周，IgGl在免疫后14－16周，IgG2a在免疫后4周和IgG2b在免疫后16周达最高水平，未能测到CAg；静脉注射组IgG在免疫后10周，IgGl和IgG2a在免疫后8周以及IgG2b在免疫后16周达最高水平，CAg在免疫后10周升高。结论：日本血吸虫重组BCG－Sj2GST疫苗能诱导宿主产生高水平的IgG、IgG2a和IgG2b，静脉注射的免疫效果优于皮下注射。     

重组Calpain蛋白诱导抗体产生及检测日本血吸虫感染的研究

目的 研究在大肠杆菌中表达的日本血吸虫Calpain蛋白的免疫原性及其在日本血吸虫病诊断上的应用。方 法用重组Calpain蛋白免疫BALB／c小鼠，ELISA法测定特异性IgG抗体的动态变化及其IgG亚型(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)产生特征；同时用重组Calpain蛋白作为诊断抗原，粪检血吸虫病阳性患者血清作为一抗，肝吸虫阳性患者血清作为考核交叉反应血清。结果 重组Calpain抗原免疫小鼠后，产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体，免疫4周IgG类抗体达到高峰，与对照组鼠相比较免疫鼠血清中IgG1，IgG2a，IgG2b特异性抗体也显著上升；Calpain重组抗原血清检测日本血吸虫和粪检的符合率为100％，粪检阳性EPG低的个体抗Calpain抗体滴度高，EPG高的患者抗Calpain抗体滴度反而低，与肝吸虫的交叉反应率为37％。结论 日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白，能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白，能够敏感地测定日本血吸虫的感染，提示Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子。     

日本血吸虫Calpain蛋白免疫原性研究

目的：探讨日本血吸虫疫苗候选分子Calpain蛋白的抗原性及其所诱导的免疫应答类型。方法：用Genetyx—MAC9．0分析Calpain肽链的亲水性，在亲水性区域以9个氨基酸为肽链单位的固相重叠肽链库(每相邻两个肽链之间仅有一个氨基酸不同)被Auto—spot Robot制备，用Dot—ELISA在合成的肽链库上筛选B细胞表位，含有B细胞表位的肽链免疫BALB／c小鼠，ELISA鉴别特异性IgG抗体亚类的产生。结果：由758个氨基酸组成的日本血吸虫Calpain蛋白含有两个主要的亲水区，其存在区域分别在氨基酸229～375和555～613；测定合成的肽链文库，在亲水区内筛选出4个B细胞的表位，分别是氨基酸234～251(YAHISGGT)；290～297(CLMGCSIH)；338～346(PWGDSHEW)：358～364(AWCDGA PQ)；与对照组比较，免疫组鼠血清中IgG1、IgG2a和IgG2b特异性抗体有显著性意义的上升。结论：日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白，能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白，提示Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子。     

乙肝病毒adr型基因疫苗诱导小鼠体液免疫应答

目的：构建乙肝病毒adr型基因疫苗pCMVS2-S,观察其免疫小鼠的特异性体液免疫应答。方法：将构建的乙肝病毒基因疫苗注射于C57BL/6小鼠胫骨前肌肉,运用ELISA检测不同时间小鼠血清中抗HBs抗体。结果：注射基因疫苗1周后,血清中抗HBs抗体转阳,1个月后抗体达到高峰,并以高水平维持至少2个月。结论：基因疫苗pCMVS2-S诱导C57BL/6小鼠产生较好的体液免疫应答。     

日本血吸虫副肌球蛋白T细胞表位的预测和鉴定

目的鉴定日本血吸虫副肌球蛋白的T细胞表位。方法用SYFPEITHI软件预测日本血吸虫(中国大陆株)副肌球蛋白的T细胞表位，候选表位分别命名为P20、P21、P22、P23、P24。设计并合成候选表位的编码核苷酸，定向克隆入融合表达载体pET-32c( )，经酶切及测序鉴定出重组克隆。阳性克隆经IPTG诱导表达，表达产物以Ni^2 -NTA柱亲和层析及透析纯化。纯化后的硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白体外刺激C3H／HeJ及C57BL／6小鼠腹股沟淋巴结或脾脏单个核细胞，^3H-TdR掺入法检测其增殖。结果候选表位中P20、P21、P22、P23能有效刺激C3H鼠致敏淋巴细胞细胞增殖，P20、P22能刺激C57鼠致敏淋巴细胞增殖。结论P20和P22可能是日本血吸虫副肌球蛋白的通用性T细胞表位。     

