雄黄诱导维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞(MR2细胞)凋亡的体外研究

目的 :深入了解雄黄治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL)的机理。方法 :以对全反式维甲酸 (ATRA)耐药的APL细胞株MR₂ 细胞为体外模型 ,用不同剂量的雄黄处理细胞一定时间后 ,利用MTT实验观察细胞的存活、增殖状态 ,应用细胞形态学、基因组DNA电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡 ,利用流式细胞仪分析细胞周期及细胞膜AnnexinⅤ的表达。结果 :一定浓度范围内雄黄对MR₂ 细胞的生长、增殖有剂量、时间依赖性抑制作用 ;Wright’s及HE染色均可见凋亡细胞 ,透射电镜下可见核染色质边集、核碎裂及凋亡小体 ;基因组DNA电泳出现“梯形”条带 ;流式细胞仪分析出现低于G1期DNA含量的亚二倍体细胞峰 ;经雄黄处理后AnnexinⅤ FITC⁺/PI^-的凋亡细胞逐渐增多。结论 :雄黄可诱导ATRA耐药的APL细胞发生凋亡 ,提示雄黄治疗APL的效应途径可能不同于ATRA。     

雄黄的临床应用及其毒副反应

黄世林教授等研究发现，雄黄对急性早幼粒细胞白血病有特异性缓解作用，实验表明对NB，HL－60、K562细胞株有显著促进凋亡作用，雄黄已在临床应用，已成为当代治疗急慢性白血病的主药，但其毒副作用也应得到高度重视，因此介绍雄黄的临床应用及其毒副作用的研究以介绍以促进雄黄及其复方制剂的合理应用。     

应用基因芯片研究雄黄对NB4细胞的作用

目的 :研究雄黄在诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化及凋亡过程中基因表达谱的改变。方法 :应用包含 1003条人类基因的cDNA表达谱芯片 ,检测雄黄作用于NB4细胞前后基因表达的调控。结果 :NB4细胞在雄黄作用后 12h ,9条基因上调 ,37条基因下调 ;2条参与蛋白酶体降解途径的基因显著上调 ,多条与细胞信号传导、RNA加工及蛋白质合成相关的基因下调。结论 :PSMC2 ,PSMD1及ITGB1基因的表达改变可能与NB4细胞的分化和凋亡有密切关系。     

雄黄对小鼠血和骨髓细胞形态学的影响

雄黄125mg/kg、250mg/kg给小鼠连续灌服,可引起外周血红细胞、白细胞、血小板的形态学改变,如彩点红细胞增加,粒细胞和淋巴细胞凋亡、血小板颗粒减少等;小鼠骨髓象各系细胞也均出现形态改变,如巨幼样红细胞、异常丝状分裂,粒细胞鼓槌状小体数量增多、凋亡小体出现等。     

艾迪注射液对食管鳞癌放疗患者Th1/Th2转录因子和细胞因子表达的影响

目的 探讨艾迪注射液对食管鳞癌放疗患者Th1/Th2转录因子和细胞因子表达的影响。     

纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用

目的: 研究纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用。 方法: 采用机械研磨法制备纳米雄黄。以白血病药物敏感K562细胞为靶细胞,采用MTT法检测纳米雄黄对K562细胞的增殖抑制作用,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,细胞流式细胞术检测Bax,Bcl-2,P-gp,BCRP,P-53蛋白的表达水平,Caspase-3活性。 结果: 雄黄经高能球磨机球磨10~50 h,扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察,电镜测量纳米雄黄的平均粒径为(72.72±22.18) nm,符合纳米颗粒的形貌特征。纳米雄黄对K562细胞有明显的增殖抑制作用。24,48,72 h的IC₅₀分别为43.48,20.52,16.07 mg·L^-1。20,50 mg·L^-1纳米雄黄作用48 h后Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增高,凋亡率分别为10.52%,73.25%。纳米雄黄作用48 h后Bax蛋白表达由对照的(75.80±2.40)%升高到(87.50±1.20)%和(99.60±0.10)%;Bcl-2蛋白表达由对照的(73.85±0.15)%升高到(94.80±2.00)%和(97.75±0.55)%。20,50 mg·L^-1纳米雄黄处理K562细胞24 h后,K562细胞Caspase-3蛋白表达水平由对照的(3.14±0.24)%升高到(8.87±2.74)%和(72.55±1.45)%;细胞的BCRP,P-gp蛋白,P53蛋白表达总体呈上升趋势,共表达也呈上升趋势。 结论: 纳米雄黄可以显著诱导白血病药物敏感K562细胞发生凋亡。     