感染日本血吸虫的BALB/C小鼠血清内抗14OKD抗原分子抗体的动态观察

本研究采用针对日本血吸虫(中国大陆株)虫卵140KD分子的单克隆抗体NP28-5B,建立的竞争ELISA,定期检测感染日本血吸虫(中国大陆株)的BALB/C小鼠体内存在针对140KD SEA抗原的特异性抗体应答及其动态。     

猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保护性研究

研究猪囊蚴副肌球蛋白核酸疫苗诱的免疫应答。方法将ｐｃＤＮＡ３－ＡｇＢ核酸疫苗肌注４－６周龄的昆明种小鼠,从２周后开始用ＥＬＩＳＡ方法小鼠体内ＩｇＧ和ＩｇＧ２ａ的水平。另外将该核酸疫苗注射Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,体外培养小鼠脾细胞,用刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）和特异性抗原刺激,ＥＬＩＳＡ试剂盒检测细胞因子ＩＬ－２和ＩＬ－４的水平,并观察脾淋巴细胞增殖反应。另外,将该核酸疫苗肌注瘦型仔猪进行攻击实验,计算组对     

DNA vaccine pCD-Sj32 and its efficacy of protective immunity against infection of Schistosoma japonicum

Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓｉｓａｇｒｏｕｐｏｆｓｅｖｅｒｅｐａｒａｓｉｔｉｃｄｉｓｅａｓｅｓｉｎｈｕｍａｎｂｅｉｎｇｓａｎｄｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｉｍａｌｓ．ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏＷＨＯｄａｔａ（１９９０）,ｗｉｔｈａｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆ２００ｍｉｌｌｉｏｎｐｅｏｐｌｅｉｎｆｅｃｔｅｄａｎｄｓｏｍｅ２００ｔｈｏｕｓａｎｄｓｄｅａｔｈｓｐｅｒｙｅａｒ．ＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓｒｅｍａｉｎｓａｍａｊｏｒｈｅａｌｔｈｐｒｏｂｌｅｍｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｗｏｒｌｄｉｎｃｌｕｄｉｎｇＣ…     

日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫的研究

为探讨血吸虫ＤＮＡ疫苗保护性免疫效果,首先构建、鉴定和表达日本血吸虫ＤＮＡ疫苗（ｐＣＤ－Ｓｊ３２）。实验结果表明：ｐＣＤ－Ｓｊ３２免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠能诱导产生抗日本血吸虫感染免疫力,减虫率为３５．６％～４４．４％,减卵率为３９．４％～６９．０％;１００μｇＤＮＡ一次肌肉注射,免疫后８周攻击感染组的效果好;ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞、ＩＬ－２、ＴＮＦ和ＩＮＦ－γ可能在血吸虫病免疫功能调控中起重要作用;ｐＣＤ－Ｓｊ３２能诱导宿主产生高滴度特异性抗体,并在体外能介导巨噬细胞产生抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）免疫效应。结果提示,ｐＣＤ－Ｓｊ３２有可能发展为新的预防血吸虫病的亚单位疫苗。     

Humoral immune response to HCV core DNA vaccine in mice

DNAvaccine,alsocallednucleicacidvaccine,isarecombinanteukatyoticexpressionplasmidencodingcertainantigenofpathogen.DNAvaccinecanexpressantigenandinducecellularandhumoralimmuneresponsesaftervaccinationbyintramuscularinjectionorplasmid--coatedmicroparticlebombardment.Itshightemperaturestability,lowexpenseofmassproductionandtheabilitytoinducestrongimmuneresponsesevenfortheuseintherapyhavemadeDNAvaccineanexcitingwayfornewvaccinedevelopment['J.InordertofurnishevidenceforHCVDNAvaccinesuitablefo…     

热灭活疫苗HID39免疫小鼠可抵抗肺炎链球菌感染

目的 研制一种安全、有效且易于生产的肺炎链球菌疫苗,探讨其在BALB/c小鼠中的有效性.方法 通过热灭活肺炎链球菌标准菌株D39,得到无毒的、失去感染致病的能力的HID39,用HID39作为疫苗对随机分为阴性对照组(NC)、皮下免疫组(SC)和鼻内免疫组(IN)的小鼠进行免疫,ELISA法检测各组小鼠血清和唾液中的抗体...