纳米雄黄协同顺铂对人肺癌A549细胞b-FGF、MMP-9表达的影响

目的:研究纳米雄黄协同顺铂对人肺癌A549细胞b-FGF、MMP-9表达的影响,探讨纳米雄黄抗血管生成的可能作用机制。方法:对A549细胞株进行体外培养,将雄黄纳米化粉碎,以不同浓度的纳米雄黄与顺铂单用或联用干预体外培养的A549细胞,流式细胞仪检测A549细胞的b-FGF、MMP-9表达。结果:不同浓度纳米雄黄可抑制A549细胞的b-FGF、MMP-9表达,高浓度优于低浓度,与DDP联用效果更佳。结论:纳米雄黄可能通过抑制b-FGF、MMP-9的表达有效地发挥其抗血管生成作用。     

化风丹中As2S2及As2O3的含量测定

目的:建立化风丹中不溶性砷盐和可溶性砷盐的含量测定方法,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用滴定法和紫外分光光度法分别测定18批化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷的含量。结果:建立的二硫化二砷含量测定方法重复性好,平均加样回收率97.61%,RSD 2.0%。三氧化二砷在4~16μg与吸光度线性关系良好,平均回收率97.77%,RSD2.1%。18批化风丹中二硫化二砷质量分数0.012~0.021 3 g·g-1,平均质量分数0.018 4 g·g-1,差异系数13.3%;三氧化二砷质量分数75.24~124.55μg·g-1,平均质量分数92.99μg·g-1,差异系数15.3%。结论:建立的含量测定方法简单、准确,为化风丹质量标准提升提供实验依据。不同批次化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷含量差异较大。     

红毛七提取物对H2O2损伤内皮细胞核转录因子-κB的表达和NO生成的影响

 目的 观察红毛七的提取物(HMQ-4)对H₂O₂损伤内皮细胞核转录因子-κB的表达和一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法 用H₂O₂造成血管内皮细胞损伤模型,采用MTT法观察HMQ-4对血管内皮细胞活性的影响;用比色法测定细胞培养液中NO,NOs含量;免疫细胞化学法观察内皮细胞核转录因子-κB的表达。结果H₂O₂对血管内皮细胞具有损伤作用,HMQ-4在一定剂量内减少细胞的死亡;HMQ-4还可促进H₂O₂损伤的血管内皮细胞内NO,NOS释放的增加和抑制核转录因子-κB的表达的加强。结论 HMQ-4对H₂O₂损伤的血管内皮细胞具有保护作用,其机制可能与其增加NO,NOS释放和转录因子-κB的表达有关。     

As2O3 不同给药方式对 NB4 细胞侵袭力和 MMPs 活性的影响

 目的 对比 As₂O₃ 不同干预方式对白血病细胞株 NB4 的侵袭力和基质金属蛋白酶 2,9(MMP-2 、 MMP-9) 活性的影响。 方法 噻唑蓝（ MTT ）法检测 As₂O₃ 恒定和变化两种体系体外干预对 NB4 细胞的增殖抑制, ELISA 检测 2 种体系中处理的 NB4 细胞的 MMP-2 和 MMP-9 蛋白含量的变化。明胶酶谱法检测 2 种 As₂O₃ 处理前后 NB4 细胞 MMP-2 活性变化, Westen blot 检测活性 MMP-9 蛋白表达, Transwell 小室穿透实验检测两种 As₂O₃ 处理方式对 NB4 细胞穿透力的影响。 结果 ①与平行对照组比较 0.1 μmol·L^-1 As₂O₃ 恒定浓度体系中持续作用 72 h ,对 MMP-2 、 MMP-9 的活性和 NB4 细胞侵袭力影响不显著。 0.5 μmol·L^-1 As₂O₃ 持续作用 24 h 与对照组比较无明显差异, 48 h 以后 MMP-2 、 MMP-9 的活性和 NB4 侵袭力降低,与对照组比较差异显著。 1.0 μmol·L^-1 以上浓度 As₂O₃ 处理 24 h , MMP-2 、 MMP-9 活性和 NB4 细胞侵袭力下降,并呈时间依赖性。② 2.0 μmol·L^-1 As₂O₃ 恒定浓度体系与峰浓度为 5.0 μmol·L^-1 ,终质量浓度为 0 μmol·L^-1 的变化浓度体系比较,前者对 NB4 的侵袭力和 MMPs 活性的抑制程度比后者更显著。 结论 NB4 细胞的侵袭力与其 MMP-2 、 MMP-9 活性有关,促分化有效的低浓度 As₂O₃ 对 NB4 细胞侵袭力和 MMP-2 、 MMP-9 活性抑制作用不明显。在干预时间相同的情况下,促凋亡有效的恒定浓度 As₂O₃ 持续作用,对 NB4 细胞侵袭力和 MMP-2 、 MMP-9 活性的抑制强度大于峰浓度很高但持续时间很短的变化浓度体系 , 这可能是临床上 As₂O₃ 持续缓慢输注法较常规给药法更能有效降低急性早幼粒细胞白血病（ APL ）中枢神经系统浸润和早期的致死性脑出血发生率的机制之一。     

彗星试验检测雄黄对中国仓鼠肺细胞DNA的损伤作用

目的检测含砷中药雄黄对中国仓鼠肺细胞（CHL细胞）DNA的损伤作用。方法测定雄黄对CHL细胞的半数抑制浓度（IC50）,根据IC50设立不同剂量组,进行彗星试验,观察并比较不同组别不同损伤等级细胞数的差异。结果给药干预后,各剂量组及阳性对照组DNA损伤细胞数明显增加,且各剂量组随着给药浓度的增加,Ⅲ、Ⅳ级（中、重度）损伤细胞数增多。结论中药雄黄可引起CHL细胞DNA损伤。     

构建雄黄诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病NB4-R1细胞凋亡的蛋白质双向电泳图谱

目的 构建雄黄（四硫化四砷, tetra-arsenic tetra-sulfide, As4S4）诱导急性早幼粒细胞白?。ˋPL)维甲酸耐药细胞株NB4-R1细胞凋亡前后的差异蛋白质组表达谱。     

天然雄黄与精制雄黄对小鼠肝脏损伤的初步研究

目的研究天然雄黄(Cruderealgar)和精制雄黄(Purifiedrealgar)对小鼠肝脏损伤的差异,为其临床合理应用提供依据。方法取ICR小鼠,分别单次灌胃(ig)给予天然雄黄和精制雄黄0.1g.kg-1及0.4g.kg-1,4h和36h后分别测定肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量。再取ICR小鼠,以天然雄黄和精制雄黄连续ig给药4周,取肝脏称重,计算肝脏系数,观察肝脏病理学变化,并测定肝匀浆中GSH、MDA含量。结果单次ig天然雄黄后,小鼠肝脏GSH含量4h时升高,36h时降低,GSH-Px、SOD活力下降,MDA水平升高,与对照组相比,有显著或非常显著差异;单次ig精制雄黄,4h时明显抑制GSH-Px活力,0.4g.kg-1组GSH含量显著升高,对于SOD活力,MDA水平无明显影响。连续ig4周后,各给药组肝脏系数明显降低,与对照组相比有显著或非常显著差异,天然雄黄抑制作用更明显;天然雄黄组小鼠病理检查可见明显肝损伤,对GSH、MDA含量无明显影响;精制雄黄显著提高GSH含量,降低MDA水平,病理检查未见明显肝损伤。结论天然雄黄可导致小鼠肝损伤,酸化精制后对肝脏毒性显著降低,雄黄毒性成分可能为可溶性砷盐。     

雄黄微生物提取液诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的：观察雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制、并初步探寻雄黄溶解后表现药理活性的化学物种。方法：应用噻唑蓝（MTT）比色法、Annexin V-PI双染法染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术（FCM）观察K562/ADM细胞凋亡,FCM测定K562/ADM细胞Fas、Bcl-2、Caspase3的活性变化,并以H3AsO3（As2O3在该溶液中的主要存在形式）作为阳性对照。结果：雄黄微生物提取液可抑制K562/ADM细胞增殖;K562/ADM呈典型凋亡形态改变;DNA电泳可见梯状条带出现;FCM分析显示：G1期细胞比例增高,G2-M和S期阻滞;Fas蛋白表达明显上调、Bcl-2蛋白表达显著下调、Caspase-3活性明显增强。结论：雄黄微生物提取液可通过Fas/Bcl-2途径,激活Caspase-3而诱导K562/ADM细胞凋亡。砷酸（V）、甲基砷酸盐（V）可能是雄黄溶解后表现药理活性的主要化学物种。     

不同产地雄黄及其炮制品中二硫化二砷和可溶性砷含量比较

目的:比较研究不同产地雄黄及其炮制品中主成分As2S2及可溶性砷盐As2O3的含量差异。方法:采用2010年版《中国药典》雄黄项下的滴定法测定不同产地雄黄及其炮制品中As2S2的含量,采用AFS-230E型原子荧光光度计检测上述样品中可溶性砷盐As2O3含量。结果:不同产地的雄黄及其炮制品中As2S2,As2O3含量存在显著差异。雄黄炮制后,炮制品中As2S2含量均提高,As2O3含量均明显降低。除吉林和江苏2个产地的的雄黄及其炮制品中As2S2含量<90.0%,其余样品均符合药典规定;且雄黄炮制品中As2O3含量均能控制在1.7 mg.g-1以下。结论:研究结果可为指导雄黄临床合理用药提供参考依据。     

炮制对雄黄毒性与药效影响的研究

本文在雄黄炮制方法 及饮片质量标准的研究基础上,对新法(酸洗)及传统法(干研)的雄黄炮制品进行了毒性及药效方面的比较研究,结果 显示新法炮制品不仅可降低毒性,且药效有所提高.     

复方黄黛片含药兔血清对NB4细胞株作用的实验研究

目的观察复方黄黛片含药免血清对NB4细胞株的影响。方法以兔为实验血清的供体，以给药与否为分组依据，采用双道原子荧光法检测血清中砷剂的浓度，以细胞抑制率及调亡率为观察指标，对实验结果进行分析。结果（1）给药前、后兔血清中砷剂差异显著；（2）两组兔血清对NB4细胞株生长均有抑制作用，且对NB4细胞株生长的抑制作用具有一定的浓度及时间依赖性；（3）两组免血清均可诱导NB4细胞株发生凋亡，且该作用具有一定的浓度及时间依赖性。结论（1）复方黄黛片含药免血清可明显抑制人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的生长，抑制作用呈一定的浓度、时间依赖性；（2）复方黄黛片含药兔血清可诱导人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株发生凋亡，该作用呈一定的浓度、时间依赖性；（3）中药血清药理学方法可用于深入研究复方黄黛片抗白血病的作用机理。     

雄黄活性物质的毒效相关性初步研究

目的：探讨中药雄黄的毒-效关系。方法：用草酸溶解以除去天然雄黄中所含的As2O3；对比精制前后雄黄中含可溶性砷的量；对比精制前后雄黄的急性毒性和调节免疫功能的活性。结果：雄黄中可溶性砷含量从精制前的3.75％降至精制后的0．24％；急性毒性大大降低，调节免疫功能的活性无明显变化。结论：雄黄中的有效物质是As2S3，其中所含的As2O3是其毒性成分。